Name: rapid assembly of multi-gene constructs using modular golden gate cloning
Uploaded: 2021-02-05T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning at JoVE.com

Detta arbete finansierades av Research Foundation för State University of New York (Award #: 71272) och IMPACT Award of University at Buffalo (Award #: 000077).

OBS: Det hierarkiska kloningsprotokollet som erbjuds i denna verktygslåda kan delas in i tre huvudsteg: 1. Kloningsdelplasmider; 2. Avskriftsenheter för kloning(TUs). 3. Kloning av multigenplasmider (figur 1). Detta protokoll börjar från primer design och slutar med tillämpningar av klonade multi-gene plasmid.
1. Primer design för kloning delen plasmid (pYTK001):
<ol><li>Designa de främre och omvända primers som innehåller flankerande nukleotider TTT i ...

MoClo-baserade kloningssatsen som utvecklats av Lee et al. ger en utmärkt resurs för snabb montering av en till fem transkriptionsenheter i en multigenplasmid antingen för replikering eller integration i jästgenomet. Användningen av detta kit eliminerar den tidskrävande kloningsflaskhalsen som ofta finns för att uttrycka flera gener i jäst.
Vi testade fem olika förhållanden för matsmältnings-/ligaturcyklerna av Golden Gate-kloning med T4 DNA-ligas. Vi fann att 30 cykler av matsmäl...

