Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

1. Arbeid og klinisk rådgivning
MERK: Ved pasienter som krever fertilitetsbevaring av onkologiske grunner, må du sørge for at det ikke er noen venteliste for planlegging av konsultasjon, og avtalen er gitt så snart som mulig.
<ol><li>Undersøke sykehistorien og tidligere dokumentasjon, og vurdere pasientens generelle helsetilstand.</li>
	<li>Registrer all informasjon (inkludert onkologens godkjenning for å gjennomgå eggstokkstimulering i tilfelle kreftpasienter) i en relasjonsdatabase....

Kliniske hensyn 
Selv om nye strategier, som ovarian vev kryopreservering og in vitro modning, har blitt utforsket, oocyte vitrification etter COS er gull standard teknikk for fruktbarhet bevaring. I dette scenariet bør antall oocytter som hentes og kryopreserveres maksimeres på kortest mulig tid, da de fleste kreftpasienter kan ha nytte av en eggstokksyklus før de må starte kreftbehandlingen(e). Dermed er en riktig ovariestimuleringsprotokoll avgjørende for å utnytte eg...

Utvikling og implementering av et effektivt kryopreserveringsprogram for humane oocytter har vært et betydelig gjennombrudd i reproduktiv medisin. Ifølge nyere bevis er vitrifisering den mest effektive strategien for å kryopreservere metafase II (MII) oocytter, da det resulterer i statistisk høyere overlevelsesrater sammenlignet med langsom frysing, uavhengig av pasientpopulasjonen (ufruktbare pasienter eller oocyttdonasjonsprogram)1,2,3. De bemerkelsesverdige prestasjonene av oocytt vitrification førte til at Practice Committees of the American Society for Reproductive Medicine (ASRM) og Society for Assisted Reproductive Technology (SART) uttaler denne teknikken for å være den mest effektive for elektiv fruktbarhet bevaring hos postpubertal kvinner, for både medisinske og ikke-medisinskeindikasjoner 4,5,6. Medisinske indikasjoner for fruktbarhet bevaring inkluderer (i) kreft og autoimmune sykdommer som kreverterapier 7 som strålebehandling, cytotoksisk kjemoterapi, og endokrine terapi (hvis skadelige effekt på ovariereservatet er forbundet med mors alder samt type og dose av behandlingen); (ii) ovariesykdommer som krever gjentatt eller radikal kirurgi (som endometriosis)8; og (iii) genetiske tilstander (f.eks. X-skjøre) eller for tidlig ovarialsvikt. I tillegg har fruktbarhet bevaring blitt et verdifullt alternativ for alle kvinner som ikke har oppnådd sitt foreldremål av ikke-medisinske grunner (også kjent som sosial frysing).
Uavhengig av indikasjonen på fruktbarhet bevaring og i henhold til de store internasjonale retningslinjene for fruktbarhet bevaring, alle pasienter som er villige til å vitrify sine oocytter bør få passende rådgivning for å bli informert om deres realistiske sjanse for suksess, kostnader, risiko og begrensninger i prosedyren9,10,11,12,13. Viktigst, det bør være klart at vitrifisere en kohort av MII oocytter ikke sikrer en graviditet, men at det gir større sjanse for suksess for fremtidig in vitro befruktning (IVF) behandling, om nødvendig14. I denne forbindelse er kvinnens alder på tidspunktet for oocytt vitrifisering absolutt den viktigste begrensende faktoren15 som avansert mors alder (AMA, >35 år) er hovedårsaken til kvinnelig infertilitet16. Foruten en progressiv reduksjon i eggstokkreservatet, er AMA forbundet med en svekkelse av oocyttkompetanse på grunn av defekte fysiologiske veier som metabolisme, epigenetisk regulering, cellesykluskontrollpunkter og meiotisk segregering17. Derfor avhenger det rimelige antall egg å vitrify hovedsakelig av mors alder. Hos kvinner under 36 år kreves minst 8-10 MII oocytes18 for å maksimere sjansen for suksess. Generelt, jo høyere antall vitrified oocytter, jo høyere er sannsynligheten for suksess. Derfor er skreddersøm ovarian stimulering i henhold til ovariereservat markører som anti-Müllerian hormon (AMH) nivåer eller antral follicle count (AFC) avgjørende for å utnytte ovariereservatet på kortest mulig tid.
Sikkerheten til hele prosedyren er det andre sentrale problemet når du registrerer pasienter for fruktbarhet bevaring. Klinikere bør bruke de beste strategiene for å minimere risikoen og forhindre (i) ovariehyperstimuleringssyndrom (OHSS) ved å bruke sikre tilnærminger som gonadotrophinfrigjørende hormon (GnRH) antagonistprotokoll etterfulgt av en GnRH-agonistutløser19 og (ii) fjernkontrollen, likevel mulig, risiko for peritoneal blødning, skade på bekkenstrukturene (urinleder, tarm, vedlegg, nerver) eller bekkeninfeksjon under oocyttuthenting. Til slutt er (iii) tradisjonelle regimer for stimulering forbundet med supraphysiologic serum østradiol og anbefales derfor ikke i østrogenfølsomme sykdommer som brystkreft. Protokoller som involverer aromatasehemmere (som letrozol eller tamoxifen) er mer egnet i disse tilfellene20,21. I laboratorieinnstillingen er den mest utbredte protokollen for oocytt vitrifisering fortsatt den som først er beskrevet av Kuwayama og kolleger2,23, som består av en trinnvis prosedyre som involverer gradvis tilsetning av kryopreotektanter (CPAer). I den første fasen (likevekt/dehydrering) eksponeres oocytter i en CPA-løsning som inneholder 7,5 % v/v etylenglykol og 7,5 % v/v dimetylsulfoksid (DMSO), mens de er i andre fase, oocytter flyttes til en vitrifiseringsløsning med 15% v / v etylenglykol og 15% v / v DMSO, pluss 0,5 mol / L sukrose. Etter en kort inkubasjon i vitrifiseringsmediet kan oocyttene plasseres i spesielt designede, åpne kryodevices og til slutt dyppes i flytende nitrogen ved -196 °C som skal lagres til bruk.
Her har hele det kliniske og laboratoriearbeid av en fertilitetsbevaringsbehandling blitt beskrevet av (i) skissere anbefalinger for objektiv og evidensbasert rådgivning, (ii) med fokus på kostnadseffektiviteten av prosedyren, og (iii) beskrive de mest hensiktsmessige strategiene for å utnytte eggstokkreservatet fullt ut og maksimere antall oocytter hentet på kortest mulig tid. Evalueringen av eggstokkreservatet, definisjonen av en ideell stimuleringsprotokoll, samt oocyttuthenting, denudasjon og vitrifiseringsprosedyrer vil bli detaljert sammen med tilnærminger for å maksimere deres effekt, effektivitet og sikkerhet. Ettersom det finnes andre protokoller eller tilpasninger av denne protokollen i litteraturen, gjelder de representative resultatene og diskusjonsdelene i dette manuskriptet bare for denne prosedyren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

