Name: rapid assembly of multi-gene constructs using modular golden gate cloning
Uploaded: 2021-02-05T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af Research Foundation for State University of New York (Award #: 71272) og IMPACT Award of University i Buffalo (Award #: 000077).

BEMÆRK: Den hierarkiske kloningsprotokol, der tilbydes i dette værktøjssæt, kan opdeles i tre hovedtrin: 1. Kloning af delplasmider; 2. Kloning af transskriptionsenheder 3. Kloning af plasmider med flere gener (figur 1). Denne protokol starter fra primer design og slutter med anvendelser af den klonede multi-gen plasmid.
1. Primer design til kloning af del plasmid (pYTK001):
<ol><li>Design de forreste og omvendte primere, der indeholder flankerende nukleotid...

Den MoClo baseret kloning kit udviklet af Lee et al. giver en glimrende ressource for hurtig samling af en til fem transskription enheder i en multi-gen plasmid enten for replikation eller integration i gær genom. Brugen af dette kit eliminerer den tidskrævende kloning flaskehals, der ofte eksisterer for at udtrykke flere gener i gær.
Vi testede fem forskellige betingelser for fordøjelsen / ligation cyklusser af Golden Gate kloning med T4 DNA ligase. Vi konstaterede, at 30 fordøjelsescykl...

