Name: rapid assembly of multi-gene constructs using modular golden gate cloning
Uploaded: 2021-02-05T13:30:00
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이 작품은 뉴욕 주립 대학의 연구 재단 (상 #: 71272)과 버팔로 대학의 영향 상 (상 #: 000077)에 의해 지원되었다.

참고: 이 도구 키트에서 제공되는 계층 복제 프로토콜은 세 가지 주요 단계로 나눌 수 있습니다: 1. 부품 플라스미드 복제; 2. 복제 전사 단위 (투스); 3. 복제 다중 유전자 플라스미드(그림 1). 이 프로토콜은 프라이머 설계에서 시작하여 복제된 다중 유전자 플라스미드의 응용으로 끝납니다.
1. 부품 플라스미드 (pYTK001)를 복제하기위한 프라이머 디자인 :
<...

Lee et al.에 의해 개발된 MoClo 기반 복제 키트는 효모 게놈내로의 복제 또는 통합을 위해 1~5개의 전사 단위를 다중 유전자 플라스미드로 빠르게 조립할 수 있는 우수한 자원을 제공한다. 이 키트의 사용은 효모에서 여러 유전자를 표현하기 위해 자주 존재하는 시간이 많이 소요되는 복제 병목 현상을 제거합니다.
우리는 T4 DNA 리구아제와 골든 게이트 복제의 소화 / 결찰 주기에 ?...

