Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

1. Arbets- och klinisk rådgivning
OBS: Om patienter behöver fertilitetsbevarande av onkologiska skäl, se till att det inte finns någon väntelista för schemaläggningskonsultation, och mötet tillhandahålls så snart som möjligt.
<ol><li>Undersök sjukdomshistoria och tidigare dokumentation samt bedöma patientens allmänna hälsostatus.</li>
	<li>Registrera all information (inklusive onkologens godkännande att genomgå äggstocksstimulering vid cancerpatienter) i en relationsdatabas...

Kliniska överväganden 
Även om framväxande strategier, såsom äggstocksvävnad cryopreservation och in vitro mognad, har utforskats, oocyte vitrification efter COS är guld standard teknik för fertilitet bevarande. I detta scenario bör antalet äggceller som hämtas och kryopreserveras maximeras på kortast möjliga tid eftersom de flesta cancerpatienter kan dra enbart nytta av en äggstockscykel innan de måste påbörja sin cancerbehandling. Således är ett korrekt ?...

Utvecklingen och genomförandet av ett effektivt kryopreservationsprogram för mänskliga äggceller har varit ett betydande genombrott inom reproduktiv medicin. Enligt nya bevis är vitrifiering den mest effektiva strategin för att cryopreserve metaphase II (MII) äggceller, eftersom det resulterar i statistiskt högre överlevnad jämfört med långsam frysning, oberoende av patientpopulationen (infertila patienter eller oocyte donationsprogram)1,2,3. De anmärkningsvärda prestationerna av oocyte vitrification ledde praxis kommittéer av American Society for Reproductive Medicine (ASRM) och Society for Assisted Reproductive Technology (SART) att uttala denna teknik för att vara den mest effektiva för elektektiv fertilitet bevarande hos postpubertala kvinnor, för både medicinska och icke-medicinskaindikationer 4,5,6. Medicinska indikationer för fertilitetsbevarande inkluderar (i) cancer och autoimmuna sjukdomar som kräverterapier 7 såsom strålbehandling, cytotoxisk kemoterapi och endokrin behandling (vars skadliga effekt på äggstocksreserven är förknippad med moderns ålder samt typ och dos av behandlingen); ii) Äggstockssjukdomar som kräver upprepad eller radikal kirurgi (t.ex. endometrios)8. och iii) genetiska tillstånd (t.ex. X-bräckliga) eller för tidigt äggstockssvikt. Dessutom har fertilitetsbevarande blivit ett värdefullt alternativ för alla kvinnor som inte har uppnått sitt föräldramål av icke-medicinska skäl (även känd som social frysning).
Oavsett indikationen för fertilitetsbevarande och enligt de stora internationella riktlinjerna för fertilitetsbevarande, bör alla patienter som är villiga att vitrify sina äggceller få lämplig rådgivning för att informeras om deras realistiska chans att lyckas, kostnaderna, riskerna och begränsningarna i förfarandet9,10,11,12,13. Viktigast av allt bör det vara tydligt att vitrifying en kohort av MII oocyter inte säkerställer en graviditet, men att det erbjuder en högre chans att lyckas för framtida in vitro-befruktning (IVF) behandling, om nödvändigt14. I detta avseende är kvinnans ålder vid tidpunkten för oocyte vitrification verkligen den viktigaste begränsande faktor15 som avancerad moderns ålder (AMA; >35 år) är den främsta orsaken till