Syntetisk biologi har til formål at konstruere biologiske systemer med nye funktionaliteter, der er nyttige for farmaceutiske, landbrugs- og kemiske industrier. At samle et stort antal DNA-fragmenter på en høj gennemstrømningshastighed er en grundlæggende teknologi i syntetisk biologi. En sådan kompliceret proces kan opdeles i flere niveauer med faldende kompleksitet, et koncept lånt fra grundlæggende ingeniørvidenskab1,2. I syntetisk biologi samles DNA-fragmenter normalt hierarkisk baseret på funktionalitet: (i) Delniveau: "dele" refererer til DNA-fragmenter med en bestemt funktion, såsom en promotor, en kodningssekvens, en terminator, en oprindelse af replikation; ii) Transskriptionsenheder (TU): en TU består af en promotor, en kodningssekvens og en terminator, der er i stand til at transskribere et enkelt gen iii) Multigenniveau: Et multigenplasmid indeholder flere TU'er, der ofte består af en hel metabolisk vej. Denne hierarkiske samling banebrydende af BioBrick samfund er det grundlæggende koncept for samling af store sæt af DNA'er i syntetisk biologi3.
I det seneste årti4,5,6,7har Golden Gate-kloningsteknikken i høj grad lettet hierarkisk DNA-samling2. Mange andre multi-del kloning metoder, såsom Gibson kloning8, ligation-uafhængig kloning (SLIC)9, uracil excision-baseret kloning (USER)10, ligase cykling reaktion (LCR)11, og in vivo rekombination (DNA Assembler)12,13, er også blevet udviklet hidtil. Men Golden Gate kloning er en ideel DNA-samling metode, fordi det er uafhængig af gen-specifikke sekvenser, så ar-mindre, retningsbestemt, og modulopbygget samling i en one-pot reaktion. Golden Gate kloning drager fordel af type IIS-begrænsningsenzymer, der genkender en ikke-palindromisk sekvens for at skabe forskudte udhæng uden for anerkendelsesstedet2. En ligase slutter sig derefter til de udglødede DNA-fragmenter for at opnå en samling i flere dele. Anvendelse af denne kloningsstrategi på det modulære kloningssystem (MoClo) har gjort det muligt at samle op til 10 DNA-fragmenter med over 90% transformanter screenet, der indeholder den korrekt samlede konstruktion4.
MoClo-systemet tilbyder enorme fordele, der har fremskyndet design-build-testcyklussen for syntetisk biologi. For det første gør de udskiftelige dele det muligt for kombinatorisk kloning hurtigt at teste et stort rum af parametre. For eksempel kræver optimering af en metabolisk vej normalt cykling gennem mange initiativtagere for hvert gen for at afbalancere stien flux. MoClo-systemet kan nemt håndtere sådanne krævende kloningsopgaver. For det andet er man nødt til at sekvensere den del plasmid, men typisk ikke TU eller multi-gen plasmider. I de fleste tilfælde er screening ved koloni PCR eller begrænsning fordøjelse tilstrækkelig til verifikation på TU og multi-gen plasmid niveau. Dette skyldes, at kloning af del plasmid er det eneste skridt, der kræver PCR, som ofte introducerer mutationer. For det tredje er MoClo-systemet ideelt til opbygning af multigenkomplekse metaboliske veje. Endelig, på grund af den universelle udhæng, kan den del plasmids genbruges og deles med hele bioengineering samfund. I øjeblikket MoClo kits er tilgængelige for planter14,15,5,16,17, svampe6,18,19,20,21,22, bakterier7,23,24,25,26,27, og dyr28,29. En multi-kongerige MoClo platform er også blevet indført for nylig30.
For Saccharomyces cerevisiae, Lee et al.6 har udviklet en alsidig MoClo værktøjskasse, en glimrende ressource for gær syntetisk biologi samfund. Dette sæt leveres i et praktisk 96-brønds format og definerer otte typer udskiftelige DNA-dele med en forskelligartet samling af velkaraktererede promotorer, fluorescerende proteiner, terminatorer, peptidmærker, markeringsmarkører, replikations oprindelse og genomredigeringsværktøjer. Denne værktøjskasse gør det muligt at samle op til fem transskriberingsenheder i et multigenplasmid. Disse funktioner er værdifulde for gær metabolisk teknik, hvor delvis eller hele veje er over-udtrykt til at producere målrettede kemikalier. Ved hjælp af dette kit, forskere har optimeret produktionen af geraniol, linalool31, penicillin32, muconic syre33, indigo34, og betalain35 i gær.
Her leverer vi en detaljeret, trin-for-trin protokol til at guide brugen af MoClo værktøjskassen til at generere multi-gen veje til enten episomal eller genomisk udtryk. Gennem omfattende brug af dette sæt har vi fundet ud af, at nøjagtig måling af DNA-koncentrationer er nøglen til at sikre equimolarfordelingen af hver del i Golden Gate-reaktionen. Vi anbefaler også T4 DNA ligase over T7 DNA ligase, fordi førstnævnte fungerer bedre med et større antal udhæng36. Endelig skal alle interne anerkendelsessteder for BsmBI og BsaI fjernes eller tæmmes inden montering. Alternativt kan man overveje at syntetisere dele for at fjerne flere interne websteder og for at opnå samtidig codon-optimering. Vi demonstrerer, hvordan man bruger dette værktøjssæt ved at udtrykke en fem-gen vej til β-caroten og lycopen produktion i S. cerevisiae. Vi viser endvidere, hvordan man slår ADE2-locus ud ved hjælp af genomredigeringsværktøjerne fra dette sæt. Disse farvebaserede eksperimenter blev valgt for nem visualisering. Vi demonstrerer også, hvordan man genererer fusionsproteiner og skaber aminosyremutationer ved hjælp af Golden Gate-kloning.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mm Glass beads</td>
			<td>RPI research products</td>
			<td>9831</td>
			<td>For lysing yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>BD &#38; Company</td>
			<td>214010</td>
			<td>Component of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Peptone</td>
			<td>BD&#38; Company</td>
			<td>211677</td>
			<td>Component of the yeast extract peptone dextrose medium (YPD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BsaI-HFv2</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3733S</td>
			<td>a highly efficient version of BsaI restriction enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>4800-94-6</td>
			<td>Antibiotic for screening at the transcription unit level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>56-75-7</td>
			<td>Antibiotic for screening at the entry vector level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSM-His</td>
			<td>Sunrise Sciences</td>
			<td>1006-010</td>
			<td>Amino acid supplement of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Carbon source of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Yeast Nitrogen Base w/o Amino Acids</td>
			<td>BD &#38; Company</td>
			<td>291940</td>
			<td>Nitrogen source of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTP mix</td>
			<td>Promega</td>
			<td>U1515</td>
			<td>dNTPs for PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esp3I</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0734S</td>
			<td>a highly efficient isoschizomer of BsmBI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen-EZ Yeast Trasformation II Kit</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>T2001</td>
			<td>For yeast transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexanes</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>H302-1</td>
			<td>For carotenoid extraction from yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>25389-94-0</td>
			<td>Antibiotic for screening at the multigene plasmid level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar, Miller</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1425-2</td>
			<td>Lysogenic agar medium for E. coli culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Miller</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1426-2</td>
			<td>Lysogenic liquid medium for E. coli culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lycopene</td>
			<td>Cayman chemicals</td>
			<td>NC1142173</td>
			<td>For lycopene quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoClo YTK</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>1000000061</td>
			<td>Depositing Lab: John Deuber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monarch Plasmid Miniprep Kit</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>T1010L</td>
			<td>For plasmid purification from E.coli</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND2000c</td>
			<td>For measuring accurate DNA concentrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NotI-HF</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3189S</td>
			<td>Restriction enzyme for integrative multigene plasmid linearization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nourseothricin Sulphate</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>N-500-100</td>
			<td>Antibiotic Selection marker for the pCAS plasmid used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion HF reaction Buffer (5X)</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B0518S</td>
			<td>Buffer for PCR using Phusion polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High Fidelity DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0530S</td>
			<td>High fidelity polymerase for all the PCR reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLM494</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>100539</td>
			<td>Plasmid used to amplify crtI, crtYB and crtE used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quartz Cuvette</td>
			<td>Thermo Electron</td>
			<td>10050801</td>
			<td>For quantifing carotenoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202S</td>
			<td>Ligase for Golden Gate cloning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermocycler</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1851148</td>
			<td>For performing all the PCR and cloning reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Homogenizer</td>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Model: BBX24</td>
			<td>For homogenization of yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Genesys 150</td>
			<td>For quantifing carotenoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1422-500</td>
			<td>Component of the yeast extract peptone dextrose medium (YPD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-carotene</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>AAH6010603</td>
			<td>For &#946;-carotene quantification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid assembly of multi-gene constructs using modular golden gate cloning

