Name: blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model
Uploaded: 2021-06-03T13:00:00
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Ringraziamo la Dott.ssa Yun Xu per il suo aiuto come doppiatore, la Dott.ssa jianhua Peng per il suo aiuto nell'editing video e la dott.ssa Annika Kuckhahn per i suoi commenti e il suo supporto. Questo lavoro è stato sostenuto in parte dalla Fondazione tedesca per la ricerca (DFG) per promuovere collaborazioni internazionali (da HO2581/4-1 ad AH) e dalla National Science Foundation of China (NSFC; #81760291 to FJ).

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti seguendo gli orientamenti della direttiva 2010/63/UE del Parlamento europeo sulla protezione degli animali utilizzati a fini scientifici (comitato Etico approvato, #G1071/09).
NOTA: La preparazione preliminare, l'anestesia, la cura post-operatoria e il lavoro di monitoraggio sono gli stessi eseguiti nei metodichirurgici tradizionali 1,2,4. I topi...

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	<li>Corry, R., Winn, H., Russell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+heart+in+mice.">Primarily vascularized allografts of heart in mice.</a> Transplantation. 16, 343-350 (1973).</li><li>Habertheuer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+tissue-specific+exosome+profiling+enables+noninvasive+monitoring+of+acute+rejection+in+mouse+allogeneic+heart+transplantation.">Donor tissue-specific exosome profiling enables noninvasive monitoring of acute rejection in mouse allogeneic heart transplantation.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 155 (6), 2479-2489 (2018).</li><li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+of+Heterotopic+Cardiac+Transplantation+in+Mice+as+a+Model+for+Elucidating+Mechanisms+of+Graft+Rejection.">Potential of Heterotopic Cardiac Transplantation in Mice as a Model for Elucidating Mechanisms of Graft Rejection.</a> Cardiac Transplantation. , (2012).</li><li>Westhofen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterotopic+heart+transplantation+in+mice+as+a+small+animal+model+to+study+mechanical+unloading+-+Establishment+of+the+procedure,+perioperative+management+and+postoperative+scoring.">The heterotopic heart transplantation in mice as a small animal model to study mechanical unloading - Establishment of the procedure, perioperative management and postoperative scoring.</a> PLoS One. 14 (4), 0214513 (2019).</li><li>Wang, C., Wang, Z., Allen, R., Bishop, G. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+chronic+graft+injury+with+a+new+HTK-based+preservation+solution+in+a+murine+heart+transplantation+model.">Reduction of chronic graft injury with a new HTK-based preservation solution in a murine heart transplantation model.</a> Cryobiology. 64 (3), 273-278 (2012).</li></ol>

La tecnica chirurgica del trapianto di cuore addominale eterotopico nei topi è molto impegnativa e questo implica una restrizione all'uso diffuso di questo modello.
Uno degli svantaggi della tecnica convenzionale è la lunghezza limite dell'arteria polmonare del donatore (PA). Di solito è di circa 2 mm di lunghezza, mentre la lunghezza dell'IIVC del cuore donatore utilizzato nel nostro modello è generalmente di circa 1 cm(Figura 2). Ciò significa che nel model...

La tecnica chirurgica del trapianto di cuore addominale eterotopico nei topi rappresenta un modello standard per la ricerca nell'immunologia deitrapianti 1,2,3. Tuttavia, è molto difficile da eseguire e ciò implica una restrizione all'uso diffuso di questo modello4,5.
Nel trapianto tradizionale di cuore di topo (THTx), l'aorta donatrice e l'aorta addominale ricevente vengono anastomosi mentre l'arteria polmonare è anastomosa alla vena cava inferiorericevente 6,7,8.
In questa tecnica modificata di trapianto di cuore di topo, l'aorta donatrice viene anastomosa all'aorta addominale ricevente e il donatore IIVC viene anastomoso alla vena cava inferiore ricevente(3,4,6) ( Figura2 e Figura 3).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>30G-needles</td>
			<td>Braun</td>
			<td>456300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>acepromazine</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Tranquisol P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c AnNCrl mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen eye ointment</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 01578675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Micro Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11083-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Box for insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J&#160; mice</td>
			<td>Charles River. Germany</td>
			<td>no catalog number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CATHETER-FEP 26G</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Surflo-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip Applicator Forceps Style</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14114-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>custodiol/HTK</td>
			<td>Dr. Franz K&#246;hler Chemie</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutasept skin disinfection</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BODL980365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electrosurgical pen</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>CHANGE-A-TIP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze pads, cotton swabs</td>
			<td>Lohmann-Rauscher</td>
			<td>13353</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>THERMO MAT PRO 30W</td>
			<td>HTP-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic sponge</td>
			<td>CuraSpon</td>
			<td>J1276A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparine-solution</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 03029820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ice box</td>
			<td>PETZ</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inhalation anesthesia device</td>
			<td>GROPPLER</td>
			<td>BKGM 0616</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insulation and oxygen supply device</td>
			<td>RUSKINN</td>
			<td>INVIV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>CP Pharma</td>
			<td>Isofluran CP 1 ml/ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>metamizole</td>
			<td>WDT</td>
			<td>no catalog numer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00,15000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>LEICAMZ6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light</td>
			<td>SCHOTT</td>
			<td>KL2500LED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9%)</td>
			<td>Haus-Apotheke</td>
			<td>PZN 06178437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Peha Instruments</td>
			<td>991083/4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small Petri dish</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>833900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14113-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical tape</td>
			<td>BSN</td>
			<td>4120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture Tying Forceps - 10 cm</td>
			<td>FST</td>
			<td>18025-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(10-0)</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>N2540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(4-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>V4940H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures(7-0)</td>
			<td>ETHILON</td>
			<td>1647H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (0.3 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>324826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>BD</td>
			<td>320801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>Rompun</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

