Name: electrocorticographic recording of cerebral cortex areas manipulated using an adeno-associated virus targeting cofilin in mice
Uploaded: 2021-02-21T14:00:00
Duration: 8 min 44 s
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इस काम को स्लीप मॉलिक्यूलर फिजियोलॉजी में कनाडा रिसर्च चेयर द्वारा वित्त पोषित किया गया था । लेखक तकनीकी मदद के लिए क्लो प्रोवोस्ट और कैरोलीन बोचार्ड के आभारी हैं।

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

यह प्रोटोकॉल एएवी का उपयोग करके आणविक लक्ष्यों में हेरफेर के दौरान ईकॉग और ईएमजी गतिविधि की निगरानी करने के लिए एक सटीक और सरल विधि का वर्णन करता है। पर्याप्त बीच समूह तुलना के लिए, परीक्षण और नियंत्रण जानवरों के लिए एक ही दिन में हमेशा सर्जिकल प्रक्रियाओं (एएवी इंजेक्शन और इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण) की योजना बनाने और एक साथ उनके इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल संकेतों को रिकॉर्ड करने के लिए अत्यधिक अनुशंसा की जाती है। परीक्षण और नियंत्रण जानवरों के बीच इसी तरह की वायरल अभिव्यक्ति प्राप्त करने के लिए, एक ही वायरल टाइटर इंजेक्शन वांछनीय है। वर्तमान मामले में, नियंत्रण एएवी के वायरल टाइटर को इसी तरह के वायरल अभिव्यक्ति को सुनिश्चित करने के लिए परीक्षण एएवी के आधे से कम कर दिया गया था । प्रयोगकर्ताओं को मस्तिष्क क्षेत्र/कॉर्टिकल लेयर टार्गेटिंग में कम-पशु परिवर्तनशीलता सुनिश्चित करने के लिए टकसाली निर्देशांक के माप के साथ बहुत सावधान रहना चाहिए । इसके अतिरिक्त, यह देखते हुए कि इंजेक्शन की गहराई खोपड़ी की सतह से गणना की जाती है, और खोपड़ी की मोटाई उम्र और लिंग के साथ भिन्न होती है, कैनुला की नियुक्ति को हमेशा पोस्ट-प्रोटोकॉल हिस्टोलॉजी या इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (जैसे, चित्रा 2)का उपयोग करके सत्यापित किया जाना चाहिए ताकि इंजेक्शन की पर्याप्त स्थिति/गहराई सुनिश्चित की जा सके, और यदि आवश्यक हो तो स्टीरियोटैक्सिक निर्देशांक को समायोजित किया जाना चाहिए। 40-मिनट एएवी इंजेक्शन के दौरान, पंप रुकावट जैसे संभावित मुद्दों का तेजी से पता लगाने और सही करने के लिए इंजेक्शन की गति की निगरानी करना बहुत महत्वपूर्ण है। इष्टतम इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल सिग्नल प्राप्त करने के लिए कुछ प्रयोगात्मक कदम भी महत्वपूर्ण हैं। उदाहरण के लिए, इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण के दौरान ओवरक्रू न करें; सेरेब्रल कॉर्टेक्स को नुकसान को कम करने और ग्लियल निशान के गठन के लिए शिकंजा को खोपड़ी से कम से कम 2.5 मिमी तक रहना चाहिए। बाद में, यह भी काफी महत्वपूर्ण है i) इलेक्ट्रोड के चरम पर सीमेंट लगाने से बचें, ii) कनेक्टर के लिए इलेक्ट्रोड की तेजी से टांका सुनिश्चित करें, और iii) सुनिश्चित करें कि इलेक्ट्रोड के बीच कोई संपर्क नहीं है।
ईकॉग और ईएमजी रिकॉर्डिंग के लिए यहां प्रस्तुत प्रक्रिया बहुत अच्छी तरह से स्थापित, सरल है, और व्यापक रूप से चूहों2,11, 13,34में जागना और नींद की निगरानी करने के लिए उपयोग की जाती है। सतत ईकॉग और ईएमजी रिकॉर्डिंग लगातार कई दिनों (और यहां तक कि हफ्तों) के लिए किया जा सकता है और एक बहुत ही समृद्ध डेटासेट उत्पन्न करता है जिसका उपयोग विश्लेषण की कई पंक्तियों को करने के लिए किया जा सकता है जिसमें जागना और नींद की मात्रा और वास्तुकला2,11,12 (उदाहरण के लिए, प्रकाश और अंधेरे अवधि के प्रति विभिन्न राज्यों में बिताया गया समय, प्रत्येक राज्य के एपिसोड की संख्या, 24-h नींद का वितरण), जागना और नींद स्पेक्ट्रल सामग्री34,41 (उदाहरण के लिए, विभिन्न आवृत्ति बैंड में शक्ति [चित्र 3], स्केल-मुक्त गतिविधि के समान), और व्यक्तिगत तरंगों की विशेषताएं42,43,44 (उदाहरण के लिए, धीमी-तरंग आयाम और ढलान)। जब एएवी-मध्यस्थता आणविक जोड़तोड़ के साथ संयोजन में उपयोग किया जाता है, तो एक अतिरिक्त लाभ संभावित विकासात्मक मुआवजे से बचा जाता है जो ट्रांसजेनिक जानवरों में हो सकता है। अभ्यास के साथ, 40-मिनट एएवी इंजेक्शन सहित पूरी प्रक्रिया, लगभग 90 मिनट में की जा सकती है। मृत्यु दर (बहुत) कम होनी चाहिए क्योंकि सर्जरी न्यूनतम आक्रामक है।