Golden Gate-kloningsmetoden muliggør hurtig samling af flere gener i ethvert brugerdefineret arrangement. Det bruger type IIS-begrænsningsenzymer, der skærer uden for deres genkendelsessteder og skaber et kort udhæng. Dette modulopbyggede kloningssystem (MoClo) bruger en hierarkisk arbejdsgang, hvor forskellige DNA-dele, såsom promotorer, kodningssekvenser (CDS) og terminatorer, først klones til en indgangsvektor. Flere indgangsvektorer samles derefter i transskriberingsenheder. Flere transskriptionsenheder opretter derefter forbindelse til et multi-gen plasmid. Golden Gate kloning strategi er af enorm fordel, fordi det giver ar-mindre, retningsbestemt, og modulopbygget samling i en one-pot reaktion. Den hierarkiske arbejdsgang muliggør typisk facile kloning af en lang række multigenkonstruktioner uden behov for sekventering ud over indgangsvektorer. Brugen af fluorescerende proteinudfald gør det nemt at screene visuelt. Dette arbejde giver en detaljeret, trin-for-trin protokol til samling af multi-gen plasmider ved hjælp af gær modulopbygget kloning (MoClo) kit. Vi viser optimale og suboptimale resultater af multi-gen plasmid samling og giver en guide til screening for kolonier. Denne kloningsstrategi gælder i høj grad for metabolisk gærteknik og andre situationer, hvor multigenplasmidkloning er påkrævet.

Her resultaterne af fire repliktive multi-gen plasmider til β-caroten (gul) og lycopen (rød) produktion. En integrativ multi-gen plasmid for at forstyrre ADE2 locus blev bygget, hvis kolonier er røde.
Kloning af CDS'er i indgangsvektoren (pYTK001) ERG20 blev forstærket fra gær genom og de tre carotenoid gener crtE, crtYB, crtI fra plasmid pLM494<sup class="xre...

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning at JoVE.com

Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning

Målet med denne protokol er at give en detaljeret, trin-for-trin guide til samling af multi-gen konstruktioner ved hjælp af modulopbygget kloning system baseret på Golden Gate kloning. Den giver også anbefalinger til kritiske skridt for at sikre optimal montage baseret på vores erfaringer.

Hurtig samling af multigenkonstruktioner ved hjælp af modulær golden gate-kloning

The Golden Gate cloning method enables the rapid assembly of multiple genes in any user-defined arrangement. It utilizes type IIS restriction enzymes that ...