Syntetisk biologi syftar till att konstruera biologiska system med nya funktioner som är användbara för läkemedels-, jordbruks- och kemiindustrin. Att montera ett stort antal DNA-fragment på ett höggenomströmningssätt är en grundläggande teknik inom syntetisk biologi. En sådan komplicerad process kan bryta ner i flera nivåer med minskande komplexitet, ett koncept lånat från grundläggande ingenjörsvetenskaper1,2. Inom syntetisk biologi monterar DNA-fragment vanligtvis hierarkiskt baserat på funktionalitet: i) Delnivå: "delar" avser DNA-fragment med en specifik funktion, såsom en promotor, en kodningssekvens, en terminator, ett ursprung för replikering; ii) Tu-nivå (Transcription units) : en TU består av en promotor, en kodningssekvens och en terminator som kan transkribera en enda gen. iii) Multigennivå: En multigenplasmid innehåller flera TUs som ofta består av en hel metabolisk väg. Denna hierarkiska församling som är pionjär av BioBrick-samhället är det grundläggande konceptet för montering av stora uppsättningar DNA i syntetiskbiologi 3.
Under det senaste decenniethar 4,5,6,7, Golden Gate kloningstekniken avsevärt underlättat hierarkisk DNA-montering2. Många andra flerdelad kloningsmetoder, såsom Gibson kloning8,ligaturoberoende kloning (SLIC)9,uracil excision-baserad kloning (USER)10, ligase cykelreaktion (LCR)11, och in vivo rekombination (DNA Assembler)12,13, har också utvecklats hittills. Men Golden Gate-kloning är en idealisk DNA-monteringsmetod eftersom den är oberoende av genspecifika sekvenser, vilket möjliggör ärrfri, riktad och modulär montering i en enpottreaktion. Golden Gate kloning drar nytta av typ IIS begränsning enzymer som känner igen en icke-palindromisk sekvens för att skapa förskjutna överhäng utanför igenkännings platsen2. En ligase förenar sedan de glödgade DNA-fragmenten för att få en flerdelad sammansättning. Genom att tillämpa denna kloningsstrategi på moclo-systemet (modulär kloning) har monteringen av upp till 10 DNA-fragment med över 90 % transformatorer avskärmade som innehåller den korrekt monteradekonstruktionen 4.
MoClo-systemet erbjuder enorma fördelar som har påskyndat design-build-testcykeln för syntetisk biologi. För det första möjliggör de utbytbara delarna kombinatorisk kloning för att snabbt testa ett stort antal parametrar. Till exempel kräver optimering av en metabolisk väg vanligtvis cykling genom många promotors för varje gen för att balansera vägflödet. MoClo-systemet kan enkelt hantera sådana krävande kloningsuppgifter. För det andra måste man sekvensera delen plasmid men vanligtvis inte TU eller multigenplasmider. I de flesta fall är screening genom koloni PCR eller begränsningssammanfattning tillräcklig för verifiering på TU- och multigenplasmidnivå. Detta beror på att kloning av delen plasmid är det enda steget som kräver PCR, som ofta introducerar mutationer. För det tredje är MoClo-systemet idealiskt för att bygga komplexa metaboliska vägar med flera gener. Slutligen, på grund av de universella överhängen, kan de delplasmider återanvändas och delas med hela bioengineeringsgemenskapen. För närvarande finns MoClo-kit tillgängliga för växter14,15,5,16,17,svampar 6,18,19,20,21,22,bakterier 7,23,24,25,26,27och djur28,29. En MoClo-plattform med flera kungarike har också introducerats nyligen30.
För Saccharomyces cerevisiaehar Lee et al.6 utvecklat en mångsidig MoClo-verktygslåda, en utmärkt resurs för jästsyntetisk biologigemenskap. Detta kit finns i ett bekvämt 96-brunnsformat och definierar åtta typer av utbytbara DNA-delar med en mångfaldig samling av väl karakteriserade promotors, fluorescerande proteiner, terminatorer, peptidtaggar, urvalsmarkörer, replikerings ursprung och genomredigeringsverktyg. Denna verktygslåda gör det möjligt att montera upp till fem transkriptionsenheter i en multigenplasmid. Dessa egenskaper är värdefulla för jästmetabolisk teknik, där partiella eller hela vägar är överp uttryckta för att producera riktade kemikalier. Med hjälp av detta kit har forskare optimerat produktionen av geraniol, linalool31, penicillin32, mukonsyra33, indigo34, och betalain35 i jäst.
Här tillhandahåller vi ett detaljerat, steg-för-steg-protokoll för att vägleda användningen av MoClo-verktygslådan för att generera flergenvägar för antingen episomal eller genomiskt uttryck. Genom omfattande användning av detta kit har vi funnit att noggrann mätning av DNA-koncentrationer är nyckeln till att säkerställa equimolarfördelningen av varje del i Golden Gate-reaktionen. Vi rekommenderar också T4 DNA ligase över T7 DNA ligase eftersom den förra fungerar bättre med större antal överhäng36. Slutligen måste alla interna igenkänningsplatser för BsmBI och BsaI avlägsnas eller tämjas före monteringen. Alternativt kan man överväga att syntetisera delar för att ta bort flera interna webbplatser och för att uppnå samtidig kodonoptimering. Vi visar hur man använder denna verktygslåda genom att uttrycka en fem-gen väg för β-karoten och lykopen produktion i S. cerevisiae. Vi visar vidare hur man slår ut ADE2-locusen med hjälp av genomredigeringsverktygen från detta kit. Dessa färgbaserade experiment valdes för enkel visualisering. Vi visar också hur man genererar fusionsproteiner och skapar aminosyramutationer med Golden Gate-kloning.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mm Glass beads</td>
			<td>RPI research products</td>
			<td>9831</td>
			<td>For lysing yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>BD &#38; Company</td>
			<td>214010</td>
			<td>Component of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Peptone</td>
			<td>BD&#38; Company</td>
			<td>211677</td>
			<td>Component of the yeast extract peptone dextrose medium (YPD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BsaI-HFv2</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3733S</td>
			<td>a highly efficient version of BsaI restriction enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>4800-94-6</td>
			<td>Antibiotic for screening at the transcription unit level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>56-75-7</td>
			<td>Antibiotic for screening at the entry vector level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSM-His</td>
			<td>Sunrise Sciences</td>
			<td>1006-010</td>
			<td>Amino acid supplement of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Carbon source of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Yeast Nitrogen Base w/o Amino Acids</td>
			<td>BD &#38; Company</td>
			<td>291940</td>
			<td>Nitrogen source of the yeast complete synthetic medium (CSM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTP mix</td>
			<td>Promega</td>
			<td>U1515</td>
			<td>dNTPs for PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Esp3I</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0734S</td>
			<td>a highly efficient isoschizomer of BsmBI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frozen-EZ Yeast Trasformation II Kit</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>T2001</td>
			<td>For yeast transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexanes</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>H302-1</td>
			<td>For carotenoid extraction from yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>25389-94-0</td>
			<td>Antibiotic for screening at the multigene plasmid level</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar, Miller</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1425-2</td>
			<td>Lysogenic agar medium for E. coli culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth, Miller</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1426-2</td>
			<td>Lysogenic liquid medium for E. coli culturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lycopene</td>
			<td>Cayman chemicals</td>
			<td>NC1142173</td>
			<td>For lycopene quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoClo YTK</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>1000000061</td>
			<td>Depositing Lab: John Deuber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monarch Plasmid Miniprep Kit</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>T1010L</td>
			<td>For plasmid purification from E.coli</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND2000c</td>
			<td>For measuring accurate DNA concentrations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NotI-HF</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3189S</td>
			<td>Restriction enzyme for integrative multigene plasmid linearization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nourseothricin Sulphate</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>N-500-100</td>
			<td>Antibiotic Selection marker for the pCAS plasmid used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion HF reaction Buffer (5X)</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B0518S</td>
			<td>Buffer for PCR using Phusion polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High Fidelity DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0530S</td>
			<td>High fidelity polymerase for all the PCR reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pLM494</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>100539</td>
			<td>Plasmid used to amplify crtI, crtYB and crtE used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quartz Cuvette</td>
			<td>Thermo Electron</td>
			<td>10050801</td>
			<td>For quantifing carotenoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202S</td>
			<td>Ligase for Golden Gate cloning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermocycler</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1851148</td>
			<td>For performing all the PCR and cloning reactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Homogenizer</td>
			<td>Bullet Blender</td>
			<td>Model: BBX24</td>
			<td>For homogenization of yeast cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Genesys 150</td>
			<td>For quantifing carotenoids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1422-500</td>
			<td>Component of the yeast extract peptone dextrose medium (YPD)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-carotene</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>AAH6010603</td>
			<td>For &#946;-carotene quantification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid assembly of multi-gene constructs using modular golden gate cloning

