Name: rapid assembly of multi-gene constructs using modular golden gate cloning
Uploaded: 2021-02-05T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av Research Foundation for State University of New York (Pris #: 71272) og IMPACT Award of University at Buffalo (Pris #: 000077).

MERK: Den hierarkiske kloningsprotokollen som tilbys i dette verktøysettet, kan deles inn i tre hovedtrinn: 1. Kloning av delplasmider; 2. Kloning transkripsjon enheter (TUer); 3. Kloning av multigenplasmider (Figur 1). Denne protokollen starter fra primer design og slutter med anvendelser av klonet multi-gen plasmid.
1. Primer design for kloning av delen plasmid (pYTK001):
<ol><li>Design fremre og omvendte primere som inneholder flanke nukleotider TTT på 5 ' ...

Det MoClo-baserte kloningssettet utviklet av Lee et al. gir en utmerket ressurs for rask montering av en til fem transkripsjonsenheter i en multigenplasmid enten for replikering eller integrasjon i gjærgenomet. Bruken av dette settet eliminerer den tidkrevende kloning flaskehalsen som ofte eksisterer for å uttrykke flere gener i gjær.
Vi testet fem forskjellige forhold for fordøyelses-/ligasjonssyklusene til Golden Gate-kloning med T4 DNA-ligaer. Vi fant at 30 sykluser av fordøyelsen ved ...

