Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

1. ייעוץ רפואי וייעוץ קליני
הערה: במקרה של מטופלים הזקוקים לשימור פוריות מסיבות אונקולוגיות, ודאו כי אין רשימת המתנה לייעוץ תזמון, והמינוי יינתן בהקדם האפשרי.
<ol><li>לבחון את ההיסטוריה הרפואית ואת המסמכים הקודמים, ולהעריך את מצבו הבריאותי הכללי של המטופל.</li>
	<li>תעד את כל המידע...

שיקולים קליניים 
למרות אסטרטגיות המתעוררות, כגון קריופרה של רקמת השחלות והבשלת הפריה חוץ גופית, נחקרו, vitrification oocyte לאחר COS היא טכניקה סטנדרטית זהב לשימור פוריות. בתרחיש זה, מספר הביציות שאוחזרו והקפאה צריך להיות מוגדל בזמן הקצר ביותר האפשרי כמו רוב חולי הסרטן עשויי?...

פיתוח ויישום של תוכנית הקפאה יעילה עבור ביציות אנושיות היוו פריצת דרך משמעותית ברפואת הרבייה. על פי עדויות אחרונות, vitrification היא האסטרטגיה היעילה ביותר כדי cryopreserve metaphase II (MII) ביציות, כפי שהוא מביא שיעורי הישרדות גבוהים יותר סטטיסטית לעומת הקפאה איטית, ללא תלות באוכלוסיית המטופלים(חוליםעקרים או תוכנית תרומת ביציות) 1,2,3. ההישגים המדהימים של vitrification oocyte הובילו את ועדות התרגול של האגודה האמריקאית לרפואת פוריות (ASRM) והאגודה לטכנולוגיית פוריות בסיוע (SART) לבטא טכניקה זו כיעילה ביותר לשימור פוריות אלקטיבית אצל נשים לאחר הפוסט-pubertal, עבור אינדיקציות רפואיות ולא רפואיות4,5,6. אינדיקציות רפואיות לשימור פוריות כוללות (i) סרטן ומחלות אוטואימוניות הדורשות טיפולים7 כגון הקרנות, כימותרפיה ציטוטוקסית וטיפול אנדוקריני (שהשפעתו המזיקה על שמורת השחלות קשורה לגיל אימהי כמו גם לסוג ומינון הטיפול); (ii) מחלות השחלות הדורשות ניתוח חוזר או רדיקלי (כגון אנדומטריוזיס)8; וכן (iii) תנאים גנטיים (למשל, שברירי X) או אי ספיקת שחלות מוקדמת. בנוסף, שימור פוריות הפך לאופציה חשובה עבור כל הנשים שלא השיגו את מטרתן ההורית מסיבות שאינן רפואיות (הידועות גם בשם הקפאה חברתית).
ללא קשר לאינדיקציה לשימור פוריות ועל פי ההנחיות הבינלאומיות העיקריות לשמירה על פוריות, כל המטופלים המוכנים להמחיש את הביציות שלהם צריכים לקבל ייעוץ מתאים כדי לקבל מידע על סיכוייהם הריאליים להצלחה, העלויות, הסיכונים והמגבלות של ההליך9,10,11,12,13. והכי חשוב, זה צריך להיות ברור כי vitrifying קבוצה של ביציות MII אינו מבטיח הריון, אבל זה מציע סיכוי גבוה יותר להצלחה בעתיד הפריה חוץ גופית (הפריה חוץ גופית) טיפול, במידת הצורך14. בהקשר זה, גיל האישה בזמן vitrification הביצית הוא ללא ספק הגורם המגביל החשוב ביותר15 כמו גיל אימהי מתקדם (AMA; >35 שנים) הוא הגורם העיקרי לאי פוריות נשית16. מלבד הפחתה הדרגתית בשמורת השחלות, AMA קשורה לפגיעה