Name: using immunofluorescence to detect pm2.5-induced dna damage in zebrafish embryo hearts
Uploaded: 2021-02-15T13:00:00
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Diese Arbeit wurde von der National Nature Sciences Foundation of China (Förderkennzeichen: 81870239, 81741005, 81972999) und The Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions unterstützt.

Wildtyp-Zebrafische (AB), die in dieser Studie verwendet wurden, wurden vom National Zebrafish Resource Center in Wuhan, China, bezogen. Alle hier beschriebenen Tierverfahren wurden von der Animal Care Institution der Ethikkommission der Soochow University überprüft und genehmigt.
1. PM2.5 Probenahme und Extraktion organischer Verbindungen
HINWEIS: PM2.5 wurde in einem städtischen Gebiet in Suzhou, China, vom 1. bis 7. August 2015 gesammelt, w...

<ol>
	<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Exposure+to+Air+Pollution+and+Risk+of+Congenital+Heart+Defects.">Maternal Exposure to Air Pollution and Risk of Congenital Heart Defects.</a> European Journal of Pediatrics. 175, 1520 (2016).</li><li>Huang, C. C., Chen, B. Y., Pan, S. C., Ho, Y. L., Guo, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+exposure+to+PM2.5+and+Congenital+Heart+Diseases+in+Taiwan.">Prenatal exposure to PM2.5 and Congenital Heart Diseases in Taiwan.</a> The Science of the Total Environment. 655, 880-886 (2019).</li><li>Mesquita, S. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+damage+induced+in+A549+cells+by+physically+and+chemically+characterized+air+particulate+matter+(PM2.5)+collected+in+Abidjan,+Cote+d'Ivoire.">Oxidative damage induced in A549 cells by physically and chemically characterized air particulate matter (PM2.5) collected in Abidjan, Cote d'Ivoire.</a> Journal of Applied Toxicology. 30, 310-320 (2010).</li><li>Gualtieri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+of+A549+cells+exposed+to+Milan+PM2.5.">Gene expression profiling of A549 cells exposed to Milan PM2.5.</a> Toxicology Letters. 209, 136-145 (2012).</li><li>Li, S. Y., Sigmon, V. K., Babcock, S. 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Part B, Biochemistry &amp; Molecular Biology. 136, 731-742 (2003).</li><li>Moazzen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-Acetylcysteine+prevents+congenital+heart+defects+induced+by+pregestational+diabetes.">N-Acetylcysteine prevents congenital heart defects induced by pregestational diabetes.</a> Cardiovascular Diabetology. 13, 46 (2014).</li><li>Sun, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-acetylcysteine,+reactive+oxygen+species+and+beyond.">N-acetylcysteine, reactive oxygen species and beyond.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 9, 109-110 (2010).</li><li>Tu, S., Chi, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+models+in+cardiac+development+and+congenital+heart+birth+defects.">Zebrafish models in cardiac development and congenital heart birth defects.</a> Differentiation. 84, 4-16 (2012).</li><li>Asnani, A., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+tool+to+identify+novel+therapies+for+human+cardiovascular+disease.">The zebrafish as a tool to identify novel therapies for human cardiovascular disease.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 7, 763-767 (2014).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxic+effects+of+polychlorinated+biphenyls+on+cardiac+development+in+zebrafish.">Toxic effects of polychlorinated biphenyls on cardiac development in zebrafish.</a> Molecular Biology Reports. 41, 7973-7983 (2014).</li><li>Massarsky, A., Prasad, G. L., Di Giulio, R. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+consensus+on+cardiac+regeneration.">An emerging consensus on cardiac regeneration.</a> Nature Medicine. 20, 1386-1393 (2014).</li><li>Yue, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+folic+acid+on+PM2.5-induced+cardiac+developmental+toxicity+in+zebrafish+embryos+by+targeting+AhR+and+Wnt/beta-catenin+signal+pathways.">Protective effects of folic acid on PM2.5-induced cardiac developmental toxicity in zebrafish embryos by targeting AhR and Wnt/beta-catenin signal pathways.</a> Environmental Toxicology. 32, 2316-2322 (2017).</li><li>Zhao, X., Ren, X., Zhu, R., Luo, Z., Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+oxide+nanoparticles+induce+oxidative+DNA+damage+and+ROS-triggered+mitochondria-mediated+apoptosis+in+zebrafish+embryos.">Zinc oxide nanoparticles induce oxidative DNA damage and ROS-triggered mitochondria-mediated apoptosis in zebrafish embryos.</a> Aquatic Toxicology. 180, 56-70 (2016).</li><li>Zhao, X., Wang, S., Wu, Y., You, H., Lv, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ZnO+nanoparticles+exposure+induces+developmental+toxicity,+oxidative+stress+and+DNA+damage+in+embryo-larval+zebrafish.">Acute ZnO nanoparticles exposure induces developmental toxicity, oxidative stress and DNA damage in embryo-larval zebrafish.</a> Aquatic Toxicology. 136-137, 49-59 (2013).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage+and+effects+on+glutathione-S-transferase+activity+induced+by+atrazine+exposure+in+zebrafish+(Danio+rerio).">DNA damage and effects on glutathione-S-transferase activity induced by atrazine exposure in zebrafish (Danio rerio).</a> Environmental Toxicology. 26, 480-488 (2011).</li></ol>