Golden Gate-kloningsmetoden möjliggör snabb montering av flera gener i alla användardefinierade arrangemang. Den använder typ IIS-begränsningsenzymer som skär utanför deras igenkänningsplatser och skapar ett kort överhäng. Detta modulära kloningssystem (MoClo) använder ett hierarkiskt arbetsflöde där olika DNA-delar, till exempel promotors, kodningssekvenser (CDS) och terminatorer, först klonas till en ingångsvektor. Flera postvektorer monteras sedan i transkriptionsenheter. Flera transkriptionsenheter ansluts sedan till en multigenplasmid. Golden Gate-kloningsstrategin är av enorm fördel eftersom den tillåter ärrlös, riktad och modulär montering i en enpottreaktion. Det hierarkiska arbetsflödet möjliggör vanligtvis enkel kloning av ett stort antal multigenkonstruktioner utan behov av sekvensering utöver ingångsvektorer. Användningen av fluorescerande proteinavhopp möjliggör enkel visuell screening. Detta arbete ger ett detaljerat, steg-för-steg-protokoll för montering av multigenplasmider med hjälp av moclo-kit (Yeast Modular Cloning). Vi visar optimala och suboptimala resultat av multigenplasmidmontering och ger en guide för screening för kolonier. Denna kloningsstrategi är mycket tillämplig för jästmetabolisk teknik och andra situationer där multigenplasmidkloning krävs.

Här resultaten av fyra replikatoriska multi-gen plasmider för β-karoten (gul) och lykopen (röd) produktion. En integrativ multi-gene plasmid för att störa ADE2 locus konstruerades, vars kolonier är röda.
Klonings-CDS till ingångsvektorn (pYTK001) ERG20 förstärktes från jästgenomet och de tre karotenoidgenerna crtE, crtYB, crtI från plasmid pLM494<sup ...

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning at JoVE.com

Rapid Assembly of Multi-Gene Constructs using Modular Golden Gate Cloning

Målet med detta protokoll är att tillhandahålla en detaljerad steg-för-steg-guide för montering av multigenkonstruktioner med hjälp av det modulära kloningssystemet baserat på Golden Gate-kloning. Det ger också rekommendationer om kritiska steg för att säkerställa optimal montering baserat på våra erfarenheter.

Snabb montering av multigenkonstruktioner med modulär Golden Gate-kloning

The Golden Gate cloning method enables the rapid assembly of multiple genes in any user-defined arrangement. It utilizes type IIS restriction enzymes that ...