Bevaring av kvinnelig fruktbarhet er avgjørende i et multifunksjonelt helsevesen som tar vare på pasientenes fremtidige livskvalitet. Oocyte kryopreservering er anerkjent av flere internasjonale vitenskapelige samfunn som gullstandarden for fruktbarhet bevaring i postpubertal kvinner, for både medisinske og ikke-medisinske indikasjoner. De viktigste medisinske indikasjonene er onkologiske sykdommer, gynekologiske sykdommer som alvorlig endometriosis, systemiske sykdommer som kompromitterer eggstokkreservatet, og genetiske forhold som involverer for tidlig overgangsalder. Denne artikkelen beskriver hele det kliniske og laboratoriearbeid av en fertilitetsbevaringsbehandling ved å skissere anbefalinger for objektiv og evidensbasert rådgivning. Videre fokuserer den på effektiviteten av prosedyren og beskriver de mest hensiktsmessige strategiene for å utnytte eggstokkreservatet fullt ut og maksimere antall oocytter hentet på kortest mulig tid. Evalueringen av ovariereservatet, definisjonen av en ideell stimuleringsprotokoll, samt oocyttuthenting, benektelse og vitrifiseringsprosedyrer har blitt detaljert sammen med tilnærminger for å maksimere effekt, effektivitet og sikkerhet.

