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•
10:24 min
March 18th, 2021
DOI :
10.3791/62025-v
Chapters
0:04
Introduction
0:30
Microstructured Single Cell Array Fabrication
3:16
Cell Seeding
4:21
Perfusion System
5:13
Time-Lapse Microscopy
6:44
Fluorescent Marker mRNA Transfection
7:34
Image Analysis and Fluorescence Readout
8:29
Results: Representative Image Analysis and Fluorescence Readout
9:34
Conclusion
Transcript
LISCAと呼ばれる単一細胞アレイのライブセルイメージングは、何百もの個々の細胞の蛍光時間コースの自動読み出しでもあります。このアプローチの利点は、個々の細胞応答が同一のマイクロ環境で空間的に単離された細胞から記録され、優れた統計を用いた効率的な発光分析が可能になる点である。単一セル配列を製造するには、メスを使用して、6つのマイクロパウダーストライプを含む単一のPDM傑作をPDM層から切り取り、マイクロパターンを上に向けてラボベンチに置きます。
カミソリの刃を使用して、6つのマ
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Summary
マイクロパターン配列を用いた単一細胞からの蛍光レポータータイムコースの取得方法を紹介する。このプロトコルは、単一細胞アレイの調製、ライブセルスキャンタイムラプス顕微鏡のセットアップと動作、および接着部位あたりの細胞統合蛍光時間コースの自動事前選択、視覚制御および追跡のためのオープンソース画像分析ツールを記述する。
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