Detta är ett detaljerat protokoll för montering av multigenplasmider med jästmoclo-kit. Denna metod möjliggör bekväm kloning av en mängd olika klasskamrater med flera gener. Det är idealiskt för att generera ett stort bibliotek med relaterade delar.Börja med att ställa in Golden Gate-reaktionsmixen. Tillsätt 20 femtomoler av varje PCR-produkt och inträdesvektorn, en mikroliter buffert på 10X T4 Ligase, 0,5 mikroliter Esp3I och 0,5 mikroliter T4 ligase. Tillsätt dubbeldestillerat vatten för att få den totala volymen till 10 mikroliter.Kör sedan kloningsreaktionen. Omvandla hela reaktionsblandningen till alfastammen DH5 eller motsvarande Escherichia coli kemiskt kompetenta celler genom värmechock. Sprid cellerna på en lb-platta med 35 mikrogram per milliliter kloramfenikol.Inkubera sedan plattan vid 37 grader Celsius över natten. Efter 16 till 18 timmar, ta plattan ur inkubatorn och lämna den vid fyra grader Celsius i ungefär fem timmar för att låta superfoldern grönt fluorescerande protein eller sfGFP utvecklas för en mer intensiv grön färg. För att avskärma plattan, placera den på en ultraviolett eller blå ljustransilluminator.SfGFP som innehåller kolonier kommer att fluorescera under UV-ljuset. De gröna kolonierna är negativa eftersom de innehåller den oklippta delen plasmid. De vita kolonierna är troligen positiva.Kloningen lyckas om det finns 30 till 100% vita kolonier. Montera en mellanvektor med vänster kontakt, sfGFP-avhoppet, höger kontakt, en jästvalsmarkör, ett jästursprung av replikering och delen plasmid med en mRFP1, ett E.coli-ursprung och den ampicillinresistenta genen. Utför kloningsreaktionen enligt beskrivningen i textmanuskriptet.Omvandla hela reaktionsblandningen till alfastammen DH5 och sprid sedan cellerna på en lb-platta med 50 mikrogram per milliliter karbinskelysalin eller ampicillin. Inkubera vid 37 grader Celsius över natten. Efter 16 till 18 timmar, ta ut plattan ur inkubatorn.Plattan kommer att innehålla både blekröda och blekgröna kolonier. Håll den på fyra grader Celsius i ungefär fem timmar för att låta mRFP1 och sfGFP mogna. Använd en UV- eller blåljustransilluminator för att identifiera de gröna kolonierna som innehåller den potentiellt korrekta mellanvektorn.Strecka ut de gröna kolonierna på en lb-karbenicillinplatta och inkubera vid 37 grader Celsius över natten. Nästa dag, strimla ut dem igen på en kloramfenikolplatta och inkubera vid 37 grader Celsius över natten. Kolonierna som växer på kloramfenikolplattor innehåller felmonterade plasmider.När den mellanliggande vektorn har monterats, fortsätt med att montera transkriptionsenheterna. Denna fyrdelade sammansättning innehåller mellanvektorn, en promotor, en CDS och determinator. Rena plasmiderna, registrera deras koncentrationer och späd varje plasmid till 20 femtomoler DNA per mikroliter.Efter att ha utfört kloningsreaktionen omvandlar du hela kloningsreaktionsblandningen till de DH5 alfa- eller motsvarande E.coli-kompetenta cellerna och pläterar dem på LBN-kardenicillin. Inkubera sedan plattan vid 37 grader Celsius över natten. Efter 16 till 18 timmar, ta ut plattan ur inkubatorn och håll den på fyra grader Celsius i ungefär fem timmar för att låta sfGFP mogna.Använd en UV- eller blåljustransilluminator för att identifiera de icke-fluorescerande vita kolonierna som innehåller de potentiellt korrekta transkriptionsenheterna. Montera en mellanvektor för multigenplasmiderna enligt beskrivningen i textmanuskriptet. Omvandla sedan hela kloningsreaktionsblandningen till DH5 alfaceller och plätera dem på lb med 50 mikrogram per milliliter kanamycin.Inkubera plattan vid 37 grader Celsius över natten. Utför röd och grön färgbaserad screening, strimla sedan och odla de gröna kolonierna på en lb kanamycinplatta för att screena för felmontörer som tidigare visats. Montera sedan multigenplasmiden genom att ställa in en kloningsreaktion som beskrivs i textmanuskriptet.Omvandla hela kloningsreaktionsblandningen till DH5 alfaceller och plätera dem på lb kanamycin. Inkubera plattan vid 37 grader Celsius över natten. Utför sedan den grönvita screeningen som tidigare beskrivits.Detta protokoll användes för att konstruera en integrativ multi-gene plasmid för att störa ADE2 locus. Fyra replikativa och en integrativ multi-gen plasmider monterades. Förhållandet mellan potentiellt korrekta kolonier för mellanliggande vektor kloning var 1,83%När den mellanliggande plasmiden klonades, framgångsgraden för montering av multi-gen plasmider från mellanliggande var 93,77%Det försumbara antalet positiva vita kolonier visar en suboptimal enhet av multi-gen plasmider.Efter omvandling till jäst växte kolonier som producerar betakaroten och lykopen dag tre. Fyra kolonier från varje tallrik ströddes ut på färska tallrikar och odlades i ytterligare två dagar. Karotenoiderna extraherades och kvantifierades av UV-Vis spektrofotometri.BTS1/ERG20 leder till 35 gånger högre produktion av betakaroten jämfört med stammen enbart hos ERG20. På samma sätt är produktionen av lykopen ungefär 16,5 gånger högre i stammen med BTS1/ERG20 jämfört med ENBART ERG20. Multi-gen integrativ plasmid användes för störningen av ADE2 locus, antingen med en gRNA och ingen hjälpare DNA eller med gRNA och en multi-gen integrativ plasmid som hjälpare DNA.Efter tre till fyra dagar observerades röda kolonier på YPD-plattan med Nourseothricin, vilket indikerar att ADE2 framgångsrikt hade störts. När du försöker denna metod är det viktigaste att komma ihåg att mäta DNA-koncentrationerna noggrant och pipetten noggrant medan du ställer in denna reaktionsblandning. Denna teknik gör det möjligt för forskare inom jästmetabolisk teknik att undersöka ett stort antal gener och promotors för maximerat produktutbyte.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

