Name: location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion
Uploaded: 2020-12-22T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion at JoVE.com

ويود المؤلفون أن يشكروا هارتفيغ ويبولدت على مساعدته التقنية الممتازة، ومرفق التصوير المجهري في المملكة المتحدة (Umif) التابع للمركز الطبي الجامعي هامبورغ - إيبيندورف على توفير المجاهر والدعم. تم تمويل هذا البحث من قبل DZHK (المركز الألماني لأبحاث القلب والأوعية الدموية) [FKZ 81Z4710141].

وقد وافقت لجنة رعاية الحيوان واستخدامه في ولاية هامبورغ (ORG870, 959) والوكالة الحكومية للطبيعة والبيئة وحماية المستهلك في شمال الراين وستفاليا على جميع الإجراءات المتعلقة بالحيوانات (LANUV, 07/11) وتتوافق مع دليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر (2011). أجريت دراسات باستخدام الذكور وال...

فهم العمليات الخلوية والجزيئية في الخلايا العصبية والخلايا الدبقية من الجهاز العصبي المتعاطف الذي يسبق ظهور VA هو من أهمية عالية، والسكتة القلبية المفاجئة لا يزال السبب الأكثر شيوعا للوفاة في جميع أنحاء العالم5. لذلك، في المخطوطة الحالية، نقدم مجموعة أساسية من الأساليب لتحد?...

