Name: laser doppler perfusion imaging in the mouse hindlimb
Uploaded: 2021-04-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb at JoVE.com

Bu çalışma VA Puget Ses Sağlık Merkezi'ndeki tesis ve kaynakların kullanımı ile gerçekleştirilmiştir. Çalışma yazarın eseridir ve Gazi İşleri Bakanlığı'nın veya Abd hükümetinin konumunu veya politikasını yansıtmak zorunda değildir. Dr Tang şu anda VA (Merit 5 I01 BX004975-02) aracılığıyla finanse ediliyor.

Hayvan deneyleri, Washington Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan bir protokole göre gerçekleştirildi.
1. Tarayıcı hazırlığı
<ol><li>Taranan nesneye olan mesafe yaklaşık 30 cm olacak şekilde tarayıcı yüksekliğini ayarlayın.</li>
	<li>Görüntüleyiciyi açın ve ilişkili yazılımı başlatın.</li>
	<li>Ölçüm programını açın. Yazılım tarayıcıyla doğru iletişim kuruyorsa, kızılötesi lazer açma uya...

<ol>
	<li>Varma, P., Stineman, M. G., Dillingham, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+limb+loss.">Epidemiology of limb loss.</a> Physical Medicine and Rehabilitation Clinics of North America. 25 (1), 1-8 (2014).</li><li>Farber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Limb-Threatening+Ischemia.">Chronic Limb-Threatening Ischemia.</a> New England Journal of Medicine. 379 (2), 171-180 (2018).</li><li>Abularrage, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+microcirculation+in+vascular+disease.">Evaluation of the microcirculation in vascular disease.</a> Journal of Vascular Surgery. 42 (3), 574-581 (2005).</li><li>Houben, A., Martens, R. J. H., Stehouwer, C. D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Microvascular+Function+in+Humans+from+a+Chronic+Disease+Perspective.">Assessing Microvascular Function in Humans from a Chronic Disease Perspective.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (12), 3461-3472 (2017).</li><li>Mahe, G., Humeau-Heurtier, A., Durand, S., Leftheriotis, G., Abraham, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+skin+microvascular+function+and+dysfunction+with+laser+speckle+contrast+imaging.">Assessment of skin microvascular function and dysfunction with laser speckle contrast imaging.</a> Circulation: Cardiovascular Imaging. 5 (1), 155-163 (2012).</li><li>Murray, A. K., Herrick, A. L., King, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+Doppler+imaging:+a+developing+technique+for+application+in+the+rheumatic+diseases.">Laser Doppler imaging: a developing technique for application in the rheumatic diseases.</a> Rheumatology (Oxford). 43 (10), 1210-1218 (2004).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeatability,+reproducibility+and+standardisation+of+a+laser+Doppler+imaging+technique+for+the+evaluation+of+normal+mouse+hindlimb+perfusion.">Repeatability, reproducibility and standardisation of a laser Doppler imaging technique for the evaluation of normal mouse hindlimb perfusion.</a> Sensors (Basel). 13 (1), 500-515 (2012).</li><li>Sonmez, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+laser-Doppler+flowmetry+assisted+murine+model+of+acute+hindlimb+ischemia-reperfusion+for+free+flap+research.">A novel laser-Doppler flowmetry assisted murine model of acute hindlimb ischemia-reperfusion for free flap research.</a> PLoS One. 8 (6), 66498 (2013).</li><li>Gargiulo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+some+anesthetic+agents+on+skin+microcirculation+evaluated+by+laser+Doppler+perfusion+imaging+in+mice.">Effects of some anesthetic agents on skin microcirculation evaluated by laser Doppler perfusion imaging in mice.</a> BMC Veterinary Research. 9, 255 (2013).</li><li>Ankri-Eliahoo, G., Weitz, K., Cox, T. C., Tang, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p27(kip1)+Knockout+enhances+collateralization+in+response+to+hindlimb+ischemia.">p27(kip1) Knockout enhances collateralization in response to hindlimb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 63 (5), 1351-1359 (2016).</li><li>McEnaney, R. M., Shukla, A., Madigan, M. C., Sachdev, U., Tzeng, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P2Y2+nucleotide+receptor+mediates+arteriogenesis+in+a+murine+model+of+hind+limb+ischemia.">P2Y2 nucleotide receptor mediates arteriogenesis in a murine model of hind limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 63 (1), 216-225 (2016).</li><li>Padgett, M. E., McCord, T. J., McClung, J. M., Kontos, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+Acute+and+Subacute+Murine+Hindlimb+Ischemia.">Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54166 (2016).</li><li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Murine model of hindlimb ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments. (23), e1035 (2009).</li><li>Chalothorn, D., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-dependent+variation+in+collateral+circulatory+function+in+mouse+hindlimb.">Strain-dependent variation in collateral circulatory function in mouse hindlimb.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 469-479 (2010).