합성 생물학은 제약, 농업 및 화학 산업에 유용한 새로운 기능으로 생물학적 시스템을 설계하는 것을 목표로합니다. 높은 처리량 방식으로 많은 수의 DNA 단편을 조립하는 것은 합성 생물학의 기초 기술입니다. 이러한 복잡한 과정은 복잡성이 감소하여 여러 단계로 분해 될 수 있으며, 기본 공학과학1,2에서빌린 개념. 합성 생물학에서 DNA 단편은 일반적으로 기능에 기초하여 계층적으로 조립됩니다: (i) 부품 수준: "부품"은 프로모터, 코딩 서열, 터미네이터, 복제의 기원과 같은 특정 기능을 가진 DNA 단편을 지칭한다. (ii) 전사 단위 (TU) 수준: TU는 프로모터, 코딩 서열 및 단일 유전자를 전사할 수 있는 종점으로 구성된다. (iii) 다중 유전자 수준: 다중 유전자 플라스미드는 전체 대사 경로로 자주 구성된 다중 투구를 함유하고 있습니다. BioBrick 커뮤니티가 개척한 이 계층적 조립은 합성 생물학3에서대형 DN 세트의 조립을 위한 기본 개념입니다.
지난 10년 동안4,5,6,7,골든 게이트 복제 기술은 계층적 DNA 어셈블리2를현저히 촉진했다. 깁슨 복제8,결찰-독립 복제(SLIC)9,우라실 절제 기반 복제(USER)10,리구아 사이클링 반응(LCR)11,생체 내 재조합(DNA 어셈블러)12,13등 다른 다중 부품 복제 방법도 지금까지 개발되었다. 그러나 골든 게이트 복제는 유전자 특정 서열과 독립적이기 때문에 이상적인 DNA 조립 방법이므로 흉터가 없고 방향성 및 모듈식 조립을 한 냄비 반응에서 허용합니다. 골든 게이트 복제는 비 palindromic 서열을 인식하는 유형 IIS 제한 효소를 활용하여 인식 부위2외부에서 비틀거리는 오버행을 만듭니다. 그런 다음 리거제는 어닐링된 DNA 단편에 합류하여 다중 부분 조립을 얻습니다. 모듈형 복제(MoClo) 시스템에 이 복제 전략을 적용하면 올바르게 조립된 구조4를포함하는 90% 이상의 변압제를 통해 최대 10개의 DNA 단편을 조립할 수 있게 되었다.
MoClo 시스템은 합성 생물학의 설계 구축 테스트 주기를 가속화한 엄청난 이점을 제공합니다. 첫째, 교환 가능한 부품은 결합 복제를 가능하게 하여 큰 파라미터 공간을 빠르게 테스트할 수 있습니다. 예를 들면, 신진 대사 통로를 최적화하는 것은 일반적으로 통로 플럭스의 균형을 맞추기 위하여 각 유전자를 위한 많은 프로모터를 통해 순환을 요구합니다. MoClo 시스템은 이러한 까다로운 복제 작업을 쉽게 처리할 수 있습니다. 둘째, 하나는 부품 플라스미드를 서열화할 필요가 있지만 전형적으로TU 또는 다중 유전자 플라스미드가 아닙니다. 대부분의 경우, 콜로니 PCR 또는 제한 소화에 의한 스크리닝은 TU 및 다중 유전자 플라스미드 수준에서 검증하기에 충분하다. 이는 플라스미드 부분을 복제하는 것이 돌연변이를 자주 도입하는 PCR을 필요로 하는 유일한 단계이기 때문입니다. 셋째, MoClo 시스템은 다중 유전자 복합 대사 경로를 구축하는 데 이상적입니다. 마지막으로, 보편적 인 오버행으로 인해 부품 플라스미드를 재사용하고 전체 생물 공학 커뮤니티와 공유 할 수 있습니다. 현재, MoClo 키트는 식물14,15,5,16,17,곰팡이6,18,19,20,21,22,박테리아7,23,24,25,26,27및 동물28,29에사용할 수 있습니다. 멀티 킹덤 MoClo 플랫폼도 최근에 도입되었습니다30.
Saccharomyces cerevisiae를위해, Lee외. 6효모 합성 생물학 커뮤니티를 위한 우수한 자원인 다재다능한 MoClo 툴킷을 개발했습니다. 이 키트는 편리한 96웰 형식으로 제공되며 다양한 유형의 상호 교환 가능한 DNA 부품을 잘 특징적인 프로모터, 형광 단백질, 터미네이터, 펩타이드 태그, 선택 마커, 복제 원산지 및 게놈 편집 도구를 정의합니다. 이 툴킷은 최대 5개의 전사 단위를 다중 유전자 플라스미드로 조립할 수 있게 한다. 이러한 특징은 부분 또는 전체 경로가 표적 화학 물질을 생산하기 위해 과도하게 표현되는 효모 신진 대사 공학에 유용합니다. 이 키트를 사용하여 연구자들은 제라니올, 리날로올31,페니실린32,무코닉산33,인디고34,베타레인35 의 효모 의 생산을 최적화했다.
여기서 우리는 상피 또는 게놈 발현을 위한 다중 유전자 통로를 생성하기 위하여 MoClo 툴킷의 사용을 안내하는 상세한 단계별 프로토콜을 제공합니다. 이 키트의 광범위한 사용을 통해, 우리는 DNA 농도의 정확한 측정이 골든 게이트 반응에서 각 부분의 동등성 분포를 보장하는 열쇠임을 발견했다. 우리는 또한 T7 DNA 리개세 위에 T4 DNA 리구아제추천36의 더큰 숫자와 더 잘 작동하기 때문에. 마지막으로, BsmBI 및 BsaI의 내부 인식 사이트는 조립 전에 제거하거나 길들여야 합니다. 또는 여러 내부 사이트를 제거하고 동시 코돈 최적화를 달성하기 위해 부품을 합성하는 것을 고려할 수 있습니다. 우리는 S. cerevisiae에 있는 β 카로틴 및 리코펜 생산을 위한 5 유전자 통로를 표현하여 이 공구키트를 사용하는 방법을 보여줍니다. 우리는 또한이 키트에서 게놈 편집 도구를 사용하여 ADE2 궤적을 노크하는 방법을 보여줍니다. 이러한 색상 기반 실험은 쉽게 시각화할 수 있는 선택되었습니다. 우리는 또한 융합 단백질을 생성하고 골든 게이트 복제를 사용하여 아미노산 돌연변이를 만드는 방법을 보여줍니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mm Glass beads</td>
			<td>RPI research products</td>
			<td>9831</td>
			<td>For lysing yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>BD &#38; Company</td>
			<td>214010</td>
			<td>Component of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Peptone</td>
			<td>BD&#38; Company</td>
			<td>211677</td>
			<td>Component of the yeast extract peptone dextrose medium (YPD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BsaI-HFv2</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3733S</td>
			<td>a highly efficient version of BsaI restriction enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>4800-94-6</td>
			<td>Antibiotic for screening at the transcription unit level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>56-75-7</td>
			<td>Antibiotic for screening at the entry vector level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSM-His</td>
			<td>Sunrise Sciences</td>
			<td>1006-010</td>
			<td>Amino acid supplement of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Carbon source of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Yeast Nitrogen Base w/o Amino Acids</td>
			<td>BD &#38; Company</td>
			<td>291940</td>
			<td>Nitrogen source of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTP mix</td>
			<td>Promega</td>
			<td>U1515</td>
			<td>dNTPs for PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esp3I</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0734S</td>
			<td>a highly efficient isoschizomer of BsmBI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen-EZ Yeast Trasformation II Kit</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>T2001</td>
			<td>For yeast transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexanes</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>H302-1</td>
			<td>For carotenoid extraction from yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>25389-94-0</td>
			<td>Antibiotic for screening at the multigene plasmid level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar, Miller</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1425-2</td>
			<td>Lysogenic agar medium for E. coli culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Miller</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1426-2</td>
			<td>Lysogenic liquid medium for E. coli culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lycopene</td>
			<td>Cayman chemicals</td>
			<td>NC1142173</td>
			<td>For lycopene quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoClo YTK</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>1000000061</td>
			<td>Depositing Lab: John Deuber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monarch Plasmid Miniprep Kit</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>T1010L</td>
			<td>For plasmid purification from E.coli</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND2000c</td>
			<td>For measuring accurate DNA concentrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NotI-HF</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3189S</td>
			<td>Restriction enzyme for integrative multigene plasmid linearization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nourseothricin Sulphate</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>N-500-100</td>
			<td>Antibiotic Selection marker for the pCAS plasmid used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion HF reaction Buffer (5X)</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B0518S</td>
			<td>Buffer for PCR using Phusion polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High Fidelity DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0530S</td>
			<td>High fidelity polymerase for all the PCR reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLM494</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>100539</td>
			<td>Plasmid used to amplify crtI, crtYB and crtE used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quartz Cuvette</td>
			<td>Thermo Electron</td>
			<td>10050801</td>
			<td>For quantifing carotenoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202S</td>
			<td>Ligase for Golden Gate cloning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermocycler</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1851148</td>
			<td>For performing all the PCR and cloning reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Homogenizer</td>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Model: BBX24</td>
			<td>For homogenization of yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Genesys 150</td>
			<td>For quantifing carotenoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1422-500</td>
			<td>Component of the yeast extract peptone dextrose medium (YPD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-carotene</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>AAH6010603</td>
			<td>For &#946;-carotene quantification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid assembly of multi-gene constructs using modular golden gate cloning

