Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

1. 업무 및 임상 상담
참고: 종양학적 이유로 불임 보존을 요구하는 환자의 경우, 일정 상담을 위한 대기자 명단이 없는지 확인하고 가능한 한 빨리 약속이 제공됩니다.
<ol><li>병력 및 이전 문서를 검사하고 환자의 전반적인 건강 상태를 평가합니다.</li>
	<li>관계형 데이터베이스에 모든 정보(암 환자의 경우 난소 자극을 받기 위한 종양 전문의의 승인 포함)를 기록합니다.</li>
...

임상 고려 사항 
난소 조직 냉동 보존 및 체외 성숙과 같은 새로운 전략이 탐구되었지만 COS 후 난소 의 진동은 불임 보존을위한 금 표준 기술입니다. 이 시나리오에서는 대부분의 암 환자가 암 치료를 시작하기 전에 한 난소 주기에서만 이익을 얻을 수 있기 때문에 검색되고 냉동 보존된 난모세포의 수를 가능한 한 짧은 시간에 최대화해야 합니다. 따라서, 적절한 ...

인간 난모세포에 대한 효율적인 냉동 보존 프로그램의 개발 및 구현은 생식 의학에서 중요한 돌파구였습니다. 최근 증거에 따르면, 유리화는 환자 집단(불임 환자 또는 난소세포 기증 프로그램)1,2,3과는 독립적으로 느린 동결에 비해 통계적으로 더 높은 생존율을 초래하기 때문에 전이형 II(MII) 난소류를 보존하는 가장 효과적인 전략이다. oocyte 진동의 놀라운 성과는 미국 생식 의학 학회 (ASRM)와 보조 생식 기술 협회 (SART)의 실천위원회가 후구 여성의 선택적 불임 보존에 가장 효과적이도록 발음하도록 이끌었습니다4,5,6. 불임 보존을 위한 의학 표시는 (i) 방사선 요법, 세포독성 화학요법 및 내분비 치료 (난소 예비에 해로운 효력이 모계 나이뿐만 아니라 치료의 유형 및 복용량과 연관되는) 와같은 치료를 필요로하는 (i) 암 및 자가 면역 질환을 포함합니다. (ii) 반복 또는 급진적 인 수술을 필요로하는 난소 질환 (자궁 내막증등)8; 및 (iii) 유전 적 상태 (예를 들어, X 연약) 또는 조기 난소 실패. 또한, 불임 보존은 비 의학적 이유 (사회적 동결로 도상)에 대한 부모의 목표를 달성하지 않은 모든 여성에게 가치있는 옵션이되었습니다.
불임 보존에 대한 표시와 불임 보존에 대한 주요 국제 지침에 따라, 그들의 난모세포에 대한 주요 국제 지침에 따라, 그들의 난모세포에 대한 모든 환자는 절차9,10,11,12,13의성공의 현실적인 기회, 비용, 위험 및 제한에 대해 통보할 적절한 상담을 받아야한다. 가장 중요한 것은, MII 난모세포의 코호트를 진동하는 것은 임신을 보장하지 않지만, 필요한 경우 체외 수정 (IVF) 치료에 미래의 성공의 더 높은 기회를 제공한다는 것을 분명히해야한다14. 이와 관련하여, 난낭체 진동시의 여성의 나이는 확실히 가장 중요한 제한 요인15 고급 모성 연령으로 (AMA; >35 년) 여성 불임의 주요원인이다 16. 난소 예비의 점진적 감소 외에, AMA는 신진 대사, 후성 유전학 조절, 세포 주기 체크포인트 및 메이오틱 분리17과같은 불완전한 생리적 경로로 인한 난소 세포의 능력의 손상과 관련이 있다. 따라서, 생체화하는 계란의 적당한 수는 주로 모성 나이에 달려 있습니다. 36 세 미만의 여성의 경우 성공 가능성을 최대화하기 위해 적어도 8-10 MII 난모세포18이 필요합니다. 일반적으로, 유리화 된 난모세포의 수가 높을수록 성공 가능성이 높습니다. 따라서, 항 뮐레리안 호르몬(AMH) 수준 또는 개미 여포 수(AFC)와 같은 난소 예비 마커에 따라 난소 자극을 조정하는 것은 가능한 한 짧은 시간에 난소 예비군을 완전히 활용하는 데 매우 중요합니다.
전체 절차의 안전은 불임 보존을 위해 환자를 등록할 때 다른 중요한 문제입니다. 임상의는 위험을 최소화하고 예방 (i)난소 과자극 증후군 (OHSS)을 방지하기 위해 최선의 전략을 채택해야 합니다 고나돌트로핀 방출 호르몬 (GnRH) 길항제 프로토콜과 같은 안전한 접근 법을 사용하여 GnRH 작용기 트리거19 및 (ii) 원격, 그러나 가능한, 복막 출혈의 위험, 골반 구조에 부상 (요관, 창자, 부록, 신경), 또는 oocyte 검색 하는 동안 골반 감염. 마지막으로, (iii) 자극을 위한 전통적인 식이요법은 초생리학적 혈청 estradiol과 연관되어 있기 때문에 유방암과 같은 에스트로겐 에스트로겐 에스트로겐 에민감한 질병에서는 권장되지 않습니다. 아로마타제 억제제(예: 레토졸 또는 타목시펜)를 포함하는 프로토콜은 이러한 경우20,21에서더 적합하다. 실험실 설정에서, oocyte 진동을 위한 가장 널리 퍼진 프로토콜은 여전히 Kuwayama와동료에의해 기술된 첫번째2,23입니다,극저온 보호제 (CPA)의 점진적인 추가를 관련시키는 단계적 절차로 이루어져 있습니다. 제1상(평형/탈수)에서, 난모세포는 7.5% v/v 에틸렌 글리콜 및 7.5% v 디메틸 설프리산화물(DMSO)을 함유한 CPA 용액에 노출되며, 2상에서는, 난소세포는 15% v/v 에틸렌 글리콜과 15% v/v DMSO, 0.5 mol/L 자당으로 바이트화 용액으로 이동됩니다. 생체화 의 매체에서 짧은 배양 후, 난소 세포는 특별히 설계, 열 극저온 장치에 배치하고 마지막으로 사용 될 때까지 저장 - 196 °C에서 액체 질소에 급락 할 수 있습니다.
여기서, 불임 보존 치료의 전체 임상 및 실험실 작업업은 (i) 객관적이고 증거 기반 상담을 위한 권고사항을 요약하고, (ii) 절차의 비용 효과에 초점을 맞추고, (iii) 난소 예비를 완전히 활용하고 가능한 한 짧은 시간에 회수된 난소 세포의 수를 최대화하는 가장 적합한 전략을 설명하는 것으로 설명하였다. 난소 예비의 평가, 이상적인 자극 프로토콜의 정의뿐만 아니라 난소 검색, 비하 및 유리화 절차는 효능, 효율성 및 안전을 극대화하는 접근 방식과 함께 자세히 설명될 것입니다. 이 프로토콜의 다른 프로토콜 또는 적응이 문헌에 존재하므로 이 원고의 대표 결과 및 토론 섹션은 이 절차에만 적용됩니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

