Name: crispr/cas9 editing of the c. elegans rbm-3.2 gene using the dpy-10 co-crispr screening marker and assembled ribonucleoprotein complexes.
Uploaded: 2020-12-11T14:00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes. at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل من قبل صناديق بدء جامعة تولسا (TU) وزمالة الصيف لتطوير كلية TU الممنوحة لجيوتي آير. نود أن نشكر برنامج أبحاث الكيمياء الصيفية الجامعية (CSURP) وتحدي أبحاث تولسا الجامعي (TURC) لمنح رواتب للطلاب المشاركين في هذه الدراسة. ونود أن نعترف بالسيدة كارولين دان لمساعدتها التقنية. وأخيرا، نود أن نشكر الدكتورين جوردان وارد وإيمي جاراميلو لامبرت وآنا ألن وروبرت شيف وويليام بوتر وسيلي موغي على تعليقاتهم الناقدة على هذه المخطوطة.

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

لقد استخدمنا البروتوكول أعلاه لتحرير العديد من الجينات إلى جانب rbm-3.2. وقد تباينت كفاءات التحرير لدينا لمختلف loci، دليل RNAs وقوالب الإصلاح (واحد تقطعت بهم السبل وتقطعت بهم السبل المزدوجة) بين 2٪ و 58٪ (البيانات غير مبين). كفاءات التحرير الملاحظة مماثلة لكفاءات التحرير المبلغ عنها سابقا من 2٪ إلى 70٪ لهذا البروتوكول27. كما نجحنا في استخدام هذه التقنية في إجراء عمليات حذف الجينات. باستخدام اثنين من crRNAs استبدلنا الجين الذي هو قريب من 6 كيلوبايت في الطول مع تسلسل الترميز للبروتين الفلوري الأخضر (GFP) (البيانات غير المعروضة). لهذه التجربة، تم العثور على حوالي 14٪ من الديدان رول F1 التي تم تحليلها لتكون إيجابية لحذف الجينات واستبدال مع GFP (البيانات غير مبين). ومع ذلك، هناك حاجة إلى تجارب إضافية لتحديد الحد الأقصى لطول عمليات حذف الجينات واستبدالها التي يمكن إجراؤها باستخدام هذه التقنية.
يمكن استخدام هذه التقنية لجعل الإدراجات التي هي حوالي 1.6 كيلو بايت في طول19. وقد أظهرت دراسة حديثة أن لجعل الإدراج التي هي أكثر من 1.6 كيلوبايت في الطول باستخدام هذا البروتوكول، وتوليد اثنين من فواصل حبلا مزدوجة واستخدام قوالب إصلاح مع أذرع أطول homology يمكن تمكين إدراج شظايا أكبر بكثير من الحمض النووي (~ 10 Kb)28. بدلا من ذلك، قد يتم تنفيذ جولات متعددة من تحرير الجينات مع هذا البروتوكول لإنشاء تعديلات أكبر. ويمكن أيضا أن تعتمد غيرها من البلازميد القائم على C. elegans CRISPR / Cas9 بروتوكولات تحرير الجينات لتجارب CRISPR التي تنطوي على إدراج شظايا الحمض النووي أكبر من 1.6 kb46,47,48.