Syntetisk biologi har som mål å konstruere biologiske systemer med nye funksjoner som er nyttige for farmasøytisk, landbruks- og kjemisk industri. Montering av et stort antall DNA-fragmenter på en høy gjennomstrømningsmåte er en grunnleggende teknologi i syntetisk biologi. En slik komplisert prosess kan brytes ned i flere nivåer med synkende kompleksitet, et konsept lånt fra grunnleggende ingeniørvitenskap1,2. I syntetisk biologi samler DNA-fragmenter vanligvis hierarkisk basert på funksjonalitet: (i) Delnivå: "deler" refererer til DNA-fragmenter med en bestemt funksjon, for eksempel en promotor, en kodingssekvens, en terminator, en opprinnelse av replikering; (ii) Transkripsjonsenheter (TU) nivå: en TU består av en promotor, en kodingssekvens og en terminator som er i stand til å transkribere et enkelt gen; (iii) Multigennivå: en multigenplasmid inneholder flere TUer som ofte består av en hel metabolsk vei. Denne hierarkiske samlingen som er banebrytende av BioBrick-samfunnet er det grunnleggende konseptet for montering av store sett med DNAer i syntetisk biologi3.
I løpet av det siste tiåret4,5,6,7, golden gate kloning teknikken har betydelig tilrettelagt hierarkisk DNA-montering2. Mange andre flerdelte kloningsmetoder, for eksempel Gibson kloning8, ligation-uavhengig kloning (SLIC)9, uracil excision-basert kloning (USER)10, ligase sykkelreaksjonen (LCR)11, og in vivo rekombinasjon (DNA Assembler)12,13, er også utviklet så langt. Men Golden Gate kloning er en ideell DNA-monteringsmetode fordi den er uavhengig av genspesifikke sekvenser, noe som tillater arrfri, retningsbestemt og modulær montering i en en-pot reaksjon. Golden Gate-kloning drar nytte av type IIS-begrensningsenzymer som gjenkjenner en ikke-palindrom sekvens for å skape forskjøvede overheng utenfor anerkjennelsesstedet2. En ligase blir deretter med de glødede DNA-fragmentene for å få en flerdelt montering. Ved å bruke denne kloningsstrategien på det modulære kloningssystemet (MoClo) har det mulig å montere opptil 10 DNA-fragmenter med over 90% transformanter screenet som inneholder den riktig monterte konstruksjonen4.
MoClo-systemet tilbyr enorme fordeler som har akselerert design-build-test-syklusen til syntetisk biologi. For det første muliggjør de utskiftbare delene kombinatorisk kloning for å teste et stort rom med parametere raskt. For eksempel krever optimalisering av en metabolsk vei vanligvis å sykle gjennom mange promotører for hvert gen for å balansere banestrømmen. MoClo-systemet kan enkelt håndtere slike krevende kloningsoppgaver. For det andre må man sekvensere delen plasmid, men vanligvis ikke TU eller multi-genplasmider. I de fleste tilfeller er screening av koloni PCR eller begrensning fordøyelse tilstrekkelig for verifisering på TU og multi-gen plasmid nivå. Dette er fordi kloning av delen plasmid er det eneste trinnet som krever PCR, som ofte introduserer mutasjoner. For det tredje er MoClo-systemet ideelt for å bygge multigenkomplekse metabolske veier. Til slutt, på grunn av de universelle overhengene, kan delen plasmider gjenbrukes og deles med hele bioingeniørsamfunnet. For tiden er MoClo-sett tilgjengelige for planter14,15,5,16,17, sopp6,18,19,20,21,22, bakterier7,23,24,25,26,27og dyr28,29. En Multi-Kingdom MoClo-plattform har også blitt introdusert nylig30.
For Saccharomyces cerevisiaehar Lee et al.6 utviklet et allsidig MoClo-verktøysett, en utmerket ressurs for gjærsyntetisk biologisamfunn. Dette settet kommer i et praktisk 96-brønns format og definerer åtte typer utskiftbare DNA-deler med en mangfoldig samling av godt karakteriserte promotorer, fluorescerende proteiner, terminatorer, peptidkoder, utvalgsmarkører, opprinnelsen til replikasjon og genomredigeringsverktøy. Dette verktøysettet gjør det mulig å montere opptil fem transkripsjonsenheter i en multigenplasmid. Disse funksjonene er verdifulle for gjær metabolsk engineering, der delvise eller hele veier er over-uttrykt for å produsere målrettede kjemikalier. Ved hjelp av dette settet har forskere optimalisert produksjonen av geraniol, linalool31, penicillin32, mukonsyre33, indigo34og betalain35 i gjær.
Her tilbyr vi en detaljert, trinnvis protokoll for å veilede bruken av MoClo-verktøysettet for å generere flergenbaner for enten episomalt eller genomisk uttrykk. Gjennom utstrakt bruk av dette settet har vi funnet ut at nøyaktig måling av DNA-konsentrasjoner er nøkkelen til å sikre likeverdig fordeling av hver del i Golden Gate-reaksjonen. Vi anbefaler også T4 DNA-ligaer over T7 DNA-ligaene fordi førstnevnte fungerer bedre med større antall overheng36. Til slutt må eventuelle interne anerkjennelsessteder for BsmBI og BsaI fjernes eller tammes før montering. Alternativt kan man vurdere å syntetisere deler for å fjerne flere interne nettsteder og for å oppnå samtidig kodonoptimalisering. Vi demonstrerer hvordan du bruker dette verktøysettet ved å uttrykke en fem-gens vei for β-karoten- og lykopenproduksjon i S. cerevisiae. Vi viser videre hvordan du slår ut ADE2-locus ved hjelp av genomredigeringsverktøyene fra dette settet. Disse fargebaserte eksperimentene ble valgt for enkel visualisering. Vi demonstrerer også hvordan man genererer fusjonsproteiner og skaper aminosyremutasjoner ved hjelp av Golden Gate-kloning.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mm Glass beads</td>
			<td>RPI research products</td>
			<td>9831</td>
			<td>For lysing yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>BD &#38; Company</td>
			<td>214010</td>
			<td>Component of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Peptone</td>
			<td>BD&#38; Company</td>
			<td>211677</td>
			<td>Component of the yeast extract peptone dextrose medium (YPD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BsaI-HFv2</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3733S</td>
			<td>a highly efficient version of BsaI restriction enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>4800-94-6</td>
			<td>Antibiotic for screening at the transcription unit level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>56-75-7</td>
			<td>Antibiotic for screening at the entry vector level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSM-His</td>
			<td>Sunrise Sciences</td>
			<td>1006-010</td>
			<td>Amino acid supplement of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Carbon source of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Yeast Nitrogen Base w/o Amino Acids</td>
			<td>BD &#38; Company</td>
			<td>291940</td>
			<td>Nitrogen source of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTP mix</td>
			<td>Promega</td>
			<td>U1515</td>
			<td>dNTPs for PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esp3I</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0734S</td>
			<td>a highly efficient isoschizomer of BsmBI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen-EZ Yeast Trasformation II Kit</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>T2001</td>
			<td>For yeast transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexanes</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>H302-1</td>
			<td>For carotenoid extraction from yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>25389-94-0</td>
			<td>Antibiotic for screening at the multigene plasmid level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar, Miller</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1425-2</td>
			<td>Lysogenic agar medium for E. coli culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Miller</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1426-2</td>
			<td>Lysogenic liquid medium for E. coli culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lycopene</td>
			<td>Cayman chemicals</td>
			<td>NC1142173</td>
			<td>For lycopene quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoClo YTK</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>1000000061</td>
			<td>Depositing Lab: John Deuber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monarch Plasmid Miniprep Kit</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>T1010L</td>
			<td>For plasmid purification from E.coli</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND2000c</td>
			<td>For measuring accurate DNA concentrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NotI-HF</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3189S</td>
			<td>Restriction enzyme for integrative multigene plasmid linearization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nourseothricin Sulphate</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>N-500-100</td>
			<td>Antibiotic Selection marker for the pCAS plasmid used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion HF reaction Buffer (5X)</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B0518S</td>
			<td>Buffer for PCR using Phusion polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High Fidelity DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0530S</td>
			<td>High fidelity polymerase for all the PCR reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLM494</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>100539</td>
			<td>Plasmid used to amplify crtI, crtYB and crtE used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quartz Cuvette</td>
			<td>Thermo Electron</td>
			<td>10050801</td>
			<td>For quantifing carotenoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202S</td>
			<td>Ligase for Golden Gate cloning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermocycler</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1851148</td>
			<td>For performing all the PCR and cloning reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Homogenizer</td>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Model: BBX24</td>
			<td>For homogenization of yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Genesys 150</td>
			<td>For quantifing carotenoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1422-500</td>
			<td>Component of the yeast extract peptone dextrose medium (YPD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-carotene</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>AAH6010603</td>
			<td>For &#946;-carotene quantification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid assembly of multi-gene constructs using modular golden gate cloning