ईकॉग/ईएमजी रिकॉर्डिंग और एएवी के साथ लक्षित हेरफेर का एक साथ उपयोग कई प्रकार के अन्य लाभ और अनुप्रयोग प्रदान करता है। उदाहरण के लिए, स्टीरियोटैक्सिक लक्ष्यीकरण की सटीकता, जब पर्याप्त रूप से किया जाता है, बहुत अधिक और प्रतिकृति होती है और नींद या अन्य शारीरिक प्रक्रियाओं के नियमन में किसी दिए गए मस्तिष्क क्षेत्र (और/या कोशिका प्रकार या क्षेत्र के भीतर एक आणविक तत्व) की विशिष्ट भूमिका निर्धारित करने के लिए उपयोगी होती है । इस प्रकार वर्तमान प्रोटोकॉल के रूपांतरों का उपयोग करके कई अलग-अलग कॉर्टिकल क्षेत्रों को आसानी से लक्षित किया जा सकता है। इसके अलावा, AAVs का उपयोग कर लक्ष्य जोड़तोड़ एक कॉर्टिकल/उपकॉर्टिकल ईकॉग रिकॉर्डिंग साइटों से अलग क्षेत्र के लिए निर्देशित किया जा सकता है । ऐसे मामलों में, एएवी इंजेक्शन के लिए बर्र छेद दंत सीमेंट (या हड्डी मोम) का उपयोग करके तय एक छोटे ग्लास कवरलिप द्वारा कवर किया जा सकता है। बढ़ी हुई विशिष्टता के लिए, एएवी निर्माण में अक्सर एक प्रमोटर शामिल होता है जो सटीक सेल प्रकार14के लक्षित संक्रमण की अनुमति देता है। वर्तमान प्रोटोकॉल में मोटर कॉर्टेक्स के14,29,45उत्तेजक पिरामिड कोशिकाओं को विशेष रूप से लक्षित करने के लिए एक CamKIIα प्रमोटर का उपयोग किया गया था। इस रणनीति ने मोटर कॉर्टेक्स के उत्तेजक न्यूरॉन्स में कोफिलिन (कोफिलिनS3D)32, 33का उपयोग करके और ईकॉग गतिविधि (चित्र3) में राज्य-विशिष्ट परिवर्तनों के अवलोकन को सक्षमबनाया है। संक्रमण/ट्रांसडक्शन प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए, भविष्य के प्रोटोकॉल उपयोगकर्ता प्रस्तुत एएवी-ईकोग प्रोटोकॉल को इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा सह-धुंधला में से एक के साथ जोड़ सकते हैं, और उच्च आवर्धन छवियों का उपयोग करने के लिए क्षमताओं की कुल संख्या से बाहर डबल लेबलिंग दिखाने के लिए लक्ष्य की एकल लेबलिंग (यहां, CaMKIIα-व्यक्त न्यूरॉन्स) । हाल ही में एक अध्ययन में, यहां वर्णित एक के समान एएवी-ईकोग विधि का उपयोग एक सिनेप्सिन प्रमोटर युक्त एएवी का उपयोग करके मोटर कॉर्टेक्स के सभी न्यूरॉन्स में नाजुक एक्स मानसिक मंदता सिंड्रोम से संबंधित प्रोटीन 1 (FXR1) को अधिक व्यक्त करने के लिए किया गया था और सतर्कता राज्य वितरण और स्पेक्ट्रल सामग्री28पर इस हेरफेर के प्रभाव का पता चला। इन निष्कर्षों से स्पष्ट होता है कि AAVs का उपयोग करके लक्षित मस्तिष्क क्षेत्र में दिए गए अणु में हेरफेर करने से विशिष्ट जागना/नींद मापदंडों के नियमन में भूमिकाओं का पता चल सकता है ।
वर्णित प्रोटोकॉल की एक सीमा एएवी इंजेक्शन करने से पहले कैनुला प्लेसमेंट के साथ होने वाले मस्तिष्क के ऊतकों का छोटा घाव है, जो एक भड़काऊ प्रतिक्रिया के साथ भी हो सकता है। यह विशेष चिंता का विषय हो सकता है जब उपकॉर्टिकल क्षेत्रों में एएवी इंजेक्शन प्रदर्शन और हमेशा पर्याप्त नियंत्रण का उपयोग करके निपटा जाना चाहिए । वैकल्पिक रूप से, वर्तमान प्रोटोकॉल का पालन नियंत्रण और परीक्षण समूहों में इसी तरह के स्तर को सुनिश्चित करने के लिए प्रतिक्रियाशील ग्लियोसिस और/या माइक्रोग्लियाल एक्टिवेशन (उदाहरण के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग करके) की मात्रा के बाद किया जा सकता है और इसलिए, ईकोग रीडआउट पर । एक दूसरी सीमा इलेक्ट्रोड और कनेक्टर के बीच खराब संबंध के जोखिम से संबंधित है, जिसके परिणामस्वरूप लगातार या कभी-कभी खराब इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल सिग्नल हो सकता है। मजबूत रूप से खराब, टांका, और सीमेंटेड इलेक्ट्रोड इस मुद्दे की घटनाओं को कम करेंगे। एक तीसरी सीमा रिकॉर्डिंग के दौरान सिर असेंबल के माध्यम से सीमित जानवरों से संबंधित है, जो कम से कम कुछ हद तक लोकोमोशन और अन्य व्यवहार को सीमित कर सकता है, और कभी-कभी केबलिंग क्षति और सिग्नल हानि में परिणाम देता है। अंत में, प्रस्तुत प्रोटोकॉल वयस्क चूहों के लिए अधिक उपयुक्त है, यह देखते हुए कि छोटे जानवरों की खोपड़ी का आकार चित्रित सिर असेंबल स्थापित करने में कठिनाइयों का कारण बन सकता है, जैसा कि पहले2वर्णित है।
संयुक्त ECoG/EMG रिकॉर्डिंग और एक सटीक लक्ष्य के AAV मध्यस्थता हेरफेर भी नींद के तंत्रिका विज्ञान के अलावा अंय अनुसंधान क्षेत्रों के लिए लागू होता है । अन्य लोगों के अलावा, इसका उपयोग जब्ती के पशु मॉडलों में मिर्गी की घटनाओं का अध्ययन और हेरफेर करने के लिए किया जा सकता है और स्मृति एन्कोडिंग और समेकन46, 47में शामिल मस्तिष्क दोलनों को मिलाना एक शक्तिशाली उपकरण है। तदनुसार, संभावित अनुप्रयोगों में निश्चित रूप से न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों सहित मनोरोग और न्यूरोलॉजी में मौलिक अनुसंधान के क्षेत्र शामिल हैं। एक अणु के एक निष्क्रिय रूप को व्यक्त करने की क्षमता के अलावा, AAVs कर सकते है और अधिक प्रयोग या डाउनरेगुलेट (जैसे, छोटे हस्तक्षेप आरएनए, CRISPR/Cas9) या एक पूर्ण शरीर KO में एक अणु की अभिव्यक्ति को बचाने के लिए इस्तेमाल किया गया है । महत्वपूर्ण बात यह है कि वर्तमान प्रोटोकॉल की दोहरी पद्धति अन्य स्तनधारी प्रजातियों जैसे चूहों और दैनिक कृंतकों पर भी लागू होती है जो नींद और न्यूरोडिजेनरेशन48, 49दोनों को समझने के लिए दिलचस्प मॉडल का प्रतिनिधित्व करती हैं।

