Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Никакой

1. Разработка и клиническое консультирование
ПРИМЕЧАНИЕ: В случае пациентов, нуждающихся в сохранении фертильности по онкологическим причинам, убедитесь, что нет списка ожидания для назначения консультации, и запись на прием предоставляется как можно скорее.
<ol><li>Изучи...

Клинические соображения 
Хотя новые стратегии, такие как криоконсервация ткани яичников и созревание in vitro, были изучены, витрификация ооцитов после COS является золотым стандартом для сохранения фертильности. В этом сценарии количество извлеченных и криоконсер...

Разработка и внедрение эффективной программы криоконсервации ооцитов человека стала значительным прорывом в репродуктивной медицине. Согласно последним данным, витрификация является наиболее эффективной стратегией криоконсервации метафазных II (MII) ооцитов, поскольку она приводит к статистически более высоким показателям выживаемости по сравнению с медленным замораживанием, независимо от популяции пациентов (бесплодных пациентов или программы донорства ооцитов)1,2,3. Замечательные достижения витрификации ооцитов привели к тому, что практические комитеты Американского общества репродуктивной медицины (ASRM) и Общества вспомогательных репродуктивных технологий (SART) объявили этот метод наиболее эффективным для выборного сохранения фертильности у женщин в постпубертатном периоде, как по медицинским, так и по немедицинским показаниям4,5,6. Медицинские показания для сохранения фертильности включают (i) рак и аутоиммунные заболевания, которые требуюттерапии 7, такой как лучевая терапия, цитотоксическая химиотерапия и эндокринная терапия (чье пагубное влияние на овариальный резерв связано с возрастом матери, а также с типом и дозой лечения); ii) заболевания яичников, требующие повторного или радикальногохирургического вмешательства (например, эндометриоз)8; и iii) генетические условия (например, X-хрупкий) или преждевременная недостаточность яичников. Кроме того, сохранение фертильности стало ценным вариантом для всех женщин, которые не достигли своей родительской цели по немедицинским причинам (также известным как социальное замораживание).
Независимо от показаний к сохранению фертильности и в соответствии с основными международными руководящими принципами по сохранению фертильности, все пациенты, желающие витрифицировать свои ооциты, должны получить соответствующую консультацию, чтобы быть информированными об их реальных шансах на успех, стоимости, рисках и ограничениях процедуры9,10, 11,12,13. Самое главное, должно быть ясно, что витрифицирование когорты ооцитов МИИ не обеспечивает беременность, но что она предлагает более высокие шансы на успех для будущего лечения экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), при необходимости14. В связи с этим возраст женщины на момент витрификации ооцитов, безусловно, является важнейшим ограничивающим фактором15, так как преклонный возраст матери (АМА; >35 лет) является основной причиной женского бесплодия16. Помимо прогрессирующего снижения овариального резерва, АМА связана с ухудшением компетентности ооцитов из-за дефектных физиологических путей, таких как метаболизм, эпигенетическая регуляция, контрольные точки клеточного цикла и мейотическая сегрегация17. Поэтому разумное количество яйцеклеток для витры в основном зависит от возраста матери. У женщин моложе 36 лет требуется не менее 8-10 МИИ ооцитов18, чтобы максимизировать шансы на успех. В целом, чем выше количество витрифицированных ооцитов, тем выше вероятность успеха. Поэтому адаптация стимуляции яичников в соответствии с маркерами овариального резерва, такими как уровень антимюллерова гормона (AMH) или количество антральных фолликулов (AFC), имеет решающее значение для полного использования овариального резерва в кратчайшие сроки.
Безопасность всей процедуры является другим ключевым вопросом при регистрации пациентов для сохранения фертильности. Клиницисты должны использовать лучшие стратегии для минимизации рисков и предотвращения (i)синдрома гиперстимуляции яичников (СГЯ) с использованием безопасных подходов, таких как протокол антагониста гонадотропин-рилизинг-гормона (ГнРГ), за которым следует триггер агониста ГнРГ19 и (ii) отдаленные, но возможные, риски перитонеального кровотечения, повреждения тазовых структур (мочеточник, кишечник, аппендикс, нервы) или тазовой инфекции во время извлечения яйцеклеток. Наконец, (iii) традиционные схемы стимуляции связаны с супрафизиологическим сывороточным эстрадиолом и, следовательно, не рекомендуются при эстроген-чувствительных заболеваниях, таких как рак молочной железы. Протоколы с участием ингибиторов ароматазы (таких как летрозол или тамоксифен) более подходят в этих случаях20,21. В лабораторных условиях наиболее распространенным протоколом витрификации ооцитов по-прежнему является тот, который впервые описан Куваямой и его коллегами2,23,который состоит из поэтапной процедуры, включающей постепенное добавление криопротекторов (CPA). В первой фазе (равновесие/обезвоживание) ооциты подвергают воздействию в растворе CPA, содержащем 7,5% v/v этиленгликоля и 7,5% v/v диметилсульфоксида (DMSO), в то время как во второй фазе ооциты перемещают в раствор витрификации с 15% v/v этиленгликолем и 15% v/v DMSO, плюс 0,5 моль/л сахарозы. После короткой инкубации в среде витрификации ооциты могут быть помещены в специально разработанные открытые криодевицы и, наконец, погружены в жидкий азот при -196 °C для хранения до использования.
Здесь вся клиническая и лабораторная работа по лечению сохранения фертильности была описана путем (i) изложения рекомендаций по объективному и основанному на фактических данных консультирования, (ii) сосредоточения внимания на экономической эффективности процедуры и (iii) описания наиболее подходящих стратегий для полного использования овариального резерва и максимизации количества ооцитов, извлеченных в кратчайшие сроки. Оценка овариального резерва, определение идеального протокола стимуляции, а также процедуры извлечения, денудации и витрификации ооцитов будут подробно описаны вместе с подходами к максимизации их эффективности, действенности и безопасности. Поскольку в литературе существуют другие протоколы или адаптации этого протокола, репрезентативные результаты и разделы обсуждения этой рукописи применяются только к этой процедуре.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