</li><li>Helisch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+mouse+strain+differences+in+innate+hindlimb+collateral+vasculature.">Impact of mouse strain differences in innate hindlimb collateral vasculature.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 26 (3), 520-526 (2006).</li><li>Faber, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging+causes+collateral+rarefaction+and+increased+severity+of+ischemic+injury+in+multiple+tissues.">Aging causes collateral rarefaction and increased severity of ischemic injury in multiple tissues.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 31 (8), 1748-1756 (2011).</li><li>Forrester, K. R., Stewart, C., Tulip, J., Leonard, C., Bray, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+laser+speckle+and+laser+Doppler+perfusion+imaging:+measurement+in+human+skin+and+rabbit+articular+tissue.">Comparison of laser speckle and laser Doppler perfusion imaging: measurement in human skin and rabbit articular tissue.</a> Medical &amp; Biological Engineering &amp; Computing. 40 (6), 687-697 (2002).</li><li>Briers, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+Doppler,+speckle+and+related+techniques+for+blood+perfusion+mapping+and+imaging.">Laser Doppler, speckle and related techniques for blood perfusion mapping and imaging.</a> Physiological Measurement. 22 (4), 35-66 (2001).</li><li>Heeman, W., Steenbergen, W., van Dam, G., Boerma, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+laser+speckle+contrast+imaging:+a+review.">Clinical applications of laser speckle contrast imaging: a review.</a> Journal of Biomedical Optics. 24 (8), 1-11 (2019).</li><li>Nguyen, T., Davidson, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrast+Enhanced+Ultrasound+Perfusion+Imaging+in+Skeletal+Muscle.">Contrast Enhanced Ultrasound Perfusion Imaging in Skeletal Muscle.</a> Journal of Cardiovascular Imaging. 27 (3), 163-177 (2019).</li><li>Zaccagnini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+Resonance+Imaging+Allows+the+Evaluation+of+Tissue+Damage+and+Regeneration+in+a+Mouse+Model+of+Critical+Limb+Ischemia.">Magnetic Resonance Imaging Allows the Evaluation of Tissue Damage and Regeneration in a Mouse Model of Critical Limb Ischemia.</a> PLoS One. 10 (11), 0142111 (2015).</li><li>Penuelas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PET+as+a+measurement+of+hindlimb+perfusion+in+a+mouse+model+of+peripheral+artery+occlusive+disease.">PET as a measurement of hindlimb perfusion in a mouse model of peripheral artery occlusive disease.</a> Journal of Nuclear Medicine. 48 (13), 1216-1223 (2007).</li><li>Jia, Y., Qin, J., Zhi, Z., Wang, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrahigh+sensitive+optical+microangiography+reveals+depth-resolved+microcirculation+and+its+longitudinal+response+to+prolonged+ischemic+event+within+skeletal+muscles+in+mice.">Ultrahigh sensitive optical microangiography reveals depth-resolved microcirculation and its longitudinal response to prolonged ischemic event within skeletal muscles in mice.</a> Journal of Biomedical Optics. 16 (8), 086004 (2011).</li><li>Turaihi, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Intravital+Microscopy+and+Contrast-enhanced+Ultrasonography+of+the+Mouse+Hindlimb+to+Study+Insulin-induced+Vasodilation+and+Muscle+Perfusion.">Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e54912 (2017).</li><li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+autophagy+alleviates+injury+during+hindlimb+ischemia/reperfusion+in+mice.">Enhanced autophagy alleviates injury during hindlimb ischemia/reperfusion in mice.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 18 (3), 1669-1676 (2019).</li><li>Liu, D. L., Svanberg, K., Wang, I., Andersson-Engels, S., Svanberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+Doppler+perfusion+imaging:+new+technique+for+determination+of+perfusion+and+reperfusion+of+splanchnic+organs+and+tumor+tissue.">Laser Doppler perfusion imaging: new technique for determination of perfusion and reperfusion of splanchnic organs and tumor tissue.</a> Lasers in Surgery and Medicine. 20 (4), 473-479 (1997).</li><li>Jing, Y., Bai, F., Chen, H., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Laser+Doppler+Imaging+and+Monitoring+to+Analyze+Spinal+Cord+Microcirculation+in+Rat.">Using Laser Doppler Imaging and Monitoring to Analyze Spinal Cord Microcirculation in Rat.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e56243 (2018).</li><li>Zhang, D., Li, S., Wang, S., Ma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+the+effect+of+a+gastric+ischemia-reperfusion+model+with+laser+Doppler+blood+perfusion+imaging.">An evaluation of the effect of a gastric ischemia-reperfusion model with laser Doppler blood perfusion imaging.</a> Lasers in Medical Science. 21 (4), 224-228 (2006).</li><li>Fitzal, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulatory+changes+after+prolonged+ischemia+in+the+epigastric+flap.">Circulatory changes after prolonged ischemia in the epigastric flap.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 17 (7), 535-543 (2001).</li></ol>