इलेक्ट्रोएन्सेफेलोग्राफिक (या आम तौर पर इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक [ईकोग] कृंतक में) और इलेक्ट्रोमायोग्राफिक (ईएमजी) रिकॉर्डिंग का बड़े पैमाने पर नींद अनुसंधान के साथ-साथ तंत्रिका विज्ञान, न्यूरोलॉजी और मनोरोग में अधिक व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। संयोजन में, ये इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल सिग्नल सतर्कता राज्यों की पहचान और मनुष्यों और कृंतक दोनों1,2,3,4 दोनों में राज्य अवधि और स्पेक्ट्रल संरचना के बाद के मात्राकरण के लिए अनुमतिदेतेहैं। इस तरह की मात्रा यह समझने के लिए उपयोगी रही है कि न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों और मॉडल 5 , 6,7या आनुवंशिक संशोधन 8,9जैसी रोग स्थितियों में नींद को कैसे संशोधित कियाजाताहै । उदाहरण के लिए, न्यूरोनल संचार से जुड़े विभिन्न जीनों के नॉकआउट (KO) को माउस और फल फ्लाई10, 11, 12, 13दोनों में जागने और नींद की अवधि को बदलने के लिए दिखाया गया था। कृंतक में पूर्ण शरीर KO के अध्ययन से उत्पन्न होने वाले संभावित विकासात्मक मुआवजे से निपटने के लिए और आनुवंशिक हेरफेर के महीन नियंत्रण के लिए अनुमति देने के लिए, जीन अभिव्यक्ति में हेरफेर करने का एक कुशल तरीका एडेनो-संबद्ध वायरस (एएवी) का उपयोग करना है। एक एएवी-मध्यस्थता आनुवंशिक हेरफेर का उपयोग किसी दिए गए आणविक लक्ष्य को कम करने या अपरेगुलेट करने और विभिन्न प्रकार के प्रवर्तकों का उपयोग करके एक विशिष्ट कोशिकाआबादीतक हेरफेर को सीमित करने के लिए किया जा सकता है। एएवी का उपयोग क्लस्टर में डिलीवरी विधि के रूप में भी बड़े पैमाने पर किया जाता है, नियमित रूप से इंटरस्पेस्ड शॉर्ट पैलिंड्रोमिक रिपीट्स (CRISPR)/Cas9 प्रौद्योगिकी15,16। ये पद्धतियां आनुवंशिक हेरफेर के बेहतर लौकिक और स्थानिक नियंत्रण के लिए अनुमति देती हैं, जो आम तौर पर इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग करके संक्रमित क्षेत्र के परिमाणीकरण की अनुमति देने वाले रिपोर्टर की अभिव्यक्ति से जुड़ी होती है।
एएवी ऑप्टोजेनेटिक्स और केमोजेनेटिक्स17, 18, 19के माध्यम से न्यूरोनल गतिविधि के सेल प्रकार-विशिष्ट जोड़तोड़ के लिए मुख्य वेक्टर का भी प्रतिनिधित्व करते हैं, जिनका हाल के शोध में न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों, व्यवहार, अनुभूति और नींद20,21,22पर व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। नींद अनुसंधान में, कुछ मस्तिष्क क्षेत्रों की सक्रियता या अवरोध के लिए ऑप्टोजेनेटिक्स का अनुप्रयोग, जैसे बेसल फोरेब्रेशन, हाइपोथैलेमस, और सबलेट्रोडोर्सल टेगमेंटम, उत्तेजना, धीमी लहर की नींद (जिसे गैर-रैपिड आई मूवमेंट स्लीप के रूप में भी जाना जाता है), विरोधाभासी नींद (या रैपिड आई मूवमेंट स्लीप), और कैटप्लेक्सी23,और कैटप्लेक्सी 23, और कैटप्लेक्सी 23, और कैटप्लेक्सी 23, कैटेप्लेक्सी के नियंत्रण में उनकी भूमिकाओं को निर्धारित करने के लिए उपयोगी रहाहै। 24,25. इसके अलावा , एएवी-मध्यस्थता जोड़तोड़ ने महत्वपूर्ण नींद नियामक सर्किट और अणुओं को स्पष्ट करने में मदद की है जो नींद की हानि26,27, 28के प्रतिकूल प्रभावों में योगदानदेतेहैं। उदाहरण के लिए, नींद के अभाव-प्रेरित स्मृति हानि में फंसाया जाने वाला एक प्रोटीन कोफिलिन29,30है। यह प्रोटीन एक तंतुपात्मक ऐक्टिविन-ब्रेकिंग प्रोटीन है जो ऐक्टिन फिलामेंट्स के पुनर्गठन में शारीरिक रूप से बाध्यकारी होकर और तंतुओं के विघटन को गतिशीलतरीकेसे बढ़ावा देता है । एएवी-मध्यस्थता दृष्टिकोण का उपयोग करके कोफिलिन गतिविधि को बाधित करने के लिए रीढ़ की हड्डी की हानि के साथ-साथ चूहों29में नींद के अभाव से प्रेरित सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी और स्मृति घाटे को रोकने के लिए दिखाया गया था। सामूहिक रूप से, ये अध्ययन नींद विनियमन और कृंतक में नींद के अभाव के परिणामों को समझने के लिए एएवी-मध्यस्थता जोड़तोड़ की उपयोगिता और प्रासंगिकता पर जोर देते हैं।
यहां, एक प्रोटोकॉल वर्णित है कि एएवी का उपयोग करके जंगली प्रकार (डब्ल्यूटी) चूहों के सेरेब्रल कॉर्टेक्स क्षेत्र में कोफिलिन फ़ंक्शन के हेरफेर के साथ ईकॉग और ईएमजी इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण और रिकॉर्डिंग को जोड़ती है। अधिक सटीक रूप से, माउस कोफिलिन (कोफिलिनएस3 डी)के फॉस्फोरमेटिक रूप के कोडिंग अनुक्रम को व्यक्त करने वाला एएवी (सीरोटाइप 9), इसे निष्क्रिय32, 33प्रदान करता है, मोटर कॉर्टेक्स (एम 1 और एम 2) में इंजेक्ट कियाजाताहै। संक्रमित कोशिकाओं की समकालिक कॉर्टिकल गतिविधि की रिकॉर्डिंग सुनिश्चित करने के लिए इंजेक्शन साइट पर सीधे एक ईकोग इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपित किया जाता है। ECoG/EMG रिकॉर्डिंग सर्जरी, अनुकूलन, और उच्च cofilinS3D अभिव्यक्ति के लिए अनुमति देने के लिए सर्जरी के तीन सप्ताह बाद अबाधित परिस्थितियों में 24 घंटे के लिए आयोजित किया जाता है । इसके बाद रिकॉर्डिंग का उपयोग सतर्कता राज्यों और ईकोग स्पेक्ट्रल विश्लेषण की पहचान के लिए किया जाता है, जैसा कि पिछले अध्ययनों में वर्णितहै 11,34। यह पद्धति विशेष रूप से प्रकट कर सकती है कि चूहों में कॉर्टिकल कोफिलिन जागने और स्लीप ईकॉग संकेतों को कैसे संशोधित करता है। इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल रिकॉर्डिंग और एएवी-मध्यस्थता आनुवंशिक हेरफेर का यह संयोजन विशेष रूप से विशिष्ट मस्तिष्क कार्यों में विभिन्न आणविक तत्वों की भूमिकाओं की जांच करने के लिए प्रासंगिक है और इसे डब्ल्यूटीई में रुचि के कॉर्टिकल (और उपकॉर्टिकल) मस्तिष्क क्षेत्र (एस) पर लागू किया जा सकता है और दोनों लिंगों और यहां तक कि अन्य प्रजातियों के आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Surgery peparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>21 G needle</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN-2125R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-channel connector</td>
			<td>ENA AG</td>
			<td>BPHF2-O6S-E-3.2</td>
			<td>Connector used in this manuscript, but discontinued. See potential replacement below</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Distrelec</td>
			<td>300-93-672</td>
			<td>Potential replacement for discontinued connector above</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL6/J mice</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>000664 | B6</td>