Obwohl Zebrafische ein ausgezeichnetes Wirbeltiermodell für die Untersuchung der kardialen Entwicklungstoxizität von Umweltchemikalien sind, ist es aufgrund der geringen Größe des Embryoherzes schwierig, genügend Protein für die Western-Blot-Analyse zu erhalten. Daher präsentieren wir eine empfindliche Immunfluoreszenzmethode zur Quantifizierung der Proteinexpressionsniveaus von DNA-Schadensbiomarkern in den Herzen von Zebrafischembryonen, die PM2,5ausgesetzt sind.
Während d...

Luftverschmutzung ist heute ein ernstes Umweltproblem, mit dem die Welt konfrontiert ist. Feinstaub (PM2.5),einer der wichtigsten Indikatoren für die Luftqualität, kann eine große Anzahl von Schadstoffen enthalten und in den Blutkreislauf gelangen, was die menschliche Gesundheit ernsthaft schädigt1. Epidemiologische Studien haben gezeigt, dass eine PM2.5-Exposition zu einem erhöhten Risiko für angeborene Herzfehler (KHK) führen kann2,3. Beweise aus Tierversuchen zeigten auch, dass PM2,5 eine abnormale Herzentwicklung bei Zebrafischembryonen und den Nachkommen von Mäusen verursachenkann,aber die molekularen Mechanismen der kardialen Entwicklungstoxizität von PM2,5 sind noch weitgehend unbekannt4,5,6.
DNA-Schäden können zu einem Stillstand des Zellzyklus führen und apoptose induzieren, was das Potenzial von Vorläuferzellen weitgehend zerstören und folglich die Herzentwicklung beeinträchtigen kann7). Es ist gut dokumentiert, dass Umweltschadstoffe, einschließlich PM2,5,das Potenzial haben, DNA durch oxidative Stressmechanismen anzugreifen8,9. Sowohl die herzische Entwicklung des Menschen als auch des Zebrafisches reagiert empfindlich auf oxidativen Stress10,11,12. 8-OHdG ist ein oxidativer DNA-Schadensmarker, und das γH2AX-Signal ist ein Marker für DNA-Doppelstrangbrüche. N-Acetyl-L-Cystein (NAC), ein synthetischer Vorläufer von intrazellulärem Cystein und Glutathion, wird häufig als antioxidative Verbindung verwendet. In dieser Studie verwenden wir NAC, um die Rolle von oxidativem Stress bei PM2,5- induzierten DNA-Schäden13zu untersuchen.
Zebrafisch als Modellwirbeltier wurde häufig verwendet, um die Herzentwicklung und menschliche Herz-Kreislauf-Erkrankungen zu untersuchen, da Mechanismen der Herzentwicklung bei Wirbeltieren hoch konserviert sind14,15. Zu den Vorteilen der Verwendung von Zebrafischen als Modell gehören ihre geringe Größe, ihre starke Fortpflanzungsfähigkeit und ihre niedrigen Fütterungskosten. Von besonderem Interesse für diese Studien sind Zebrafischembryonen, die während der frühen Entwicklung nicht vom Kreislaufsystem abhängig sind und schwere Herzfehlbildungen überleben können14. Darüber hinaus ermöglicht ihre Transparenz die direkte Beobachtung des gesamten Körpers unter dem Mikroskop. Somit bieten Zebrafischembryonen eine hervorragende Gelegenheit, die molekularen Mechanismen zu bewerten, die an der Induktion der kardialen Entwicklungstoxizität infolge der Exposition gegenüber verschiedenen Umweltchemikalien beteiligt sind5,16,17. Wir haben bereits berichtet, dass PM2,5-induzierteroxidativer Stress zu DNA-Schäden und Apoptose führt, was zu Herzfehlbildungen bei Zebrafischen führt18. In dieser Studie stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Untersuchung von PM2,5-induziertenDNA-Schäden im Herzen von Zebrafischembryonen zur Verfügung.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-OHdG Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, USA</td>
			<td>sc-66036</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Sartorius,China</td>
			<td>BSA124S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Solarbio,Beijing,China</td>
			<td>SW3015</td>
			<td>For blocking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam, USA</td>
			<td>ab104139</td>
			<td>For nuclear counterstain.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Solarbio,Beijing,China</td>
			<td>D8371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus, Japan</td>
			<td>IX73</td>
			<td>For imaging fluorescence signals/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG Cy3</td>
			<td>Carlsbad,USA</td>
			<td>CW0159</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG FITC</td>
			<td>Carlsbad,USA</td>
			<td>RS0003</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine(NAC)</td>
			<td>Adamas-Beta, Shanghai, China</td>
			<td>616-91-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>QILINBEIER,China</td>
			<td>TS-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma,China</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Make 4% paraformaldehyde for fixation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>HyClone,USA</td>
			<td>SH30256.01</td>
			<td>Prepare 0.1% Tween in PBS for washing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PM2.5 sampler</td>
			<td>TianHong,Wuhan, China</td>
			<td>TH-150C</td>
			<td>For 24-hr uninterrupted PM2.5 sampling.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Re-circulating aquaculture system</td>
			<td>HaiSheng,Shanghai,China</td>
			<td></td>
			<td>The zebrafish was maintained in it.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soxhlet extractor</td>
			<td>ZhengQiao,Shanghai, China</td>
			<td>BSXT-02</td>
			<td>For organic components extraction.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon,Canada</td>
			<td>SMZ645</td>
			<td>For heart dissection from zebrafish embryos.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulfonate (MS222)</td>
			<td>Sigma,China</td>
			<td>E10521</td>
			<td>To anesthetize zebrafish embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma,China</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#947;H2AX Antibody</td>
			<td>Abcam, USA</td>
			<td>ab26350</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using immunofluorescence to detect pm2.5-induced dna damage in zebrafish embryo hearts