LDPI ile güvenilir sonuçlar elde etmek için tutarlı teknik kritik öneme sahiptir. Tüm zaman dilimi boyunca aynı anestezi, sıcaklık ayarları, fare konumu ve ilgi alanı kullanılmalıdır. Farklı anestezik ajanlar daha yüksek veya daha düşük perfüzyon değerlerine neden olur9. Isofluran anestezisi, hızlı başlaması ve ortaya çıkmasının yanı sıra genel güvenliği nedeniyle uygundur. Bu vazodilatör ajan ile anestezi derinliği olarak tutarlı bir izofluran yüzdesi deri per...

Yetersiz yara iyileşmesi ile cilt ülserasyon, insan hastalarda amputasyonların önde gelen bir nedenidir1. Yeterli yara iyileşmesi, periferik arteriyel hastalığı olan hastalarda tehlikeye giren sağlam cildi korumak için gerekenden daha yüksek arteriyel perfüzyon gerektirir2,3,4. Diğer birkaç romatolojik durum ve diyabet de yaraları iyileştirmek için rahatsız ve yetersiz cilt mikroserkülasyonuna yol açabilir5,6. Birçok diyabetik hastada eşlik eden periferik arteriyel hastalık vardır ve bu da onları özellikle amputasyon riskiyle karşı karşıya bırakarak. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI), klinik durumlarda cilt mikrosirkülasyonunu değerlendirmek için ve deneysel hindlimb iskemi, iskemi-reperfüzyon ve mikrocerrahi kapaklar7'densonra kan akışını ve kan akışı iyileşmesini değerlendirmek için araştırma durumlarında kullanılır.
LDPI sistemi, ilgi çekici bir bölge üzerinde hareket etmek için bir tarama aynası tarafından saptırılan düşük güçlü bir lazer ışını yansıtır. Bu, akış dektiyometrisiprobu 8ile doğrudan temas halinde olan küçük doku alanı için perfüzyon ölçümü sağlayan Lazer Doppler akış debimetrisinden farklıdır. Lazer ışını mikrovaskültürdeki hareketli kanla etkileşime girdiğinde, tarayıcı tarafından foto algılanan ve rastgele perfüzyon ünitelerine dönüştürülen bir Doppler frekans değişimine uğrar. LDPI ışık tabanlı bir teknik olduğundan, penetrasyon derinliği açısından 0,3-1 mm ile sınırlıdır, yani çoğunlukla dermal perfüzyon7. Dermal akış cilt sıcaklığı ve çeşitli anestezik ajanlardan etkilenebilecek sempatik sinir sistemi ile değiştirilebilir9. Optik lazerden yapılan ölçümler de ortam aydınlatma koşullarından, cilt pigmentasyonundan etkilenir ve aşırı kürk veya saç7ile engellenebilir.
LDPI, iskemi sonrası perfüzyon iyileşmesini izlemek için en sık kullanılan araştırma tekniğidir, çünkü invaziv değildir, kontrast yönetimi gerektirmez ve birden fazla hayvanda veri toplanmasına izin vermek için hızlı tarama sürelerine sahiptir. Bu, terapötik arteriogenez veya anjiogenez amaçlayan tedavilerin küçük hayvan modellerinde etkili olup olmadığını belirlemeye yardımcı olmak için idealdir. LDPI ile ölçülen hindlimb iskemi sonrası kan akışıiyileşmesi,Microfil döküm veya mikro-CT10, 11gibi diğer yollarla değerlendirildiğinde kollateral arter gelişimi ile iyiilişkilidir. Bu protokolün amacı, LDPI kullanılarak hindlimb perfüzyonunun değerlendirilmesini göstermektir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Black nonreflective material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Fabric store, black neoprene recommended by company</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/air cannister</td>
			<td>A.M. Bickford Inc</td>
			<td>80120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket with rigid metal probe</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td>Also comes with flexible probe, but this is less durable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane Anesthesia machine</td>
			<td>Drager</td>
			<td></td>
			<td>Multiple manufacturers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane induction chamber</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>941444</td>
			<td>2 L chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moor laser Doppler perfusion imager</td>
			<td>Moor Instruments</td>
			<td>MoorLDI2-IR</td>
			<td>Higher resolution imager (MoorLDI2-HIR)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Anesthesia nose cone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Multiple manufacturers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen tank</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Multiple manufacturers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgilube</td>
			<td>Multiple distributors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laser doppler perfusion imaging in the mouse hindlimb

