Name: location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion
Uploaded: 2020-12-22T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion at JoVE.com

המחברים רוצים להודות להארטוויג ויבולדט על הסיוע הטכני המצוין שלו, ולמתקן הדמיית המיקרוסקופיה בבריטניה (Umif) של המרכז הרפואי האוניברסיטאי המבורג-אפנדורף על אספקת מיקרוסקופים ותמיכה. מחקר זה מומן על ידי DZHK (המרכז הגרמני לחקר הלב וכלי הדם) [FKZ 81Z4710141].

כל ההליכים הנוגעים לבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים ושימוש במדינת המבורג (ORG870, 959) והסוכנות הממלכתית נורדריין-ווסטפליאן לטבע, סביבה והגנת הצרכן (LANUV, 07/11) ומתאימים למדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (2011). מחקרים בוצעו באמצעות גברים ונשים (בגילאי 10-24 שבו?...

ההבנה של תהליכים תאיים ומולקולריים בתאי עצב ותאי גליה של מערכת העצבים הסימפתטית שקדמו לתהתפרצות VA היא עניין רב, כמו דום לב פתאומי נשאר הגורם הנפוץ ביותר למוות ברחבי העולם5. לכן, בכתב היד הנוכחי, אנו מספקים רפרטואר בסיסי של שיטות לזיהוי ה- Murine SG – אלמנט מורין בתוך רשת זו – ולבצע ...