قبل استخدام هذا البروتوكول لتحرير الجينات، من الضروري التأكد من عدم ارتباط جين الاهتمام بالجراد dpy-10 على الكروموسوم الثاني. في حالة ربط جين مستهدف ب dpy-10، قد يكون من الصعب فصل طفرة dpy-10 بعيدا عن تحرير اهتمامك. وبالتالي، في حالة ارتباط جين الاهتمام بالجراد dpy-10، يمكن استخدام علامات CRISPR المشتركة الأخرى مثل unc-58 (X-chromosome) أوunc-22 أو zen-4 (الكروموسوم IV) وبن-1 أو pha-1 (الكروموسوم الثالث) الموجودة على كروموسومات مختلفة24 و25و26و28. البيانات من مختبر ماير تثبت أن بن-1 وزن-4 الطفرات يمكن استخدامها كعلامات CRISPR المشتركة الناجحة للفحص مع هذه الطريقة28. ومع ذلك، من المهم أن نلاحظ أن استخدام زين-4 وpha-1 كعلامات كريسبر المشاركة يتطلب إجراء تجربة CRISPR في غير البرية من نوع زين-4 (cle10ts) أو pha-1 (e2123ts) الخلفيات على التوالي26،28. وعلاوة على ذلك، قد تتطلب تجارب CRISPR التي تنطوي على بعض علامات CRISPR المشتركة مثل بن-1 إعداد لوحات خاصة (مثل لوحات تحتوي على البنزيميدازول)28. لقد استخدمنا بنجاح علامة UNC-58 co-CRISPR لفحص التعديلات الإيجابية لجين مرتبط ب dpy-10 باستخدام هذه الطريقة (البيانات غير المعروضة). تمنح طفرة unc-58 (e665) نمطا ظاهرا مرئيا (شللا) يمكن استخدامه بفعالية لفحص الديدان المحررة بشكل إيجابي24. بدلا من ذلك، إذا كان الوصول إلى المجهر الفلوري متوفرا، يمكن أيضا استخدام جين gtbp-1 الموسوم بالفلورسنت كعلامة CRISPR مشتركة لهذا البروتوكول19.
من أجل كفاءة تحرير عالية أثناء استخدام هذه الطريقة لتحرير الجينوم ، يجب أن يكون موقع التحرير ضمن 10 إلى 30 قاعدة من موقع القطع Cas9. إذا كان موقع التحرير هو أكثر من 30 قاعدة بعيدا عن موقع القطع Cas9 ، فإن كفاءة التحرير تنخفض بشكل كبير19،35،37. ومع ذلك ، فقد أظهرت دراسة حديثة من مختبر ماير أن إنشاء اثنين من فواصل مزدوجة حبلا على مسافة من بعضها البعض يمكن أن تمكن من إدراج تعديلات بعيدا عن موقع قطع Cas9 باستخدام هذا البروتوكول28.
في البروتوكول الحالي، تم تصميم قالب الإصلاح بحيث تظهر كافة codons التوقف المدرجة الثلاثة في نفس إطار القراءة. ومع ذلك ، فإن استراتيجية بديلة لإنشاء المسوخ فارغة يكون لاستخدام عالمي 43 قاعدة طويلة ضرب في STOP - IN كاسيت التي وصفت سابقا50. الأهم من ذلك، هذا كاسيت لديه codons وقف في جميع إطارات القراءة الثلاثة الممكنة ويسبب الطفرات frameshift. هذه استراتيجية مفيدة بشكل خاص لإنشاء null-mutants عند حدوث إصلاح غير صحيح أو غير كامل في موقع التحرير.
في الختام ، نظرا لقصر مدتها والتقدم الأخير في هذه الطريقة ، وهذه طريقة ممتازة للتجارب المختبرية الروتينية التي تنطوي على إضافة علامات الظهارة المناعية القصيرة ، وعلامات الفلورسنت ، وإجراء حذف الجينات ، واستبدال الجينات واستبدال كودون.