Dette er en detaljeret protokol til samling af multi-gen plasmider ved hjælp af Gær MoClo kit. Denne metode muliggør praktisk kloning af en række multi-gen klassekammerater. Det er ideelt til at generere et stort bibliotek med relaterede dele.Begynd med at oprette Golden Gate reaktion mix. Der tilsættes 20 femtomoleer af hvert PCR-produkt og indgangsvektoren, en mikroliter på 10X T4 Ligase buffer, 0,5 mikroliter Esp3I og 0,5 mikroliter T4 ligase. Tilsæt dobbeltdestilleret vand for at bringe det samlede volumen til 10 mikroliter.Kør derefter kloningsreaktionen. Omdan hele reaktionsblandingen til DH5-alfastammen eller tilsvarende Escherichia coli kemisk kompetente celler ved varmechok. Spred cellerne på en lb plade med 35 mikrogram per milliliter chloramphenicol.Derefter inkubere pladen ved 37 grader Celsius natten over. Efter 16 til 18 timer skal du tage pladen ud af inkubatoren og lade den stå ved fire grader Celsius i cirka fem timer for at lade superfoldergrønt fluorescerende protein eller sfGFP udvikle sig til en mere intens grøn farve. For at screene pladen skal du placere den på en ultraviolet eller blå lystransilluminator.Den sfGFP indeholder kolonier vil fluorescere under UV-lys. De grønne kolonier er negative, fordi de indeholder den uslebne del plasmid. De hvide kolonier er sandsynligvis positive.Kloning er vellykket, hvis der er 30 til 100% hvide kolonier. Saml en mellemliggende vektor med venstre stik, sfGFP dropout, højre stik, en gær udvælgelse markør, en gær oprindelse replikation, og den del plasmid med en mRFP1, en E.coli oprindelse, og ampicillin resistente gen. Udfør kloningsreaktionen som beskrevet i tekstmanuskriptet.Transformer hele reaktionsblandingen til DH5 alpha-stammen, og spred derefter cellerne på en lb-plade med 50 mikrogram pr. milliliter carbenicillin eller ampicillin. Inkuber ved 37 grader Celsius natten over. Efter 16 til 18 timer skal du tage pladen ud af inkubatoren.Pladen vil indeholde både lyserøde og lysegrønne kolonier. Hold det på fire grader Celsius i cirka fem timer for at lade mRFP1 og sfGFP modnes. Brug en UV- eller blå lystransilluminator til at identificere de grønne kolonier, der indeholder den potentielt korrekte mellemliggende vektor.Streak de grønne kolonier på en lb carbenicillin plade og inkubere ved 37 grader Celsius natten over. På den næste dag, stribe dem ud igen på en chloramphenicol plade og inkubere ved 37 grader Celsius natten over. Kolonierne, der vokser på kloramphenicolplader, indeholder forkert sammensatte plasmider.Når den mellemliggende vektor er blevet samlet, skal du fortsætte med at samle transskriberingsenhederne. Denne firedelte samling indeholder den mellemliggende vektor, en promotor, en CDS og determinator. Rense plasmider, registrere deres koncentrationer, og fortynd hver plasmid til 20 femtomoles af DNA pr mikroliter.Efter at have udført kloningsreaktionen skal hele kloningsreaktionen omdannes til de kompetente CELLER DH5 alpha eller tilsvarende E.coli og plade dem på LBN carbenicillin. Derefter inkubere pladen ved 37 grader Celsius natten over. Efter 16 til 18 timer skal du tage pladen ud af inkubatoren og holde den ved fire grader Celsius i cirka fem timer for at lade sfGFP modne.Brug en UV eller en blå lys transilluminator til at identificere de ikke-fluorescerende hvide kolonier, som indeholder de potentielt korrekte transskription enheder. Saml en mellemliggende vektor til multigenplasmiderne som beskrevet i tekstmanuskriptet. Derefter omdanne hele kloning reaktion blandes i DH5 alfaceller og plade dem på lb med 50 mikrogram per milliliter kanamycin.Inkuber pladen ved 37 grader Celsius natten over. Udfør rød og grøn farvebaseret screening, derefter streak og vokse de grønne kolonier på en lb kanamycin plade til at screene for misassemblies som tidligere demonstreret. Derefter samles multigenplasmidet ved at oprette en kloningsreaktion som beskrevet i tekstmanuskriptet.Transformer hele kloning reaktion blandes i DH5 alfaceller og plade dem på lb kanamycin. Inkuber pladen ved 37 grader Celsius natten over. Udfør derefter den grønne og hvide screening som tidligere beskrevet.Denne protokol blev brugt til at konstruere en integrativ multi-gen plasmid for at forstyrre ADE2 locus. Fire repliktive og en integrativ multi-gen plasmider blev samlet. Forholdet mellem potentielt korrekte kolonier for den mellemliggende vektor kloning var 1,83%, når den mellemliggende plasmid blev klonet, succesraten for at samle multi-gen plasmider fra mellemliggende var 93,77%Det ubetydelige antal positive hvide kolonier viser en suboptimal samling af multi-gen plasmider.Efter at omdanne til gær, kolonier producerer beta-caroten og lycopen voksede på dag tre. Fire kolonier fra hver plade blev stribet ud på friske plader og dyrket i yderligere to dage. Carotenoider blev udvundet og kvantificeret af UV-Vis spektrofotometri.BTS1/ERG20 fører til 35 gange højere produktion af beta-caroten sammenlignet med belastningen med ERG20 alene. På samme måde er produktionen af lycopen ca. 16,5 gange højere i belastningen med BTS1/ERG20 sammenlignet med ERG20 alene. Multigenintegrerende plasmid blev brugt til afbrydelse af ADE2-locus, enten med et gRNA og ingen hjælper-DNA eller med gRNA og et multigenintegrerende plasmid som hjælper-DNA.Efter tre til fire dage blev røde kolonier observeret på YPD-pladen med Nourseothricin, hvilket indikerer, at ADE2 var blevet forstyrret med succes. Mens du forsøger denne metode, er det vigtigste at huske at måle DNA-koncentrationerne nøjagtigt og pipette omhyggeligt, mens du opretter denne reaktionsblanding. Denne teknik gør det muligt for forskere inden for Gær Metabolic Engineering at undersøge et stort antal gener og initiativtagere til maksimeret produktudbytte.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