בכשירות הביצית עקב מסלולים פיזיולוגיים פגומים כגון חילוף חומרים, רגולציה אפיגנטית, מחסומי מחזור תאים והפרדה מיוטית17. לכן, המספר הסביר של ביצים כדי לvitrify תלוי בעיקר בגיל האימהי. אצל נשים מתחת לגיל 36, לפחות 8-10 ביוצים18 נדרשים כדי למקסם את סיכויי ההצלחה. באופן כללי, ככל שמספר היוציטים גבוה יותר, כך גדל הסיכוי להצלחה. לכן, התאמת גירוי השחלות על פי סמני עתודה השחלות כגון רמות הורמון אנטי מולרי (AMH) או ספירת זקיק אנטרלי (AFC) חיוני כדי לנצל באופן מלא את עתודת השחלות בזמן הקצר ביותר האפשרי.
הבטיחות של ההליך כולו היא הנושא המרכזי השני בעת רישום חולים לשימור פוריות. רופאים צריכים להשתמש באסטרטגיות הטובות ביותר כדי למזער את הסיכונים ולמנוע (i)תסמונת גירוי יתר השחלות (OHSS) באמצעות גישות בטוחות כגון הורמון משחרר גונדוטרופין (GnRH) פרוטוקול אנטגוניסט ואחריו גורם אגוניסט GnRH19 ו -(ii) את המרוחק, עדיין אפשרי, סיכונים של דימום צפק, פגיעה במבני האגן (השופכן, המעי, נספח, עצבים), או זיהום באגן במהלך אחזור ביציות. לבסוף, (iii) משטרים מסורתיים לגירוי קשורים אסטרדיול סרום סופרפיזיולוגי ולכן, אינם מומלצים במחלות רגישות לאסטרוגן כגון סרטן השד. פרוטוקולים מעורבים מעכבי ארומטאז (כגון letrozole או טמוקסיפן) מתאימים יותר במקרים אלה20,21. בסביבת המעבדה, הפרוטוקול הנפוץ ביותר עבור vitrification oocyte הוא עדיין אחד שתואר לראשונה על ידי Kuwayama ועמיתיו 2,23, אשר מורכבהליךצעד הכולל תוספת הדרגתית של cryoprotectants (CPAs). בשלב הראשון (שיווי משקל/התייבשות), ביציות נחשפות בתמיסת רו"ח המכילה 7.5% v/v אתילן גליקול ו-7.5% v/v דימתיל סולפוקסיד (DMSO), ואילו בשלב השני, ביציות מועברות לתמיסת vitrification עם 15% v/v אתילן גליקול ו-15% v/v DMSO, בתוספת 0.5 סול/ל סוכרוז. לאחר דגירה קצרה באמצע של vitrification, הביציות ניתן להציב ב קריודוויצים מעוצבים במיוחד, פתוח ולבסוף צללו חנקן נוזלי ב -196 °C כדי להיות מאוחסן עד השימוש.
כאן, כל העבודה הקלינית והמעבדה של טיפול לשימור פוריות תוארה על ידי (1) מתווה המלצות לייעוץ אובייקטיבי ומבוסס ראיות, (ii) תוך התמקדות בעלויות האפקטיביות של ההליך, ו-(iii) תיאור האסטרטגיות המתאימות ביותר לניצול מלא של עתודת השחלות ולמקסם את מספר הביציות שאוחזרו בזמן הקצר ביותר האפשרי. הערכת עתודת השחלות, ההגדרה של פרוטוקול גירוי אידיאלי, כמו גם הליכי אחזור ביציות, גינוי והתחדשות יפורטו יחד עם גישות כדי למקסם את היעילות שלהם, יעילות, ובטיחות. מאחר שפרוטוקולים או התאמות אחרות של פרוטוקול זה קיימות בספרות, התוצאות הייצוגיות וסעיפי הדיון בכתב יד זה חלים רק על הליך זה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

