Name: using immunofluorescence to detect pm2.5-induced dna damage in zebrafish embryo hearts
Uploaded: 2021-02-15T13:00:00
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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências da Natureza da China (número de subvenção: 81870239, 81741005, 81972999) e pelo Programa Acadêmico Prioritário de Desenvolvimento de Instituições de Ensino Superior de Jiangsu.

Os zebrafish do tipo selvagem (AB) utilizados neste estudo foram obtidos no Centro Nacional de Recursos de Zebrafish em Wuhan, China. Todos os procedimentos de animais aqui descritos foram revisados e aprovados pela Instituição de Cuidados Com Animais do Comitê de Ética da Universidade de Soochow.
1. PM2.5 amostragem e extração de compostos orgânicos
NOTA: PM2.5 foi coletado em uma área urbana em Suzhou, China, 1-7 de agosto de 2015, como...

<ol>
	<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Exposure+to+Air+Pollution+and+Risk+of+Congenital+Heart+Defects.">Maternal Exposure to Air Pollution and Risk of Congenital Heart Defects.</a> European Journal of Pediatrics. 175, 1520 (2016).</li><li>Huang, C. C., Chen, B. Y., Pan, S. C., Ho, Y. L., Guo, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+exposure+to+PM2.5+and+Congenital+Heart+Diseases+in+Taiwan.">Prenatal exposure to PM2.5 and Congenital Heart Diseases in Taiwan.</a> The Science of the Total Environment. 655, 880-886 (2019).</li><li>Mesquita, S. 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I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+senescence,+apoptosis+and+DNA+damage+cooperate+in+the+remodeling+processes+accounting+for+heart+morphogenesis.">Cell senescence, apoptosis and DNA damage cooperate in the remodeling processes accounting for heart morphogenesis.</a> Journal of Anatomy. 234, 815-829 (2019).</li><li>Kouassi, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+damage+induced+in+A549+cells+by+physically+and+chemically+characterized+air+particulate+matter+(PM2.5)+collected+in+Abidjan,+Cote+d'Ivoire.">Oxidative damage induced in A549 cells by physically and chemically characterized air particulate matter (PM2.5) collected in Abidjan, Cote d'Ivoire.</a> Journal of Applied Toxicology. 30, 310-320 (2010).</li><li>Gualtieri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+of+A549+cells+exposed+to+Milan+PM2.5.">Gene expression profiling of A549 cells exposed to Milan PM2.5.</a> Toxicology Letters. 209, 136-145 (2012).</li><li>Li, S. Y., Sigmon, V. K., Babcock, S. A., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+glycation+endproduct+induces+ROS+accumulation,+apoptosis,+MAP+kinase+activation+and+nuclear+O-GlcNAcylation+in+human+cardiac+myocytes.">Advanced glycation endproduct induces ROS accumulation, apoptosis, MAP kinase activation and nuclear O-GlcNAcylation in human cardiac myocytes.</a> Life Sciences. 80, 1051-1056 (2007).</li><li>Yamashita, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+in+zebrafish+development.">Apoptosis in zebrafish development.</a> Comparative biochemistry and physiology. Part B, Biochemistry &amp; Molecular Biology. 136, 731-742 (2003).</li><li>Moazzen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-Acetylcysteine+prevents+congenital+heart+defects+induced+by+pregestational+diabetes.">N-Acetylcysteine prevents congenital heart defects induced by pregestational diabetes.</a> Cardiovascular Diabetology. 13, 46 (2014).</li><li>Sun, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-acetylcysteine,+reactive+oxygen+species+and+beyond.">N-acetylcysteine, reactive oxygen species and beyond.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 9, 109-110 (2010).</li><li>Tu, S., Chi, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+models+in+cardiac+development+and+congenital+heart+birth+defects.">Zebrafish models in cardiac development and congenital heart birth defects.</a> Differentiation. 84, 4-16 (2012).</li><li>Asnani, A., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+tool+to+identify+novel+therapies+for+human+cardiovascular+disease.">The zebrafish as a tool to identify novel therapies for human cardiovascular disease.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 7, 763-767 (2014).</li><li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxic+effects+of+polychlorinated+biphenyls+on+cardiac+development+in+zebrafish.">Toxic effects of polychlorinated biphenyls on cardiac development in zebrafish.</a> Molecular Biology Reports. 41, 7973-7983 (2014).</li><li>Massarsky, A., Prasad, G. L., Di Giulio, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+particulate+matter+from+cigarette+smoke+disrupts+vascular+development+in+zebrafish+brain+(Danio+rerio).">Total particulate matter from cigarette smoke disrupts vascular development in zebrafish brain (Danio rerio).</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 339, 85-96 (2018).</li><li>Ren, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AHR-mediated+ROS+production+contributes+to+the+cardiac+developmental+toxicity+of+PM2.5+in+zebrafish+embryos.">AHR-mediated ROS production contributes to the cardiac developmental toxicity of PM2.5 in zebrafish embryos.</a> The Science of the Total Environment. 719, 135097 (2020).</li><li>van Berlo, J. H., Molkentin, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+emerging+consensus+on+cardiac+regeneration.">An emerging consensus on cardiac regeneration.</a> Nature Medicine. 20, 1386-1393 (2014).</li><li>Yue, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+folic+acid+on+PM2.5-induced+cardiac+developmental+toxicity+in+zebrafish+embryos+by+targeting+AhR+and+Wnt/beta-catenin+signal+pathways.">Protective effects of folic acid on PM2.5-induced cardiac developmental toxicity in zebrafish embryos by targeting AhR and Wnt/beta-catenin signal pathways.</a> Environmental Toxicology. 32, 2316-2322 (2017).</li><li>Zhao, X., Ren, X., Zhu, R., Luo, Z., Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+oxide+nanoparticles+induce+oxidative+DNA+damage+and+ROS-triggered+mitochondria-mediated+apoptosis+in+zebrafish+embryos.">Zinc oxide nanoparticles induce oxidative DNA damage and ROS-triggered mitochondria-mediated apoptosis in zebrafish embryos.</a> Aquatic Toxicology. 180, 56-70 (2016).</li><li>Zhao, X., Wang, S., Wu, Y., You, H., Lv, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ZnO+nanoparticles+exposure+induces+developmental+toxicity,+oxidative+stress+and+DNA+damage+in+embryo-larval+zebrafish.">Acute ZnO nanoparticles exposure induces developmental toxicity, oxidative stress and DNA damage in embryo-larval zebrafish.</a> Aquatic Toxicology. 136-137, 49-59 (2013).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage+and+effects+on+glutathione-S-transferase+activity+induced+by+atrazine+exposure+in+zebrafish+(Danio+rerio).">DNA damage and effects on glutathione-S-transferase activity induced by atrazine exposure in zebrafish (Danio rerio).</a> Environmental Toxicology. 26, 480-488 (2011).</li></ol>