Golden Gate-kloningsmetoden muliggjør rask montering av flere gener i ethvert brukerdefinert arrangement. Den bruker type IIS-begrensningsenzymer som kutter utenfor deres anerkjennelsessteder og skaper et kort overheng. Dette modulære kloningssystemet (MoClo) bruker en hierarkisk arbeidsflyt der forskjellige DNA-deler, for eksempel promotorer, kodesekvenser (CDS) og terminatorer, først klones inn i en inngangsvektor. Flere inngangsvektorer samles deretter i transkripsjonsenheter. Flere transkripsjonsenheter kobles deretter til en multigenplasmid. Golden Gate-kloningsstrategien er av enorm fordel fordi den tillater arrfri, retningsmessig og modulær montering i en en-pott-reaksjon. Den hierarkiske arbeidsflyten muliggjør vanligvis facile-kloning av et stort utvalg av flergenkonstruksjoner uten behov for sekvensering utover inngangsvektorer. Bruken av fluorescerende proteinfrafall muliggjør enkel visuell screening. Dette arbeidet gir en detaljert, trinnvis protokoll for montering av multigenplasmider ved hjelp av gjær modulær kloning (MoClo) kit. Vi viser optimale og suboptimale resultater av multi-gen plasmid montering og gir en guide for screening for kolonier. Denne kloning strategien er svært anvendelig for gjær metabolsk engineering og andre situasjoner der multi-gen plasmid kloning er nødvendig.

Her resultatene av fire replikerende multi-gen plasmider for β-karoten (gul) og lykopen (rød) produksjon. En integrativ multi-gen plasmid for å forstyrre ADE2 locus ble konstruert, hvis kolonier er røde.
Kloning av CDS-er i inngangsvektoren (pYTK001) ERG20 ble forsterket fra gjærgenomet og de tre karotenoidgenene crtE, crtYB, crtI fra plasmid pLM494<sup class=...

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning at JoVE.com

Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning

Målet med denne protokollen er å gi en detaljert, trinnvis guide for montering av multigenkonstruksjoner ved hjelp av det modulære kloningssystemet basert på Golden Gate-kloning. Det gir også anbefalinger om kritiske skritt for å sikre optimal montering basert på våre erfaringer.

Rask montering av multigenkonstruksjoner ved hjelp av modulær golden gate-kloning

The Golden Gate cloning method enables the rapid assembly of multiple genes in any user-defined arrangement. It utilizes type IIS restriction enzymes that ...