골든 게이트 복제 방법은 사용자 정의 배열에서 여러 유전자의 신속한 조립을 가능하게합니다. 그것은 그들의 인식 사이트 외부 잘라 하 고 짧은 오버행을 만드는 유형 IIS 제한 효소를 활용. 이 모듈식 복제(MoClo) 시스템은 프로모터, 코딩 서열(CDS) 및 종착기와 같은 다른 DNA 부품이 먼저 엔트리 벡터로 복제되는 계층적 워크플로우를 사용합니다. 그런 다음 여러 항목 벡터가 전사 단위로 어셈블합니다. 몇몇 전사 단위는 그 때 다중 유전자 플라스미드로 연결합니다. 골든 게이트 복제 전략은 한 냄비 반응에서 흉터가없고 방향성 및 모듈식 조립을 허용하기 때문에 엄청난 이점입니다. 계층적 워크플로우를 통해 전형적으로 엔트리 벡터를 넘어 시퀀싱할 필요 없이 다양한 다중 유전자 구조의 촉진 복제를 가능하게 합니다. 형광 단백질 중퇴를 사용하면 쉽게 시각적 으로 선별 할 수 있습니다. 이 작업은 효모 모듈식 복제(MoClo) 키트를 사용하여 다중 유전자 플라스미드를 조립하기 위한 상세한 단계별 프로토콜을 제공합니다. 우리는 다중 유전자 플라스미드 조립의 최적 및 최적 결과를 보여주고 식민지에 대한 검열을위한 가이드를 제공합니다. 이 복제 전략은 효모 대사 공학 및 다중 유전자 플라스미드 복제가 필요한 다른 상황에 매우 적용 가능합니다.

여기서 β 카로틴(yellow) 및 리코펜(red) 생산을 위한 4개의 복제다유전자 플라스미드의 결과. ADE2 궤적을 방해하기위한 하나의 통합 다중 유전자 플라스미드가 건설되었으며, 그 중 식민지는 빨간색입니다.
CDS를 엔트리 벡터로 복제(pYTK001) ERG20은 설명된 바와 같이 효모 게놈 및 3개의 카로티노이드 유?...

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Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning

이 프로토콜의 목표는 골든 게이트 복제를 기반으로 모듈형 복제 시스템을 사용하여 다중 유전자 구조를 조립하기위한 상세한 단계별 가이드를 제공하는 것입니다. 또한 우리의 경험을 바탕으로 최적의 어셈블리를 보장하기 위한 중요한 단계에 대한 권장 사항을 제공합니다.

모듈형 골든 게이트 복제를 사용하여 다중 유전자 구조물의 신속한 조립

The Golden Gate cloning method enables the rapid assembly of multiple genes in any user-defined arrangement. It utilizes type IIS restriction enzymes that ...