Embora o zebrafish seja um excelente modelo vertebrado para estudar a toxicidade do desenvolvimento cardíaco de produtos químicos ambientais, devido ao pequeno tamanho do coração embrião, é difícil obter proteína suficiente para análise de manchas ocidentais. Por isso, apresentamos um método sensível de imunofluorescência para quantificar os níveis de expressão proteica dos biomarcadores de dano de DNA nos corações dos embriões de zebrafish expostos à PM2.5.
Durant...

A poluição do ar é agora um sério problema ambiental enfrentado pelo mundo. Partículas finas ambientes (PM2.5),que é um dos indicadores mais importantes da qualidade do ar, podem transportar um grande número de substâncias nocivas e entrar no sistema circulatório sanguíneo, causando sérios danos à saúde humana1. Estudos epidemiológicos demonstraram que a exposição à PM2,5 pode levar a um risco aumentado de defeitos cardíacos congênitos (CHDs)2,3. Evidências de experimentos em animais também mostraram que a PM2.5 pode causar desenvolvimento cardíaco anormal em embriões de zebrafish e na prole de camundongos, mas os mecanismos moleculares da toxicidade do desenvolvimento cardíaco de PM2.5 ainda são amplamente desconhecidos4,5,6.
Danos no DNA podem causar apreensão do ciclo celular e induzir apoptose, que pode destruir extensivamente o potencial das células progenitoras e, consequentemente, prejudicar o desenvolvimento cardíaco7). Foi bem documentado que os poluentes ambientais, incluindo o PM2.5,têm potencial para atacar o DNA através de mecanismos de estresse oxidativo8,9. Tanto o desenvolvimento cardíaco humano quanto o zebrafish são sensíveis ao estresse oxidativo10,11,12. 8-OHdG é um marcador de dano de DNA oxidativo, e o sinal γH2AX é um marcador de quebras duplas de dna. N-acetil-L-cisteína (NAC), um precursor sintético de cisteína intracelular e glutationa, é amplamente utilizado como um composto antioxidante. Neste estudo, utilizamos o NAC para investigar o papel do estresse oxidativo na PM2.5- dano de DNA induzido13.
O zebrafish como vertebrado modelo tem sido amplamente utilizado para estudar o desenvolvimento cardíaco e doenças cardiovasculares humanas porque os mecanismos de desenvolvimento cardíaco são altamente conservados entre vertebrados14,15. As vantagens de usar o zebrafish como modelo incluem seu pequeno tamanho, forte capacidade reprodutiva e baixo custo de alimentação. De particular interesse para esses estudos, os embriões de zebrafish não dependem do sistema circulatório durante o desenvolvimento precoce e podem sobreviver à malformação cardíaca grave14. Além disso, sua transparência permite que todo o corpo seja diretamente observado sob um microscópio. Assim, os embriões de zebrafish proporcionam uma excelente oportunidade para avaliar os mecanismos moleculares envolvidos na indução da toxicidade do desenvolvimento cardíaco como resultado da exposição a diversos produtos químicos ambientais5,16,17. Informamos anteriormente que o estresse oxidativo induzido por PM2.5leva a danos no DNA e à apoptose, resultando em malformações cardíacas em zebrafish18. Neste estudo, fornecemos um protocolo detalhado para investigar danos de DNA induzidos por PM2.5no coração de embriões de zebrafish.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>8-OHdG Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, USA</td>
			<td>sc-66036</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Sartorius,China</td>
			<td>BSA124S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Solarbio,Beijing,China</td>
			<td>SW3015</td>
			<td>For blocking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam, USA</td>
			<td>ab104139</td>
			<td>For nuclear counterstain.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Solarbio,Beijing,China</td>
			<td>D8371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus, Japan</td>
			<td>IX73</td>
			<td>For imaging fluorescence signals/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG Cy3</td>
			<td>Carlsbad,USA</td>
			<td>CW0159</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG FITC</td>
			<td>Carlsbad,USA</td>
			<td>RS0003</td>
			<td>Secondary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine(NAC)</td>
			<td>Adamas-Beta, Shanghai, China</td>
			<td>616-91-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>QILINBEIER,China</td>
			<td>TS-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma,China</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Make 4% paraformaldehyde for fixation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>HyClone,USA</td>
			<td>SH30256.01</td>
			<td>Prepare 0.1% Tween in PBS for washing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PM2.5 sampler</td>
			<td>TianHong,Wuhan, China</td>
			<td>TH-150C</td>
			<td>For 24-hr uninterrupted PM2.5 sampling.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Re-circulating aquaculture system</td>
			<td>HaiSheng,Shanghai,China</td>
			<td></td>
			<td>The zebrafish was maintained in it.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soxhlet extractor</td>
			<td>ZhengQiao,Shanghai, China</td>
			<td>BSXT-02</td>
			<td>For organic components extraction.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon,Canada</td>
			<td>SMZ645</td>
			<td>For heart dissection from zebrafish embryos.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulfonate (MS222)</td>
			<td>Sigma,China</td>
			<td>E10521</td>
			<td>To anesthetize zebrafish embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma,China</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#947;H2AX Antibody</td>
			<td>Abcam, USA</td>
			<td>ab26350</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using immunofluorescence to detect pm2.5-induced dna damage in zebrafish embryo hearts