Oversikt over fruktbarhet bevaring programmet på senteret
Over en 12-årsperiode (2008-2020) gjennomgikk 285 kvinner minst en oocyttuthenting som medførte vitrifisering av hele kohorten av modne egg samlet. De fleste av disse kvinnene (n = 250) gjennomgikk en enkelt gjenfinning, og 35 gjennomgikk flere gjenfinninger. Årsakene til å gjennomgå oocyttuthenting for egg vitrifisering er oppsummert i 4 kategorier: medisinsk (unntatt kreft), kreft, ikke-medisinsk og andre. Blant...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Oocyte kryopreservering er anerkjent av flere internasjonale vitenskapelige samfunn som gullstandarden for fruktbarhet bevaring i postpubertal kvinner. Hensiktsmessige kliniske og laboratoriestrategier sikrer maksimal effekt, effektivitet og sikkerhet av fruktbarhet bevaring behandlinger.

Ufrivillig bevaring gjennom Oocyte Vitrification: Kliniske og laboratorieperspektiver

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Oocytt vitrifisering og oppvarming prosedyrer er avgjørende for fruktbarhet bevaring. Hvis du følger denne protokollen som vist, kan en bruker maksimere effektiviteten av disse prosedyrene. Ufrivillig bevaring for oocytt vitrification er i dag en etablert og etisk akseptabel tilnærming.Det tillater å oppnå effektive og konsistente kliniske resultater og overvinne den moralske og juridiske begrensningen forbundet med embryokryopservering. For å oppnå ferdigheter med vitrifiseringsprosessen er det viktig å bli kjent med alle de kritiske punktene i protokollen, og være spesielt oppmerksom på eksponeringstiden for prøvene til kryoprektantene. Innen 38 timer etter gjenfinning og umiddelbart etter benektelse, merk alle plastforsyningene med pasientens navn, ID og type løsning, og be et vitne om å bekrefte pasientens informasjon på kryoenheten.Når alle forsyningene er merket, inverterer du forsiktig hvert hetteglass med oocytter flere ganger for å blande og plassere en 30 mikroliterdråpe HEPES-buffermedium supplert med humant serumalbumin og en 30 mikroliter tilstøtende dråpe likevektsløsning på en petriskål. Bruk stripperpipetten til å plassere oocyttene i første dråpe og lag en bro av medium til en 30 mikroliter dråpe likevektsløsning for å oppnå en gradvis økning i konsentrasjonen av kryopreotektantene. Etter tre minutter legger du til en ekstra 30 mikroliterdråpe likevektsløsning til platen og bruker pipetten til å lage en middels bro mellom løsningsdråpene.Mens oocyttene likevekter, tilsett en 30 mikroliter dråpe likevektsløsning for hver kryoenhet som skal brukes på platen. Etter tre minutter flytter du oocyttene inn i den rene likevektsløsningen i seks til ni minutter for å la oocyttene gå tilbake til sin opprinnelige størrelse. Når oocyttene har kommet seg, lag en sentral brønn IVF-tallerken som inneholder en milliliter vitrifiseringsløsning.Overfør oocyttene til parabolen i så lite medium som mulig og flytt dem forsiktig for å fjerne overflødig likevektsløsning. Omtrent 10 sekunder før inkubasjonens slutt, plasser en kryoenhet merket med pasientens informasjon under mikroskopet og juster fokuset på spissen av kryoenheten. Plasser oocyttene på cryo-enheten ved siden av spissen i den minste mengden vitrifiseringsløsning og flytt stripperpipetten bort fra oocyttene for å fjerne overflødig vitrifiseringsløsning, slik at oocyttene er dekket med et tynt lag av medium.Dypp kryoenheten raskt i flytende nitrogen og rist enheten raskt for å fjerne eventuelle luftbobler fra overflaten. Hold beskyttelseshetten på kryoenheten med pinsett, fyll hetten med flytende nitrogen før du setter enheten inn i hetten mens du holder propylenstrimlene i flytende nitrogen. Oppbevar deretter kryoenheten i en visotube merket med pasientens informasjon og oppdater laboratoriearket.For oocyttoppvarming, inverter forsiktig hvert hetteglass med tining, fortynning og vaskeløsning oppvarmet til romtemperatur, og tilsett en milliliter opptiningsløsning til den sentrale brønnen til en petriskål i minst en times inkubasjon ved 37 grader Celsius. Merk alle plastforsyningene med pasientens navn og ID og type løsning, og be et vitne om å bekrefte pasientens informasjon på kryoapparatet. For hver enhet som skal varmes opp, tilsett 200 mikroliter fortynningsløsning til den første brønnen på en seks brønnplate og tilsett et likt volum vaskeløsning til den andre og tredje brønnen av platen.Tilsett PBS i området på utsiden av brønnene for å forhindre