이것은 효모 MoClo 키트를 사용하여 다중 유전자 플라스미드를 조립하기위한 상세한 프로토콜입니다. 이 방법은 다양한 다중 유전자 급우의 편리한 복제를 가능하게합니다. 그것은 관련 부품의 큰 라이브러리를 생성하기에 이상적입니다.골든 게이트 반응 믹스를 설정하여 시작합니다. 각 PCR 제품 및 엔트리 벡터, 10X T4 Ligase 버퍼1개, Esp3I 0.5 마이크로리터, T4 리게아제 0.5 마이크로리터의 펨토몰 20개를 추가합니다. 이중 증류수를 추가하여 총 부피를 10 마이크로리터로 가져옵니다.그런 다음 복제 반응을 실행합니다. 전체 반응 믹스를 열 충격에 의해 DH5 알파 균주 또는 동등한 대장균화학적으로 유능한 세포로 변환합니다. 밀리리터 클로람페니콜당 35 마이크로그램으로 셀을 lb 플레이트에 퍼뜨리습니다.그런 다음 하룻밤 사이에 섭씨 37도에서 접시를 배양합니다. 16~18시간 후, 배양기에서 플레이트를 꺼내 서퍼폴더 녹색 형광 단백질 또는 sfGFP가 더욱 강렬한 녹색 색을 위해 개발할 수 있도록 약 5시간 동안 섭씨 4도에 둡니다. 접시를 검사하려면 울트라 바이올렛 또는 블루 라이트 트랜일루미나이터에 놓습니다.식민지를 포함하는 sfGFP는 UV 빛 의 밑에 형광할 것입니다. 녹색 식민지는 절단되지 않은 부분을 포함하기 때문에 부정적입니다. 흰색 식민지는 긍정적 일 가능성이 높습니다.복제는 30~ 100% 흰색 식민지가 있는 경우에 성공적입니다. 왼쪽 커넥터, sfGFP 드롭아웃, 오른쪽 커넥터, 효모 선택 마커, 복제의 효모 기원 및 mRFP1, 대장균 기원 및 암피실린 내성 유전자를 가진 중간 벡터를 조립한다. 텍스트 원고에 설명된 대로 복제 반응을 수행합니다.전체 반응 믹스를 DH5 알파 스트레인으로 변환한 다음 밀리리터 카베니실린 또는 암피실린당 50 마이크로그램으로 셀을 lb 플레이트에 전파합니다. 하룻밤 사이에 섭씨 37도에서 배양하십시오. 16~18시간 후에는 배양기에서 접시를 꺼낸다.접시에는 옅은 빨간색과 옅은 녹색 식민지가 모두 포함됩니다. mRFP1및 sfGFP가 성숙하게 하기 위해 약 5시간 동안 섭씨 4도에 보관하십시오. UV 또는 청색광 트랜실루미네이터를 사용하여 잠재적으로 올바른 중간 벡터를 포함하는 녹색 식민지를 식별합니다.lb 카베니실린 접시에 녹색 식민지를 밖으로 줄이며 하룻밤 섭씨 37도에서 배양. 다음 날, 클로람페니콜 접시에 다시 그들을 밖으로 줄이며 하룻밤 섭씨 37도에서 배양. 클로람페니콜 플레이트에서 자라는 식민지에는 잘못 조립된 플라스미드가 들어 있습니다.중간 벡터가 성공적으로 조립되면 전사 단위를 조립합니다. 이 4피스 어셈블리에는 중간 벡터, 프로모터, CDS 및 결정자가 포함되어 있습니다. 플라스미드를 정화하고, 농도를 기록하고, 각 플라스미드를 마이크로리터당 20개의 펨토몰로 희석시다.복제 반응을 수행한 후, 전체 복제 반응 믹스를 DH5 알파 또는 동등한 E.coli 유능한 세포로 변환하고 LBN 카베니실린에 판화한다. 그런 다음 하룻밤 사이에 섭씨 37도에서 접시를 배양합니다. 16~18시간 후에는 배양기에서 접시를 꺼내 서포트FP가 성숙하게 하기 위해 약 5시간 동안 섭씨 4도에서 보관하십시오.UV 또는 청색광 트랜실루미네이터를 사용하여 잠재적으로 정확한 전사 단위를 포함하는 비형광 백색 식민지를 식별합니다. 텍스트 원고에 설명된 바와 같이 다중 유전자 플라스미드에 대한 중간 벡터를 조립한다. 그런 다음 전체 복제 반응 믹스를 DH5 알파 세포로 변환하고 밀리리터 카나마이신 당 50 마이크로 그램으로 lb에 접시를 놓습니다.하룻밤 사이에 섭씨 37도에서 접시를 배양하십시오. 빨간색과 녹색 색상 기반 스크리닝을 수행한 다음, 이전에 설명한 대로 잘못된 어셈블리를 검사하기 위해 lb kanamycin 플레이트에 녹색 식민지를 줄이며 성장시다. 다음으로, 텍스트 원고에 설명된 대로 복제 반응을 설정하여 다중 유전자 플라스미드를 조립한다.전체 복제 반응 믹스를 DH5 알파 셀로 변환하고 lb kanamycin에 접시를 놓습니다. 하룻밤 사이에 섭씨 37도에서 접시를 배양하십시오. 그런 다음 이전에 설명한 대로 녹색 및 흰색 스크리닝을 수행합니다.이 프로토콜은 ADE2 궤적을 방해하기 위한 하나의 통합다중 유전자 플라스미드를 구성하는 데 사용되었습니다. 4개의 복제 및 1개의 통합다중 유전자 플라스미드가 조립되었다. 중간 벡터 복제에 대한 잠재적으로 정확한 콜로니의 비율은 중간 플라스미드가 복제되면 1.83%였으며, 중간으로부터 다중 유전자 플라스미드를 조립하는 성공률은 93.77%였으며, 양성 백색 식민지의 무시할 수 있는 수는 다유전자 플라스미드의 최적 조립을 나타낸다.효모로 변신한 후, 베타 카로틴과 리코펜을 생산하는 식민지는 셋째 날에 성장했습니다. 각 접시에서 네 개의 식민지는 신선한 접시에 줄지어 이틀 더 성장했다. 카로티노이드는 UV-Vis 분광광법에 의해 추출및 정량화되었다.BTS1/ERG20은 ERG20만으로 변형되는 것에 비해 베타 카로틴의 35배 높은 생산으로 이어집니다. 마찬가지로 리코펜의 생산은 ERG20에 비해 BTS1/ERG20의 균주에서 약 16.5배 더 높다. 다중 유전자 통합 플라스미드는 GRNA와 도우미 DNA가 없거나 gRNA및 다중 유전자 통합 플라스미드를 도우미 DNA로 사용하여 ADE2 궤적의 중단을 위해 사용되었습니다.3~4일 후, Nourseothricin과 YPD 플레이트에서 붉은 식민지가 관찰되어 ADE2가 성공적으로 중단되었음을 나타냅니다. 이 방법을 시도하는 동안 기억해야 할 가장 중요한 것은 이 반응 믹스를 설정하는 동안 DNA 농도를 정확하게 측정하고 조심스럽게 파이펫하는 것입니다. 이 기술은 효모 신진 대사 공학 분야의 연구원들이 제품 수율을 극대화하기 위해 많은 수의 유전자와 프로모터를 조사할 수 있게 합니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