			<td>Animals bred on site</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-68</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Non-ionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold wire 0.2 mm diameter</td>
			<td>Delta scientific</td>
			<td>920-862-41</td>
			<td>Non-insulated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (10 &#956;L)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14815279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infusion syringe Pump CMA 402</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>CMA8003110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection cannula 28 G</td>
			<td>Plastics one</td>
			<td>C313l-SPCL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>CA2L9100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (10 mg/mL)</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>4550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead-free solder</td>
			<td>AIM</td>
			<td>SN100C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricating ophthalmic ointment</td>
			<td>ALLERGAN</td>
			<td>210889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE 50 Catheter thin wall</td>
			<td>Plastics one</td>
			<td>C232CT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat fillister head self tapping screws</td>
			<td>MORRIS</td>
			<td>FF00CE125</td>
			<td>ECoG electrode gold covered; Dimension : 1.9 mm head diameter, 1.14 mm thread major diameter, 3.6 mm length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soldering iron</td>
			<td>Weller</td>
			<td>WES51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-9063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (20 mg/mL)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>2169592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Intracortical AAV injection with syringe pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.7 mm drill bit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAV9-CaMKII&#945;0.4-cofilinS3D-HA</td>
			<td>UPenn Viral Core</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAV9-CaMKII&#945;0.4-eGFP</td>
			<td>UPenn Viral Core</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tippped applicators</td>
			<td>Medicom</td>
			<td>806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drill</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>8050-N/18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra-fine Graefe forceps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic arm</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51604U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clamps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>18050-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue scissor</td>
			<td>Magna Stainless</td>
			<td>M4-124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">ECoG/EMG electrode implantation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (0.3 mg/mL)</td>
			<td>CEVA</td>
			<td>57133-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11001-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate task wipers</td>
			<td>Kimtech</td>
			<td>34120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental acrylic cement</td>
			<td>Yates Motloid</td>
			<td>44115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>91150-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra fine Graefe forceps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kelly forceps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>13002-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid acrylic</td>
			<td>Yates Motloid</td>
			<td>44119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monocryl plus suture needle 13 mm 3/8c rev cutting</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>MCP494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Providone-iodine 10%</td>
			<td>Triad disposables</td>
			<td>10-8208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RelyX Unicem 2, Adhesive Resin Cement A2</td>
			<td>3M</td>
			<td>56849</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Immunofluorescence and ECoG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>36-Channel EEG Wearable Headbox</td>
			<td>LaMONT Medical</td>
			<td>832-000350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaMKII alpha Monoclonal Antibody (Cba-2)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>13-7300</td>
			<td>Dilution 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conductors Awg PVC Insulation Cable</td>
			<td>Calmont Wire &#38; Cables</td>
			<td>HC-0819075R0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Mouse IgG secondary Ab, Alexa Fluor 568</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10037</td>
			<td>Dilution 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG secondary Ab, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11008</td>
			<td>Dilution 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>3724</td>
			<td>Dilution 1:800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Programmable Amplifier</td>
			<td>LaMONT Medical</td>
			<td>815-000002-S2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stellate Harmonie</td>
			<td>Natus</td>
			<td>HSYS-REC-LT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swivel connector</td>
			<td>Crist Instrument Company Inc.</td>
			<td>4-TBC-9-S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrocorticographic recording of cerebral cortex areas manipulated using an adeno-associated virus targeting cofilin in mice

