Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
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1. Work-up e aconselhamento clínico
NOTA: No caso de pacientes que necessitam de preservação da fertilidade por razões oncológicas, certifique-se de que não há lista de espera para consulta de agendamento, e a consulta é fornecida o mais rápido possível.
<ol><li>Examine o histórico médico e a documentação prévia e avalie o estado geral de saúde do paciente.</li>
	<li>Registo todas as informações (incluindo a aprovação do oncologista para se submeter à estimulação ovari...

Considerações clínicas 
Embora estratégias emergentes, como a criopreservação do tecido ovariano e a maturação in vitro, tenham sido exploradas, a vitrificação oócida após a COS é a técnica padrão-ouro para a preservação da fertilidade. Nesse cenário, o número de oócitos recuperados e criopreservados deve ser maximizado no menor tempo possível, pois a maioria dos pacientes com câncer pode se beneficiar apenas de um ciclo ovariano antes de ter que iniciar ...

O desenvolvimento e implementação de um programa eficiente de criopreservação para oócitos humanos tem sido um avanço significativo na medicina reprodutiva. De acordo com evidências recentes, a vitrificação é a estratégia mais eficaz para criopreservar os oócitos de metafase II (MII), pois resulta em taxas de sobrevivência estatisticamente mais elevadas em comparação com o congelamento lento, independentemente da população do paciente (pacientes inférteis ou programa de doação de oócitos)1,2,3. As realizações notáveis da vitrificação oócica levaram os Comitês de Prática da Sociedade Americana de Medicina Reprodutiva (ASRM) e da Sociedade de Tecnologia Reprodutiva Assistida (SART) a pronunciar essa técnica como a mais eficaz para a preservação da fertilidade eletiva em mulheres pós-aubertas, tanto para indicações médicas quanto não médicas4,5,6. As indicações médicas para preservação da fertilidade incluem (i) câncer e doenças autoimunes que requerem terapias7, como radioterapia, quimioterapia citotóxica e terapia endócrina (cujo efeito prejudicial na reserva ovariana está associado à idade materna, bem como tipo e dose do tratamento); (ii) doenças ovarianas que requerem cirurgia repetida ou radical (como a endometriose)8; e (iii) condições genéticas (por exemplo, X-frágil) ou insuficiência ovariana prematura. Além disso, a preservação da fertilidade tornou-se uma opção valiosa para todas as mulheres que não realizaram seu objetivo parental por razões não médicas (também conhecidas como congelamento social).
Independentemente da indicação para a preservação da fertilidade e de acordo com as principais diretrizes internacionais sobre preservação da fertilidade, todos os pacientes dispostos a vitrifar seus oócitos devem receber aconselhamento adequado para serem informados sobre sua chance realista de sucesso, os custos, riscos e limitações do procedimento9,10,11,12,13. Mais importante, deve-se deixar claro que vitrificar uma coorte de oócitos MII não garante uma gravidez, mas que oferece uma maior chance de sucesso para o futuro tratamento de fertilização in vitro (FIV), se necessário14. Nesse sentido, a idade da mulher no momento da vitrificação do oócito é certamente o fator limitante mais importante15, pois a idade materna avançada (AMA; >35 anos) é a principal causa da infertilidade feminina16. Além de uma redução progressiva da reserva ovariana, a AMA está associada a um comprometimento da competência do oócito devido a vias fisiológicas defeituosas, como metabolismo, regulação epigenética, pontos de verificação do ciclo celular e segregação média17. Portanto, o número razoável de ovos para vitrify depende principalmente da idade materna. Em mulheres com menos de 36 anos, pelo menos 8-10 oócitos MII18 são necessários para maximizar a chance de sucesso. Em geral, quanto maior o número de oócitos vitrificados, maior é a probabilidade de sucesso. Portanto, a adaptação da estimulação ovariana de acordo com marcadores de reserva ovariana, como os níveis de hormônio anti-Mülleriano (AMH) ou a contagem de folículos antral (AFC) é crucial para explorar totalmente a reserva ovariana no menor tempo possível.
A segurança de todo o procedimento é a outra questão fundamental na inscrição de pacientes para preservação da fertilidade. Os médicos devem empregar as melhores estratégias para minimizar os riscos e prevenir (i)síndrome de hiperestimulação ovariana (OHSS) usando abordagens seguras, como o protocolo antagonista do hormônio liberador de gonadotrophin (GnRH), seguido por um agonista gnrh gatilho19 e (ii) o remoto, ainda possível, riscos de hemorragia peritoneal, lesão nas estruturas pélvicas (ureter, intestino, apêndice, nervos) ou infecção pélvica durante a recuperação do oócito. Por fim, (iii) os regimes tradicionais de estimulação estão associados ao estradiol soro suprafisiológico e, portanto, não são recomendados em doenças sensíveis ao estrogênio, como o câncer de mama. Protocolos envolvendo inibidores de aromatase (como letrozol ou tamoxifen) são mais adequados nesses casos20,21. No ambiente laboratorial, o protocolo mais difundido para vitrificação de oócitos ainda é o primeiro descrito por Kuwayama e seus colegas2,23, que consiste em um procedimento passo a passo envolvendo a adição gradual de crioprotetores (CPAs). Na primeira fase (equilíbrio/desidratação), os oócitos são expostos em uma solução CPA contendo 7,5% v/v de etileno glicol e 7,5% v/v de sulfóxido de dimetil (DMSO), enquanto na segunda fase, osócitos são movidos para uma solução de vitrificação com 15% v/v de etileno glicol e 15% v/v DMSO, mais 0,5 mol/L sacarose. Após uma breve incubação no meio da vitrificação, os oócitos podem ser colocados em criodes específicos, abertos e finalmente mergulhados em nitrogênio líquido a -196 °C para serem armazenados até o uso.
Aqui, todo o trabalho clínico e laboratorial de um tratamento de preservação da fertilidade foi descrito por (i) delinear recomendações para aconselhamento objetivo e baseado em evidências, (ii) com foco no custo-efetividade do procedimento, e (iii) descrever as estratégias mais adequadas para explorar plenamente a reserva ovariana e maximizar o número de oócitos recuperados no menor tempo possível. A avaliação da reserva ovariana, a definição de um protocolo ideal de estimulação, bem como os procedimentos de recuperação de oócitos, desnudação e vitrificação serão detalhados, juntamente com abordagens para maximizar sua eficácia, eficiência e segurança. Como existem outros protocolos ou adaptações desse protocolo na literatura, os resultados representativos e as seções de discussão deste manuscrito só se aplicam a este procedimento.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

