Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

1. İş ve klinik danışmanlık
NOT: Onkolojik nedenlerle doğurganlığın korunmasını gerektiren hastalarda, konsültasyon planlama için bekleme listesi olmadığından ve randevunun mümkün olan en kısa sürede sağlandığından emin olun.
<ol><li>Tıbbi geçmişi ve önceki belgeleri inceleyin ve hastanın genel sağlık durumunu değerlendirin.</li>
	<li>Tüm bilgileri (kanser hastalarında yumurtalık stimülasyonuna tabi tutulmak için onkolog onayı dahil) ilişkisel bir verit...

Klinik hususlar 
Yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu ve in vitro olgunlaşma gibi gelişmekte olan stratejiler araştırılmış olsa da, COS sonrası oosit vitrifikasyonu doğurganlığın korunması için altın standart tekniktir. Bu senaryoda, çoğu kanser hastası kanser tedavilerine başlamadan önce sadece bir yumurtalık döngüsünden yararlanabileceğinden, alınan ve kriyoprezerserve edilen oosit sayısı mümkün olan en kısa sürede en üst düzeye çıkarılm...

İnsan oositleri için verimli bir kriyoprezervasyon programının geliştirilmesi ve uygulanması üreme tıbbında önemli bir atılım olmuştur. Son kanıtlara göre, vitrifikasyon, hasta popülasyonundan bağımsız olarak (infertil hastalar veya oosit bağış programı) 1 ,2,3' e kıyasla yavaş donmaya kıyasla istatistiksel olarakdaha yüksek sağkalım oranları ile sonuçladığı için, metafaz II (MII) oositlerini kriyoprezite etmek için en etkili stratejidir. Oosit vitrifikasyonunun dikkat çekici başarıları, Amerikan Üreme Tıbbı Derneği (ASRM) ve Yardımcı Üreme Teknolojisi Derneği (SART) Uygulama Komitelerinin bu tekniği postpubertal kadınlarda hem tıbbi hem de tıbbi olmayan endikasyonlar için elektif doğurganlığın korunmasında en etkili olacak şekilde telaffuz etmesine yol açmıştır4,5,6. Doğurganlığın korunması için tıbbi endikasyonlar şunlardır: (i) radyoterapi, sitotoksik kemoterapi ve endokrin tedavi gibi7 tedavi gerektiren kanser ve otoimmün hastalıklar (yumurtalık rezervi üzerindeki zararlı etkisi anne yaşı ve tedavinin türü ve dozu ile ilişkilidir); (ii) tekrarlanan veya radikal cerrahi gerektiren yumurtalık hastalıkları (endometriozis gibi)8; ve (iii) genetik durumlar (örneğin, X-kırılgan) veya erken yumurtalık yetmezliği. Ek olarak, doğurganlığın korunması, tıbbi olmayan nedenlerle (sosyal donma olarak da bilinir) ebeveyn hedefini gerçekleştiremeyen tüm kadınlar için değerli bir seçenek haline gelmiştir.
Doğurganlığın korunması için endikasyondan bağımsız olarak ve doğurganlığın korunmasına ilişkin başlıca uluslararası yönergelere göre, oositlerini vitrifiye etmek isteyen tüm hastalar, gerçekçi başarı şansları, maliyetleri, riskleri ve prosedürün sınırlamaları hakkında bilgi sahibi olmak için uygun danışmanlık almalıdır9, 10,11,12,13. En önemlisi, bir MII oosit kohortunun vitrifiye edilmesi hamileliği sağlamaz, ancak gerekirse gelecekteki in vitro fertilizasyon (IVF) tedavisi için daha yüksek bir başarı şansı sunduğu açık olmalıdır14. Bu bağlamda, kadının oosit vitrifikasyonu sırasındaki yaşı kesinlikle en önemli sınırlayıcı faktördür15 ileri anne yaşı (AMA; >35 yıl) kadın kısırlığının ana nedenidir16. Yumurtalık rezervinde ilerleyici bir azalmanın yanı sıra, AMA metabolizma, epigenetik düzenleme, hücre döngüsü kontrol noktaları ve meiotik ayrım gibi kusurlu fizyolojik yollar nedeniyle oosit yeterliliği bozukluğu ile ilişkilidir17. Bu nedenle, vitrifiye etmek için makul sayıda yumurta esas olarak anne yaşına bağlıdır. 