कृंतक में इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक (ईकोग) रिकॉर्डिंग का उपयोग नींद अनुसंधान और न्यूरोलॉजिकल स्थितियों की एक विस्तृत श्रृंखला के अध्ययन के लिए प्रासंगिक है। Adeno से जुड़े वायरस (AAVs) तेजी से मस्तिष्क सर्किट और उनके कार्यों की समझ में सुधार करने के लिए उपयोग किया जाता है । विशिष्ट कोशिका आबादी और/या सटीक आणविक घटकों के एएवी-मध्यस्थता हेरफेर नींद की हानि के प्रतिकूल प्रभावों में योगदान करने वाले नए स्लीप रेगुलेटरी सर्किट/अणुओं और प्रमुख प्रोटीन की पहचान करने के लिए काफी उपयोगी रहा है । उदाहरण के लिए, एएवी का उपयोग करके फिलामेंटस ऐक्टिन-ब्रेकिंग प्रोटीन कोफिलिन की गतिविधि को बाधित करना नींद के अभाव-प्रेरित स्मृति हानि को रोकता है। यहां, एक प्रोटोकॉल वर्णित है जो ईकोग गतिविधि की रिकॉर्डिंग के साथ सेरेब्रल कॉर्टेक्स क्षेत्र में कोफिलिन फ़ंक्शन के हेरफेर को जोड़ती है ताकि यह जांच की जा सके कि कॉर्टिकल कोफिलिन जागना और नींद ईकॉग संकेतों को संशोधित करता है या नहीं। एएवी इंजेक्शन वयस्क पुरुष और मादा चूहों में ईकॉग और इलेक्ट्रोमायोग्राफिक (ईएमजी) इलेक्ट्रोड के प्रत्यारोपण के रूप में एक ही शल्य प्रक्रिया के दौरान किया जाता है। चूहों को एनेस्थेटाइज्ड किया जाता है, और उनके सिर मुंडा दिए जाते हैं। त्वचा की सफाई और चीरा के बाद, मोटर कॉर्टेक्स के स्टीरियोटैक्सिक निर्देशांक निर्धारित किए जाते हैं, और खोपड़ी को इस स्थान पर छेदा जाता है। कोफिलिन का एक निष्क्रिय रूप, कोफिलिनकाएक निष्क्रिय रूप, एएवी व्यक्त करने वाले एएवी के साथ एक कैनुला धीरे-धीरे कॉर्टिकल ऊतक में तैनात होता है। AAV जलसेक के बाद, सोने से ढके शिकंजा (ECoG इलेक्ट्रोड) खोपड़ी के माध्यम से खराब कर रहे है और सोने की गर्दन की मांसपेशियों (EMG इलेक्ट्रोड) में डाला तारों के साथ खोपड़ी को मजबूत । जानवरों को ठीक होने और कोफिलिनS3Dकी पर्याप्त अभिव्यक्ति सुनिश्चित करने के लिए तीन सप्ताह की अनुमति है । संक्रमित क्षेत्र और सेल प्रकार इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का उपयोग करके सत्यापित किए जाते हैं, और ईपीओजी का विश्लेषण सतर्कता राज्यों और स्पेक्ट्रल विश्लेषण की दृश्य पहचान का उपयोग करके किया जाता है। संक्षेप में, यह संयुक्त पद्धतिगत दृष्टिकोण अणुकार्य आकृति विज्ञान और जागना और नींद के दौरान सिंक्रोनाइज्ड सेरेब्रल कॉर्टेक्स गतिविधि के नियमन के लिए कनेक्टिविटी को विनियमित करने वाले आणविक घटकों के सटीक योगदान की जांच की अनुमति देता है।