A exposição de partículas finas ambientes (PM2.5) pode levar à toxicidade do desenvolvimento cardíaco, mas os mecanismos moleculares subjacentes ainda não estão claros. 8-hidroxi-2'desoxygenase (8-OHdG) é um marcador de dano oxidativo de DNA e γH2AX é um marcador sensível para quebras de fios duplos de DNA. Neste estudo, tivemos como objetivo detectar alterações de PM2.5-Induzidas 8-OHdG e γH2AX no coração de embriões de zebrafish usando um ensaio de imunofluorescência. Os embriões de zebrafish foram tratados com questões orgânicas extrativáveis (EOM) a partir de PM2,5 a 5 μg/mL na presença ou ausência de antioxidante N-acetil-L-cisteína (NAC, 0,25 μM) a 2 h pós fertilização (hpf). O DMSO foi usado como controle de veículos. Com 72 cv, os corações foram dissecados a partir de embriões usando uma agulha de seringa e fixos e permeabilizados. Após serem bloqueadas, as amostras foram sondadas com anticorpos primários contra 8-OHdG e γH2AX. As amostras foram então lavadas e incubadas com anticorpos secundários. As imagens resultantes foram observadas sob microscopia de fluorescência e quantificadas por ImageJ. Os resultados mostram que os sinais de EOM de PM2.5 aumentaram significativamente os sinais 8-OHdG e γH2AX no coração dos embriões de zebrafish. No entanto, o NAC, agindo como um carniceiro reativa de oxigênio (ROS), contra-ativou parcialmente o dano de DNA induzido pelo EOM. Aqui, apresentamos um protocolo de imunofluorescência para investigar o papel dos danos de DNA em defeitos cardíacos induzidos por PM2,5que podem ser aplicados à detecção de mudanças de expressão de proteínas induzidas por químicos ambientais nos corações dos embriões de zebrafish.

Este ensaio de imunofluorescência é um método sensível e específico para medir mudanças de expressão proteica nos corações dos embriões de zebrafish expostos a produtos químicos ambientais.
Nesta análise representativa, foram avaliados embriões expostos à PM2,5 na ausência ou presença do NAC antioxidante para a presença de malformações cardíacas(Figura 1). Como observa...

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Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Este protocolo usa um ensaio de imunofluorescência para detectar danos de DNA induzidos por PM2.5nos corações dissecados de embriões de zebrafish.

Usando imunofluorescência para detectar danos de DNA induzidos por PM2.5em corações embrionários de zebrafish

Ambient fine particulate matter (PM2.5) exposure can lead to cardiac developmental toxicity but the underlying molecular mechanisms are still unclear. ...

Este método pode ser usado para detectar com precisão e facilidade a expressão de proteínas-alvo no coração de zebrafish. A mudança na proteína alvo é detectada diretamente pela medição da imunofluorescência. Realize a coleta e tratamento de embriões de zebrafish, conforme descrito no manuscrito do texto.Às 72 horas após a fertilização, transfira os embriões para lâminas de vidro e observe-os sob um microscópio estéreo. Registra-lo malformações cardíacas, como edema pericárdico, looping alterado e diminuição do tamanho. Calcular taxas de malformação e analisar diferenças entre grupos usando uma forma ANOVA, seguido pelo teste de comparação múltipla da Turquia.Depois de anestesiar os embriões com 0,6 miligramas por mililitro MS222, registos cardíacos por 30 segundos e quantificar as frequências cardíacas usando o software Image J. Dissecar cuidadosamente corações dos embriões de peixe zebra com uma agulha de seringa