Сохранение женской фертильности имеет решающее значение в многофункциональной системе здравоохранения, которая заботится о будущем качестве жизни пациентов. Криоконсервация ооцитов признана несколькими международными научными обществами золотым стандартом сохранения фертильности у постпубертатных женщин, как по медицинским, так и по немедицинским показаниям. Основными медицинскими показаниями являются онкологические заболевания, гинекологические заболевания, такие как тяжелый эндометриоз, системные заболевания, ставящие под угрозу овариальный резерв, и генетические состояния, связанные с преждевременной менопаузой. В этой статье описывается вся клиническая и лабораторная работа по лечению сохранения фертильности путем изложения рекомендаций по объективному и основанному на фактических данных консультированию. Кроме того, основное внимание уделяется эффективности процедуры и описываются наиболее подходящие стратегии для полного использования овариального резерва и максимизации количества ооцитов, извлеченных в кратчайшие сроки. Оценка овариального резерва, определение идеального протокола стимуляции, а также процедуры извлечения, денудации и витрификации ооцитов были подробно описаны вместе с подходами к максимизации их эффективности, действенности и безопасности.

Обзор программы сохранения фертильности в центре
За 12-летний период (2008-2020 гг.) 285 женщин подверглись по крайней мере одному извлечению ооцитов, влекущего за собой витрификацию всей когорты собранных зрелых яйцеклеток. Большинство из этих женщин (n = 250) подверглис...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Криоконсервация ооцитов признана несколькими международными научными обществами золотым стандартом сохранения фертильности у постпубертатных женщин. Соответствующие клинические и лабораторные стратегии обеспечивают максимальную эффективность, результативность и безопасность методов лечения бесплодия.