שמירה על פוריות האישה חיונית במערכת בריאות רב תכליתית המטפלת באיכות החיים העתידית של המטופלים. שימור קריופרציה של Oocyte מוכר על ידי מספר חברות מדעיות בינלאומיות כסטנדרט הזהב לשימור פוריות אצל נשים לאחר הפוסט-פוסט-פוסט-רפואיות, הן עבור אינדיקציות רפואיות והן עבור אינדיקציות לא רפואיות. הסימנים הרפואיים העיקריים הם מחלות אונקולוגיות, מחלות גניקולוגיות כגון אנדומטריוזיס חמור, מחלות מערכתיות המתפשרות על שמורת השחלות, ותנאים גנטיים הכרוכים בגיל המעבר בטרם עת. מאמר זה מתאר את כל העבודה הקלינית והמעבדה של טיפול לשימור פוריות על ידי מתווה המלצות לייעוץ אובייקטיבי ומבוסס ראיות. יתר על כן, הוא מתמקד ביעילות ההליך ומתאר את האסטרטגיות המתאימות ביותר לנצל באופן מלא את עתודת השחלות ולמקסם את מספר הביציות שאוחזרו בזמן הקצר ביותר האפשרי. הערכת עתודת השחלות, ההגדרה של פרוטוקול גירוי אידיאלי, כמו גם הליכי אחזור ביציות, גינוי ו- vitrification פורטו יחד עם גישות כדי למקסם את היעילות שלהם, יעילות, ובטיחות.

סקירה כללית של התוכנית לשימור פוריות במרכז
במשך תקופה של 12 שנים (2008-2020), 285 נשים עברו לפחות אחזור ביציות אחד שנובע את ההבשלה של כל קבוצת הביצים הבוגרות שנאספו. רוב הנשים הללו (n=250) עברו אחזור אחד, ו-35 עברו אחזורים מרובים. הסיבות לאחזור הביצית לוויטוריזציה של ביצים מסוכ?...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

שימור קריופרציה של Oocyte מוכר על ידי מספר חברות מדעיות בינלאומיות כסטנדרט הזהב לשימור פוריות אצל נשים לאחר הפוסט-פוסט-פוריות. אסטרטגיות קליניות ומעבדות מתאימות מבטיחות יעילות מרבית, יעילות ובטיחות של טיפולי שימור פוריות.