36 yaşından küçük kadınlarda başarı şansını en üst düzeye çıkarmak için en az 8-10 MII oosit18 gereklidir. Genel olarak, vitrifiye oosit sayısı ne kadar yüksekse, başarı olasılığı da o kadar yüksektir. Bu nedenle, yumurtalık rezervinin anti-Müllerian hormon (AMH) seviyeleri veya antral folikül sayısı (AFC) gibi yumurtalık rezervi belirteçlerine göre uyarılması, yumurtalık rezervinin mümkün olan en kısa sürede tam olarak istismar etmesi için çok önemlidir.
Tüm prosedürün güvenliği, hastaları doğurganlık korumasına kaydederken diğer önemli konudur. Klinisyenler, riskleri en aza indirmek ve (i)yumurtalık hiperstimülasyon sendromunun (OHSS) gonadotropin salgılayan hormon (GnRH) antagonist protokolü ve ardından bir GnRH agonisttetikleyicisi 19 ve (ii) uzaktan kumanda gibi güvenli yaklaşımları kullanarak önlemek için en iyi stratejileri kullanmalıdır, ancak olası, periton kanaması riskleri, pelvik yapılarda yaralanma (üreter, bağırsak, apandisit, sinirler) veya oosit alımı sırasında pelvik enfeksiyon. Son olarak, (iii) stimülasyon için geleneksel rejimler suprafizyolojik serum estradiol ile ilişkilidir ve bu nedenle meme kanseri gibi östrojene duyarlı hastalıklarda önerilmez. Aromataz inhibitörlerini (letrozol veya tamoksifen gibi) içeren protokoller bu durumlarda daha uygundur20,21. Laboratuvar ortamında, oosit vitrifikasyonu için en yaygın protokol hala Kuwayama ve meslektaşları tarafından ilk açıklananprotokoldür 2,23 , kriyoprotekantların(CPAs)kademeli olarak eklenmesini içeren adım adım bir prosedürden oluşur. İlk fazda (denge/dehidratasyon) oositler %7,5 v/v etilen glikol ve %7,5 v/v dimetil sülfit (DMSO) içeren bir CPA çözeltisinde maruz kalırken, ikinci aşamada, oositler% 15 v / v etilen glikol ve% 15 v / v DMSO, artı 0.5 mol / L sakkaroz ile bir vitrifikasyon çözeltisine taşınır. Vitrifikasyon ortamında kısa bir inkübasyondan sonra, oositler özel olarak tasarlanmış, açık kriyodevices içine yerlenebilir ve son olarak kullanıma kadar saklanmak üzere -196 ° C'de sıvı nitrojene daldırılabilir.
Burada, bir doğurganlık koruma tedavisinin tüm klinik ve laboratuvar çalışmaları (i) objektif ve kanıta dayalı danışmanlık için önerilerin özetlenmesi, (ii) prosedürün maliyet etkinliğine odaklanılması ve (iii) yumurtalık rezervinden tam olarak yararlanmak ve mümkün olan en kısa sürede alınan oosit sayısını en üst düzeye çıkarmak için en uygun stratejileri tanımlamakla tanımlanmıştır. Yumurtalık rezervinin değerlendirilmesi, ideal bir stimülasyon protokolünün tanımı, ayrıca oosit alma, denudasyon ve vitrifikasyon prosedürleri, etkinliklerini, verimliliklerini ve güvenliklerini en üst düzeye çıkarmak için yaklaşımlarla birlikte ayrıntılı olarak açıklanacaktır. Literatürde bu protokolün diğer protokolleri veya uyarlamaları mevcut olduğu için, bu makalenin temsili sonuçları ve tartışma bölümleri sadece bu prosedür için geçerlidir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