kvinnlig infertilitet16. Förutom en progressiv minskning av äggstocksreserven är AMA associerad med en försämring av oocytkompetens på grund av defekta fysiologiska vägar som metabolism, epigenetisk reglering, cellcykelkontroller och meiotisk segregering17. Därför beror det rimliga antalet ägg att vitrify främst på moderns ålder. Hos kvinnor yngre än 36 år krävs minst 8-10 MII-oocyter18 för att maximera chansen att lyckas. I allmänhet, ju högre antalet förrikade äggceller, desto högre är sannolikheten för framgång. Därför är skrädderi äggstocksstimulering enligt äggstocksreservmarkörer som anti-Müllerian hormon (AMH) nivåer eller antral follikel räknas (AFC) avgörande för att fullt ut utnyttja äggstocksreserven på kortast möjliga tid.
Säkerheten för hela förfarandet är den andra nyckelfrågan när man skriver in patienter för fertilitetsbevarande. Kliniker bör använda de bästa strategierna för att minimera riskerna och förhindra (i)ovariellt hyperstimuleringssyndrom (OHSS) genom att använda säkra metoder som gonadotropinfrisättande hormon (GnRH) antagonistprotokoll följt av en GnRH-agonistutlösare19 och (ii) fjärrkontrollen, men ändå möjligt, risker för peritoneal blödning, skada på bäckenhålorna strukturer (ureter, tarm, tillägg, nerver) eller bäckenhålorna infektion under oocyte hämtning. Slutligen är (iii) traditionella stimuleringsregimer förknippade med suprafysiologisk serumestradiol och rekommenderas därför inte vid östrogenkänsliga sjukdomar som bröstcancer. Protokoll som omfattar aromatashämmare (t.ex. letrozol eller tamoxifen) är lämpligare i dessafall 20,21. I laboratoriemiljön är det mest utbredda protokollet för oocyte vitrification fortfarande det som först beskrivs av Kuwayama ochkollegorna 2,23, som består av ett stegvis förfarande som involverar gradvis tillsats av kryoprotekter (CPA). I den första fasen (jämvikt/uttorkning) exponeras oocyter i en CPA-lösning som innehåller 7,5% v/v etylenglykol och 7,5% v/v dimetylsulfoxid (DMSO), medan i den andra fasen, oocyter flyttas till en vitrifieringslösning med 15% v/v etylenglykol och 15% v/v DMSO, plus 0,5 mol/L sackaros. Efter en kort inkubation i vitrifieringsmediet kan äggcellerna placeras i särskilt utformade, öppna cryodevices och slutligen kastas i flytande kväve vid -196 °C för att lagras tills de används.
Här har hela det kliniska och laboratoriearbete som utförs av en fertilitetsbevarande behandling beskrivits av i) som beskriver rekommendationer för objektiv och evidensbaserad rådgivning, ii) med fokus på förfarandets kostnadseffektivitet och iii) beskriver de lämpligaste strategierna för att fullt ut utnyttja äggstocksreserven och maximera antalet äggceller som hämtas på kortast möjliga tid. Utvärderingen av äggstocksreserven, definitionen av ett idealiskt stimuleringsprotokoll, liksom oocyte hämtning, denudation och vitrification förfaranden kommer att specificeras tillsammans med metoder för att maximera deras effektivitet, effektivitet och säkerhet. Eftersom andra protokoll eller anpassningar av detta protokoll finns i litteraturen gäller de representativa resultaten och diskussionsavsnitten i detta manuskript endast för detta förfarande.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