שימור פוריות באמצעות ויטריפיקציה של אוציט: פרספקטיבות קליניות ומעבדתיות

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

התחדשות הביצית והליכי ההתחממות חיוניים לשימור פוריות. ביצוע פרוטוקול זה כפי שהודגם מאפשר למשתמש למקסם את האפקטיביות של הליכים אלה. שימור פוריות להתחדשות ביציות הוא כיום גישה מבוססת ומקובלת מבחינה אתית.זה מאפשר להשיג תוצאות קליניות יעילות ועקביות ולהתגבר על המגבלה המוסרית והמשפטית הקשורה עם שימור קריופרציה עוברית. כדי להשיג מיומנות עם תהליך vitrification, חשוב להכיר את כל הנקודות הקריטיות של הפרוטוקול, לשים לב במיוחד לזמן החשיפה של הדגימות cryoprotectants. תוך 38 שעות מרגע האחזור ומיד לאחר ההקפאה, תייג את כל חומרי הפלסטיק עם שמו, תעודת הזהות וסוג הפתרון של המטופל, ובקש מעד לאשר את פרטי המטופל במכשיר ההקפאה.כאשר כל האספקה תויגה, הפוך בזהירות כל מקטורן של ביציות מספר פעמים כדי לערבב ולהניח טיפה של 30 מיקרוליטר של מדיום חיץ HEPES בתוספת אלבומין סרום אנושי טיפה סמוכה 30 מיקרוליטר של פתרון שיווי משקל על צלחת פטרי. השתמש pipette חשפנית למקם את oocytes בטיפה הראשונה וליצור גשר של בינוני עד 30 טיפה מיקרוליטר של פתרון שיווי משקל כדי להשיג עלייה הדרגתית בריכוז של cryoprotectants. לאחר שלוש דקות, להוסיף טיפה שנייה 30 microliter של פתרון שיווי משקל לצלחת ולהשתמש pipette כדי ליצור גשר בינוני בין טיפות הפתרון.בעוד ביוציטים הם שיווי משקל, להוסיף טיפה אחת 30 microliter של פתרון שיווי משקל עבור כל מכשיר קריו לשמש על הצלחת. לאחר שלוש דקות, להעביר את oocytes לתוך פתרון שיווי משקל טהור במשך שש עד תשע דקות כדי לאפשר את oocytes לחזור לגודל הראשוני שלהם. כאשר הביציות התאוששו, להכין צלחת IVF באר מרכזית המכילה מיליליטר אחד של פתרון vitrification.מעבירים את היוציטים לצלחת במדיום קטן ככל האפשר ומעבירים אותם בזהירות כדי להסיר כל פתרון שיווי משקל עודף. כ-10 שניות לפני סיום הדגירה, הניחו מכשיר קריו המסומן במידע של המטופל מתחת למיקרוסקופ והתכוו את המיקוד בקצה מכשיר ההקפאה. מניחים את הביציות על מכשיר ההקפאה ליד הקצה בכמות המינימלית של פתרון vitrification ולהזיז את פיפטת החשפנית מן הביצית כדי להסיר כל פתרון vitrification עודף, משאיר את הביציות מכוסה בשכבה דקה של בינוני.במהירות לצלול את מכשיר ההקפאה לתוך חנקן נוזלי במהירות לנער את המכשיר כדי להסיר את כל בועות אוויר מפני השטח שלה. מחזיק את מכסה המגן של מכשיר ההקפאה עם פינצטה, למלא את המכסה עם חנקן נוזלי לפני החדרת המכשיר לתוך המכסה תוך שמירה על רצועות פרופילן בחנקן נוזלי. לאחר מכן לאחסן את מכשיר ההקפאה ב visotube שכותרתו עם המידע של המטופל ולעדכן את גיליון המעבדה.להתחממות ביציות, הפוך בקפידה כל מקטורינה של הפשרה, דילול ופתרון כביסה מחומם לטמפרטורת החדר, והוסיפו מיליליטר אחד של פתרון הפשרה לבאר המרכזית של צלחת פטרי לפחות שעה אחת דגירה ב 37 מעלות צלזיוס. תייג את כל אספקת הפלסטיק עם שמו ותעודת הזהות של המטופל וסוג הפתרון, ובקש מעד לאשר את פרטי המטופל במכשיר ההקפאה. כדי שכל מכשיר יתחמם, הוסיפו 200 מיקרוליטרים של תמיסת דילול לבאר הראשונה של צלחת שש בארות והוסיפו נפח שווה של תמיסת כביסה לבאר השנייה והשלישית של הצלחת.הוסף PBS לאזור בצד החיצוני של הבארות כדי למנוע אידוי פתרון. מניחים את צלחת פתרון ההפשרה מתחת למיקרוסקופ הסטריאו ומתאימה את המיקוד למרכז המנה. יש לסובב בזהירות כדי להסיר את מכסה המגן של מכשיר קריו תוך שמירה על רצועות פרופילן בחנקן נוזלי ולהעביר את מכשיר ההקפאה מן החנקן הנוזלי לתוך פתרון הפשרה מהר ככל האפשר כדי למנוע את הסיכון של devitrification.