Kadın doğurganlığının korunması, hastaların gelecekteki yaşam kalitesiyle ilgilenen çok işlevli bir sağlık sisteminde çok önemlidir. Oosit kriyoprezervasyonu, birçok uluslararası bilim topluluğu tarafından postpubertal kadınlarda doğurganlığın korunması için altın standart olarak kabul edilir, hem tıbbi hem de tıbbi olmayan endikasyonlar için. Başlıca tıbbi endikasyonlar onkolojik hastalıklar, ağır endometriozis gibi jinekolojik hastalıklar, yumurtalık rezervini tehlikeye atarak sistemik hastalıklar ve erken menopoz içeren genetik durumlardır. Bu makalede, objektif ve kanıta dayalı danışmanlık önerileri sıralanarak doğurganlık koruma tedavisinin tüm klinik ve laboratuvar çalışmaları açıklanmaktadır. Ayrıca, prosedürün etkinliğine odaklanır ve yumurtalık rezervinden tam olarak yararlanmak ve mümkün olan en kısa sürede alınan oosit sayısını en üst düzeye çıkarmak için en uygun stratejileri açıklar. Yumurtalık rezervinin değerlendirilmesi, ideal bir stimülasyon protokolünün tanımı, ayrıca oosit alma, denudasyon ve vitrifikasyon prosedürleri, etkinliklerini, verimliliklerini ve güvenliklerini en üst düzeye çıkarmak için yaklaşımlarla birlikte ayrıntılı olarak verilmiştir.

Merkezdeki doğurganlık koruma programına genel bakış
12 yıllık bir süre boyunca (2008-2020), 285 kadın, toplanan olgun yumurtaların tüm kohortunun vitrifikasyonu gerektiren en az bir oosit alımı geçirdi. Bu kadınların çoğu (n=250) tek bir geri alma işleminden, 35'inden ise birden fazla geri alma işlemi yapıldı. Yumurta vitrifikasyonu için oosit alımının nedenleri 4 kategoride özetlenmiştir: tıbbi (kanser hariç), kanser, tıbbi olmayan ve diğerler...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Oosit kriyoprezervasyonu, postpubertal kadınlarda doğurganlığın korunması için altın standart olarak çeşitli uluslararası bilim toplumları tarafından kabul edilmektedir. Uygun klinik ve laboratuvar stratejileri, doğurganlık koruma tedavilerinin maksimum etkinliğini, verimliliğini ve güvenliğini sağlar.

Oosit Vitrifikasyonu ile Doğurganlığın Korunması: Klinik ve Laboratuvar Perspektifleri