descartável sob um microscópio estéreo. Use uma caneta de barreira hidrofóbica para desenhar um círculo em um escorregador de vidro limpo.Adicione 50 microlitres de 4%de paraformaldeído a 1,25 microlitres de PBS para fazer uma solução fixa, em seguida, coloque três corações dissecados em um círculo de barreira hidrofóbica e incubar por 20 minutos à temperatura ambiente. Decante a solução sob o microscópio e seque as amostras à temperatura ambiente por pelo menos cinco minutos. Lave os slides três vezes em PBST por cinco minutos por lavagem.Adicione 50 microliters de BSA a 1.000 microliters de PBST para obter uma solução BSA de 5% e incubar os slides em uma câmara úmida por uma hora para bloquear a ligação de anticorpos não específicos. Decante a solução e lave as amostras três vezes com PBS por cinco minutos por lavagem. Diluir dois microliters de anticorpo monoclonal de camundongos contra 8 hidroxideoxyguanosine e dois microliters de anticorpo policlonal de coelho contra gama-H2AX em 296 microliters de PBST para obter uma solução de coquetel de anticorpos primário funcionando.Incubar as amostras cardíacas com 50 microliters da solução primária de coquetel de anticorpos em uma câmara umidificada por pelo menos uma hora em temperatura ambiente ou durante a noite a quatro graus Celsius. Decante a solução e lave as amostras três vezes com PBST por cinco minutos por lavagem. Diluir um microliter de anticorpo secundário anti-rato de cabra com rótulo FITC e um microliter de anticorpo secundário anti-coelho psy-3 em 500 microliters de PBST para obter uma solução de coquetel de anticorpos secundários em funcionamento.Incubar as amostras com os anticorpos secundários por uma hora à temperatura ambiente no escuro. Decante a solução e lave as amostras três vezes com PBS por cinco minutos por lavagem. Adicione 20 microliters de DAPI às amostras para coloração nuclear e incuba-os por 30 minutos à temperatura ambiente.Aplique um deslizamento de tampa no slide e sele-o com esmalte para evitar a secagem e o movimento. Imagem as amostras sob um microscópio de fluorescência e quantificar o sinal fluorescente da área cardíaca usando o software ImageJ. Calcule as alterações relativas utilizando a média das amostras de controle do DMSO e determine a significância estatística dos dados.Os embriões expostos à PM 2.5 na ausência ou presença do antioxidante, N-acetil-L-cisteína, ou NAC, foram avaliados para a presença de malformações cardíacas. O EOM da PM 2.5 custou um aumento significativo na teratogênese cardíaca, como edema pericárdico, looping alterado e diminuição do tamanho, em comparação com corações tratados com controle de DMSO. A frequência cardíaca também foi significativamente diminuída em embriões expostos ao EOM.Adição de defeitos cardíacos induzidos pelo EOM no NAC. Um ensaio de imunofluorescência foi utilizado para avaliar a extensão dos danos de DNA nos tecidos tratados com EOM. Os níveis de 8-hidroxideoxyguanosina e expressão gama-H2AX foram significativamente aumentados nos corações dos embriões de zebrafish tratados com EOM, indicando um aumento nos danos oxidativos do DNA e quebras duplas de DNA, respectivamente.O dano de DNA induzido pelo EOM foi parcialmente neutralizado pela suplementação do NAC. Ao tentar este protocolo, tome cuidado ao lavar as amostras com PBS, pois o coração de zebrafish pode descascar o slide.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Using Immunofluorescence to Detect PM2.5-induced DNA Damage in Zebrafish Embryo Hearts