Kan akışı iyileşmesi deneysel hindlimb iskemi veya iskemi-reperfüzyondan sonra kritik bir sonuç ölçüsüdür. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme (LDPI), kan akışı iyileşmesini değerlendirmek için yaygın, noninvaziv, tekrarlanabilir bir yöntemdir. Teknik, örneklenen dokudaki genel kan akışını, bir lazerin hareketli kırmızı kan hücrelerine çarpması sonucu ortaya çıkan frekanstaki Doppler kaymasından hesaplar. Ölçümler rastgele perfüzyon üniteleri ile ifade edilir, bu nedenle bacak üzerinde müdahale edilmeyen kontrallateral genellikle ölçümleri kontrol etmeye yardımcı olmak için kullanılır. Ölçüm derinliği 0,3-1 mm aralığındadır; hindlimb iskemi için bu, dermal perfüzyonin değerlendirildiği anlamına gelir. Dermal perfüzyon çeşitli faktörlere bağlıdır - en önemlisi cilt sıcaklığı ve anestezik ajan, güvenilir okumalarla sonuçlanacak şekilde dikkatlice kontrol edilmelidir. Ayrıca, saç ve cilt pigmentasyonu lazerin dermis'e ulaşma veya nüfuz etme yeteneğini değiştirebilir. Bu makalede, fare arkalığındaki LDPI tekniği göstermektedir.

Başarılı LDPI, üç tarama arasında en fazla 100-150 perfüzyon ünitesi varyasyonu (fare ayak takımı için normal ortalama perfüzyonun yaklaşık% 10'una karşılık gelir) ile tutarlı tekrarlanan önlem taramalarına neden olmalıdır (Şekil 2). Şekil 2'degösterildiği gibi, tekrarlanan taramalar farenin uygun şekilde dengelendiğini belirlemeye yardımcı olur, böylece iskemik/kontrol oranı, sıcaklık değişiminin neden olduğu dermal perfüzy...

Watch this Scientific Journal Video about Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb at JoVE.com

Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb

Burada, fare arkalığındaki kan akışını ölçmek için Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme tekniğini ve gerekli kontrolleri gösteren bir protokol sunuyoruz.

Fare Hindlimb Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is ...

