Name: location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion
Uploaded: 2020-12-22T14:45:00
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लेखक अपनी उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए हार्टविग विबेबिल्ट और यूनिवर्सिटी मेडिकल सेंटर हैम्बर्ग-एपेंडोर्फ के यूकेई माइक्रोस्कोपी इमेजिंग फैसिलिटी (उमिफ) को माइक्रोस्कोप और समर्थन प्रदान करने के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं। इस शोध को डीजेडके (जर्मन सेंटर फॉर कार्डियोवैस्कुलर रिसर्च) [एफकेजेड 81Z4710141] द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

पशुओं से जुड़ी सभी प्रक्रियाओं को हैम्बर्ग राज्य की पशु देखभाल और उपयोग समिति (ORG870, 959) और उत्तरी राइन-वेस्टफेलियन स्टेट एजेंसी फॉर नेचर, पर्यावरण और उपभोक्ता संरक्षण (LANUV, 07/11) द्वारा अनुमोदित किया गया था और...

वीए की शुरुआत से पहले सहानुभूति तंत्रिका तंत्र के न्यूरॉन्स और ग्लियल कोशिकाओं में सेलुलर और आणविक प्रक्रियाओं की समझ उच्च रुचि है, क्योंकि अचानक हृदय की गिरफ्तारी दुनिया भर में मौत का सबसे आम कारण बन...