A preservação da fertilidade feminina é crucial em um sistema de saúde multifuncional que cuida da qualidade de vida futura das pacientes. A criopreservação de oócito é reconhecida por várias sociedades científicas internacionais como o padrão ouro para a preservação da fertilidade em mulheres pós-púbertas, tanto para indicações médicas quanto não médicas. As principais indicações médicas são doenças oncológicas, doenças ginecológicas como endometriose grave, doenças sistêmicas que comprometem a reserva ovariana e condições genéticas envolvendo menopausa prematura. Este artigo descreve todo o trabalho clínico e laboratorial de um tratamento de preservação da fertilidade, delineando recomendações para aconselhamento objetivo e baseado em evidências. Além disso, foca-se na eficácia do procedimento e descreve as estratégias mais adequadas para explorar plenamente a reserva ovariana e maximizar o número de oócitos recuperados no menor tempo possível. A avaliação da reserva ovariana, a definição de um protocolo ideal de estimulação, bem como os procedimentos de recuperação de oócitos, desnudação e vitrificação foram detalhados, juntamente com abordagens para maximizar sua eficácia, eficiência e segurança.

Visão geral do programa de preservação da fertilidade no centro
Durante um período de 12 anos (2008-2020), 285 mulheres foram submetidas a pelo menos uma recuperação de oócitos, implicando a vitrificação de toda a coorte de ovos maduros coletados. A maioria dessas mulheres (n=250) foi submetida a uma única recuperação, e 35 foram submetidas a múltiplas recuperações. As razões para a recuperação de oócitos para vitrificação de óvulos são resumidas em 4 ca...

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Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

A criopreservação oócito é reconhecida por várias sociedades científicas internacionais como o padrão ouro para a preservação da fertilidade em mulheres pós-púbertas. Estratégias clínicas e laboratoriais adequadas garantem a máxima eficácia, eficiência e segurança dos tratamentos de preservação da fertilidade.

Preservação da Fertilidade Através da Vitrificação de Oócitos: Perspectivas Clínicas e Laboratoriais