여성의 불임 을 보존하는 것은 환자의 미래의 삶의 질을 돌보는 다기능 의료 시스템에서 중요합니다. Oocyte 냉동 보존은 의료 및 비 의학 표시 모두에 대한 후구 여성의 불임 보존을위한 금 본위제로 여러 국제 과학 사회에 의해 인식된다. 주요 의학적 징후는 종양학 질환, 심한 자궁내막증과 같은 부인과 질환, 난소 보호구역을 손상시키는 전신 질환 및 조기 폐경과 관련된 유전적 상태입니다. 이 논문은 객관적이고 증거 기반 상담을 위한 권고사항을 요약하여 불임 보존 치료의 전체 임상 및 실험실 작동을 설명합니다. 또한 절차의 효과에 중점을 두고 난소 예비를 완전히 활용하고 가능한 한 짧은 시간에 검색된 난소 세포의 수를 최대화하는 가장 적절한 전략을 설명합니다. 난소 예비의 평가, 이상적인 자극 프로토콜의 정의뿐만 아니라 난소 검색, 비하 및 유리화 절차는 효능, 효율성 및 안전을 극대화하는 접근 방식과 함께 상세합니다.

센터의 불임 보존 프로그램 개요
12년 기간(2008-2020년) 동안 285명의 여성이 수집된 성숙한 계란의 전체 코호트의 병용을 수반하는 적어도 하나의 난낭화물 검색을 시행했습니다. 이들 여성의 대부분(n=250)은 단일 검색을 거쳤으며 35명이 여러 번 검색을 거쳤습니다. 계란 유리화에 대한 난소 세포 검색을 받는 이유는 의료 (암 제외), 암, 비 의료 및 기타 4 가지 범주?...

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Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Oocyte 냉동 보존은 후구형 여성의 불임 보존을위한 금 본위제로 여러 국제 과학 사회에 의해 인식된다. 적절한 임상 및 실험실 전략은 불임 보존 치료의 효능, 효율성 및 안전을 최대한 보장합니다.