ECM Protein Nanofibers and Nanostructures Engineered Using Surface-initiated Assembly

ECM Protein Nanofibers og nanostrukturer Engineered Brug Surface-initierede Assembly

The extracellular matrix (ECM) in tissues is synthesized and assembled by cells to form a 3D fibrillar, protein network with tightly regulated fiber ...

Viability of Bioprinted Cellular Constructs Using a Three Dispenser Cartesian Printer

Levedygtighed Bioprinted Cellular Konstruktioner Ved hjælp af en tre Dispenser kartesiske Printer

Tissue engineering has centralized its focus on the construction of replacements for non-functional or damaged tissue. The utilization of ...

Construction of Modular Hydrogel Sheets for Micropatterned Macro-scaled 3D Cellular Architecture

Konstruktion af Modular Hydrogel Leverandørbrugsanvisning på mikromønstrede Macro-skaleret 3D Cellular Arkitektur

Hydrogels can be patterned at the micro-scale using microfluidic or micropatterning technologies to provide an in vivo-like three-dimensional (3D) tissue ...

Bioprinting Cellularized Constructs Using a Tissue-specific Hydrogel Bioink

Bioprinting Cellularized Konstruerer Ved hjælp af en Tissue-specifik Hydrogel Bioink

Bioprinting has emerged as a versatile biofabrication approach for creating tissue engineered organ constructs. These constructs have potential use as ...

Layered Alginate Constructs: A Platform for Co-culture of Heterogeneous Cell Populations

Lagdelte alginat konstruktioner: En platform for Co-kultur af Heterogene Cell populationer

Many load bearing tissues possess structurally and functionally distinct regions, typically accompanied by different cell phenotypes with differential ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning og Samling af 3D mikrokar

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

Automatiseret robot flydende håndtering forsamling af modulære DNA enheder

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Treatment of Ligament Constructs with Exercise-conditioned Serum: A Translational Tissue Engineering Model

Behandling af ligamentkonstruktioner med træningskonditioneret serum: en translational tissue engineering model

In vitro experiments are essential to understand biological mechanisms; however, the gap between monolayer tissue culture and human physiology is large, ...

Production of Genetically Engineered Golden Syrian Hamsters by Pronuclear Injection of the CRISPR/Cas9 Complex

Produktion af gensplejsede gyldne syriske hamstere af Pronuclear injektion af CRISPR/Cas9-komplekset

The pronuclear (PN) injection technique was first established in mice to introduce foreign genetic materials into the pronuclei of one-cell stage embryos. ...

Rapid, Scalable Assembly and Loading of Bioactive Proteins and Immunostimulants into Diverse Synthetic Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Hurtig og skalerbar forsamling og læsning af bioaktive proteiner og immunostimulanter i forskellige syntetiske Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Nanomaterials present a wide range of options to customize the controlled delivery of single and combined molecular payloads for therapeutic and imaging ...