Die Exposition gegenüber Feinstaub (PM2,5)in der Umgebung kann zu einer kardialen Entwicklungstoxizität führen, aber die zugrunde liegenden molekularen Mechanismen sind noch unklar. 8-Hydroxy-2'-Desoxygenase (8-OHdG) ist ein Marker für oxidative DNA-Schäden und γH2AX ist ein empfindlicher Marker für DNA-Doppelstrangbrüche. In dieser Studie wollten wir PM2,5-induzierte8-OHdG- und γH2AX-Veränderungen im Herzen von Zebrafischembryonen mit einem Immunfluoreszenz-Assay nachweisen. Zebrafischembryonen wurden mit extrahierbaren organischen Fasern (EOM) aus PM2,5 bei 5 μg/ml in Gegenwart oder Abwesenheit von antioxidativem N-Acetyl-L-Cystein (NAC, 0,25 μM) nach 2 h nach der Befruchtung (hpf) behandelt. DMSO wurde als Fahrzeugsteuerung eingesetzt. Bei 72 HPF wurden Herzen mit einer Spritzennadel aus Embryonen seziert und fixiert und permeabilisiert. Nach der Blockierung wurden die Proben mit primären Antikörpern gegen 8-OHdG und γH2AX untersucht. Die Proben wurden dann gewaschen und mit sekundären Antikörpern inkubiert. Die resultierenden Bilder wurden unter Fluoreszenzmikroskopie beobachtet und mit ImageJ quantifiziert. Die Ergebnisse zeigen, dass EOM aus PM2,5 die 8-OHdG- und γH2AX-Signale im Herzen von Zebrafischembryonen signifikant verbesserte. NAC, das als reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) -Fänger fungierte, wirkte jedoch dem EOM-induzierten DNA-Schaden teilweise entgegen. Hier stellen wir ein Immunfluoreszenzprotokoll zur Untersuchung der Rolle von DNA-Schäden bei PM2,5-induziertenHerzfehlern vor, das zum Nachweis von umweltchemisch induzierten Proteinexpressionsveränderungen in den Herzen von Zebrafischembryonen angewendet werden kann.