الجهاز العصبي اللاإرادي القلبي هو توازن منظم بإحكام من المكونات المتعاطفة وشبه المتعاطفة والحسية التي تسمح للقلب بالتكيف مع التغيرات البيئية مع الاستجابة الفسيولوجية المناسبة1،2. الاضطرابات في هذا التوازن، على سبيل المثال، زيادة النشاط المتعاطف، وقد ثبت كمحرك رئيسي لبداية وكذلك الحفاظ على عدم انتظام ضربات القلب البطيني (VA)3،4. لذلك ، كان التشكيل اللاإرادي ، الذي تحقق عن طريق الحد الدوائي للنشاط المتعاطف مع حاصرات بيتا ، حجر الزاوية في علاج المرضى الذين يعانون من VA لعقود5،6. ولكن على الرغم من التدخلات الدوائية والقائمة على القسطرة ، لا يزال عدد كبير من المرضى يعانون من VA7المتكررة.
يتم التوسط في الغالب مدخلات متعاطفة إلى القلب عن طريق أجسام الخلايا العصبية في العقدة النجمية (SG) ، والهياكل الثنائية على شكل نجمة من السلسلة المتعاطفة ، والتي تنقل المعلومات عبر العديد من الأعصاب داخل الصدر من جذع الدماغ إلى القلب8و9و10. العصب تنبت من SG بعد الإصابة ويرتبط VA والموت القلبي المفاجئ11,12, مؤكدا على SG كهدف لتعديل اللاإرادي13,14. ويمكن تحقيق انخفاض في المدخلات المتعاطفة للقلب مؤقتا عن طريق الحقن عن طريق الجلد من التخدير الموضعي أو بشكل دائم عن طريق إزالة جزئية من SG عن طريق تنظير الصدر بمساعدة الفيديو15,16. القلب متعاطفة denervation يقدم خيارا للمرضى الذين يعانون من العلاج الحراري VA مع نتائج واعدة14,16,17. لقد تعلمنا من SG explanted من هؤلاء المرضى أن إعادة عرض الخلايا العصبية والأعصاب الكيميائية، والتهاب الأعصاب والتنشيط الدبقية هي السمات المميزة لإعادة عرض متعاطفة التي قد تسهم أو تفاقم الخلل اللاإرادي18،19. ومع ذلك، فإن العمليات الخلوية والجزيئية الكامنة في هذه الخلايا العصبية لا تزال غامضة حتى الآن، على سبيل المثال، دور التمايز العصبي في النمط الظاهري الكوليني20،21. تقدم الدراسات التجريبية مقاربات جديدة لعلاج VA ، على سبيل المثال ، الحد من النشاط العصبي المتعاطف عن طريق optogenetics22، ولكن التوصيف المتعمق ل SG لا يزال مفقودا في العديد من أمراض القلب التي تسير جنبا إلى جنب مع VA. نماذج الماوس تحاكي هذه الأمراض تسمح لدراسة إعادة عرض الخلايا العصبية التي يحتمل أن تسبق ظهور عدم انتظام ضربات القلب12،23. ويمكن استكمال هذه من خلال مزيد من التحليلات المورفولوجية والوظيفية لتوصيف اللاإرادي للقلب والجهاز العصبي. في هذا البروتوكول، ونحن نقدم ذخيرة أساسية من الأساليب التي تسمح لتشريح وتوصيف SG مورين لتحسين فهم VA.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92097</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesion Slides SuperFrost plus&#160; 25 x 75 x 1 mm</td>
			<td>R. Langenbrinck</td>
			<td>03-0060</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin bovine Fraction V receptor grade lyophil.</td>
			<td>Serva</td>
			<td>11924.03</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti neurofilament</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti chicken IgY Alexa 647&#160;</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AP194SA6</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat IgG Alexa 568&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11057</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit IgG Alexa 488&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying block 37-100 mm</td>
			<td>Whatman (Sigma Aldrich)</td>
			<td>WHA10310992&#160;</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E4009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99 % denatured with MEK, IPA and Bitrex (min. 99,8 %)</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>2212.5000</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eukitt mounting medium</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>253681.0008</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G + DAPI</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-20</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti choline acetyltransferase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AP144P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2 30% (w/w)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium 25.000 UI / 5ml</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>PZN: 3862340</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-capacity cDNA reverse transctiption kit</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>&#160;4368813</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (Forene)</td>
			<td>Abbott Laboratories</td>
			<td>2594.00.00</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hemalum solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.09249.0500</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glasses 20x20 mm or smaller</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>0101040</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000c</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570 Reagent Pack</td>
			<td>Akoya Bioscience</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde, 16% w/v aq. soln., methanol free&#160;</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>43368</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes, LDPE, unsterile, 3 ml, 154 mm</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>7691202</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline tablets</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>18912-014</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pinzette Dumont SS Forceps</td>
			<td>FineScienceTools</td>
			<td>11203-25</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAzol Lysis Reagent</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>79306</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti tyrosine hydroxylase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R0901-100ML</td>
			<td>RNA isolation (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>323100</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-S100b-C2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>431738-C2</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-Tubb3</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>423391</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel beads 7 mm&#160;</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>69990</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan black B</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0292.2</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Cdkn1b (Mm00438168_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Choline acetyltransferase (Mm01221880_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay MKi67 (Mm01278617_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay PTPCR (Mm01293577_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay S100b (Mm00485897_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Tyrosin Hydroxylase (Mm00447557_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan mastermix</td>
			<td>Applied biosystems</td>
			<td>4370074</td>
			<td>Gene Expression analysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Lyser II</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 10% solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93443-100ml</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9416-100ML</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wacom bamboo pen</td>
			<td>Wacom</td>
			<td>CTL-460/K</td>
			<td>Cell size measurements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman prepleated qualitative filter paper, Grade 595 1/2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA10311647</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 633 Conjugate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W21404</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion

الجهاز العصبي اللاإرادي هو محرك كبير للفيزيولوجيا الكهربية القلبية. خاصة دور فرعها المتعاطف هو مسألة مستمرة للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية لرواية البطين (VA). الخلايا العصبية في العقدة النجمية (SG)   – الهياكل الثنائية على شكل نجمة من سلسلة متعاطفة –   هي عنصر مهم في البنية التحتية المتعاطفة. وSG هي هدف معترف به للعلاج عن طريق denervation متعاطفة مع القلب في المرضى الذين يعانون من العلاج الحراري VA. في حين تم وصف إعادة عرض الخلايا العصبية والتنشيط الدبقية في SG في المرضى الذين يعانون من VA ، فإن العمليات الخلوية والجزيئية الأساسية التي يحتمل أن تسبق ظهور عدم انتظام ضربات القلب غير مفهومة بشكل كاف فقط وينبغي توضيحها لتحسين التشكيل اللاإرادي. نماذج الماوس تسمح لنا لدراسة إعادة عرض الخلايا العصبية متعاطفة، ولكن تحديد SG مورين يشكل تحديا للمحقق عديم الخبرة. وبالتالي، تفتقر الدراسات البيولوجية الخلوية والجزيئية المتعمقة للمورين SG للعديد من أمراض القلب الشائعة. هنا، ونحن نصف ذخيرة أساسية لتشريح ودراسة SG في الفئران الكبار للتحليلات على مستوى الحمض النووي الريبي (عزل الحمض النووي الريبي لتحليل التعبير الجيني، في التهجين الموقعي)، ومستوى البروتين (immunofluorescent تلطيخ جبل كامل)، والمستوى الخلوي (مورفولوجيا الأساسية، وقياس حجم الخلية). نحن نقدم الحلول المحتملة للتغلب على التحديات في تقنية التحضير، وكيفية تحسين تلطيخ عن طريق إخماد autofluorescence. وهذا يسمح لتصور الخلايا العصبية وكذلك الخلايا الدبقية عن طريق علامات المنشأة من أجل تحديد تكوين الخلية وإعادة عرض العمليات. الأساليب المعروضة هنا تسمح لتميز SG للحصول على مزيد من المعلومات حول الخلل اللاإرادي في الفئران المعرضة لVA ويمكن أن تستكمل بتقنيات إضافية التحقيق في المكونات العصبية والجلبقية من الجهاز العصبي اللاإرادي في القلب.

الشكل 1 تصور كيفية تحديد وتشريح SG. الشكل 1A يظهر رسم تخطيطي للموقع، في حين أن الشكل 1B يقدم وجهة نظر في الصدر بعد إزالة حزمة القلب والرئة. عضلات لونغوس كولي اليسار واليمين وسيطة من SG القفص الصدري هي معالم هامة للتوجيه. يتم إجراء تشريح على طول خط?...

Watch this Scientific Journal Video about Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion at JoVE.com

Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion

تساهم التغيرات المرضية الفسيولوجية في الجهاز العصبي اللاإرادي القلبي ، خاصة في فرعه المتعاطف ، في ظهور وصيانة عدم انتظام ضربات القلب البطيني. في هذا البروتوكول، نعرض كيفية توصيف العصابات النجمية مورين لتحسين فهم العمليات الجزيئية والخلوية الكامنة.

الموقع، تشريح، وتحليل عصابة مورين ستيلاتي

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

وهناك طريقة لعزل جزيرة الفئران تحت المحفظة وزراعة الكلى

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

تشريح الإنسان عناصر الجسم الزجاجي لتحليل البروتين

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

زجاجي كله فكاهة تشريح لتحليل Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

الفئران البروستاتا الجزئي تشريح والإخصاء الجراحي

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

تشريح البنكرياس الماوس للتحليل النسيجي والتنميط الأيضية

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

تشريح وثقافة Explant موريني Allantois للتحليل في المختبر للحجز الانتويك

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

التحليل الكمي للأشعة المقطعية الصغرى من أورتوباثي في نموذج ماوس β-أمينوبروبيونيتريلي-المستحث الابهر والتشريح

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

طريقة غير جراحية لتوليد نموذج آفة الغضروف داخل المفصل الناجم عن التحميل الدوري لركبة الجرذ

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Robot-assisted Total Mesorectal Excision and Lateral Pelvic Lymph Node Dissection for Locally Advanced Middle-low Rectal Cancer

استئصال إجمالي متوسطي بمساعدة الروبوت وتشريح العقدة الليمفاوية الحوضية الجانبية لسرطان المستقيم المتوسط المنخفض المتقدم محليا

Since their approval for clinical use, da Vinci surgical robots have shown great advantages in gastrointestinal surgical operations, especially in complex ...