ECM Protein Nanofibers and Nanostructures Engineered Using Surface-initiated Assembly

ECM Proteinnanofiber och nanostrukturer Engineered Använda Surface initierad Assembly

The extracellular matrix (ECM) in tissues is synthesized and assembled by cells to form a 3D fibrillar, protein network with tightly regulated fiber ...

Viability of Bioprinted Cellular Constructs Using a Three Dispenser Cartesian Printer

Lönsamhet Bioprinted Cellular konstruktioner med hjälp av en tre Dispenser cartesianska skrivare

Tissue engineering has centralized its focus on the construction of replacements for non-functional or damaged tissue. The utilization of ...

Construction of Modular Hydrogel Sheets for Micropatterned Macro-scaled 3D Cellular Architecture

Konstruktion av Modular hydrogel Skivor för Micropatterned Makro skalas 3D Cellular Architecture

Hydrogels can be patterned at the micro-scale using microfluidic or micropatterning technologies to provide an in vivo-like three-dimensional (3D) tissue ...

Bioprinting Cellularized Constructs Using a Tissue-specific Hydrogel Bioink

Bioprinting Cellularized Konstrukt användning av en vävnadsspecifik Hydrogel Bioink

Bioprinting has emerged as a versatile biofabrication approach for creating tissue engineered organ constructs. These constructs have potential use as ...

Layered Alginate Constructs: A Platform for Co-culture of Heterogeneous Cell Populations

Layered alginat Konstruktioner: En plattform för Co-kultur av heterogena cellpopulationer

Many load bearing tissues possess structurally and functionally distinct regions, typically accompanied by different cell phenotypes with differential ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning och montering av 3D mikrokärl

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

Automatiserad robot vätskehantering montering av modulära DNA enheter

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Treatment of Ligament Constructs with Exercise-conditioned Serum: A Translational Tissue Engineering Model

Behandling av ligamentkonstruktioner med träningskonditionerad serum: en translationsvävnadsteknikmodell

In vitro experiments are essential to understand biological mechanisms; however, the gap between monolayer tissue culture and human physiology is large, ...

Production of Genetically Engineered Golden Syrian Hamsters by Pronuclear Injection of the CRISPR/Cas9 Complex

Produktion av genmanipulerade gyllene syriska hamstrar genom pronukleär injektion av CRISPR/Cas9 komplexet

The pronuclear (PN) injection technique was first established in mice to introduce foreign genetic materials into the pronuclei of one-cell stage embryos. ...

Rapid, Scalable Assembly and Loading of Bioactive Proteins and Immunostimulants into Diverse Synthetic Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Snabba, skalbara montering och packning av bioaktiva proteiner och immunstimulerande medel i olika syntetiska Nanocarriers Via Flash Nanoprecipitation

Nanomaterials present a wide range of options to customize the controlled delivery of single and combined molecular payloads for therapeutic and imaging ...