Yara iyileşmesi yetersiz olan cilt ülserasyon, insan hastalarda amputasyonun önde gelen nedenlerinden biridir. Yeterli yara iyileşmesi, periferik arteriyel hastalığı olan hastalarda tehlikeye giren sağlam cildi korumak için gereken daha yüksek arteriyel bolluk seviyeleri gerektirir. Diğer birçok romatolojik durum ve diyabet de yaraları iyileştirmek için rahatsız ve yetersiz cilt mikroskrkülasyonuna yol açabilir.Birçok diyabetik hastada eşlik eden periferik arteriyel hastalık vardır ve bu da onları özellikle amputasyon riskiyle karşı karşıya bırakarak. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme veya LDPI, klinik durumlarda cilt mikrosirkülasyonunu değerlendirmek için olduğu gibi deneysel hindlimb iskemi, iskemi reperfüzyonu ve mikrocerrahi kapaklardan sonra kan akışını ve kan akışı iyileşmesini değerlendirmek için araştırma durumlarında kullanılır. LDPI sistemi, ilgi çekici bir bölge üzerinde hareket etmek için bir tarama aynası tarafından saptırılan düşük güçlü bir lazer ışını yansıtır.Bu, akış dektiyometrisi probu ile doğrudan temas halinde küçük doku alanı için perfüzyon ölçümü sağlayan lazer Doppler akış debisinden farklıdır. Lazer ışını mikrovaskülürdeki hareketli kanla etkileşime girdiğinde, tarayıcı tarafından foto algılanan ve rastgele perfüzyon ünitelerine dönüştürülen bir Doppler frekans değişimine uğrar. LDPI ışık tabanlı bir teknik olduğundan, penetrasyon derinliği açısından 0,3 ila 1 milimetre ile sınırlıdır, yani çoğunlukla dermal perfüzyon değerlendirilir.Dermal akış, cilt sıcaklığı ve çeşitli anestezik ajanlardan etkilenebilecek sempatik sinir sistemi ile değiştirilebilir. Optik lazerden yapılan ölçümler de ortam aydınlatma koşullarından, cilt pigmentasyonundan etkilenir ve aşırı kürk veya saç ile engellenebilir. LDPI, iskemi sonrası bol miktarda iyileşmeyi izlemek için en sık kullanılan araştırma tekniğidir, çünkü invaziv değildir, kontrast yönetimi gerektirmez ve birden fazla hayvanda veri toplanmasına izin vermek için hızlı tarama sürelerine sahiptir.Bu, terapötik arteriogenez veya anjiogenez amaçlayan tedavilerin küçük hayvan modellerinde etkili olup olmadığını belirlemeye yardımcı olmak için idealdir. LDPI ile ölçülen hindlimb iskemi sonrası kan akışı iyileşmesi, mikro dolgu dökümü veya mikro BT gibi diğer yollarla değerlendirildiğinde kollateral arter gelişimi ile iyi ilişkilidir. Bu protokolün amacı, LDPI kullanılarak hindlimb perfüzyonunun değerlendirilmesini göstermektir. Tarayıcı yüksekliğini, tarama konusuna olan mesafe yaklaşık 30 santimetre olacak şekilde ayarlayın.Görüntüleyiciyi açın ve ilişkili yazılımı başlatın. Ölçüm programını açın. Yazılım tarayıcı ile doğru iletişim kuruyorsa kızılötesi lazer açma uyarısı görünecektir.Tarayıcı ayarlarını, odadaki arka plan malzemesi ve aydınlatma kurulumuna uygun olacak şekilde ayarlayın. Lazer ışınını siyah arka plan malzemesine doğrultarak arka plan eşiğini ayarlayın ve Otomatik BK Seti'ne basın. Atık gazın uygun şekilde atılması ile izofluran indüksiyon odasını kurun.İndüksiyon odasını bir ısıtma pedi üzerine yerleştirmek, anestezi indüksiyonu sırasında fare sıcaklık kaybını önlemeye yardımcı olacaktır. Yansıtıcı olmayan bir yüzeyin altındaki tarama alanına yerleştirilen homeotermik battaniyeyi açın. Bu durumda, siyah bir neopilen kumaş.Homeotermik battaniye, vücut sıcaklığını 37 santigrat derece koruyacak şekilde ayarlanmıştır. Sıcaklık probunu ve yağlayıcıları yerleştirmeye hazır olacak şekilde konumlandırın. Anestezi yüz maskesini ve atma sistemini de tarama alanına yerleştirin.Fareyi bir izofluran buharlaştırıcı ile uyuşturun. Oksijen hızı dakikada bir litre akışa ayarlanır. Ve izofluran anestezi indüksiyonu için% 4'e ayarlanır.Akış anestezi indüksiyon odasına açılır ve fare solunum hızı yavaşlar. Fare sağ refleksini kaybettiğinde yeterli anestezi elde edilir. Fareyi ekli atık gaz leş yiyici ile anestezik maske burun konisine aktarın ve izofluranları% 1.5'e ayarlayın Bu anestezi seviyesi genellikle tarama sırasında fareyi nispeten hareketsiz tutmak için yeterlidir, ancak cerrahi anestezi seviyeleri sağlamak için tasarlanmamıştır.Yani anestezinin derinliği kontrol edilir. İzofluran seviyesini değiştirmek kalp atış hızında, solunumda ve dermal profusionda değişikliklere neden olur. Bu nedenle, herhangi bir zaman kursu deneyi boyunca ve tüm deneysel denekler için tutarlı bir yüzde kullanılmalıdır.Ketamin ksilazinin IP enjeksiyonu gibi alternatif anestezi