الكتلة بانتظام بين متباعدة قصيرة Palindromic تكرار (CRISPR)/ المكورات العقدية pyogenes كريسبر المرتبطة البروتين (كاس) التكنولوجيا تمكن كفاءة تحرير الجينوم المستهدفة في مجموعة واسعة من الكائنات الحية1،2،3،4. تم اكتشاف نظام CRISPR لأول مرة كجزء من الاستجابة المناعية المضادة للفيروسات prokaryotic5،6،7. يستخدم نظام CRISPR TYPE II اندونوكليس مثل Cas9، A RNA تنشيط (tracrRNA) وقصيرة, الهدف الحمض النووي محددة 20-nucleotide دليل طويل CRISPR RNA (crRNA) للتعرف على "NGG" Protospacer المجاور Motif (PAM) وجعل كسر مزدوج تقطعت بهم السبل في الحمض النووي الهدف5,6,7,8,9,10,11,12. يتم التعرف على هذه الاستراحة المزدوجة كآفة من خلال آلات إصلاح الحمض النووي الخلوية. وبالتالي ، يمكن إصلاح كسر مزدوجة تقطعت بهم السبل التي تم إنشاؤها عن طريق واحد من مسارين - 1) غير متجانسة نهاية الانضمام (NHEJ) أو ii) إصلاح موجهة Homology (HDR)13. NHEJ غالبا ما يكون عرضة للخطأ، وبالتالي، عندما يتم استخدام هذا المسار لإصلاح كسر مزدوجة تقطعت بهم السبل في الحمض النووي الهدف، فإنه غالبا ما يسبب الطفرات المعطل (الإدراج، والحذف) في الجين من الفائدة. من ناحية أخرى ، من خلال توفير قالب إصلاح خارجي مع homology إلى جانبي كسر مزدوج حبلا ، يمكن توجيه آلات إصلاح الحمض النووي الخلوية لاستخدام HDR لإصلاح كسر13. وهكذا تمكن طريقة HDR من التحرير الدقيق لأي مكان اهتمام.
وقد وصفت مجموعة متنوعة من بروتوكولات تحرير الجينات CRISPR/Cas9 لC. elegans14،15،16،17،18،19،20. الأكثر استخداما CRISPR /Cas9 طرق التحرير في C. elegans تشمل كل من الاستنساخ القائم على وبروتوكولات خالية من الاستنساخ لتوليد قوالب إصلاح ل CRISPR / Cas9 التحرير14،15،16،17،18،19،20. يناقش هذا البروتوكول بالتفصيل بروتوكول تحرير CRISPR/Cas9 الخالي من الاستنساخ استنادا إلى استخدام dpy-10 كعلامة CRISPR مشتركة للفحص. حتى الآن ، فإن C. elegansالمفصلة الوحيدة التي تركز على CRISPR / Cas9 تحرير بروتوكول الفيديو الموجود يستخدم علامة الفلورسنت لفحص21. ومع ذلك ، فإن استخدام علامة الفلورسنت للفحص يتطلب الوصول إلى مجهر مضان ، والذي قد تجد العديد من المختبرات في المؤسسات الجامعية الصغيرة (PUIs) صعوبة في الوصول إليه. ومن المشجع أن نلاحظ أنه تم الحصول على نتائج إيجابية مترابطة في الدراسات السابقة بين الديدان التي تحمل علامات الفلورسنت ووجود تحرير21،22. ومع ذلك، من الضروري إجراء دراسات إضافية لتحديد الكفاءة الإجمالية لطريقة الفحص القائمة على الفلورسينس لتحرير مجموعة واسعة من loci مع RNAs دليل مختلف وقوالب الإصلاح. وأخيرا ، منذ ترميز البلازميدات لهذه العلامات الفلورية تشكل صفائف خارج الكروموسومات ، وغالبا ما تنتج مضان متغير من هذه الصفائف التي يمكن أن تجعل من الصعب تحديدايجابيات 23. ومن ثم، وعلى الرغم من أن طريقة الفرز القائمة على الفلورسينس قد تكون مفيدة لاعتمادها، فإن المسائل المذكورة أعلاه قد تحد من قابليتها للتطبيق.
باستخدام علامة كريسبر المشتركة التي تنتج النمط الظاهري مرئية يقلل كثيرا من عدد ذرية التي تحتاج إلى فحص للعثور على دودة تحريرها بشكل إيجابي23،24،25،26،27،28. الأهم من ذلك، يمكن الكشف عن الأنماط الظاهرية التي تنتجها هذه العلامات بسهولة تحت المجهر تشريح بسيط23،24،25،26،27،28،29،30،31،32،33،34. علامة dpy-10 المشترك CRISPR هي واحدة من أفضل العلامات المميزة والمستعملة على نطاق واسع شارك CRISPR لأداء C. elegans CRISPR / Cas9 تحرير الجينوم24،27. لذلك، ستناقش هذه المقالة طريقة تنفيذ CRISPR/Cas9 التحرير في C. elegans باستخدام التسليم المباشر للمجمعات ريبونوكليوبروتين مع dpy-10 كعلامة كريسبر المشارك27،35. في هذه الطريقة، ومزيج حقن التحرير المعدة يتكون من نمط إصلاح dpy-10 dpy-10 تتميز جيدا والقالب dpy-10 إصلاح للتوسط في توليد المهيمنة ملحوظ "الأسطوانة" (رول) النمط الظاهري الذي يمنحه هوتيروزيغوس dpy-10(cn64) طفرة المعروفة داخل الجين dpy-10 24،27،29. عندما تكون موجودة في حالتها homozygous، الطفرة dpy-10 (cn64) يسبب النمط الظاهري مزبل (Dpy) التي تنتج أقصر والديدان stouter24،29. يتم التوسط في النمط الظاهري رول عن طريق الإدراج الدقيق للقالب dpy-10 إصلاح الموردة المشتركة في نسخة واحدة من الجين dpy-10 بواسطة HDR بوساطة CRISPR / Cas9 التحرير. لذلك ، يشير ظهور Rol C. elegans إلى حقن ناجح بالإضافة إلى حدث تحرير ناجح بوساطة HDR داخل خلايا الدودة المحقونة. منذ crRNA وقالب إصلاح الجين المستهدف من الفائدة هي في نفس مزيج الحقن مع dpy-10 crRNA و dpy-10 قالب الإصلاح، وهناك فرصة جيدة أن الديدان رول المحددة كما تم تحريرها في وقت واحد في الجين المستهدف من الفائدة. ومن ثم، يتم فحص هذه الديدان رول لتحرير الاهتمام من قبل تقنيات مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) (للتحريرات أكبر من 50 نقطة أساس) أو عن طريق PCR تليها تقييد الهضم (للتحرير أقل من 50 نقطة أساس).