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Oosit vitrifikasyonu ve ısınma prosedürleri doğurganlığın korunması için gereklidir. Bu protokolü gösterildiği gibi izleyerek, kullanıcının bu yordamların etkinliğini en üst düzeye çıkarmasını sağlar. Oosit vitrifikasyonu için doğurganlık koruması günümüzde yerleşik ve etik olarak kabul edilebilir bir yaklaşımdır.Etkili ve tutarlı klinik sonuçlar elde etmeyi ve embriyo kriyoprezervasyonu ile ilişkili ahlaki ve yasal sınırlamanın üstesinden gelmeyi sağlar. Vitrifikasyon sürecinde yeterliliğe ulaşmak için, örneklerin kriyoprotektantlara maruz kalma süresine özellikle dikkat etmenin protokolün tüm kritik noktalarına aşina olmak önemlidir. Alındıktan sonraki 38 saat içinde ve denudasyondan hemen sonra, tüm plastik malzemeleri hastanın adı, kimliği ve çözüm türü ile etiketleyin ve bir tanıktan hastanın kriyo cihazındaki bilgilerini onaylamasını isteyin.Tüm malzemeler etiketlendiğinde, insan serum albümin ile desteklenmiş 30 mikroliter hepes tampon ortamını karıştırmak ve yerleştirmek için her bir şişe oositleri birkaç kez dikkatlice ters çevirin ve bir petri kabına 30 mikroliter bitişik bir denge çözeltisi damlası yerleştirin. Oositleri ilk damlaya yerleştirmek için striptizci pipetini kullanın ve kriyoprotektantların konsantrasyonunda kademeli bir artış elde etmek için orta ila 30 mikroliner bir denge çözeltisi damlası arasında bir köprü oluşturun. Üç dakika sonra, plakaya ikinci bir 30 mikroliter equilibrasyon çözeltisi damlası ekleyin ve çözelti damlaları arasında orta bir köprü oluşturmak için pipeti kullanın.Oositler dengelenirken, plakaya kullanılacak her kriyo cihazı için bir adet 30 mikroliner equilibrasyon çözeltisi ekleyin. Üç dakika sonra, oositlerin başlangıç boyutlarına geri dönmesini sağlamak için oositleri altı ila dokuz dakika boyunca saf denge çözeltisine taşıyın. Oositler iyileştiğinde, bir mililitre vitrifikasyon çözeltisi içeren merkezi bir kuyu IVF yemeği hazırlayın.Oositleri mümkün olduğunca az ortamda yemeğe aktarın ve fazla denge çözeltisini çıkarmak için dikkatlice hareket ettirin. Kuluçkanın bitiminden yaklaşık 10 saniye önce, hastanın bilgilerinin etiketli bir kriyo cihazını mikroskop altına yerleştirin ve kriyo cihazının ucuna odaklanmayı ayarlayın. Oositleri ucun yanındaki kriyo cihazına minimum miktarda vitrifikasyon çözeltisi halinde yerleştirin ve fazla vitrifikasyon çözeltisini çıkarmak için striptizci pipeti oositlerden uzaklaştırın ve oositleri ince bir ortam tabakası ile kaplı bırakın.Kriyo cihazını hızlı bir şekilde sıvı nitrojene daldırın ve yüzeyindeki hava kabarcıklarını gidermek için cihazı hızla sallayın. Kriyo cihazının koruyucu kapağını cımbızla tutarak, propilen şeritlerini sıvı nitrojende tutarken cihazı kapağa yerleştirmeden önce kapağı sıvı nitrojenle doldurun. Ardından kriyo cihazını hastanın bilgileriyle etiketlenmiş bir visotubeda saklayın ve laboratuvar sayfasını güncelleyin.Oosit ısınması için, oda sıcaklığına ısıtılmış her bir çözdürme, seyreltme ve yıkama çözeltisi şişesini dikkatlice ters çevirin ve bir petri kabının merkezi kuyusuna 37 santigrat derecede en az bir saatlik kuluçka için bir mililitre çözünme çözeltisi ekleyin. Tüm plastik malzemeleri hastanın adı, kimliği ve çözüm türü ile etiketleyin ve bir tanıktan hastanın kriyo cihazındaki bilgilerini onaylamasını isteyin. Isınacak her cihaz için, altı kuyu plakasının ilk kuyusuna 200 mikrolitre seyreltme çözeltisi ekleyin ve plakanın ikinci ve üçüncü kuyularına eşit miktarda yıkama çözeltisi ekleyin.