מערכת העצבים האוטונומית הלבית היא שיווי משקל מוסדר היטב של רכיבים סימפטיים, פרזימפתטיים וסנסיריים המאפשרים ללב להסתגל לשינויים סביבתיים עם התגובה הפיזיולוגית המתאימה1,2. הפרעות בשיווי משקל זה, למשל, עלייה בפעילות אוהדת, הוקמו כנהג מפתח לתערוכה, כמו גם תחזוקה של הפרעות קצב חדריות (VA)3,4. לכן, אפנון אוטונומי, שהושג באמצעות הפחתה פרמקולוגית של פעילות אוהדת עם חוסמי בטא, היה אבן פינה בטיפול בחולים עם VA במשךעשרות שנים 5,6. אבל למרות התערבויות פרמקולוגיות וצנתר מבוסס, מספר רלוונטי של חולים עדיין סובל VA7חוזר .
קלט סימפטי ללב מתווך בעיקר באמצעות גופי תאים עצביים בגרעיני הכוכבים (SG), מבנים בצורת כוכב דו-צדדי של השרשרת הסימפתטית, המעבירים מידע באמצעות עצבים תוך-אתאורקטיים רבים מגזע המוח ללב8,9,10. עצב נבט מן SG לאחר פציעה קשורה VA ומוות לבבי פתאומי11,12, המדגיש את SG כיעד אפנון אוטונומי13,14. הפחתת קלט אוהד ללב ניתן להשיג באופן זמני באמצעות הזרקה עורית של הרדמה מקומית או לצמיתות על ידי הסרה חלקית של SG באמצעות בית החזה בסיוע וידאו15,16. denervation אוהד לב מציג אפשרות עבור חולים עם VA עקשן טיפול עם תוצאות מבטיחות14,16,17. למדנו מ SG המוסבר של חולים אלה כי שיפוץ עצבי ונוירוכימי, נוירו-דלקת והפעלה גליאלית הם סימני היכר של שיפוץ אוהד שעלול לתרום או להחמיר תפקוד אוטונומי18,19. ובכל זאת, התהליכים התאיים והמולקולריים הבסיסיים בתאי העצב האלה נשארים מעורפלים עד כה, למשל, תפקיד הטרנס-דיפרנטיציה העצבית לפנוטיפ כולינרגי20,21. מחקרים ניסיוניים מציגים גישות חדשניות לטיפול VA, למשל, הפחתת פעילות עצבית אוהדת באמצעות אופטוגנטיקה22, אבל אפיון מעמיק של SG עדיין חסר פתולוגיות לב רבות ללכת ביד עם VA. מודלים עכבר לחקות פתולוגיות אלה לאפשר ללמוד שיפוץ עצבי כי פוטנציאל לפני תחילת הפרעות קצב12,23. אלה יכולים להסתיים על ידי ניתוחים מורפולוגיים ותפקודיים נוספים לאפיון אוטונומי של הלב ומערכת העצבים. בפרוטוקול הנוכחי, אנו מספקים רפרטואר בסיסי של שיטות המאפשר לנתח ולאפיין את SG מורין כדי לשפר את ההבנה של VA.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92097</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesion Slides SuperFrost plus&#160; 25 x 75 x 1 mm</td>
			<td>R. Langenbrinck</td>
			<td>03-0060</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin bovine Fraction V receptor grade lyophil.</td>
			<td>Serva</td>
			<td>11924.03</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti neurofilament</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti chicken IgY Alexa 647&#160;</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AP194SA6</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat IgG Alexa 568&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11057</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit IgG Alexa 488&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying block 37-100 mm</td>
			<td>Whatman (Sigma Aldrich)</td>
			<td>WHA10310992&#160;</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E4009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99 % denatured with MEK, IPA and Bitrex (min. 99,8 %)</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>2212.5000</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eukitt mounting medium</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>253681.0008</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G + DAPI</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-20</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti choline acetyltransferase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AP144P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2 30% (w/w)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium 25.000 UI / 5ml</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>PZN: 3862340</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-capacity cDNA reverse transctiption kit</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>&#160;4368813</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (Forene)</td>
			<td>Abbott Laboratories</td>
			<td>2594.00.00</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hemalum solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.09249.0500</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glasses 20x20 mm or smaller</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>0101040</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000c</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570 Reagent Pack</td>
			<td>Akoya Bioscience</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde, 16% w/v aq. soln., methanol free&#160;</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>43368</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes, LDPE, unsterile, 3 ml, 154 mm</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>7691202</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline tablets</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>18912-014</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pinzette Dumont SS Forceps</td>
			<td>FineScienceTools</td>
			<td>11203-25</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAzol Lysis Reagent</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>79306</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti tyrosine hydroxylase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R0901-100ML</td>
			<td>RNA isolation (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>323100</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-S100b-C2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>431738-C2</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-Tubb3</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>423391</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel beads 7 mm&#160;</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>69990</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan black B</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0292.2</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Cdkn1b (Mm00438168_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Choline acetyltransferase (Mm01221880_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay MKi67 (Mm01278617_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay PTPCR (Mm01293577_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay S100b (Mm00485897_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Tyrosin Hydroxylase (Mm00447557_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan mastermix</td>
			<td>Applied biosystems</td>
			<td>4370074</td>
			<td>Gene Expression analysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Lyser II</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 10% solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93443-100ml</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9416-100ML</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wacom bamboo pen</td>
			<td>Wacom</td>
			<td>CTL-460/K</td>
			<td>Cell size measurements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman prepleated qualitative filter paper, Grade 595 1/2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA10311647</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 633 Conjugate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W21404</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion

מערכת העצבים האוטונומית היא מניע משמעותי של אלקטרופיזיולוגיה לבבית. במיוחד תפקידו של הענף האוהד שלה הוא עניין מתמשך של חקירה בפתופיזיולוגיה של הפרעות קצב חדריות (VA). נוירונים בגרעינים הכוכביים (SG)   – מבנים דו-צדדיים בצורת כוכב של השרשרת הסימפתטית –   הם מרכיב חשוב בתשתית הסימפתטית. SG הם יעד מוכר לטיפול באמצעות denervation לב אוהד בחולים עם VA עקשן טיפול. בעוד שיפוץ עצבי והפעלה גליה ב SG תוארו בחולים עם VA, התהליכים התאיים והמולקולריים הבסיסיים שעלולים להקדים את תחילת הפרעות קצב אינם מובנים מספיק ויש לברוח כדי לשפר את אפנון האוטונומי. מודלים של עכבר מאפשרים לנו לחקור שיפוץ עצבי אוהד, אבל זיהוי של SG מורין מאתגר עבור החוקר חסר הניסיון. לכן, מחקרים ביולוגיים תאיים ומולקולריים מעמיקים של ס"ג מורין חסרים למחלות לב נפוצות רבות. כאן, אנו מתארים רפרטואר בסיסי לניתוח ולמידה של ה- SG בעכברים בוגרים עבור ניתוחים ברמת ה- RNA (בידוד RNA עבור ניתוחי ביטוי גנים, בהכלאה במקום), רמת חלבון (כתמי הר שלם אימונופלואורסצנטיים) ורמת התא (מורפולוגיה בסיסית, מדידת גודל תאים). אנו מציגים פתרונות פוטנציאליים להתגבר על אתגרים בטכניקת ההכנה, וכיצד לשפר את הכתמים באמצעות מרווה של autofluorescence. זה מאפשר הדמיה של נוירונים, כמו גם תאי גליה באמצעות סמנים הוקמה על מנת לקבוע את הרכב התא ותהליכי שיפוץ. השיטות המוצגות כאן מאפשרות לאפיין את ה- SG כדי לקבל מידע נוסף על תפקוד אוטונומי בעכברים הנוטים ל- VA וניתן להשלים טכניקות נוספות החוקרות רכיבים עצביים וגליה של מערכת העצבים האוטונומית בלב.

איור 1 מדמיין כיצד לזהות ולנתח את ה-SG. איור 1A מציג ציור סכמטי של המיקום, ואילו איור 1B מציג את הנוף לבית החזה לאחר הסרת חבילת הלב-ריאה. שרירי הקולי הארוכים השמאליים והימניים מתווכים מהס"ג וכלוב הצלעות הם ציוני דרך חשובים להתמצאות. הניתוח מתבצע ?...

Watch this Scientific Journal Video about Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion at JoVE.com

Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion

שינויים פתופיזיולוגיים במערכת העצבים האוטונומית הלבבית, במיוחד בענף הסימפטי שלה, תורמים לתחזוקה ולתחזוקה של הפרעות קצב חדריות. בפרוטוקול הנוכחי, אנו מראים כיצד לאפיין גרעינים כוכביים מורין כדי לשפר את ההבנה של התהליכים המולקולריים והתאים הבסיסיים.

מיקום, ניתוח וניתוח של גנגליון מורין סטלה

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

שיטה בידוד איילט Murine והשתלות כליה Subcapsular

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

Dissection של גוף האדם אלמנטים הזגוגיות לניתוח proteomic

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

כל הזגוגיות ההומור Dissection לניתוח Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Murine הערמונית מיקרו לנתיחה סירוס כירורגי

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

דיסקציה של הלבלב העכבר עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

דיסקציה והתרבות Explant של Allantois מאתר לניתוח במבחנה של קובץ מצורף Allantoic

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

ניתוח כמותי מיקרו-CT Aortopathy במודל של עכברים של β-aminopropionitrile-induced מפרצת אבי העורקים, דיסקציה

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

שיטה לא פולשנית ליצירת מודל סחוס תוך מפרקי הנגרם על ידי העמסה מחזורית של ברך החולדה

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Robot-assisted Total Mesorectal Excision and Lateral Pelvic Lymph Node Dissection for Locally Advanced Middle-low Rectal Cancer

כריתה מזורצית בסיוע רובוט וריצוף בלוטות לימפה לרוחב האגן לסרטן רקטלי בינוני-נמוך מתקדם מקומי

Since their approval for clinical use, da Vinci surgical robots have shown great advantages in gastrointestinal surgical operations, especially in complex ...