teknikleri de kullanılabilir, ancak farklı anestezikler dermal profusion'u farklı şekilde etkilediği için herhangi bir ders çalışması boyunca aynı anestezi tekniği kullanılmalıdır. Taranacak plan bölgesi kürkle kaplıysa, saçı ilgi çekici bölgeden çıkarmak için küçük bir elektrikli düzeltici ve/veya depilatör krem kullanın. Islak cilt lazerden yansımalara neden olabileceğinden, depilatör kremler tamamen çıkarılmalı ve taramadan önce fare derisi kurutulmalıdır Homeotermik battaniye ile ilişkili yağlanmış rektal sıcaklık probunu fare rektumuna yerleştirin.Tarama sıcaklığını arzulamak için fare sıcaklığını dengele, 37 santigrat derece. Bu beş ila 10 dakika kadar sürebilir. Üst menüden veya Tarayıcı Kurulumu simgesinden erişilebilen Tarayıcı Kurulumu'nu seçin.Tarama alanı, ilgi alanına uyum sağlamak için X, Y koordinatları değiştirilerek ayarlanmalıdır. Tarama hızı tarama çözünürlüğüne bağlı olacaktır. Daha yüksek çözünürlük, daha uzun tarama süreleri sağlar.Anatomik perfüzyona odaklanan daha yüksek çözünürlüğün aksine, küresel profusion'a odaklanan tekrar tarama için, piksel başına dört milisaniyelik en yüksek tarama hızı yeterlidir. Yineleme taramaları yapıyorsanız, Yineleme ve Satır Taraması sekmesini seçin. Tarama sayısı değiştirilebilir.Bu durumda, üç taramanın yanı sıra yineleme aralığı. Yineleme aralığı için en az süre, kutunun sağındaki gri renkteki alanda gösterilen, tarama alanı ve tarama çözünürlüğü ile belirlenen tahmini tarama süreleri olacaktır. Birkaç saniye eklemek, kullanıcının taramalar arasında gerekirse fareyi duraklatmasını ve yeniden konumlandırmasını sağlar.Bu durumda toplam tarama süresi üç dakika 21 saniyedir. Görüntü Taraması sekmesini seçin ve İşaretle düğmesini seçin. Bu, lazerin tarama alanını ana hatlarıyla belirlemesine neden olur.Taranacak hedef işaretli alan içinde olacak şekilde fare konumunu ayarlayın. Taramayı Yinele simgesini seçip taramayı başlatmak için Oynat düğmesine basarak tekrarlanan ölçümü başlatın. Tarama mesafesini onaylayan bir açılır pencere görünecektir.Taramaya başlamak için Tamam'ı tıklatın. Hindlimb iskemi indüksiyonu öncesi bir farenin ilk taraması gerçek zamanlı olarak gösterilir. İkinci ve üçüncü tekrar taramaları 16x hıza hızlandırılmıştır.Ana pencere, yazılım tarafından oluşturulan taramanın sonuçlarını gösterir. Sağ alttaki içe, lazerin fare ayaklıklarını tarayıp taramasını gösterir. Ayak takımı veya ayak takımı ve dorsal baldır taraması için, kuyruğa doğru uzatılmış arkalıklarla eğilimli konumlandırma, sırtüstü konumlandırmaya daha tutarlı bir ilgi alanı sağlar.Femoral arter, saphenöz arter ve kollateraller uyluk ve baldırın ventral yüzeyine çok yakındır. Bu nedenle, bu ilgi alanlarını kullanıyorsanız supine konumlandırma tercih edilir. Fare hareketini tarama sırasında fareyi izleyin.Fare, ayak altlıklarının artık taramanın ortasındaki tarama bölgesinde olmayacak kadar hareket ederse, taramayı yeniden başlatın. Fare ayak takımı konumundaki küçük varyasyonlar analiz yazılımında bulunabilir. Ayrıca, tarama işlemi sırasında fare sıcaklığını izleyin, çünkü homeotermik battaniyenin kullanımıyla bile dalgalanabilir.Fare sıcaklığında çok fazla değişiklik varsa, bu taramalar arasında önemli bir değişime neden olabilir. Genellikle, 36,8 ila 37,2 sıcaklık aralığı kabul edilebilir verilerle sonuçlanacaktır. Yakalanan taramayı Farklı Kaydet penceresinin altına, daha kolay veri çözümlemesi için fare tanımlayıcısı ve zaman noktası içeren bir dosya adıyla kaydedin.Konu Ayrıntıları penceresinde istenirse fare ve zaman noktası ayrıntılarını girin. Arkadaki fare ile ventral hindlimb taraması, tarama alanı ayarlandıktan sonra burada gösterilir. Fare supine ile önermenin, ayağın yan tarafının değişken bir kısmının taranmasıyla sonuçlandığını unutmayın.Rektal sıcaklık probını çıkarın ve bir sonraki fare için hazır olacak şekilde% 70 etanol ile dezenfekte edin. İsoflurane'yi% 0'a düşürün Fare oksijen almaya devam ederse daha hızlı iyileşir, ancak ek oksijen olmadan da kurtarılabilir. Farenin anesteziden kafese dönmeden önce supine konumundan eğilimli konuma dönerek sağa doğru refleks gösterdiği noktaya kadar iyileşmesine izin verin.