오키테 바이트로피화를 통한 불임 보존: 임상 및 실험실 관점

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

난수성 진동과 온난화 절차는 불임 보존에 필수적입니다. 설명된 대로 이 프로토콜을 따라 사용자가 이러한 절차의 효과를 극대화할 수 있습니다. 난소 진동을 위한 불임 보존은 오늘날 확립되고 윤리적으로 허용되는 접근 방식입니다.그것은 효과적이고 일관된 임상 결과를 달성하고 태아 냉동 보존과 관련된 도덕적, 법적 한계를 극복 할 수 있습니다. 시험성 공정에 대한 숙련도를 달성하기 위해서는 프로토콜의 모든 중요한 점에 익숙해지기 위해 극저온 보호제에 대한 샘플의 노출 시간에 특히 주의를 기울이는 것이 중요합니다. 검색 후 38시간 이내에, 모든 플라스틱 소모품을 환자의 이름, ID 및 유형의 솔루션으로 라벨을 부착하고 증인에게 냉동 장치에 대한 환자의 정보를 확인하도록 요청합니다.모든 소모품이 라벨이 붙었을 때, 인체 혈청 알부민으로 보충된 HEPES 버퍼 매체의 30 마이크로리터 드롭과 페트리 접시에 30 마이크로리터 인접 한 방울을 혼합하고 놓기 위해 각 난모세포의 각 유리병을 여러 번 조심스럽게 반전시하십시오. 스트리퍼 파이펫을 사용하여 첫 번째 낙하에 난모를 배치하고 평형 용액의 30 마이크로 리터 드롭에 중간의 다리를 만들어 냉동 보호제의 농도가 점진적으로 증가합니다. 3분 후, 플레이트에 평형 용액의 두 번째 30 마이크로리터 드롭을 추가하고 파이펫을 사용하여 용액 방울 사이의 중간 다리를 만듭니다.난모세포가 평형화되는 동안 각 극저온 장치에 대해 30 마이크로리터 드롭한을 플레이트에 사용합니다. 3분 후, 난모세포를 순수 평형 솔루션으로 이동하여 난모세포가 초기 크기로 돌아갈 수 있도록 합니다. 난모세포가 회복되면 1밀리리터의 진동용액을 포함하는 중앙 우물 IVF 접시를 준비하십시오.난모를 가능한 한 적은 매체로 접시에 옮기고 조심스럽게 이동하여 과도한 평형 솔루션을 제거합니다. 인큐베이션이 끝나기 약 10초 전에 현미경으로 환자의 정보로 표시된 냉동 장치를 배치하고 저온 장치의 끝에 초점을 조정합니다. 최소 량의 바이트화 용액에 팁 옆에 나온화물을 놓고 스트리퍼 파이펫을 난모세포에서 멀리 이동하여 과도한 진동 용액을 제거하여 나분모를 중간 층으로 덮어 둡니까.냉동고 장치를 액체 질소로 빠르게 급락시키고 장치를 빠르게 흔들어 표면에서 기포를 제거합니다. 저온 장치의 보호 캡을 핀셋으로 잡고, 액체 질소에 프로필렌 스트립을 유지하면서 캡에 장치를 삽입하기 전에 액체 질소로 캡을 채웁니다. 그런 다음 환자의 정보로 표시된 비소튜브에 냉동 장치를 저장하고 실험실 시트를 업데이트합니다.오취물 온난화의 경우 실온으로 따뜻하게 된 해동, 희석 및 세척 용액의 각 유리병을 조심스럽게 반납하고 37°C에서 적어도 1시간 동안 페트리 접시의 중앙 우물에 해빙 용액 1밀리리터를 추가합니다. 모든 플라스틱 소모품을 환자의 이름과 ID 및 용액 유형으로 라벨을 부착하고 증인에게 냉동 장치에 대한 환자의 정보를 확인하도록 요청합니다. 각 장치를 데우려면 6개의 웰 플레이트의 첫 번째 웰에 200 마이크로리터의 희석 용액을 추가하고 플레이트의 두 번째 및 세 번째 우물에 동일한 양의 세척 용액을 추가합니다.