हृदय स्वायत्त तंत्रिका तंत्र सहानुभूति, परानुभूति और संवेदी घटकों का कसकर विनियमित संतुलन है जो दिल को उचित शारीरिक प्रतिक्रिया1, 2के साथ पर्यावरणीय परिवर्तनों के अनुकूल होने की अनुमति देता है। उदाहरण के लिए, इस संतुलन में गड़बड़ी, सहानुभूतिपूर्ण गतिविधि में वृद्धि, शुरुआत के साथ-साथ वेंट्रिकुलर अतालता (वीए)3, 4के रखरखाव के लिए एक प्रमुख चालक के रूप मेंस्थापितकी गई है। इसलिए, बीटा-ब्लॉकर्स के साथ सहानुभूतिपूर्ण गतिविधि की औषधीय कमी के माध्यम से प्राप्त स्वायत्त मॉड्यूलेशन,5,6दशकों से वीए के रोगियों के उपचार में एक आधारशिला रहा है। लेकिन औषधीय और कैथेटर आधारित हस्तक्षेप के बावजूद, रोगियों की एक प्रासंगिक संख्या अभी भी आवर्ती VA 7 सेग्रस्तहै ।
दिल के लिए सहानुभूति इनपुट ज्यादातर स्टेलेट गैंगलिया (एसजी) में न्यूरोनल सेल निकायों के माध्यम से मध्यस्थता की जाती है, सहानुभूति श्रृंखला की द्विपक्षीय स्टार-आकार की संरचनाएं, जो ब्रेनस्टेम सेदिल8,9,10तक कई इंट्राथोरेसिक नसों के माध्यम से जानकारी रिले करती हैं। चोट लगने के बाद एसजी से नर्व अंकुरित होकर वीए और अचानक हृदय मृत्यु11,12से जुड़ा होता है , जो एसजी को स्वायत्त मॉडुलन 13,14के लक्ष्य के रूप में बल देता है । दिल के लिए सहानुभूति इनपुट की कमी स्थानीय संवेदनाहारी के परक्यूटेनियस इंजेक्शन के माध्यम से या स्थायी रूप से वीडियो-सहायता प्राप्त थोरेकोस्कोपी15, 16के माध्यम से एसजी को आंशिक रूप से हटाने के माध्यम से अस्थायी रूप से प्राप्त की जा सकती है। कार्डियक सहानुभूति denervation आशाजनक परिणाम14, 16, 17के साथ चिकित्सा-रिफ्रैक्टरी वीए के साथ रोगियों के लिए एक विकल्प प्रस्तुत करता है । हमने इन रोगियों के लगाए गए एसजी से सीखा है कि न्यूरोनल और न्यूरोकेमिकल रीमॉडलिंग, न्यूरो-सूजन और ग्लियल एक्टिवेशन सहानुभूति रीमॉडलिंग की पहचान हैं जो स्वायत्त शिथिलता18, 19में योगदान या बढ़ सकते हैं। फिर भी, इन न्यूरॉन्स में अंतर्निहित सेलुलर और आणविक प्रक्रियाएं आज तक अस्पष्ट रहती हैं, उदाहरण के लिए, न्यूरोनल ट्रांसफेशन की भूमिका कोलिनेर्गिक फेनोटाइप20, 21में। प्रयोगात्मक अध्ययन वीए के इलाज के लिए उपन्यास दृष्टिकोण पेश करते हैं, उदाहरण के लिए, ऑप्टोजेनेटिक्स22के माध्यम से सहानुभूति तंत्रिका गतिविधि में कमी, लेकिन एसजी के गहन लक्षण वर्णन में अभी भी कई हृदय विकृति की कमी है जो वीए के साथ हाथ में जाती हैं। माउस मॉडल इन विकृतियों की नकल उतारने से न्यूरोनल रीमॉडलिंग का अध्ययन करने की अनुमति मिलती है जो संभवतःअतालता 12,23की शुरुआत से पहले होता है । इन्हें दिल और तंत्रिका तंत्र के स्वायत्त लक्षण वर्णन के लिए आगे रूपात्मक और कार्यात्मक विश्लेषण द्वारा पूरा किया जा सकता है। वर्तमान प्रोटोकॉल में, हम वीए की समझ में सुधार करने के लिए मुरीन एसजी को विच्छेदन और विशेषता देने के तरीकों का एक बुनियादी प्रदर्शनों की सूची प्रदान करते हैं।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92097</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesion Slides SuperFrost plus&#160; 25 x 75 x 1 mm</td>
			<td>R. Langenbrinck</td>
			<td>03-0060</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin bovine Fraction V receptor grade lyophil.</td>
			<td>Serva</td>
			<td>11924.03</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti neurofilament</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti chicken IgY Alexa 647&#160;</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AP194SA6</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat IgG Alexa 568&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11057</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit IgG Alexa 488&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying block 37-100 mm</td>
			<td>Whatman (Sigma Aldrich)</td>
			<td>WHA10310992&#160;</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E4009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99 % denatured with MEK, IPA and Bitrex (min. 99,8 %)</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>2212.5000</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eukitt mounting medium</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>253681.0008</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G + DAPI</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-20</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti choline acetyltransferase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AP144P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2 30% (w/w)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium 25.000 UI / 5ml</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>PZN: 3862340</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-capacity cDNA reverse transctiption kit</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>&#160;4368813</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (Forene)</td>
			<td>Abbott Laboratories</td>
			<td>2594.00.00</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hemalum solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.09249.0500</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glasses 20x20 mm or smaller</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>0101040</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000c</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570 Reagent Pack</td>
			<td>Akoya Bioscience</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde, 16% w/v aq. soln., methanol free&#160;</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>43368</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes, LDPE, unsterile, 3 ml, 154 mm</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>7691202</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline tablets</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>18912-014</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pinzette Dumont SS Forceps</td>
			<td>FineScienceTools</td>
			<td>11203-25</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAzol Lysis Reagent</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>79306</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti tyrosine hydroxylase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R0901-100ML</td>
			<td>RNA isolation (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>323100</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-S100b-C2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>431738-C2</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-Tubb3</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>423391</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel beads 7 mm&#160;</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>69990</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan black B</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0292.2</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Cdkn1b (Mm00438168_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Choline acetyltransferase (Mm01221880_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay MKi67 (Mm01278617_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay PTPCR (Mm01293577_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay S100b (Mm00485897_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Tyrosin Hydroxylase (Mm00447557_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan mastermix</td>
			<td>Applied biosystems</td>
			<td>4370074</td>
			<td>Gene Expression analysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Lyser II</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 10% solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93443-100ml</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9416-100ML</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wacom bamboo pen</td>
			<td>Wacom</td>
			<td>CTL-460/K</td>
			<td>Cell size measurements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman prepleated qualitative filter paper, Grade 595 1/2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA10311647</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 633 Conjugate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W21404</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion

स्वायत्त तंत्रिका तंत्र कार्डियक इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी का एक पर्याप्त चालक है। विशेष रूप से इसकी सहानुभूति शाखा की भूमिका वेंट्रिकुलर अतालता (वीए) के रोगविज्ञान में जांच का एक सतत मामला है । स्टेलेट गैंगलिया (एसजी) में न्यूरॉन्स   - सहानुभूति श्रृंखला के द्विपक्षीय स्टार के आकार की संरचनाएं -   सहानुभूति बुनियादी ढांचे का एक महत्वपूर्ण घटक हैं। एसजी चिकित्सा-रिफ्रैक्टरी वीए के साथ रोगियों में हृदय सहानुभूति denervation के माध्यम से उपचार के लिए एक मान्यता प्राप्त लक्ष्य हैं । जबकि एसजी में न्यूरोनल रीमॉडलिंग और ग्लियल एक्टिवेशन को वीए के रोगियों में वर्णित किया गया है, अंतर्निहित सेलुलर और आणविक प्रक्रियाएं जो संभावित रूप से अतालता की शुरुआत से पहले होती हैं, केवल अपर्याप्त रूप से समझ में आती हैं और स्वायत्त मॉडुलन में सुधार करने के लिए स्पष्ट की जानी चाहिए। माउस मॉडल हमें सहानुभूति न्यूरोनल रीमॉडलिंग का अध्ययन करने की अनुमति देते हैं, लेकिन मुरीन एसजी की पहचान अनुभवहीन अन्वेषक के लिए चुनौतीपूर्ण है। इस प्रकार, मुरीन एसजी के गहन सेलुलर और आणविक जैविक अध्ययन में कई आम हृदय रोगों की कमी है। यहां, हम आरएनए स्तर पर विश्लेषण के लिए वयस्क चूहों में एसजी को विच्छेदन और अध्ययन करने के लिए एक बुनियादी प्रदर्शनों की सूची का वर्णन करते हैं (जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए आरएनए अलगाव, सीटू संकरण में), प्रोटीन स्तर (इम्यूनोफ्लोर्सेंट पूरे माउंट धुंधला), और सेलुलर स्तर (बुनियादी आकृति विज्ञान, सेल आकार माप)। हम तैयारी तकनीक में चुनौतियों से उबरने के लिए संभावित समाधान प्रस्तुत करते हैं, और ऑटोफ्लोरेसेंस के शमन के माध्यम से धुंधला करने में कैसे सुधार करें। यह कोशिका संरचना और पुन तैयार करने की प्रक्रियाओं को निर्धारित करने के लिए स्थापित मार्कर के माध्यम से न्यूरॉन्स के साथ-साथ ग्लियल कोशिकाओं के दृश्य के लिए अनुमति देता है। यहां प्रस्तुत किए गए तरीके एसजी को वीए से ग्रस्त चूहों में स्वायत्त शिथिलता के बारे में अधिक जानकारी हासिल करने की अनुमति देते हैं और हृदय में स्वायत्त तंत्रिका तंत्र के न्यूरोनल और ग्लियल घटकों की जांच करने वाली अतिरिक्त तकनीकों द्वारा पूरित किया जा सकता है।

चित्रा 1 एसजी की पहचान करने और विच्छेदन करने की कल्पना करता है। चित्रा 1A स्थान की एक योजनाबद्ध ड्राइंग दिखाता है, जबकि चित्रा 1B हृदय-फेफड़ों के पैकेज को हटाने के बाद छात?...

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Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion

हृदय स्वायत्त तंत्रिका तंत्र में रोगविज्ञानी परिवर्तन, विशेष रूप से इसकी सहानुभूति शाखा में, वेंट्रिकुलर अतालता की शुरुआत और रखरखाव में योगदान देते हैं। वर्तमान प्रोटोकॉल में, हम दिखाते हैं कि अंतर्निहित आणविक और सेलुलर प्रक्रियाओं की समझ में सुधार करने के लिए मुरीन स्टेलेट गैंगलिया की विशेषता कैसे है।

स्थान, विच्छेदन, और मुरीन स्टेलेट गैंगलियन का विश्लेषण

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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