İyileşme izofluran için bir ısıtma battaniyesi üzerinde gerçekleştirilebilir, çünkü iyileşme çok hızlıdır veya ketamin ksilazin için sıcak bir iyileşme kafesindedir. Görüntüleme gözden geçirme yazılım programını açın. Taramaları gözden geçirmek için yeni bir pencere açılacaktır.Dosya menüsüne gidin, Kaydedilen dosyayı açın ve bulun. Araç çubuğundan yatırım getirisi simgesini seçin. Çokgen Ekle simgesini seçin.Fareyi kullanarak ilgi çekici bölgenin etrafındaki bir alanı izleme. İşiniz bittiğinde, araç çubuğuna geri dönün ve İstatistikler simgesini seçin. Bu, ilgi çekici bölgeden istatistikleri gösteren bir pencere açacaktır.Veri incelemesinde, ortalama bolluk birimi veya PU değerleri, her ayak takımı için tekrarlanan taramalar üzerinde 100 ila 150 PU'dan fazla değişmez. Bu kabul edilebilir bir taramadır ve tarama sırasında farenin iyi dengelenmiş olduğunu gösterir. Tekrarlanan taramalar üzerinde çalışmayan bir fare ayak takımı için ortalama perfüzyonun% 10'undan fazlasına karşılık gelen 100 ila 150 PU'dan daha büyük varyasyona sahip ortalama PU değerleri, farenin iyi dengelenmemiş olduğunu gösterir ve tekrar tarama şiddetle önerilir.Tarama tamamlandıktan hemen sonra hızlı bir analiz yapmak, fare hala uyuşturulurken tekrar tarama yapılmasına izin verir ve taramalar daha sonraki bir tarihte analiz edilirse ve tekrarlanan taramalar arasındaki önemli değişiklik nedeniyle bir tarama kabul edilemez kabul edilirse oluşabilecek bir veri noktasını kaybetmekten kaçının. Sonuçlar, fareler başlangıçta vasodilat ve daha sonra içsel teminatlarını geliştirirken kontrol hindlimb perfüzyonu üzerinde cerrahi hindlimb bolluğu oranı olarak ifade edilir, LDPI ile kan akışı iyileşmesi ameliyat sonrası bir zaman seyrinde görülmelidir. İyileşme derecesi, fare zorlanmasına ve hindlimb iskemi modelinin şiddetine bağlıdır.Bu rakam, LDPI'nın femoral arter ligasyonu ve P27 nakavt ve vahşi tip C57Bl / 6 fareler sonrasında zaman içinde ayaküstü kan akışı iyileşmesini ölçmek için kullanıldığı 28 gün boyunca tamamlanmış bir zaman kursu deneyini göstermektedir. Vahşi tip farelerde her iki P27 nakavt da, genelleştirilmiş bir matris metalloproteinaz inhibitörü olan oral doksiksin ile tedavi edildiğinde kan akışı iyileşmesini bozmuştu ve MMP aktivitesinin arteriogenezi kolaylaştırdığını düşündürmektedir. Kazanç kurulumu ve arka plan eşiği, tüm zaman kursu denemesi için sabit tutulmalıdır.Arka plan eşiği çok düşük ayarlanmışsa, arka plan malzemesini taramak düşük bolluk değerlerine neden olur. Bu, arka plan bol miktarda değerin çokgen seçimi sırasında ilgi alanına ortalamasına neden olur. Bu sorunu ortadan kaldırmak için, arka plan eşiği Genel sekmesinin altındaki Tarayıcı Kurulumu penceresinde ayarlanabilir.Bu durumda, arka plan eşiğinin 118 bolluk birimine çıkarılması, herhangi bir analize dahil edilmeyecek gri arka planla sonuçlanır. Akı görüntüsünün paleti veya renk ölçeği hem ölçüm yazılımında hem de görüntü inceleme yazılımında ayarlanabilir. Ölçekteki maksimum değerden büyük tüm bolluk değerleri en yüksek bolluk rengi olarak görüntülenir.Bu durumda, kırmızı. Dinamik aralığın artırılması, örneğin ölçeğin sıfırdan 1500'e değiştirilmesi, 1000 ila 1500 bolusion birimi arasındaki alanlar artık kırmızı olarak gösterilmek yerine renk gradyanı kullanılarak görüntüleneceğinden, tekrar tarama varyasyonunu gözle daha belirgin hale getirecektir. Burada gösterilen tarama, tekrarlanan taramanın başlangıcında çekirdek vücut sıcaklığı başlangıçta 36,8'in altında olan ve daha sonra tekrarlanan taramalar üzerinde artan bir farede elde edildi.Kontrol ayak takımı ortalama bollaşmasının, iskemik ayak altlığa göre daha soğuk çekirdek vücut sıcaklığından daha fazla etkilendiğini unutmayın. Daha soğuk vücut sıcaklığının tek bir taraması, bu veri noktası için daha yüksek bir bol miktarda kaydedilmesine neden olurdu. C57Bl/6 farelerde görülebileceği gibi fare derisi pigmentasyonundaki varyasyon, tarama alanının arka plan eşik değerinin altında olmasına neden olabilir ve bu da pigmentli alanlar içeren ilgi alanlarının analizini zorlaştırır.Genel olarak fare ayak altlıkları hiperpigmentasyona sahip değildir, bu da bu fare zorlanması için taramak için en uygun alandır. Araştırmacı ventral hindlimb'i incelemek istiyorsa, beyaz bir fare suşu seçilmelidir. LDPI, genel arteriyel perfüzyonun bir yansıması olarak hindlimb dermal profusion ölçümü için etkili, kolay gerçekleştirilen ve tekrarlanabilir bir yöntemdir.Güvenilir veri elde etmek için LDPI kullanırken tutarlı teknik gereklidir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Mikro Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için hazırlık olarak retrograd perfüzyon ve Fare Koroner damarları doldurulması