Dette er en detaljert protokoll for montering av multigenplasmider ved hjelp av Gjær MoClo-settet. Denne metoden muliggjør praktisk kloning av en rekke klassekamerater med flere gen. Den er ideell for å generere et stort bibliotek med relaterte deler.Begynn med å sette opp Golden Gate reaksjonsblandingen. Tilsett 20 femtomoler av hvert PCR-produkt og inngangsvektoren, en mikroliter med 10X T4 Ligase-buffer, 0,5 mikroliter Esp3I og 0,5 mikroliter T4-ligase. Tilsett dobbelt destillert vann for å bringe det totale volumet til 10 mikroliter.Kjør deretter kloningsreaksjonen. Forvandle hele reaksjonsblandingen til DH5 alfastammen eller tilsvarende Escherichia coli kjemisk kompetente celler ved varmesjokk. Spred cellene på en lb plate med 35 mikrogram per milliliter kloramfenikol.Deretter inkuberer du platen ved 37 grader Celsius over natten. Etter 16 til 18 timer, ta platen ut av inkubatoren og la den stå på fire grader Celsius i omtrent fem timer for å la superfoldergrønn fluorescerende protein eller sfGFP utvikle seg for en mer intens grønn farge. For å screene platen, plasser den på en ultrafiolett eller blå lystransilluminator.SfGFP som inneholder kolonier vil fluoresce under UV-lyset. De grønne koloniene er negative fordi de inneholder den uklippede delen plasmid. De hvite koloniene er sannsynligvis positive.Kloningen er vellykket hvis det er 30 til 100% hvite kolonier. Sett sammen en mellomliggende vektor med venstre kontakt, sfGFP-frafallet, høyre kontakt, en gjærvalgmarkør, en gjæropprinnelse av replikasjon og delen plasmid med en mRFP1, en E.coli-opprinnelse og det ampicillinresistente genet. Utfør kloningsreaksjonen som beskrevet i tekstmanuskriptet.Forvandle hele reaksjonsblandingen til DH5 alfastammen og spred deretter cellene på en lb-plate med 50 mikrogram per milliliter carbenicillin eller ampicillin. Inkuber ved 37 grader Celsius over natten. Etter 16 til 18 timer, ta platen ut av inkubatoren.Platen vil inneholde både blekrøde og blekgrønne kolonier. Hold den på fire grader Celsius i omtrent fem timer for å la mRFP1 og sfGFP modnes. Bruk en UV- eller blålystransilluminator for å identifisere de grønne koloniene som inneholder den potensielt korrekte mellomvektoren.Strekk ut de grønne koloniene på en lb carbenicillin plate og inkuber på 37 grader Celsius over natten. Neste dag kan du strekke dem ut igjen på en kloramfenikolplate og inkubere ved 37 grader Celsius over natten. Koloniene som vokser på kloramfenikolplater inneholder feilmonterte plasmider.Når mellomvektoren er montert, fortsetter du med å montere transkripsjonsenhetene. Denne firedelte samlingen inneholder mellomvektoren, en promotor, en CDS og determinator. Rens plasmidene, registrer konsentrasjonene deres og fortynn hver plasmid til 20 femtomoler dna per mikroliter.Etter å ha utført kloningsreaksjonen, forvandle hele kloningsreaksjonsblandingen til DH5 alfa eller tilsvarende E.coli kompetente celler og plate dem på LBN carbenicillin. Deretter inkuberer du platen ved 37 grader Celsius over natten. Etter 16 til 18 timer, ta platen ut av inkubatoren og hold den på fire grader Celsius i omtrent fem timer for å la sfGFP modnes.Bruk en UV- eller blålystransilluminator for å identifisere de ikke-fluorescerende hvite koloniene som inneholder de potensielt korrekte transkripsjonsenhetene. Sett sammen en mellomvektor for multigenplasmidene som beskrevet i tekstmanuskriptet. Transformer deretter hele kloningsreaksjonen til DH5 alfaceller og plate dem på lb med 50 mikrogram per milliliter kanamycin.Inkuber platen ved 37 grader Celsius over natten. Utfør rød og grønn fargebasert screening, deretter strekke og vokse de grønne koloniene på en lb kanamycin plate til skjerm for misassemblies som tidligere demonstrert. Deretter setter du sammen multigenplasmidet ved å sette opp en kloningsreaksjon som beskrevet i tekstmanuskriptet.Forvandle hele kloningsreaksjonsblandingen til DH5 alfaceller og plate dem på lb kanamycin. Inkuber platen ved 37 grader Celsius over natten. Utfør deretter den grønne og hvite screeningen som tidligere beskrevet.Denne protokollen ble brukt til å konstruere en integrativ multigenplasmid for å forstyrre ADE2-locus. Fire replikerende og en integrativ multi-gen plasmider ble samlet. Forholdet mellom potensielt korrekte kolonier for mellomliggende vektorkloning var 1,83%Når mellomliggende plasmid ble klonet, var suksessraten for montering av multigenplasmider fra mellomliggende 93,77%Det ubetydelige antallet positive hvite kolonier viser en suboptimal montering av multigenplasmider.Etter å ha forvandlet seg til gjær, vokste kolonier som produserer betakaroten og lykopen på dag tre. Fire kolonier fra hver tallerken ble strødd ut på ferske tallerkener og vokst i to dager til. Karotenoidene ble ekstrahert og kvantifisert av UV-Vis spektrofotometri.BTS1/ERG20 fører til 35 ganger høyere produksjon av betakaroten sammenlignet med belastningen med ERG20 alene. På samme måte er produksjonen av lykopen ca. 16,5 ganger høyere i belastningen med BTS1/ERG20 sammenlignet med ERG20 alene. Multigenintegratorisk plasmid ble brukt til forstyrrelse av ADE2-locus, enten med et gRNA og ingen hjelper-DNA eller med gRNA og en multigenintegriv plasmid som hjelper-DNA.Etter tre til fire dager ble det observert røde kolonier på YPD-platen med Nourseothricin, noe som indikerer at ADE2 hadde blitt vellykket forstyrret. Mens du prøver denne metoden, er det viktigste å huske å måle DNA-konsentrasjonene nøyaktig og pipette nøye mens du setter opp denne reaksjonsblandingen. Denne teknikken gjør det mulig for forskere innen gjærmetabolteknikk å kartlegge et stort antall gener og promotorer for maksimert produktutbytte.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