Сохранение фертильности посредством витрификации ооцитов: клинические и лабораторные перспективы

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Витрификация ооцитов и согревающие процедуры необходимы для сохранения фертильности. Следование этому протоколу, как показано на рисунке, позволяет пользователю максимизировать эффективность этих процедур. Сохранение фертильности для витрификации ооцитов сегодня является устоявшимся и этически приемлемым подходом.Это позволяет достичь эффективных и последовательных клинических результатов и преодолеть моральные и юридические ограничения, связанные с криоконсервацией эмбрионов. Для достижения мастерства в процессе витрификации важно ознакомиться со всеми критическими точками протокола, уделяя особое внимание времени воздействия образцов на криопротекторы. В течение 38 часов после извлечения и сразу после денудации пометьте все пластиковые материалы именем пациента, идентификатором и типом раствора и попросите свидетеля подтвердить информацию пациента о криоустройстве.Когда все материалы будут помечены, осторожно перевертите каждый флакон ооцитов несколько раз, чтобы смешать и поместить 30-микролитровую каплю буферной среды HEPES, дополненную сывороточным альбумином человека и 30 микролитровую соседнюю каплю раствора равновесия на чашку Петри. Используйте пипетку стриппера, чтобы поместить ооциты в первую каплю и создать мост из среды к 30-микролитровой капле раствора равновесия для получения постепенного увеличения концентрации криопротекторов. Через три минуты добавьте вторую 30-микролитровую каплю раствора равновесия на пластину и используйте пипетку для создания среднего моста между каплями раствора.Пока ооциты уравновешиваются, добавьте одну 30-микролитровую каплю раствора равновесия для каждого криоустройства, которое будет использоваться на пластине. Через три минуты переместите ооциты в чистый раствор равновесия в течение шести-девяти минут, чтобы позволить оооцитам вернуться к своему первоначальному размеру. Когда яйцеклетки восстановятся, приготовьте центральную лунку для ЭКО, содержащую один миллилитр раствора для витрификации.Перенесите ооциты в тарелку в как можно меньшем месте и осторожно переместите их, чтобы удалить лишний раствор равновесия. Примерно за 10 секунд до окончания инкубации поместите криоустройство, помеченное информацией о пациенте, под микроскоп и отрегулируйте фокус на кончике криоустройства. Поместите ооциты на криоустройство рядом с наконечником в минимальном количестве раствора для витрификации и отодвиньте пипетку стриппера от ооцитов, чтобы удалить любой избыточный раствор витрификации, оставив ооциты покрытыми тонким слоем среды.Быстро погружайте криоустройства в жидкий азот и быстро встряхивайте устройство, чтобы удалить пузырьки воздуха с его поверхности. Удерживая пинцетом защитный колпачок криоустройства, заполните колпачок жидким азотом перед введением устройства в колпачок, сохраняя при этом пропиленовые полоски в жидком азоте. Затем сохраните криоустройку в визотрубе, помеченной информацией о пациенте, и обновите лабораторный лист.Для нагрева яйцеклеток осторожно переверняйте каждый флакон размораживания, разбавления и промывки раствора, нагретого до комнатной температуры, и добавьте один миллилитр оттаивающего раствора в центральный колодец чашки Петри для инкубации не менее одного часа при температуре 37 градусов Цельсия. Пометьте все пластиковые материалы с именем и идентификатором пациента и типом раствора и попросите свидетеля подтвердить информацию пациента на криоустройке. Для каждого устройства, которое будет нагреваться, добавьте 200 микролитров разбавляющего раствора в первую лунку шестиямесячной пластины и добавьте равный объем моющего раствора во вторую и третью лунки плиты.Добавьте PBS в область на внешней стороне скважин, чтобы предотвратить испарение раствора. Поместите тарелку с раствором для оттаивания под стереомикроскоп и отрегулируйте фокусировку к центру тарелки. Осторожно закрутите, чтобы снять защитный колпачок криоустройства, сохраняя пропиленовые полоски в жидком азоте, и перенесите криоустройствитель из жидкого азота в раствор для оттаивания как можно быстрее, чтобы избежать риска девитрификации.