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Electrocorticographic Recording of Cerebral Cortex Areas Manipulated Using an Adeno-Associated Virus Targeting Cofilin in Mice

यह लेख एडेनो-संबद्ध वायरस का उपयोग करके सेरेब्रल कॉर्टेक्स में आणविक लक्ष्यों में हेरफेर के लिए और इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक रिकॉर्डिंग का उपयोग करके जागने और नींद के दौरान इस हेरफेर के प्रभावों की निगरानी के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है।

सेरेब्रल कॉर्टेक्स क्षेत्रों की इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक रिकॉर्डिंग चूहों में कोफिलिन को लक्षित करने वाले एडेनो-एसोसिएटेड वायरस का उपयोग करके हेरफेर किया गया

The use of electrocorticographic (ECoG) recordings in rodents is relevant to sleep research and to the study of a wide range of neurological conditions. ...

इस प्रोटोकॉल का उपयोग विभिन्न विजिलिन राज्यों के दौरान इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक गतिविधि के नियमन में विशिष्ट व्यक्तिगत आणविक लक्ष्यों की भूमिका की पहचान करने के लिए किया जा सकता है। एडेनो से जुड़े वायरस का उपयोग करने के लाभों में से एक दिए गए मस्तिष्क क्षेत्र और एक विशिष्ट कोशिका प्रकार को ठीक से लक्षित करने की क्षमता है। प्रोटोकॉल का प्रदर्शन जूलियन डुफोर्ट-गेवाइस, मेरी टीम से एक शोध सहयोगी होगा ।एक एनेस्थेटाइज्ड 12 सप्ताह पुराने माउस में पैर की अंगुली चुटकी पलटा करने के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करने के बाद, एक बाल ट्रिमर का उपयोग करने के लिए कान के पीछे से आंखों के पीछे से आंखों के सामने करने के लिए बाल दाढ़ी । निर्जलीकरण को रोकने के लिए प्रत्येक आंख में नेत्र मरहम की एक उदार बूंद जोड़ें और माउस के सिर को ध्यान से एक स्टीरियोटैक्सिक उपकरण पर ठीक करने के लिए कान की सलाखों का उपयोग करें। घुटन से बचने के लिए जीभ को धीरे-धीरे मुंह से बाहर निकालें।माउस की नाक को उपकरण पर ठीक करें और सिर पर उजागर त्वचा को स्टरलाइज करने के लिए 70% इथेनॉल का उपयोग करें। अतिरिक्त ठीक ग्रीफे संदंश के साथ त्वचा को पकड़े हुए, ऊतक कैंची का उपयोग करने के लिए कान के आधार से आंखों के स्तर तक त्वचा में कटौती और चीरा के प्रत्येक पक्ष पर दो सर्जिकल क्लैंप जगह त्वचा खिंचाव और खोपड़ी का पर्दाफाश करने के लिए । मस्तिष्क टांके से परहेज, पेरिओस्टियम को हटाने के लिए खोपड़ी की सतह को खरोंच करने और दो या अधिक दिशाओं में ओवरलैपिंग धारियाँ बनाने के लिए कैंची टिप का उपयोग करें।हड्डी के टुकड़ों को हटाने और खोपड़ी को कीटाणुरहित करने के लिए 70% इथेनॉल का उपयोग करें। स्टीरियोटैक्सिक आर्म में पहले से तैयार कैनुला के साथ, ब्रेग्मा और लैम्ब्डा के स्थान की पहचान करें और प्रत्येक के स्टीरियोटैक्सिक निर्देशांक नोट करें। स्टीरियोटैक्सिक आर्म और एक पेन का उपयोग खोपड़ी पर कैनुला की स्थिति को चिह्नित करने के लिए 1.5 मिलीमीटर पार्श्व दाईं ओर मिडलाइन और 1.5 मिलीमीटर पूर्वकाल ब्रेग्मा के लिए।0.7 मिलीमीटर ड्रिल बिट का उपयोग करके, खोपड़ी की सतह पर चिह्नित स्थिति लंबवत पर खोपड़ी को सावधानीपूर्वक छेदें और ऊर्ध्वाधर धुरी के साथ गठबंधन किया और खोपड़ी को 10% बीटाडीन पोविडोन आयोडीन इोडीन समाधान में भिगोए गए बाँझ सूती टिप के साथ धोएं, फिर एक माइक्रोलीटर द्वारा 10 माइक्रोलीटर सिरिंज के प्लंजर को वापस लें ताकि कैनुला को एक माइक्रोलिटर एयर बबल के साथ लोड किया जा सके। इसके बाद, धीमी पाइपिंग के साथ ब्याज के एएवी मिश्रण को मिलाएं और एक बाँझ पेट्री डिश में मिश्रण के 1.7 माइक्रोलीटर जोड़ें। इस सिरिंज का उपयोग कैनुला में समाधान के 1.5 माइक्रोलीटर लोड करने के लिए करें और कनेक्टेड पी50 ट्यूब पर हवा के बुलबुले की स्थिति को चिह्नित करें।लंबवत खोपड़ी में छेद के साथ कैनुला को संरेखित करें ताकि कैनुला हड्डी के ऊपरी किनारे तक पहुंच जाए और खोपड़ी की सतह के जेड समन्वय को चिह्नित करे। धीरे-धीरे कैनुला को कम करें जब तक कि टिप खोपड़ी की सतह और मोटर कॉर्टेक्स के पांच परत के नीचे 1.5 मिलीमीटर तक न पहुंच जाती है और 40 मिनट से अधिक एएवी के एक माइक्रोलीटर को वितरित करने के लिए 0.025 माइक्रोलीटर प्रति मिनट प्रवाह दर पर सिरिंज पंप शुरू करें। इंजेक्शन को ट्रैक करने के लिए ट्यूब में हवा के बुलबुले का उपयोग करें, आवश्यक के रूप में किसी भी समायोजन कर रही है।