ECM Protein Nanofibers and Nanostructures Engineered Using Surface-initiated Assembly

ECM 단백질 나노 섬유 및 나노 구조 엔지니어링 사용하여 표면 시작 회의

The extracellular matrix (ECM) in tissues is synthesized and assembled by cells to form a 3D fibrillar, protein network with tightly regulated fiber ...

연구

생체공학

Viability of Bioprinted Cellular Constructs Using a Three Dispenser Cartesian Printer

세 디스펜서 데카르트 프린터 사용 Bioprinted 세포를 구축의 생존

Tissue engineering has centralized its focus on the construction of replacements for non-functional or damaged tissue. The utilization of ...

Construction of Modular Hydrogel Sheets for Micropatterned Macro-scaled 3D Cellular Architecture

미세 패턴 매크로 스케일 3D 셀룰러 아키텍처 모듈 형 하이드로 겔 시트의 건설

Hydrogels can be patterned at the micro-scale using microfluidic or micropatterning technologies to provide an in vivo-like three-dimensional (3D) tissue ...

Bioprinting Cellularized Constructs Using a Tissue-specific Hydrogel Bioink

Bioprinting Cellularized는 조직 고유의 하이드로 겔 Bioink를 사용하여 구축

Bioprinting has emerged as a versatile biofabrication approach for creating tissue engineered organ constructs. These constructs have potential use as ...

Layered Alginate Constructs: A Platform for Co-culture of Heterogeneous Cell Populations

계층화 된 알긴산를 구축 : 이기종 세포 인구의 공동 문화를위한 플랫폼

Many load bearing tissues possess structurally and functionally distinct regions, typically accompanied by different cell phenotypes with differential ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

미세화 및 3D 미세 혈관의 조립

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

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