Name: location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion
Uploaded: 2020-12-22T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Хартвига Вибольдта за его отличную техническую помощь и Центр микроскопической визуализации UKE (Umif) Университетского медицинского центра Гамбург-Эппендорф за предоставление микроскопов и поддержку. Это исследование финансировалось DZHK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований) [FKZ 81Z4710141].

Все процедуры, касающиеся животных, были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию земли Гамбург (ORG870, 959) и Государственным агентством по охране природы, окружающей среды и защиты прав потребителей Земли Северный Рейн-Вестфалия (LANUV, 07/11) и соответствуют Руководству На?...

Понимание клеточных и молекулярных процессов в нейронах и глиальных клетках симпатической нервной системы, которые предшествуют началу ВА, представляет большой интерес, так как внезапная остановка сердца остается наиболее распространенной причиной смерти во всем мире5. ...

Сердечная вегетативная нервная система представляет собой жестко регулируемое равновесие симпатических, парасимпатических и сенсорных компонентов, которое позволяет сердцу адаптироваться к изменениям окружающей среды с соответствующей физиологической реакцией1,2. Нарушения в этом равновесии, например, повышение симпатической активности, были установлены в качестве ключевого фактора возникновения, а также поддержания желудочковых аритмий (ВА)3,4. Поэтому вегетативная модуляция, достигаемая за счет фармакологического снижения симпатической активности бета-адреноблокаторами, была краеугольным камнем в лечении пациентов с ВА на протяжении десятилетий5,6. Но, несмотря на фармакологические и катетерные вмешательства, соответствующее число пациентов все еще страдает от рецидивирующего VA7.
Симпатический вход в сердце в основном опосредован через тела нейронных клеток в звездчатых ганглиях (SG), двусторонних звездообразных структурах симпатической цепи, которые передают информацию через многочисленные внутриторакальные нервы от ствола мозга к сердцу8,9,10. Прорастание нерва из СГ после травмы связано с ВА и внезапной сердечной смертью11,12,подчеркивая СГ как мишень для вегетативной модуляции13,14. Снижение симпатического поступления в сердце может быть достигнуто временно путем чрескожной инъекции местных анестетиков или постоянно путем частичного удаления SG с помощью видеоассистированной торакоскопии15,16. Сердечная симпатическая денервация представляет собой вариант для пациентов с терапией-рефрактерной ВА с многообещающими результатами14,16,17. Мы узнали из эксплантированного SG этих пациентов, что нейронное и нейрохимическое ремоделирование, нейровоспаление и глиальная активация являются отличительными признаками симпатического ремоделирования, которые могут способствовать или усугублять вегетативную дисфункцию18,19. Тем не менее, лежащие в основе клеточные и молекулярные процессы в этих нейронах остаются неясными на сегодняшний день, например, роль трансдифференциации нейронов в холинергический фенотип20,21. Экспериментальные исследования представляют новые подходы к лечению ВА, например, снижение активности симпатического нерва с помощью оптогенетики22,но углубленная характеристика SG все еще отсутствует во многих сердечных патологиях, которые идут рука об руку с VA. Мышиные модели, имитирующие эти патологии, позволяют изучать ремоделирование нейронов, которое потенциально предшествует возникновению аритмий12,23. Они могут быть дополнены дальнейшими морфологическими и функциональными анализами для вегетативной характеристики сердца и нервной системы. В настоящем протоколе мы предоставляем базовый репертуар методов, позволяющих препарировать и характеризовать мышиную СГ для улучшения понимания ВА.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92097</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesion Slides SuperFrost plus&#160; 25 x 75 x 1 mm</td>
			<td>R. Langenbrinck</td>
			<td>03-0060</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin bovine Fraction V receptor grade lyophil.</td>
			<td>Serva</td>
			<td>11924.03</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti neurofilament</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti chicken IgY Alexa 647&#160;</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AP194SA6</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat IgG Alexa 568&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11057</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit IgG Alexa 488&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying block 37-100 mm</td>
			<td>Whatman (Sigma Aldrich)</td>
			<td>WHA10310992&#160;</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E4009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99 % denatured with MEK, IPA and Bitrex (min. 99,8 %)</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>2212.5000</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eukitt mounting medium</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>253681.0008</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G + DAPI</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-20</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti choline acetyltransferase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AP144P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2 30% (w/w)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium 25.000 UI / 5ml</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>PZN: 3862340</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-capacity cDNA reverse transctiption kit</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>&#160;4368813</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (Forene)</td>
			<td>Abbott Laboratories</td>
			<td>2594.00.00</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hemalum solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.09249.0500</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glasses 20x20 mm or smaller</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>0101040</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000c</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570 Reagent Pack</td>
			<td>Akoya Bioscience</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde, 16% w/v aq. soln., methanol free&#160;</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>43368</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes, LDPE, unsterile, 3 ml, 154 mm</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>7691202</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline tablets</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>18912-014</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pinzette Dumont SS Forceps</td>
			<td>FineScienceTools</td>
			<td>11203-25</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAzol Lysis Reagent</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>79306</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti tyrosine hydroxylase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R0901-100ML</td>
			<td>RNA isolation (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>323100</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-S100b-C2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>431738-C2</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-Tubb3</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>423391</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel beads 7 mm&#160;</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>69990</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan black B</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0292.2</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Cdkn1b (Mm00438168_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Choline acetyltransferase (Mm01221880_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay MKi67 (Mm01278617_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay PTPCR (Mm01293577_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay S100b (Mm00485897_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Tyrosin Hydroxylase (Mm00447557_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan mastermix</td>
			<td>Applied biosystems</td>
			<td>4370074</td>
			<td>Gene Expression analysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Lyser II</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 10% solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93443-100ml</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9416-100ML</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wacom bamboo pen</td>
			<td>Wacom</td>
			<td>CTL-460/K</td>
			<td>Cell size measurements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman prepleated qualitative filter paper, Grade 595 1/2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA10311647</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 633 Conjugate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W21404</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion

Вегетативная нервная система является существенным драйвером электрофизиологии сердца. Особенно роль его симпатической ветви является постоянным предметом исследований в патофизиологии желудочковых аритмий (ВА). Нейроны в звездчатых ганглиях (SG)   — двусторонних звездообразных структурах симпатической цепи —   являются важным компонентом симпатической инфраструктуры. SG являются признанной мишенью для лечения с помощью сердечной симпатической денервации у пациентов с терапевтически-рефрактерным ВА. В то время как ремоделирование нейронов и глиальная активация в SG были описаны у пациентов с ВА, основные клеточные и молекулярные процессы, которые потенциально предшествуют началу аритмии, только недостаточно изучены и должны быть выяснены для улучшения вегетативной модуляции. Мышиные модели позволяют изучать симпатическое ремоделирование нейронов, но идентификация мышиного SG является сложной задачей для неопытного исследователя. Таким образом, углубленные клеточные и молекулярно-биологические исследования мышиного SG отсутствуют для многих распространенных сердечных заболеваний. Здесь мы описываем базовый репертуар для рассечения и изучения SG у взрослых мышей для анализа на уровне РНК (выделение РНК для анализа экспрессии генов, гибридизация in situ), уровне белка (иммунофлуоресцентное окрашивание цельного крепления) и клеточном уровне (базовая морфология, измерение размера клеток). Мы представляем потенциальные решения для преодоления проблем в технике приготовления и способы улучшения окрашивания путем гашения автофлуоресценции. Это позволяет визуализировать нейроны, а также глиальные клетки с помощью установленных маркеров для определения состава клеток и процессов ремоделирования. Представленные здесь методы позволяют охарактеризовать СГ для получения дополнительной информации о вегетативной дисфункции у мышей, склонных к ВА, и могут быть дополнены дополнительными методиками, исследующими нейронные и глиальные компоненты вегетативной нервной системы в сердце.

На рисунке 1 визуализируется, как идентифицировать и препарировать SG. На рисунке 1A показан схематический рисунок местоположения, в то время как на рисунке 1B представлен вид на грудную клетку после удаления пакета сердце-легкое. Левая и пр...

Watch this Scientific Journal Video about Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion at JoVE.com

Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion

Патофизиологические изменения в вегетативной нервной системе сердца, особенно в ее симпатической ветви, способствуют возникновению и поддержанию желудочковых аритмий. В настоящем протоколе мы показываем, как охарактеризовать мышиные звездчатые ганглии, чтобы улучшить понимание лежащих в основе молекулярных и клеточных процессов.

Расположение, рассечение и анализ мышиного звездчатого ганглия

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Метод мышей Изоляция Островок и субкапсулярной трансплантации почек

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

Препарирование прав Стекловидное Элементы орган для анализа протеомных

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Количественный анализ и характеристика атеросклеротических поражений в синусе аорты мышиной

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Всего Стекловидное тело Рассечение для Vitreodynamic анализа

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Мышиные простаты Micro-рассечение и хирургическая кастрация

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Рассечение поджелудочной железы мыши для гистологического анализа и метаболические профили

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Рассечение и экспланта культуры мышиных Аллантоис для анализа в пробирке Allantoic вложения

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Количественный анализ микро CT Aortopathy в мышиной модели β-aminopropionitrile индуцированной аневризмы аорты и рассечение

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

Неинвазивный метод генерации модели внутрисуставного поражения внутрисуставного хряща крысы, вызванной циклической нагрузкой

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Robot-assisted Total Mesorectal Excision and Lateral Pelvic Lymph Node Dissection for Locally Advanced Middle-low Rectal Cancer

Роботизированное тотальное мезоректальное иссечение и диссекция боковых тазовых лимфатических узлов при местно-распространенном раке прямой кишки средней и низкой

Since their approval for clinical use, da Vinci surgical robots have shown great advantages in gastrointestinal surgical operations, especially in complex ...