Att bevara fertiliteten hos kvinnor är avgörande i ett multifunktionellt hälso- och sjukvårdssystem som tar hand om patienternas framtida livskvalitet. Oocyte cryopreservation erkänns av flera internationella vetenskapliga samhällen som guldstandarden för fertilitetsbevarande hos postpubertala kvinnor, för både medicinska och icke-medicinska indikationer. De viktigaste medicinska indikationerna är onkologiska sjukdomar, gynekologiska sjukdomar som svår endometrios, systemiska sjukdomar som äventyrar äggstocksreserven och genetiska tillstånd som involverar för tidig klimakteriet. Detta dokument beskriver hela kliniska och laboratorium arbete-up av en fertilitet bevarande behandling genom att beskriva rekommendationer för objektiva och evidensbaserade rådgivning. Dessutom är det inriktat på förfarandets effektivitet och beskriver de lämpligaste strategierna för att fullt ut utnyttja äggstocksreserven och maximera antalet äggceller som hämtas på kortast möjliga tid. Utvärderingen av äggstocksreserven, definitionen av ett idealiskt stimuleringsprotokoll, liksom oocyte hämtning, denudation och vitrification förfaranden har beskrivits tillsammans med metoder för att maximera deras effektivitet, effektivitet och säkerhet.

Översikt över fertilitetsbevarande programmet i centrum
Under en 12-årsperiod (2008-2020) genomgick 285 kvinnor minst en oocyte retrieval som innebär vitrifiering av hela kohorten av mogna ägg som samlats in. De flesta av dessa kvinnor (n=250) genomgick en enda hämtning och 35 genomgick flera retrievals. Orsakerna till att genomgå oocyte hämtning för ägg vitrification sammanfattas i 4 kategorier: medicinsk (med undantag för cancer), cancer, icke-medicinsk, och andra...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Oocyte cryopreservation erkänns av flera internationella vetenskapliga samhällen som guldstandarden för fertilitetsbevarande hos postpubertala kvinnor. Lämpliga kliniska strategier och laboratoriestrategier säkerställer maximal effekt, effektivitet och säkerhet för fertilitetsbevarande behandlingar.

Fertilitetsbevarande genom oocytevitrifiering: Kliniska perspektiv och laboratorieperspektiv

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Oocyte vitrification och uppvärmning förfaranden är avgörande för fertilitet bevarande. Efter detta protokoll som visats gör det möjligt för en användare att maximera effektiviteten av dessa procedurer. Fertilitet bevarande för oocyte vitrification är idag ett etablerat och etiskt godtagbart tillvägagångssätt.Det gör det möjligt att uppnå effektiva och konsekventa kliniska resultat och övervinna den moraliska och rättsliga begränsningen i samband med embryo cryopreservation. För att uppnå färdigheter i vitrifieringsprocessen är det viktigt att bekanta sig med alla kritiska punkter i protokollet, med särskild uppmärksamhet på exponeringstiden för proverna för kryoprotektanterna. Inom 38 timmar efter hämtning och omedelbart efter denudation, märk alla plasttillbehör med patientens namn, ID och typ av lösning och be ett vittne att bekräfta patientens information på kryoenheten.När alla förnödenheter har märkts, vänd försiktigt varje flaska oocyter flera gånger för att blanda och placera en 30 mikroliter droppe HEPES buffertmedium kompletterat med humant serumalbumin och en 30 mikroliter intilliggande droppe jämviktslösning på en petriskål. Använd stripperpipetten för att placera äggcellerna i första droppen och skapa en bro av medium till en 30 mikroliter droppe jämviktslösning för att få en gradvis ökning av koncentrationen av kryoprotekter. Efter tre minuter, tillsätt en andra 30 mikroliter droppe jämviktslösning på plattan och använd pipetten för att skapa en medelbro mellan lösningsdropparna.Medan oocyterna är jämvikt, tillsätt en 30 mikroliter droppe jämviktslösning för varje kryoanordning som ska användas på plattan. Efter tre minuter, flytta äggcellerna till den rena jämviktslösningen i sex till nio minuter så att äggcellerna kan återgå till sin ursprungliga storlek. När äggcellerna har återhämtat sig, förbered en central brunn IVF-maträtt som innehåller en milliliter vitrification lösning.Överför äggcellerna till skålen i så lite medium som möjligt och flytta dem försiktigt för att ta bort eventuell överskottsjämviktslösning. Ungefär 10 sekunder före inkubationens slut, placera en kryoanordning märkt med patientens information under mikroskopet och justera fokus på kryoenhetens spets. Placera äggcellerna på kryoenheten bredvid spetsen i minsta möjliga mängd vitrifieringslösning och flytta stripperpipetten bort från äggcellerna för att avlägsna eventuell överskottsvitrifieringslösning, vilket lämnar äggcellerna täckta med ett tunt lager medium.Doppa snabbt kryoanordningen i flytande kväve och skaka snabbt enheten för att ta bort eventuella luftbubblor från dess yta. Håll kryoanordningens skyddslock med pincett, fyll locket med flytande kväve innan du sätter in enheten i locket samtidigt som propylenremsorna finns i flytande kväve. Förvara sedan cryo-enheten i en visotube märkt med patientens information och uppdatera laboratoriebladet.För oocytuppvärmning, vänd försiktigt