Analysis of Cardiomyocyte Development using Immunofluorescence in Embryonic Mouse Heart

Análise do Cardiomyocyte Desenvolvimento utilizando imunofluorescência em Embryonic Coração do rato

During heart development, the generation of myocardial-specific structural and functional units including sarcomeres, contractile myofibrils, intercalated ...

Biologia do Desenvolvimento

Microbead Implantation in the Zebrafish Embryo

Microbead Implantação no embrião de peixe-zebra

The zebrafish has emerged as a valuable genetic model system for the study of developmental biology and disease. Zebrafish share a high degree of genomic ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Otimização do Ensaio Wound zero para detectar mudanças na Murino estromais mesenquimais migração celular após a lesão por Extract fumo do cigarro Solúvel

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Imagiologia estruturas celulares no embrião vivo Zebrafish

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Observing Mitotic Division and Dynamics in a Live Zebrafish Embryo

Observando mitótico Division e Dinâmica em um embrião de peixe-zebra ao vivo

Mitosis is critical for organismal growth and differentiation. The process is highly dynamic and requires ordered events to accomplish proper chromatin ...

Analysis of Coronary Vessels in Cleared Embryonic Hearts

Análise de vasos coronarianos nos corações embrionárias Cancelado

Whole mount visualization of the embryonic coronary plexus from which the capillary and arterial networks will form is rendered problematic using standard ...

Use of Immunolabeling to Analyze Stable, Dynamic, and Nascent Microtubules in the Zebrafish Embryo

Uso de Immunolabeling para analisar os microtúbulos estáveis, dinâmicos e emergentes no embrião Zebrafish

Microtubules (MTs) are dynamic and fragile structures that are challenging to image in vivo, particularly in vertebrate embryos. Immunolabeling methods ...

AFM and Microrheology in the Zebrafish Embryo Yolk Cell

AFM e Microrheology na célula de embrião de Zebrafish gema

Elucidating the factors that direct the spatio-temporal organization of evolving tissues is one of the primary purposes in the study of development. ...

Following Endocardial Tissue Movements via Cell Photoconversion in the Zebrafish Embryo

Seguindo os movimentos de tecido endocárdico através de célula Photoconversion no embrião Zebrafish

During embryogenesis, cells undergo dynamic changes in cell behavior, and deciphering the cellular logic behind these changes is a fundamental goal in the ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Transferência de embriões minimamente invasivos e vitrificação embrionária na fase de embrião ideal em modelo de coelho

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...