Dieser Immunfluoreszenz-Assay ist eine empfindliche und spezifische Methode zur Messung von Proteinexpressionsänderungen in den Herzen von Zebrafischembryonen, die Umweltchemikalien ausgesetzt sind.
In dieser repräsentativen Analyse wurden Embryonen, die in Abwesenheit oder Anwesenheit des Antioxidans NAC pm2,5 ausgesetzt waren, auf das Vorhandensein von Herzfehlbildungen untersucht (Abbildung 1...

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Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Dieses Protokoll verwendet einen Immunfluoreszenz-Assay, um PM2,5-induzierteDNA-Schäden in den sezierten Herzen von Zebrafischembryonen nachzuweisen.

Verwendung von Immunfluoreszenz zum Nachweis von PM2,5-induziertenDNA-Schäden in Zebrafisch-Embryoherzen

Ambient fine particulate matter (PM2.5) exposure can lead to cardiac developmental toxicity but the underlying molecular mechanisms are still unclear. ...

Mit dieser Methode kann die Expression von Zielproteinen im Zebrafischherz genau und einfach nachgewiesen werden. Die Veränderung des Zielproteins wird direkt durch Messung der Immunfluoreszenz nachgewiesen. Führen Sie die Entnahme und Behandlung von Zebrafischembryonen durch, wie im Textmanuskript beschrieben.72 Stunden nach der Befruchtung werden die Embryonen auf Glasobjektträger übertragen und unter einem Stereomikroskop beobachtet. Zeichnen Sie Herzfehlbildungen wie Perikardödeme, veränderte Schleifen und verminderte Größe auf. Berechnen Sie Die Fehlbildungsraten und analysieren Sie Die Unterschiede zwischen den Gruppen mit einer Einweg-ANOVA, gefolgt vom Mehrfachvergleichstest der Türkei.Nach der Betäubung der Embryonen mit 0,6 Milligramm pro Milliliter MS222 zeichnen Sie die Herzschläge für 30 Sekunden auf und quantifizieren die Herzfrequenz mit der Image J-Software. Sezieren Sie sorgfältig Herzen aus den Zebrafischembryonen mit einer Einwegspritzennadel unter einem Stereomikroskop. Verwenden Sie einen hydrophoben Barrierestift, um einen Kreis auf einem sauberen Glasträger zu zeichnen.Fügen Sie 50 Mikroliter 4% Paraformaldehyd zu 1,25 Mikrolitern PBS hinzu, um eine fixierende Lösung herzustellen, legen Sie dann drei sezierte Herzen in einen hydrophoben Barrierekreis und inkubieren Sie für 20 Minuten bei Raumtemperatur. Dekantieren Sie die Lösung unter dem Mikroskop und trocknen Sie die Proben bei Raumtemperatur für mindestens fünf Minuten. Waschen Sie die Dias dreimal in PBST für fünf Minuten pro Waschgang.Fügen Sie 50 Mikroliter BSA zu 1.000 Mikroliter PBST hinzu, um eine 5% ige BSA-Lösung zu erhalten, und inkubieren Sie die Objektträger eine Stunde lang in einer feuchten Kammer, um die unspezifische Antikörperbindung zu blockieren. Dekantieren Sie die Lösung und waschen Sie die Proben dreimal mit PBS für fünf Minuten pro Waschgang. Verdünnen Sie zwei Mikroliter monoklonaler Mausantikörper gegen 8-Hydroxydeoxyguanosin und zwei Mikroliter polyklonaler Kaninchenantikörper gegen Gamma-H2AX in 296 Mikroliter PBST, um eine funktionierende primäre Antikörper-Cocktaillösung zu erhalten.Inkubieren Sie die Herzproben mit 50 Mikrolitern der primären Antikörper-Cocktaillösung in einer befeuchteten Kammer für mindestens eine Stunde bei Raumtemperatur oder über Nacht bei vier Grad Celsius. Dekantieren Sie die Lösung und waschen Sie die Proben dreimal mit PBST für fünf Minuten pro Waschgang. Verdünnen Sie einen Mikroliter FITC-markierten sekundären Ziegen-Anti-Maus-Antikörper und einen Mikroliter Psy-3-Ziegen-Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper in 500 Mikroliter PBST, um eine funktionierende sekundäre Antikörper-Cocktaillösung zu erhalten.Inkubieren Sie die Proben mit den sekundären Antikörpern eine Stunde lang bei Raumtemperatur im Dunkeln. Dekantieren Sie die Lösung und waschen Sie die Proben dreimal mit PBS für fünf Minuten pro Waschgang. Fügen Sie 20 Mikroliter DAPI zu den Proben hinzu, um sie kernlich zu färben, und inkubieren Sie sie für 30 Minuten bei Raumtemperatur.Tragen Sie einen Deckzettel auf den Schlitten auf und versiegeln Sie ihn mit Nagellack, um Trocknung und Bewegung zu verhindern. Stellen Sie die Proben unter einem Fluoreszenzmikroskop ab und quantifizieren Sie das Fluoreszenzsignal des Herzbereichs mit der ImageJ-Software. Berechnen Sie die relativen Änderungen anhand des Durchschnitts der DMSO-Kontrollstichproben und bestimmen Sie die statistische Signifikanz der Daten.Embryonen, die in Abwesenheit oder Anwesenheit des Antioxidans N-Acetyl-L-Cystein oder NAC pm 2,5 ausgesetzt waren, wurden auf das Vorhandensein von Herzfehlbildungen untersucht. EOM von PM 2,5 kostete eine signifikante Zunahme der kardialen Teratogenese, wie Perikardödem, veränderte Schleifen und verringerte Größe, im Vergleich zu DMSO-Kontroll-behandelten Herzen. Die Herzfrequenz war auch bei Embryonen, die EOM ausgesetzt waren, signifikant verringert.Zugabe von NAC-abgeschwächten EOM-induzierten Herzfehlern. Ein Immunfluoreszenz-Assay wurde verwendet, um das Ausmaß der DNA-Schädigung in EOM-behandelten Geweben zu bewerten. Die Spiegel der 8-Hydroxydesoxyguanosin- und Gamma-H2AX-Expression waren in den Herzen von Zebrafischembryonen, die mit EOM behandelt wurden, signifikant erhöht, was auf eine Zunahme oxidativer DNA-Schäden bzw. DNA-Doppelstrangbrüche hindeutet.Dem EOM-induzierten DNA-Schaden wurde teilweise durch nac-Supplementierung entgegengewirkt. Wenn Sie dieses Protokoll versuchen, achten Sie beim Waschen der Proben mit PBS, da sich das Zebrafischherz vom Objektträger ablösen kann.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Analysis of Cardiomyocyte Development using Immunofluorescence in Embryonic Mouse Heart