जब वायरस की पूरी मात्रा वितरित की गई है, तो पर्याप्त प्रसार सुनिश्चित करने के लिए पांच मिनट के लिए कैनुला छोड़ दें और धीरे-धीरे और ध्यान से कॉर्टेक्स से कैनुला को हटाने के लिए स्टीरियोटैक्सिक आर्म को उठाने से पहले बैकफ्लो से बचें। इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण के लिए, सीधे केली संदंश का उपयोग करने के लिए धीरे से छेद है जिसमें AAV इंजेक्शन था की ऊर्ध्वाधर धुरी में एक सीधे सोने के तार के साथ एक इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक इलेक्ट्रोड पेंच, खोपड़ी के बाहर पेंच के कम से २.५ मिलीमीटर छोड़ने के लिए ड्यूरा और मस्तिष्क प्रांतस्था को नुकसान को कम करने के लिए । संदर्भ इलेक्ट्रोड की स्थिति को चिह्नित करने के लिए एक कलम का उपयोग करें 2.6 मिलीमीटर पार्श्व दाईं ओर मिडलाइन और 0.7 मिलीमीटर पीछे ब्रेग्मा के पीछे और पीछे इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफिक इलेक्ट्रोड की स्थिति 1.5 मिलीमीटर पार्श्व सही मिडलाइन और 1.5 मिलीमीटर पूर्वकाल में लैम्ब्डा के लिए और कोई विशिष्ट समन्वय के साथ बाएं गोलार्द्ध पर तीन शिकंजा रखरखाव की स्थिति, लेकिन एक दूसरे से और इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक इलेक्ट्रोड से जितना संभव हो उतना दूर।ड्रिल का उपयोग करने के लिए ध्यान से अन्य इलेक्ट्रोड और शिकंजा के चिह्नित पदों पर खोपड़ी सतह के लिए लंबवत खोपड़ी छेदना और एक 10% povidone आयोडीन समाधान के साथ छेदा खोपड़ी धोने। रक्तस्राव और संदूषण को रोकने के लिए शिकंजा स्थापित करने से पहले नाजुक कार्य पोंछ के छोटे लुढ़का टुकड़ों के साथ छेद ब्लॉक और सीधे केली संदंश का उपयोग करने के लिए एक ही कोण है कि छेद छेद थे पर ड्रिल छेद में शिकंजा डालने के लिए । शिकंजा के अंदर अंगूठी की तरह अंतरिक्ष के केंद्र में दंत सीमेंट की कुछ छोटी बूंदों प्लेस और गर्दन की मांसपेशियों के ऊपर त्वचा उठाने के लिए अतिरिक्त ठीक ग्रीफे संदंश का उपयोग करें ।ड्यूमोंट नंबर पांच संदंश का उपयोग करके, एक इलेक्ट्रोमायोग्राफिक इलेक्ट्रोड की घुमावदार चरम सीमा को पकड़ें और इसे मांसपेशियों में लगभग एक से दो मिलीमीटर डालें। इलेक्ट्रोड के घुमावदार साइड और फोल्डिंग प्वाइंट को डेंटल सीमेंट में रखें और दूसरे इलेक्ट्रोमायोग्राफिक इलेक्ट्रोड को उसी तरीके से डालें। जानवर की आंखों को कवर करने के बाद, सीमेंट को जमना और इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक इलेक्ट्रोड के आधार को कवर करने के लिए अतिरिक्त दंत सीमेंट का उपयोग करने और एक मुकुट के आकार का समोच्च बनाने के लिए लंगर शिकंजा के लिए तीन से पांच मिनट के लिए प्रकाश लागू करें।तीन से पांच मिनट की रोशनी लगाने के बाद असेंबल के केंद्र को एक्रेलिक सीमेंट से भरें और सर्जिकल क्लैंप को हटा दें। असेंबल के सामने और पीछे त्वचा को बंद करने के लिए एक सिंथेटिक अवशोषित मोनोफिलामेंट सीवन का उपयोग करें ताकि खोपड़ी उजागर न हो और घुमावदार संदंश का उपयोग करें ताकि कनेक्टर पिन के साथ इलेक्ट्रोड के सोने के तारों को ध्यान से संरेखित करने के लिए असेंबल के ऊपर कनेक्टर को पकड़ सकें, फिर प्रत्येक इलेक्ट्रोड छोर को एक ही संबंधित कनेक्टर पिन में जल्दी से मिलाप करें। फ्रेम से माउस को हटाने के बाद, कनेक्टर और सिर के बीच खाली जगह को एक्रेलिक सीमेंट से कवर करें।और वजन करने के बाद, माउस को एक साफ पिंजरे में रखें जिसमें एक गर्मी पैड पर गैर-मेशेड ढक्कन हो। सर्जरी के दो सप्ताह बाद, चूहों को रिकॉर्डिंग केबल से कनेक्ट करें और कम से कम एक सप्ताह बाद, 24 घंटे या उससे अधिक के लिए इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक और इलेक्ट्रोमायोग्राफिक संकेतों को रिकॉर्ड करें। इंजेक्शन साइट के आसपास के मोटर कॉर्टेक्स के भीतर न्यूरॉन्स के एचए धुंधला होने से एक सफल संक्रमण की पुष्टि होती है, जो कोफिलिन S3D HA की उपस्थिति का संकेत देता है। उत्तेजक न्यूरॉन मार्कर CaMKII अल्फा के साथ सह-धुंधला उच्च आवर्धन के तहत स्पष्ट कोफिलिन S3D HA और CaMKII अल्फा सह अभिव्यक्ति इंगित करता है ।लॉग जागना, धीमी लहर नींद के लिए सापेक्ष शक्ति स्पेक्ट्रा बदल दिया है, और विरोधाभासी नींद कोफिलिन निष्क्रियता के तहत स्पेक्ट्रल गतिविधि में राज्य विशिष्ट अंतर दिखाते हैं । इलेक्ट्रोकॉर्टिकोग्राफिक रिकॉर्डिंग और सटीक आणविक लक्ष्यों के एएवी-मध्यस्थता हेरफेर का संयोजन कई मस्तिष्क क्षेत्रों और अन्य तंत्रिका विज्ञान उप-क्षेत्रों जैसे नींद के अलावा मिर्गी या स्मृति पर अनुसंधान पर भी लागू होता है।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors

एडिनो - जुड़े वायरल vectors के intracranial इंजेक्शन

Intracranial injection of viral vectors engineered to express a fluorescent protein is a versatile labeling technique for visualization of specific ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

तीव्र hippocampal स्लाइस में Synaptically पैदा Astroglial और neuronal प्रतिक्रियाएँ की दोहरी electrophysiological रिकॉर्डिंग

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Functional Imaging of Auditory Cortex in Adult Cats using High-field fMRI

उच्च क्षेत्र fMRI का उपयोग वयस्क बिल्लियों में श्रवण प्रांतस्था के कार्यात्मक इमेजिंग

Current knowledge of sensory processing in the mammalian auditory system is mainly derived from electrophysiological studies in a variety of animal ...

Subpial Adeno-associated Virus 9 (AAV9) Vector Delivery in Adult Mice

Subpial Adeno-associated Virus 9 AAV9 Vector Delivery in Adult Mice

उपशोषक एडोनो-संबंधित वायरस 9 (एएवी 9) वयस्क चूहे में वेक्टर डिलिवरी

The successful development of a subpial adeno-associated virus 9 (AAV9) vector delivery technique in adult rats and pigs has been reported on previously. ...

Methods and Tips for Intravenous Administration of Adeno-associated Virus to Rats and Evaluation of Central Nervous System Transduction

तरीकों और Adeno के नसों में प्रशासन के लिए युक्तियां-चूहों और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र Transduction के मूल्यांकन से जुड़े वायरस

Adeno-associated virus (AAV) vectors are a key reagent in the neurosciences for clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR), ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

इमेजिंग एक 2D संस्कृति प्रणाली का उपयोग कर प्राथमिक मस्तिष्क प्रांतस्था की कोशिकाओं के रहते

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

Visualization and Live Imaging of Oligodendrocyte Organelles in Organotypic Brain Slices Using Adeno-associated Virus and Confocal Microscopy

दृश्य और Organotypic मस्तिष्क Adeno-जुड़े वायरस और फोकल माइक्रोस्कोपी का उपयोग स्लाइस में Oligodendrocyte Organelles के लाइव इमेजिंग

Neurons rely on the electric insulation and trophic support of myelinating oligodendrocytes. Despite the importance of oligodendrocytes, the advanced ...

Adeno-associated Virus-mediated Transgene Expression in Genetically Defined Neurons of the Spinal Cord

Adeno-संबद्ध वायरस-रीढ़ की हड्डी की आनुवंशिक रूप से परिभाषित न्यूरॉन्स में मध्यस्थता Transgene अभिव्यक्ति

Selective manipulation of spinal neuronal subpopulations has mainly been achieved by two different methods: 1) Intersectional genetics, whereby double or ...

Direct Intrathecal Injection of Recombinant Adeno-associated Viruses in Adult Mice

रिकॉमबिनेंट Adeno-वयस्क चूहों में जुड़े वायरस के प्रत्यक्ष Intrathecal इंजेक्शन

Intrathecal (IT) injection of adeno-associated virus (AAV) has drawn considerable interest in CNS gene therapy by virtue of its safety, noninvasiveness, ...

Production, Purification, and Quality Control for Adeno-associated Virus-based Vectors

Adeno-जुड़े वायरस आधारित वैक्टर के लिए उत्पादन, शुद्धिकरण, और गुणवत्ता नियंत्रण

Gene delivery tools based on adeno-associated viruses (AAVs) are a popular choice for the delivery of transgenes to the central nervous system (CNS), ...