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

A vitrificação oócida e os procedimentos de aquecimento são essenciais para a preservação da fertilidade. Seguir este protocolo como demonstrado permite que um usuário maximize a eficácia desses procedimentos. A preservação da fertilidade para a vitrificação oócida é hoje uma abordagem estabelecida e eticamente aceitável.Permite alcançar desfechos clínicos eficazes e consistentes e superar a limitação moral e legal associada à criopreservação de embriões. Para alcançar a proficiência com o processo de vitrificação, é importante familiarizar-se com todos os pontos críticos do protocolo, prestando especial atenção ao tempo de exposição das amostras aos crioprotetores. Dentro de 38 horas após a recuperação e imediatamente após a desnudação, rotule todos os suprimentos plásticos com o nome do paciente, RG e tipo de solução, e peça a uma testemunha que confirme as informações do paciente sobre o dispositivo crio.Quando todos os suprimentos tiverem sido rotulados, inverta cuidadosamente cada frasco de oócitos várias vezes para misturar e colocar uma gota de 30 microliter de meio tampão HEPES complementado com albumina de soro humano e uma solução de 30 microliter adjacente de solução de equilíbrio em uma placa de petri. Use a pipeta de stripper para colocar os oócitos na primeira gota e criar uma ponte de média a 30 microliteres de solução de equilíbrio para obter um aumento gradual na concentração dos crioprotetores. Após três minutos, adicione uma segunda gota de 30 microliter de solução de equilíbrio à placa e use a pipeta para criar uma ponte média entre as gotas de solução.Enquanto os oócitos estão se equilibrando, adicione uma queda de 30 microliter de solução de equilíbrio para cada dispositivo criogeno a ser usado na placa. Após três minutos, mova os oócitos para a solução de equilíbrio puro por seis a nove minutos para permitir que os oócitos retornem ao seu tamanho inicial. Quando os oócitos se recuperarem, prepare um prato de FIV de poço central contendo um mililitro de solução de vitrificação.Transfira os oócitos para o prato no mínimo possível e mova-os cuidadosamente para remover qualquer solução de equilíbrio em excesso. Aproximadamente 10 segundos antes do fim da incubação, coloque um dispositivo criofilado rotulado com as informações do paciente sob o microscópio e ajuste o foco na ponta do dispositivo crio. Coloque os oócitos no dispositivo criogeno ao lado da ponta na quantidade mínima de solução de vitrificação e mova a pipeta de stripper para longe dos oócitos para remover qualquer solução de vitrificação em excesso, deixando os oócitos cobertos com uma fina camada de meio.Mergulhe rapidamente o dispositivo criogeno em nitrogênio líquido e agite rapidamente o dispositivo para remover quaisquer bolhas de ar de sua superfície. Segurando a tampa protetora do dispositivo criogeno com pinças, encha a tampa com nitrogênio líquido antes de inserir o dispositivo na tampa, mantendo as tiras de propileno em nitrogênio líquido. Em seguida, armazene o dispositivo criogeno em um visotube rotulado com as informações do paciente e atualize a folha de laboratório.Para o aquecimento do oócito, inverta cuidadosamente cada frasco de solução de descongelamento, diluição e lavagem aquecida à temperatura ambiente, e adicione um mililitro de solução de descongelamento ao poço central de uma placa de petri para uma incubação de pelo menos uma hora a 37 graus Celsius. Rotule todos os suprimentos plásticos com o nome e a ID do paciente e o tipo de solução, e peça a uma testemunha que confirme as informações do paciente sobre o dispositivo crio. Para que cada dispositivo seja aquecido, adicione 200 microliters de solução de diluição ao primeiro poço de uma placa de seis poços e adicione um