blood circuit reconstruction in an abdominal mouse heart transplantation model

La tecnica chirurgica del trapianto di cuore addominale eterotopico nei topi è un modello standard per la ricerca nell'immunologia dei trapianti. Qui viene presentata la tecnica stabilita per una ricostruzione modificata del circuito sanguigno in un modello di trapianto di cuore addominale eterotopico. Questo metodo utilizza la vena cava inferiore intratoracica (IIVC) invece dell'arteria polmonare del cuore donatore per l'anastomosi alla vena cava inferiore del ricevente. Sta facilitando e migliorando i tassi di successo per il trapianto di cuore addominale nei topi.

Qui viene presentata una tecnica modificata di trapianto di cuore addominale eterotopico nei topi che è stata precedentemente sviluppata nel nostro laboratorio e si è dimostrata utile negli ultimi 16 anni. In precedenza, è stato riferito che in generale 40 casi di vena cava a vena cava (gruppo V-V) rispetto a 40 casi della tradizionale arteria polmonare alla procedura di anastomosi vena cava (gruppo P-V)4 (Tabella 1) l'anastomosi del vaso ha preso 20,8±1,3 min nel gruppo V-V, ...

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Blood Circuit Reconstruction in an Abdominal Mouse Heart Transplantation Model

Viene dimostrata una nuova tecnica per la ricostruzione del circuito sanguigno in un modello eterotopico di trapianto di cuore di topo addominale.

Ricostruzione del circuito sanguigno in un modello di trapianto di cuore di topo addominale

The surgical technique of heterotopic abdominal heart transplantation in mice is a standard model for research in transplantation immunology. Here, the ...