løsningsfordampning. Plasser tallerkenen med opptiningsoppløsning under stereomikroskopet og juster fokuset til midten av parabolen. Vri forsiktig for å fjerne beskyttelseshetten på en kryoenhet mens du holder propylenstrimlene i flytende nitrogen og overfør kryoenheten fra det flytende nitrogenet til opptiningsløsningen så raskt som mulig for å unngå risikoen for devitrifisering.Etter ett minutt, fokuser på spissen av cryo-enheten for å finne oocyttene og til slutt bruke en stripperpipette for å forsiktig frigjøre oocyttene fra enheten. Bruk en stripperpipette med 170 mikrondiameter til å overføre oocyttene og et lite volum opptiningsløsning til fortynningsløsningen i den første brønnen på de seks brønnplatene. Etter tre minutter flytter du oocyttene inn i den første vaskeløsningen i fem minutter.På slutten av inkubasjonen overfører du oocyttene til den andre brønnen av vaskeløsning og inkuberer ved 37 grader Celsius i ett minutt før du overfører oocyttene til et passende volum av forhåndsoverveid IVF-kulturmedium i en time og oppdaterer laboratoriearket. Over en 12 års periode gjennomgikk 285 kvinner minst en oocyttuthenting som medførte vitrifisering av hele kohorten av modne egg samlet. De fleste av disse kvinnene gjennomgikk en enkelt gjenfinning.35 gjennomgikk flere gjenfinninger. Årsakene til å gjennomgå oocyttuthenting for egg vitrifisering ble generelt karakterisert som medisinsk annet enn kreft, kreft, ikke-medisinsk og andre. Pasienter med medisinsk årsak til egg vitrifisering og pasienter som gjennomgår fruktbarhet bevaring på grunn av kreft var yngre og viste høyere antral follikulær teller enn pasienter med ikke-medisinske eller andre grunner.Men ettersom gjennomsnittsmodningsratene var litt lavere i de medisinske årsakene til at pasientene, var antall oocytter vitrifisert i gjennomsnitt likt mellom gruppene. Omtrent halvparten av pasientene med andre medisinske årsaker enn kreft, og de fleste pasienter med andre årsaker til eggvistrifisering kom faktisk tilbake for oppvarming. Omvendt brukte svært få pasienter som gjennomgikk fruktbarhet bevaring for kreft eller ikke-medisinske årsaker sine vitrified oocytter for IVF.Til tross for forskjeller i tiden som gikk mellom vitrifisering og oppvarming, var overlevelsesraten til oocyttene lik mellom pasientgrupper, noe som bekreftet effekten og sikkerheten til oocytt vitrifiserings- og oppvarmingsprotokollene. Videre var overlevelsesraten uavhengig av vitrifiserings- og oppvarmingsoperatørens erfaring. De mest avgjørende trinnene som kan påvirke konsistensen av resultatene er den som er relatert til oppvarming.Derfor er det veldig viktig å nøye kontrollere volumet og temperaturen på opptiningsløsningene. Ovarievev kryopreservering den eneste strategien som for tiden undersøkes som et alternativ for pre-pubertal pasienter. Selv om det er lovende, har denne tilnærmingen viktig begrensning som begrenset applikasjonen.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation<em&gt; In Vivo</em&gt; Gjennom en polert og Forsterket Thin-skull Cranial Window

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Clinical Assessment of Spatiotemporal Gait Parameters in Patients and Older Adults

Klinisk vurdering av Spatiotemporal Gangart parametere hos pasienter og eldre voksne

Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Funksjonell Menneskelig Liver Bevaring og gjenoppretting ved hjelp av Subnormothermic Machine Perfusjons

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Metodikk for Sputum induksjon og laboratoriet behandling

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Innføring av Intracapsular Rotary-kutt prosedyrer (IRCP): en endret Hysteromyomectomy prosedyrer tilrettelegge fertilitet bevaring

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Lære moderne laryngeal kirurgi i et disseksjonslaboratorium

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Ortotopisk nyre auto-transplantasjon i en svin modell ved hjelp av 24 timer organ bevaring og kontinuerlig telemetri

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Kombinere in vitro modning etter Oocyte Gjenfinning med gynekologisk kirurgi

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Ufrivillig bevaring hos pasienter med alvorlig ovarial dysfunksjon

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Forbedret gnagermodell av myokard iskemi og reperfusjonsskade

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...