ECM Protein Nanofibers and Nanostructures Engineered Using Surface-initiated Assembly

ECM Protein Nanofibers og nanostrukturer Engineered Bruke Surface-initiert Assembly

The extracellular matrix (ECM) in tissues is synthesized and assembled by cells to form a 3D fibrillar, protein network with tightly regulated fiber ...

Viability of Bioprinted Cellular Constructs Using a Three Dispenser Cartesian Printer

Levedyktighet Bioprinted Cellular konstruerer Ved hjelp av en tre Enser kartesisk Printer

Tissue engineering has centralized its focus on the construction of replacements for non-functional or damaged tissue. The utilization of ...

Construction of Modular Hydrogel Sheets for Micropatterned Macro-scaled 3D Cellular Architecture

Bygging av Modular Hydrogel blad for Micropatterned Macro-skalert 3D Cellular Arkitektur

Hydrogels can be patterned at the micro-scale using microfluidic or micropatterning technologies to provide an in vivo-like three-dimensional (3D) tissue ...

Bioprinting Cellularized Constructs Using a Tissue-specific Hydrogel Bioink

Bioprinting Cellularized Konstruerer Ved hjelp av en Tissue-spesifikke hydrogel Bioink

Bioprinting has emerged as a versatile biofabrication approach for creating tissue engineered organ constructs. These constructs have potential use as ...

Layered Alginate Constructs: A Platform for Co-culture of Heterogeneous Cell Populations

Lagdelte Alginat konstruksjoner: En plattform for Co-kultur av heterogene cellepopulasjoner

Many load bearing tissues possess structurally and functionally distinct regions, typically accompanied by different cell phenotypes with differential ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning og montering av 3D microvessels

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

Automatisert robot flytende håndtering samlingen av modulære DNA enheter

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Treatment of Ligament Constructs with Exercise-conditioned Serum: A Translational Tissue Engineering Model

Behandling av ligamentkonstruksjoner med treningskondensert serum: en translasjonell vævsteknikkmodell

In vitro experiments are essential to understand biological mechanisms; however, the gap between monolayer tissue culture and human physiology is large, ...

Production of Genetically Engineered Golden Syrian Hamsters by Pronuclear Injection of the CRISPR/Cas9 Complex

Produksjon av genmodifiserte Golden syrer Hamsters ved Pronuclear injeksjon av CRISPR/Cas9 komplekset

The pronuclear (PN) injection technique was first established in mice to introduce foreign genetic materials into the pronuclei of one-cell stage embryos. ...

Rapid, Scalable Assembly and Loading of Bioactive Proteins and Immunostimulants into Diverse Synthetic Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Rask, skalerbar montering og lasting av bioaktive proteiner og Immunostimulants i ulike syntetisk Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Nanomaterials present a wide range of options to customize the controlled delivery of single and combined molecular payloads for therapeutic and imaging ...