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Osmotic Drug Delivery to Ischemic Hindlimbs and Perfusion of Vasculature with Microfil for Micro-Computed Tomography Imaging

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi Görüntüleme için Microfil ile İskemik arka ayaklarında ve damarları bir Perfüzyon için osmotik İlaç Taşıyıcı

Preclinical research in animal models of peripheral arterial disease plays a vital role in testing the efficacy of therapeutic agents designed to ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Fare Aortocaval Fistül Teknik Yönleri

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

Intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi fare Hindlimb, insülin kaynaklı vazodilatasyon ve kas perfüzyon çalışmaya kombine

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Imaging Metals in Brain Tissue by Laser Ablation - Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry (LA-ICP-MS)

Imaging Metals in Brain Tissue by Laser Ablation - Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry LA-ICP-MS

İndaktif Plazma - - Lazer Ablasyon Beyin Dokusu Görüntüleme Metaller Kütle Spektrometresi (LA-ICP-MS)

Metals are found ubiquitously throughout an organism, with their biological role dictated by both their chemical reactivity and abundance within a ...

Cardiac Magnetic Resonance Imaging at 7 Tesla

7 Tesla, kardiyak manyetik rezonans görüntüleme

CMR at an ultra-high field (magnetic field strength B0&#160;&#8805; 7 Tesla) benefits from the signal-to-noise ratio (SNR) advantage inherent at higher ...

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

Lazer Doppler: pankreas adacık mikrovasküler Vasomotion Vivo içinde ölçüm için bir araç

As a functional status of microcirculation, microvascular vasomotion is important for the delivery of oxygen and nutrients and the removal of carbon ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...