Çözelti buharlaşmasını önlemek için kuyuların dışındaki alana PBS ekleyin. Çözdürme çözeltisi kabını stereo mikroskobun altına yerleştirin ve odağı yemeğin ortasına ayarlayın. Propilen şeritlerini sıvı nitrojende tutarken bir kriyo cihazının koruyucu kapağını çıkarmak için dikkatlice bükün ve sapma riskini önlemek için kriyo cihazını sıvı nitrojenden çözme çözeltisine mümkün olan en kısa sürede aktarın.Bir dakika sonra, oositleri bulmak için kriyo cihazının ucuna odaklanın ve sonunda oositleri cihazdan hafifçe serbest bırakmak için bir striptizci pipeti kullanın. Oositleri ve küçük hacimli bir çözme çözeltisini altı kuyu plakasının ilk kuyusundaki seyreltme çözeltisine aktarmak için 170 mikron çapında bir striptizci pipet kullanın. Üç dakika sonra, oositleri beş dakika boyunca yıkama çözeltisinin ilk kuyusuna taşıyın.Kuluçkanın sonunda, oositleri ikinci yıkama çözeltisi kuyusuna aktarın ve oositleri bir saat boyunca uygun bir ön dengelenmiş IVF kültür ortamı hacmine aktarmadan ve laboratuvar sayfasını güncellemeden önce bir dakika boyunca 37 santigrat derecede kuluçkalayın. 12 yıllık bir süre boyunca, 285 kadın, toplanan olgun yumurtaların tüm kohortunun vitrifikasyonu gerektiren en az bir oosit alımı geçirdi. Bu kadınların çoğu tek bir geri alma işlemine tabi t başlandı.35'i birden fazla geri alma işlemi geçirdi. Yumurta vitrifikasyonu için oosit alımının nedenleri genellikle kanser, kanser, tıbbi olmayan ve diğer tıbbi olarak karakterize edildi. Yumurta vitrifikasyonu için tıbbi bir nedeni olan hastalar ve kanser nedeniyle doğurganlık koruması uygulanan hastalar daha gençti ve tıbbi olmayan veya başka nedenleri olan hastalara göre daha yüksek antral foliküler sayı gösterdi.Ancak hastaların tıbbi nedenlerinde ortalama olgunlaşma oranları biraz daha düşük olduğu için ortalama vitrifiye edilen oosit sayısı gruplar arasında benzerdi. Kanser dışında tıbbi nedeni olan hastaların yaklaşık yarısı ve yumurta vitrifikasyonu için başka nedenleri olan hastaların çoğunluğu aslında ısınmak için geri döndü. Tersine, kanser veya tıbbi olmayan nedenlerle doğurganlık koruması uygulanan çok az hasta vitrifiye oositlerini IVF için kullandı.Vitrifikasyon ve ısınma arasında geçen süredeki farklılıklara rağmen, oositlerin sağkalım oranı hasta grupları arasında benzerdi ve oosit vitrifikasyon ve ısınma protokollerinin etkinliğini ve güvenliğini doğruladı. Ayrıca, sağkalım oranı vitrifikasyon ve ısınma operatörünün deneyiminden bağımsızdı. Sonuçların tutarlılığını etkileyebilecek en önemli adımlar ısınma ile ilgili adımlardır.Bu nedenle, çözülme çözeltilerinin hacmini ve sıcaklığını dikkatlice kontrol etmek gerçekten önemlidir. Yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu, pubertal öncesi hastalar için bir seçenek olarak şu anda incelenme aşamasında olan tek stratejidir. Umut verici olmasına rağmen, bu yaklaşımın uygulamasını sınırlayan önemli bir sınırlaması vardır.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Görüntüleme Glioma Başlatma<em&gt; In Vivo</em&gt; Bir Parlak ve Takviyeli İnce kafatası Kranial Pencere arkası

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Clinical Assessment of Spatiotemporal Gait Parameters in Patients and Older Adults

Hastalar ve Yaşlı Bireylerde Spatiotemporal Yürüme Parametrelerinin Klinik Değerlendirilmesi

Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Subnormothermic Makine Perfüzyon Yoluyla Fonksiyonel İnsan Karaciğer Koruma ve Kurtarma

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Metodoloji balgam indüksiyon ve laboratuvar için

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Giriş juatify Rotary kesim işlemleri (IRCP): A değiştiren Hysteromyomectomy yordamlar doğurganlık koruma kolaylaştırılması

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Diseksiyon Laboratuvarında Modern Laringeal Cerrahi Öğrenme

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

24 Saat Organ Koruma Ve Sürekli Telemetri Kullanılarak Bir Domuz Modelinde Ortotopik Böbrek OtoTransplantasyonu

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Oosit Alımından Sonra In vitro Olgunlaşmayı Jinekolojik Cerrahi ile Birleştirmek

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Şiddetli Yumurtalık Disfonksiyonu Olan Hastalarda Doğurganlığın Korunması

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Miyokard İskemisi ve Reperfüzyon Hasarının Geliştirilmiş Kemirgen Modeli

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...