Через одну минуту сосредоточьтесь на кончике криоустройства, чтобы найти ооциты и в конечном итоге используйте пипетку стриппера, чтобы мягко освободить ооциты из устройства. Используйте пипетку стриппера диаметром 170 микрон для переноса ооцитов и небольшого объема оттаивающего раствора в разбавляющий раствор в первой скважине шестискваговочной пластины. Через три минуты переместите ооциты в первый колодец промывного раствора на пять минут.В конце инкубации перенесите ооциты во вторую скважину промывочного раствора и высиживают при 37 градусах Цельсия в течение одной минуты перед переносом ооцитов в соответствующий объем предварительно уравновешенной культуральной среды ЭКО на один час и обновлением лабораторного листа. За 12-летний период 285 женщин подверглись по крайней мере одному извлечению ооцитов, влекущего за собой витрификацию всей когорты собранных зрелых яйцеклеток. Большинство из этих женщин подверглись однократному извлечению.35 подверглись многократному извлечению. Причины для извлечения ооцитов для витрификации яйцеклеток обычно характеризовались как медицинские, отличные от рака, рака, немедицинские и другие. Пациенты с медицинской причиной витрификации яйцеклеток и пациенты, перенесшие сохранение фертильности из-за рака, были моложе и показали более высокое количество антральных фолликулов, чем пациенты с немедицинским или другими причинами.Однако, поскольку средние показатели созревания были несколько ниже у пациентов с медицинскими причинами, количество оципированных ооцитов в среднем было одинаковым между группами. Примерно половина пациентов с медицинскими причинами, отличными от рака, и большинство пациентов с другими причинами витрификации яйцеклеток фактически вернулись для согревания. И наоборот, очень немногие пациенты, которые подверглись сохранению фертильности по причинам рака или немедицинских причин, использовали свои витрифицированные ооциты для ЭКО.Несмотря на различия во времени, прошедшем между витрификацией и согревательностью, выживаемость ооцитов была одинаковой между группами пациентов, подтверждая эффективность и безопасность протоколов витрификации и согревания ооцитов. Более того, выживаемость не зависит от опыта оператора витрификации и нагрева. Наиболее важными шагами, которые могут повлиять на согласованность результатов, являются шаги, связанные с потеплением.Поэтому очень важно тщательно контролировать объем и температуру размораживающих растворов. Криоконсервация ткани яичников является единственной стратегией, которая в настоящее время рассматривается в качестве варианта для препубертатных пациентов. Хотя этот подход и является многообещающим, он имеет важное ограничение, которое ограничивает его применение.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Изображениями глиомы Посвящение<em&gt; В Vivo</em&gt; Через полированной и железобетонных тонких черепа Черепно Window

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Clinical Assessment of Spatiotemporal Gait Parameters in Patients and Older Adults

Клиническая оценка пространственно-временных походка показателей у больных и пожилых людей

Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Функциональная печени человека Сохранение и восстановление с помощью Subnormothermic машины перфузии

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Методология для индукции мокроты и лаборатория обработки

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Введение процедур Внутрикапсульный Ротари cut (IRCP): A изменение Hysteromyomectomy процедуры, облегчающие сохранение плодородия

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Изучение современной хирургии ларингии в лаборатории вскрытия

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Ортопедическая трансплантация почек в свиной модели с использованием 24 часов сохранения органов и непрерывной телеметрии

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Сочетание созревания in vitro после извлечения ооцитов с гинекологической хирургией

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Сохранение фертильности у пациенток с тяжелой дисфункцией яичников

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Улучшенная модель грызунов ишемии миокарда и реперфузионной травмы

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...