مزايا استخدام هذه الطريقة لتحرير الجينوم هي: 1) يمكن إنشاء تعديلات CRISPR بكفاءة عالية نسبيا (2٪ إلى 70٪) باستخدام هذه الطريقة27؛ '2' لا تنطوي قوالب الإصلاح وتوجيه الرناس المستخدمة في هذه الطريقة على الاستنساخ، مما يقلل من الوقت اللازم لتوليدها؛ 3) عن طريق تجميع مجمعات ريبونوكليوبروتين في المختبر، يمكن الحفاظ على تركيزات مجمعات التحرير المجمعة ثابتة نسبيا ، وبالتالي تحسين القابلية للاستنساخ ؛ 4) وقد ثبت بعض RNAs دليل التي تفشل في توليد تعديلات عندما أعرب من البلازميدات للعمل ل CRISPR / Cas9 تحرير الجينوم عندما زودت كما في المختبر crRNAs منقول27؛ v) بما في ذلك علامة dpy-10 المشتركة CRISPR تمكن من الفحص السهل باستخدام المجهر تشريح ويقلل من عدد ذرية التي يجب فحصها للعثور على ايجابيات24،27؛ و vi) تسلسل الحمض النووي التحقق من خطوط دودة homozygous تحريرها يمكن الحصول عليها بهذه الطريقة في غضون بضعة أسابيع19،27.
وقد نشرت فصول الكتاب ممتازة تتعلق العديد من مختلف أساليب كريسبر C. elegans 14،15،16،17،18،19،20،43. ومع ذلك ، فإن عرض طريقة dpy-10 المشتركة CRISPR في شكل فيديو في إعداد المختبر غير موجود حاليا. في هذه المقالة، ونحن نصف ونوضح عملية استخدام dpy-10 طريقة كريسبر المشترك لتحرير جين الهدف التمثيلي اسمه rbm-3.2، وهو بروتين المفترضة الحمض النووي الريبي ملزمة (WormBase:https://wormbase.org/species/c_elegans/gene/WBGene00011156#0-9fcb6d-10).  على وجه التحديد، هنا نصف بالتفصيل طريقة إدخال ثلاثة codons وقف سابق لأوانه داخل الجين C. elegans rbm-3.2 باستخدام في المختبر تجميعها مجمعات ريبونوكليوبروتين وقالب إصلاح خطي خارجي واحد تقطعت بهم السبل. وقد نجحت هذه الدراسات في توليد أول سلالة C. elegans CRISPR مع codons توقف سابق لأوانه في الجين rbm-3.2. وبما أنه لا يعرف الكثير حاليا فيما يتعلق بوظيفة هذا الجين في سي إليغانس، فإن هذه السلالة ستكون بمثابة أداة مفيدة في تشريح وظيفة RMB-3.2. ويمكن أيضا اعتماد هذه الطريقة لإجراء عمليات الإدراج والتبديل والحذف في أي مكان داخل الجينوم C. elegans.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Barcoded DNA sequencing tubes</td>
			<td>Eurofins Genomics</td>
			<td>SimpleSeq Kit Premixed</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cas9 protein</td>
			<td>PNA Bio</td>
			<td>CP01</td>
			<td>Lyophilized Cas9 protein was resuspended in 20%glycerol containing nuclease-free water, aliquoted and stored at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>crRNAs</td>
			<td>Horizon Discovery/ GE Dharmacon</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Lyophilized crRNAs were resuspended in 5 mM Tris-Cl pH 7.5, aliquoted and stored at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECoRI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3101S</td>
			<td>Stored at -30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minelute PCR purification kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28004</td>
			<td>Spin columns stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MyTaq Redmix</td>
			<td>Meridian Bioscience</td>
			<td>BIO-25043</td>
			<td>Stored at -30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers</td>
			<td>IDT</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Standard 20 nmol oligos were synthesized, resuspended in sterile nuclease-free water and stored at -30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Gold Bio</td>
			<td>P-480-SL4</td>
			<td>Stored at -30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Repair template oligos</td>
			<td>IDT</td>
			<td>N/A</td>
			<td>4 nmol Ultramer oligos were synthesized, resuspended in sterile nuclease-free water and stored at -30 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tracrRNA</td>
			<td>Horizon Discovery/ GE Dharmacon</td>
			<td>U-002005-50</td>
			<td>Lyophilized tracrRNA was resuspended in 5 mM Tris-Cl pH 7.5, aliquoted and stored at -80 &#176;C</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