varje flaska av upptining, utspädning och tvättlösning uppvärmd till rumstemperatur och tillsätt en milliliter upptiningslösning till den centrala brunnen i en petriskål i minst en timmes inkubation vid 37 grader Celsius. Märk alla plasttillbehör med patientens namn och ID och typ av lösning och be ett vittne bekräfta patientens information på kryoenheten. För varje anordning som ska värmas, tillsätt 200 mikroliter utspädningslösning till den första brunnen på en sex brunnsplatta och tillsätt en lika stor mängd tvättlösning till plattans andra och tredje brunnar.Tillsätt PBS till området på utsidan av brunnarna för att förhindra lösningsavdunstning. Placera upptiningslösningens skål under stereomikroskopet och justera fokus till mitten av skålen. Vrid försiktigt för att ta bort skyddslocket på en kryoanordning samtidigt som propylenremsorna finns i flytande kväve och överför kryoanordningen från det flytande kvävet till upptiningslösningen så snabbt som möjligt för att undvika risken för avvitrifiering.Efter en minut, fokusera på spetsen av kryoenheten för att hitta äggcellerna och så småningom använda en stripppipett för att försiktigt släppa äggcellerna från enheten. Använd en stripperpipett med diametern 170 mikron för att överföra äggcellerna och en liten mängd upptiningslösning till utspädningslösningen i den första brunnen på sex brunnsplattan. Efter tre minuter, flytta äggcellerna till den första tvättlösningen i fem minuter.I slutet av inkubationen, överför äggcellerna till den andra brunnen av tvättlösning och inkubera vid 37 grader Celsius i en minut innan du överför äggcellerna till en lämplig volym av förjämfört IVF-odlingsmedium i en timme och uppdaterar laboratoriebladet. Under en 12-årsperiod genomgick 285 kvinnor minst en oocyte hämtning innebär vitrification av hela kohorten av mogna ägg samlas in. De flesta av dessa kvinnor genomgick en enda hämtning.35 genomgick flera hämtningar. Orsakerna till att genomgå oocyte hämtning för ägg vitrification var i allmänhet karakteriserades som medicinska andra än cancer, cancer, nonmedical och andra. Patienter med medicinsk orsak till äggvitrifiering och patienter som genomgår fertilitet bevarande på grund av cancer var yngre och visade högre antral follicular räknas än patienter med icke-medicinska eller andra skäl.Eftersom den genomsnittliga mognadsgraden var något lägre i de medicinska orsakerna patienter, var antalet äggceller vitrified i genomsnitt likartade mellan grupperna. Ungefär hälften av patienterna med andra medicinska skäl än cancer, och majoriteten av patienterna med andra orsaker till äggvitrifiering återvände faktiskt för uppvärmning. Omvänt använde mycket få patienter som genomgick fertilitetsbevarande av cancer eller icke-medicinska skäl sina förförligade oocyter för IVF.Trots skillnader i den tid som förflutna mellan vitrification och uppvärmning, överlevnadsgraden för äggcellerna var liknande mellan patientgrupper, bekräftar effektiviteten och säkerheten av oocyte vitrification och uppvärmning protokoll. Dessutom var överlevnadsgraden oberoende av vitrifierings- och uppvärmningsoperatörens erfarenhet. De viktigaste stegen som kan påverka konsekvensen i resultaten är det som är relaterat till uppvärmning.Därför är det verkligen viktigt att noggrant kontrollera volymen och temperaturen på upptiningslösningarna. Äggstockscancer vävnad cryopreservation den enda strategi som för närvarande under utredning som ett alternativ för pre-pubertal patienter. Även om detta tillvägagångssätt är lovande har det en viktig begränsning som begränsade dess tillämpning.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Gliom Inledande<em&gt; In Vivo</em&gt; Genom en polerad och förstärkt Thin-skalle Kranial fönster

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Clinical Assessment of Spatiotemporal Gait Parameters in Patients and Older Adults

Klinisk Bedömning av Spatiotemporal gångparametrar i patienter och äldre vuxna

Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Funktionell Human Liver Bevarande och inkassering av belopp genom Subnormothermic Machine Perfusion

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Metodik för Sputum induktion och laboratorium bearbetning

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Införandet av intrakapsulära Rotary-cut förfaranden (IRCP): A modifierade Hysteromyomectomy förfaranden för att underlätta fertilitet bevarande

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Lärande modern laryngeal kirurgi i en dissekering Laboratory

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Orthotopic Njure Auto-Transplantation i en Svin modell Använda 24 timmar Organ Bevarande och kontinuerlig Telemetri

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Kombinera in vitro-mognad efter äggcellshämtning med gynekologisk kirurgi

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Fertilitetsbevarande hos patienter med svår äggstocksdysfunktion

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Förbättrad gnagarmodell av myokardiell ischemi och reperfusionsskada

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...