לאחר דקה אחת, התמקד בקצה מכשיר ההקפאה כדי לאתר את היוציטים ובסופו של דבר להשתמש בצינור חשפנית כדי לשחרר בעדינות את היוציטים מהמכשיר. השתמש פיפטה חשפנית בקוטר 170 מיקרון כדי להעביר את oocytes ונפח קטן של פתרון הפשרה לתוך פתרון דילול בבאר הראשונה של צלחת שש היטב. לאחר שלוש דקות, להעביר את oocytes לתוך הבאר הראשונה של פתרון כביסה במשך חמש דקות.בסוף הדגירה, להעביר את oocytes לבאר השנייה של פתרון כביסה ודגור ב 37 מעלות צלזיוס במשך דקה אחת לפני העברת oocytes לתוך נפח מתאים של מדיום תרבות הפריה IVF pre-equilibrated במשך שעה אחת ועדכון גיליון המעבדה. במשך תקופה של 12 שנה, 285 נשים עברו לפחות אחזור ביציות אחד שנובע את ההבשלה של כל קבוצת הביצים הבוגרות שנאספו. רוב הנשים האלה עברו אחזור אחד.35 עברו אחזורים מרובים. הסיבות לאחזור הביצית להתחדשות ביצים אופיינו בדרך כלל כרפואה מלבד סרטן, סרטן, לא רפואי ואחרים. חולים עם סיבה רפואית לvitrification ביצים וחולים שעברו שימור פוריות בגלל סרטן היו צעירים יותר והראו ספירת זקיקים אנטרלי גבוה יותר מאשר חולים עם סיבות לא רפואיות או אחרות.עם זאת, מכיוון ששיעורי ההבשלה הממוצעים היו מעט נמוכים יותר בסיבות הרפואיות, מספר היוציטים שהובטחו בממוצע היה דומה בין הקבוצות. כמחצית מהחולים עם סיבות רפואיות שאינן סרטן, ורוב החולים עם סיבות אחרות להתחדשות ביצים חזרו למעשה להתחממות. לעומת זאת, מעט מאוד חולים אשר עברו שימור פוריות לסרטן או מסיבות לא רפואיות השתמשו הביציות שלהם עבור הפריה חוץ גופית.למרות ההבדלים בזמן שחלפו בין vitrification והתחממות, שיעור ההישרדות של הביציות היה דומה בין קבוצות המטופל, המאשר את היעילות והבטיחות של vitrification הביצית והתחממות פרוטוקולים. יתר על כן, שיעור ההישרדות היה בלתי תלוי בחוויה של מפעיל ההתחדשות וההתחממות. הצעדים המכריעים ביותר שעשויים להשפיע על עקביות התוצאות הם אלה הקשורים להתחממות.לכן, חשוב מאוד לשלוט בזהירות בנפח ובטמפרטורה של פתרונות ההפשרה. הקפאה של רקמת השחלות האסטרטגיה היחידה שנמצאת כרגע תחת חקירה כאופציה עבור חולים לפני גיל ההתבגרות. למרות הבטחה, גישה זו יש מגבלה חשובה אשר הגבילה את היישום שלה.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

הדמית Glioma ייזום<em&gt; In Vivo</em&gt; דרך חלון גולגולתי מלוטש ומחוזק-גולגולת דקה

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Clinical Assessment of Spatiotemporal Gait Parameters in Patients and Older Adults

הערכה קלינית של פרמטרי ההליכה Spatiotemporal בחולים ומבוגרים

Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

אדם תפקודי כבד שימור ושחזור על ידי אמצעי Subnormothermic מכונת זלוף

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

מתודולוגיה Sputum אינדוקציה ועיבוד מעבדה

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

מבוא מההליכים רוטרי-קאט Intracapsular (IRCP): A שונו נהלים Hysteromyomectomy בקידום שימור פוריות

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

למידה ניתוח מודרני הגרון במעבדה לחיתוך

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

השתלת כליה אורתוטופית במודל פורצין באמצעות 24 שעות שימור איברים וטלמטריה רציפה

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: שילוב של התבגרות במבחנה לאחר אחזור אוציט עם ניתוח גינקולוגי

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

שימור פוריות בחולים עם תפקוד לקוי של השחלות חמורות

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

מודל מכרסמים משופר של איסכמיה שריר הלב ופציעת רפרפוזיה

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...