volume igual de solução de lavagem ao segundo e terceiro poços da placa.Adicione PBS à área do lado de fora dos poços para evitar a evaporação da solução. Coloque o prato de solução de descongelamento sob o microscópio estéreo e ajuste o foco para o centro do prato. Torça cuidadosamente para remover a tampa protetora de um dispositivo criotilo, mantendo as tiras de propileno em nitrogênio líquido e transfira o dispositivo criogeno do nitrogênio líquido para a solução de descongelamento o mais rápido possível para evitar o risco de desvitarificação.Após um minuto, concentre-se na ponta do dispositivo criogeno para localizar os oócitos e eventualmente use uma pipeta de stripper para liberar suavemente os oócitos do dispositivo. Use uma pipeta stripper de 170 mícrons de diâmetro para transferir os oócitos e um pequeno volume de solução de descongelamento para a solução de diluição no primeiro poço da placa de seis poços. Depois de três minutos, mova os oócitos para o primeiro poço de solução de lavagem por cinco minutos.Ao final da incubação, transfira os oócitos para o segundo poço de solução de lavagem e incubar a 37 graus Celsius por um minuto antes de transferir os oócitos para um volume apropriado de meio de cultura de FIV pré-equilibrada por uma hora e atualizar a folha de laboratório. Durante um período de 12 anos, 285 mulheres foram submetidas a pelo menos uma recuperação de oócito, implicando a vitrificação de toda a coorte de ovos maduros coletados. A maioria dessas mulheres foi submetida a uma única recuperação.35 foram submetidos a múltiplas recuperações. As razões para a recuperação de oócitos para vitrificação de óvulos foram geralmente caracterizadas como médicas que não o câncer, câncer, não médicas, entre outras. Pacientes com uma razão médica para a vitrificação dos óvulos e pacientes submetidos à preservação da fertilidade por causa do câncer eram mais jovens e apresentavam maior contagem folicular antral do que pacientes com razões não médicas ou outras.No entanto, como as taxas médias de maturação foram ligeiramente menores nas razões médicas, o número de oócitos vitrificados em média foi semelhante entre os grupos. Aproximadamente metade dos pacientes com razões médicas além do câncer, e a maioria dos pacientes com outras razões para a vitrificação de óvulos realmente retornou para o aquecimento. Por outro lado, muito poucos pacientes submetidos à preservação da fertilidade por câncer ou razões não medídicas usaram seus oócitos vitrificados para FIV.Apesar das diferenças no tempo decorrido entre vitrificação e aquecimento, a taxa de sobrevivência dos oócitos foi semelhante entre os grupos de pacientes, confirmando a eficácia e a segurança dos protocolos de vitrificação e aquecimento oócitos. Além disso, a taxa de sobrevivência foi independente da experiência do operador de vitrificação e aquecimento. Os passos mais cruciais que podem afetar a consistência dos resultados são os relacionados com o aquecimento.Por isso, é muito importante controlar cuidadosamente o volume e a temperatura das soluções de descongelamento. Criopreservação de tecido ovariano a única estratégia atualmente em investigação como opção para pacientes pré-pubertal. Embora promissora, essa abordagem tem uma limitação importante que limitou sua aplicação.

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In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Combinando Maturação In vitro após Recuperação de Oócito com Cirurgia Ginecológica

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Preservação da fertilidade em pacientes com disfunção ovariana grave

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Modelo de roedor melhorado de Isquemia do Miocárdio e Lesão de Reperfusão

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...