Analyse Cardiomyocyte Entwicklung mit Immunfluoreszenz in embryonalen Maus Herz

During heart development, the generation of myocardial-specific structural and functional units including sarcomeres, contractile myofibrils, intercalated ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microbead Implantation im Zebrafischembryo

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Optimierung der Wund Scratch Assay auf Änderungen in Murine mesenchymale Stromazellen Zellmigration Detect nach der Beschädigung durch lösliche Cigarette Smoke Extract

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Imaging subzellulärer Strukturen in der Living Zebrafischembryo

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

Beobachten Mitose und Dynamik in einer Live Zebrafischembryo

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Analysis of Coronary Vessels in Cleared Embryonic Hearts

Die Analyse der Herzkranzgefäße in Gelöscht Embryonale Herz

Whole mount visualization of the embryonic coronary plexus from which the capillary and arterial networks will form is rendered problematic using standard ...

Use of Immunolabeling to Analyze Stable, Dynamic, and Nascent Microtubules in the Zebrafish Embryo

Verwendung von Immunolabeling, stabilen, dynamischen und im Entstehen begriffene Mikrotubuli in Zebrafish Embryos zu analysieren

Microtubules (MTs) are dynamic and fragile structures that are challenging to image in vivo, particularly in vertebrate embryos. Immunolabeling methods ...

AFM and Microrheology in the Zebrafish Embryo Yolk Cell

AFM und Microrheology in den Zebrafish Embryos Eigelb Zelle

Elucidating the factors that direct the spatio-temporal organization of evolving tissues is one of the primary purposes in the study of development. ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

Folgenden endokardialen Gewebe Bewegungen über Zelle Ladungszustand des Zebrafish Embryos

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Minimal invasiven Embryotransfer und Embryo-Vitrifizierung auf der Optimal-Botn-Bühne im Kaninchenmodell

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...