crispr/cas9 editing of the c. elegans rbm-3.2 gene using the dpy-10 co-crispr screening marker and assembled ribonucleoprotein complexes.

البكتيرية متفاوتة بانتظام قصيرة Palindromic تكرار (CRISPR)/العقدية pyogenes CRISPR المرتبطة البروتين (كاس) النظام قد سخرت من قبل الباحثين لدراسة المشاكل الهامة ذات الصلة بيولوجيا. تسمح القوة التي لا مثيل لها لطريقة تحرير الجينوم CRISPR/Cas للباحثين بتحرير أي مكان يختارونه بدقة ، وبالتالي تسهيل زيادة فهم وظيفة الجينات. وقد وصفت عدة طرق لتحرير الجينوم C. elegans بواسطة CRISPR/Cas9 سابقا. هنا، نناقش ونوضح طريقة تستخدم في مجمعات ريبونوكليوبروتين المجمعة في المختبر وعلامة dpy-10 المشتركة CRISPR للفحص. على وجه التحديد ، في هذه المقالة ، نذهب من خلال عملية خطوة بخطوة لإدخال codons وقف سابق لأوانه في الجين C. elegans rbm-3.2 عن طريق إصلاح موجهة homology باستخدام هذه الطريقة من تحرير CRISPR / Cas9. يمكن استخدام طريقة التحرير البسيطة نسبيا لدراسة وظيفة أي جين ذي أهمية وتسمح بتوليد تحرير C. elegans بواسطة CRISPR/Cas9 في أقل من أسبوعين.