Il trapianto di cuore nel topo è un modello prezioso per studiare la risposta alloimmune Qui, introduciamo una nuova tecnica chirurgica di trapianto di cuore addominale eterotopico nel topo. Nel trapianto tradizionale di cuore di topo l'aorta donatrice e l'aorta addominale ricevente sono anastomosi. L'arteria polmonare è anastomosa alla vena cava inferiore ricevente.In questo nuovo trapianto di cuore di topo. L'aorta donatrice è anastomosa all'aorta addominale ricevente e la vena cava inferiore intratoracica donatrice è anastomosa alla vena cava inferiore ricevente. Ora iniziamo la dimostrazione sperimentale.Dopo aver messo il mouse in scatola per l'inalazione di isoflurane e l'anestesia, pesare il mouse. Secondo il peso del topo, per dare iniezione intraperitoneale di chetamina xiazina acepromacina per anestetizzare il topo. Fissare e disinfettare il mouse sul tavolo di funzionamento quando l'anestesia ha avuto effetto.Tagliare la pelle dal collo all'addome inferiore. Tagliare i muscoli della parete addominale e rimuovere delicatamente i visceri a sinistra. Quindi, esponi la vena cava inferiore.Iniettare lentamente 0,4 millilitri della soluzione di eparina nella vena cava inferiore e attendere un minuto prima di estrarre l'ago. Estrarre l'ago e tagliare sia la vena cava inferiore che l'aorta addominale con forbici per accelerare la dissanguamento. Aprire la cavità toracica eseguendo un taglio a forma di U.Esporre completamente il cuore, i polmoni e tutti i vasi sanguigni toracica. Esporre l'aorta toracica. Taglia metà del lume.Inserire il tubo di irrigazione nell'apertura dell'aorta toracica. Tagliare la vena polmonare per facilitare l'irrigazione e il drenaggio. Iniettare almeno due millimetri di soluzione HTK di quattro gradi.Il cuore smette completamente di battere fino a quando il deflusso della vena polmonare è completamente chiaro. Estrarre il tubo di irrigazione e staccare lo sterno. Rimuovere il timo.Spogliare leggermente il grasso intorno all'arco aortico. Esporre e ligarare il tronco di arteria pulmonalis con una sutura 10 zero. Separare il fatto e il tessuto connettivo attaccato alla vena cava inferiore intratoracica Esporre e legare la vena cava superiore con sette sutura zero e tagliarla dietro la legatura.Fai una sutura a sette zero intorno alla base del cuore sotto l'arco aortico. Vena cava inferiore e entrambi i padiglioni auricolari, quindi ligate i rami dell'arteria polmonare e i vasi polmonari venosi. Trasmetti l'arco aortico il più distale possibile, ma assicurati di avere un lume chiaro senza le aperture dei rami laterali.I vasi polmonari sotto la legatura e la vena cava inferiore intratoracica vicino al diaframma. Ora, togli il cuore dal petto. Posizionare il cuore del donatore esimpiantato in una soluzione HDK fredda a 4 gradi e conservare temporaneamente.Assicurati di non prolungare un tempo di ischemia fredda più di 60 minuti. Ora, iniziamo a dimostrare l'operazione del recettore. I passaggi iniziali dell'operazione sono simili a quelli precedentemente mostrati per il topo donatore, tra cui anestesia e sterilizzazione.Pelle addominale tagliata in modo trasversale. Dopo la dissezione intestinale, coprire gli organi addominali con una garza bagnata usando una soluzione salina. Esporre la vena cava inferiore e l'aorta addominale e liberarle dal tessuto adiposo circostante.Se necessario, ligate o elettrocauterizzare i vasi laterali sotto i vasi renali. Inserire le prime forcep micro emostatiche da destra nella parte superiore del cervello e aorta sotto i vasi renali. Inserire le seconde forcep micro emostatiche da destra nella parte inferiore del cervello e dell'aorta.Ci sono più di un centimetro sia per l'aorta che per lo spazio venale per l'anastomosi tra due forcep emostatiche. Fare un'incisione nell'aorta, un po 'più vicino al morsetto inferiore rispetto al morsetto superiore. Inoltre, puoi usare un ago 30G per fare un piccolo foro e aprirlo con micro forbici.Posizionare il cuore nella cavità addominale. L'aorta in vista e la vena cava dall'altra parte e coprirla con un piccolo cuscinetto di garza bagnato. Adattare e cucire l'aorta donatrice all'aorta ricevente, iniziando caudally.Fai un nodo e procedi con una sutura da corsa fino alla cima di questa incisione, da quattro a cinque punti. Successivamente, capovolgere il cuore verso destra, coprirlo di nuovo e continuare la sutura sul lato sinistro fino a raggiungere l'estremità caudale e annodarla. Utilizzare micro forbici per tagliare un foro rotondo sulla vena cava inferiore addominale del ricevente, che dovrebbe avere le stesse dimensioni della vena cava lumen inferiore intratoracica del donatore.L'incisione deve essere posizionata cranica all'anastomosi aortica pianificata. Rendere l'incisione vena più grande dell'incisione aortica. Sciacquare la vena cava inferiore intratoracica del donatore.Cucire la vena cava inferiore intratoracica donatrice alla vena cava ricevente iniziando caudally. Legare un nodo ed eseguire una sutura di corsa fino a raggiungere la parte superiore dell'incisione. Utilizzare cinque punti e continuare la sutura a sinistra.Infine, legare un nodo in un angolo di coda e stringere con cura. Fare attenzione a non tirare troppo stretto. Posare piccole parti della spugna emostatica intorno alla vena e anastomosi aortica.Rimuovere prima i morsetti micro emostatici inferiori e poi superiori e sciacquare la cavità addominale con cloruro di sodio caldo allo 0,9%. Porta via la spugna emostatica. Osservare il battito cardiaco del cuore trapiantato.Se tutto è corretto, il cuore inizierà a contrarsi di nuovo. Rimettere l'intestino nella cavità addominale e chiuderlo con quattro suture zero. Fornire un ambiente caldo e ricco di ossigeno per il recupero dei topi trapiantati.Nel nostro precedente lavoro di ricerca, abbiamo riferito di un confronto tra complessivamente 40 casi di vena cava e vena cava contro i 40 casi della tradizionale arteria polmonare alla procedura di anastomosi vena cava. Il tempo di funzionamento per l'anastomosi della nave in un gruppo vena cava-vena cava è stato significativamente più breve rispetto all'arteria polmonare convenzionale al gruppo vena cava. La tecnica chirurgica del trapianto di cuore addominale eterotopico nei topi rappresenta un modello standard per la ricerca nell'immunologia dei trapianti.Questa nuova tecnica per la ricostruzione del circuito sanguigno qui presentata sta facilitando il trapianto di cuore addominale nei topi. E questo è chiamato concomitante con ridotta ischemia calda e tempo di ribeating del cuore innestato, migliorando così il tasso di successo di questo modello.

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