용액 증발을 방지하기 위해 우물 바깥쪽에 PBS를 추가합니다. 스테레오 현미경 아래에 해동 용액의 접시를 놓고 접시의 중심에 초점을 조정합니다. 극저온 장치의 보호 캡을 제거하고 프로필렌 스트립을 액체 질소로 유지하고 냉동 장치를 액체 질소에서 해동 용액으로 최대한 빨리 전송하여 탈용량의 위험을 피하기 위해 조심스럽게 비틀어냅니다.1 분 후, 난모를 찾기 위해 냉동 장치의 끝에 초점을 맞추고 결국 부드럽게 장치에서 난모를 해제스트리퍼 파이펫을 사용합니다. 170미크론 직경스트리퍼 파이펫을 사용하여 6개의 웰 플레이트 중 첫 번째 웰에서 오사이클과 소량의 해동 용액을 희석 용액으로 이송합니다. 3분 후, 난모세포를 첫 번째 세척 용액으로 5분간 이동합니다.인큐베이션이 끝나면 난소구를 세척 용액의 두 번째 우물로 옮기고 1분 동안 섭씨 37도에서 배양한 후 1시간 동안 미리 평형된 IVF 배양 배지의 적절한 부피로 옮기고 실험실 시트를 업데이트한다. 12 년 기간 동안, 285 명의 여성이 수집 된 성숙한 계란의 전체 코호트의 유리화를 수반하는 적어도 하나의 난낭화물 검색을 받았습니다. 이 여자의 대부분은 단 하나 검색을 겪었습니다.35는 여러 번의 검색을 거쳤습니다. 계란 유리화에 대한 난소 세포 검색을 받는 이유는 일반적으로 암, 암, 비 의학 및 기타 이외의 의료로 특징지어졌습니다. 난자 진동에 대한 의학적 이유가있는 환자와 암 으로 인해 불임 보존을 받는 환자는 더 젊었으며 비의학 또는 기타 이유로 환자보다 더 높은 개량 여포 수를 보였습니다.그러나, 평균 성숙율이 환자의 의학적 이유로 약간 낮았기 때문에, 평균적으로 진동하는 난모세포의 수는 그룹 사이에서 유사했습니다. 암 이외의 의학적 이유로 환자의 약 절반은 계란 진동을 위한 그밖 이유를 가진 환자의 대다수가 실제로 온난화를 위해 돌아왔습니다. 반대로, 암 또는 비의학 이유로 불임 보존을 받은 거의 환자가 IVF를 위해 그들의 유리화 된 난소세포를 사용했습니다.진동과 온난화 사이의 경과 시간의 차이에도 불구하고, 난모세포의 생존율은 환자 그룹 간에 유사하여 난소 진동및 온난화 프로토콜의 효능과 안전성을 확인하였다. 더욱이 생존율은 진동과 온난화 작업자의 경험과 무관했다. 결과의 일관성에 영향을 미칠 수 있는 가장 중요 한 단계는 온난화와 관련 된 하나입니다.따라서 해동 용액의 부피와 온도를 신중하게 제어하는 것이 매우 중요합니다. 난소 조직 냉동 보존은 현재 전 사춘기 환자를위한 옵션으로 현재 조사 중인 유일한 전략입니다. 유망하지만 이 접근 방식은 응용 프로그램을 제한하는 중요한 제한이 있습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

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연구

의학

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Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

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Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...