Watch this Scientific Journal Video about CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes. at JoVE.com

CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes.

الهدف من هذا البروتوكول هو تمكين تحرير CRISPR/Cas9 السلس لجينوم C. elegans باستخدام مجمعات ريبونوكليوبروتين المجمعة وعلامة dpy-10 المشتركة CRISPR للفحص. يمكن استخدام هذا البروتوكول لإجراء مجموعة متنوعة من التعديلات الجينية في C. elegans بما في ذلك عمليات الإدراج والحذف واستبدال الجينات واستبدال الكودون.

CRISPR/Cas9 تحرير الجين C. elegans rbm-3.2 باستخدام علامة فحص dpy-10 Co-CRISPR ومجمعات ريبونوكليوبروتين المجمعة.

The bacterial Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat (CRISPR)/Streptococcus pyogenes CRISPR-associated protein (Cas) system has been ...

Research

JoVE Journal

Genetics

CRISPR/Cas9 Editing of the C. elegans rbm-3.2 Gene using the dpy-10 Co-CRISPR Screening Marker and Assembled Ribonucleoprotein Complexes.

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

QTL Mapping and CRISPR/Cas9 Editing to Identify a Drug Resistance Gene in Toxoplasma gondii

كتل رسم الخرائط و كريسبر / Cas9 تحرير لتحديد الجينات المقاومة للمخدرات في<em&gt; التوكسوبلازما غونديي</em

Scientific knowledge is intrinsically linked to available technologies and methods. This article will present two methods that allowed for the ...

Selection-dependent and Independent Generation of CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockouts in Mammalian Cells

جيل يعتمد على الاختيار ومستقل من كريسبر / كاس 9 بوساطة جين نوكوتس في خلايا الثدييات

The CRISPR/Cas9 genome engineering system has revolutionized biology by allowing for precise genome editing with little effort. Guided by a single guide ...

A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

منهجية موحدة لدراسة المحدثة للطفرات في الموقع كدالة لإصلاح نقطة تحور تحفزها كريسبر/Cas9 وسودن في الخلايا البشرية

Combinatorial gene editing using CRISPR/Cas9 and single-stranded oligonucleotides is an effective strategy for the correction of single-base point ...

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection كريسبر/Cas9 البروتين في أجنة سمك السلور القناة، Ictalurus punctatus، لتحرير الجينات

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins

A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins

السريع وخط أنابيب سهلة "توليد طفرات نقطة الجينوم" في C. ايليجانس باستخدام كريسبر/Cas9 "ريبونوكليوبروتينس"

The clustered regularly interspersed palindromic repeats (CRISPR)-CRISPR-associated protein 9 (Cas9) prokaryotic adaptive immune defense system has been ...

CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum

CRISPR/Cas9 Gene Editing to Make Conditional Mutants of Human Malaria Parasite P. falciparum

"جعل طفرات مشروطة طفيل الملاريا البشرية" المنجلية "تحرير الجينات" كريسبر/Cas9

Malaria is a significant cause of morbidity and mortality worldwide. This disease, which primarily affects those living in tropical and subtropical ...

CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein-mediated Precise Gene Editing by Tube Electroporation

CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein بوساطة تحرير الجينات الدقيقة عن طريق أنبوب الكهربائي

Gene editing nucleases, represented by CRISPR-associated protein 9 (Cas9), are becoming mainstream tools in biomedical research. Successful delivery of ...

Introducing a Gene Knockout Directly Into the Amastigote Stage of Trypanosoma cruzi Using the CRISPR/Cas9 System

Introducing a Gene Knockout Directly Into the Amastigote Stage of Trypanosoma cruzi Using the CRISPR/Cas9 System

إدخال الجين بالضربة القاضية مباشرة في مرحلة Amastigote من التريبانوسوما كروزي باستخدام نظام CRISPR/Cas9

Trypanosoma cruzi is a pathogenic protozoan parasite that causes Chagas&#8217; disease mainly in Latin America. In order to identify a novel drug target ...

Generation of Defined Genomic Modifications Using CRISPR-CAS9 in Human Pluripotent Stem Cells

توليد تعديلات جينية محددة باستخدام CRISPR-CAS9 في الخلايا الجذعية البشرية متعددة القوى

Human pluripotent stem cells offer a powerful system to study gene function and model specific mutations relevant to disease. The generation of precise ...

Investigation of the Transcriptional Role of a RUNX1 Intronic Silencer by CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein in Acute Myeloid Leukemia Cells

Investigation of the Transcriptional Role of a RUNX1 Intronic Silencer by CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein in Acute Myeloid Leukemia Cells

التحقيق في الدور النسخي لـ RUNX1 كاتم الصوت من قبل كريسبر/كاس9 ريبونوكليوبروتين في خلايا سرطان الدم النقوي الحاد

The bulk of the human genome (~98%) is comprised of non-coding sequences. Cis-regulatory elements (CREs) are non-coding DNA sequences that contain binding ...