Name: location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion
Uploaded: 2020-12-22T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion at JoVE.com

Yazarlar Hartwig Wieboldt'a mükemmel teknik yardımı için ve Hamburg-Eppendorf Üniversitesi Tıp Merkezi UKE Mikroskopi Görüntüleme Tesisi'ne (Umif) mikroskop ve destek sağladığı için teşekkür ediyor. Bu araştırma DZHK (Alman Kardiyovasküler Araştırmalar Merkezi) [FKZ 81Z4710141] tarafından finanse edildi.

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler Hamburg Eyaleti Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (ORG870, 959) ve Kuzey Ren-Vestfalya Devlet Doğa, Çevre ve Tüketiciyi Koruma Ajansı (LANUV, 07/11) tarafından onaylandı ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi'ne (2011) uygun. Çalışmalar, diyabet spontan mutasyonu (Leprdb)için erkek ve dişi (10-24 haftalık) C57BL/6 fareler (stok numarası 000664, Jackson Laboratuvarları) ve fareler homozigous (db/db) vey...

Va başlangıcından önce sempatik sinir sisteminin nöronlarında ve glial hücrelerinde hücresel ve moleküler süreçlerin anlaşılması, ani kalp durması dünya çapında en yaygın ölüm nedeni olmaya devam ettiği için yüksek ilgi çekicidir5. Bu nedenle, mevcut yazıda, bu ağdaki bir murine elemanı olan murine SG'yi tanımlamak ve RNA, protein ve hücresel düzeyde sonraki analizleri yapmak için temel bir yöntem repertuarı sunuyoruz.
Murine SG'nin bir...

Kardiyak otonom sinir sistemi, kalbin uygun fizyolojik yanıtla çevresel değişikliklere uyum sağlamasını sağlayan sempatik, parasempatik ve duyusal bileşenlerin sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir dengesidir1,2. Bu dengedeki bozukluklar, örneğin sempatik aktivitenin artması, başlangıç için önemli bir sürücü olarak ventrikül aritmilerinin (VA) bakımı olarak belirlenmiştir3,4. Bu nedenle, beta-blokerlerle sempatik aktivitenin farmakolojik olarak azaltılması yoluyla elde edilen otonom modülasyon, on yıllardırVA'lıhastaların tedavisinde bir temel taşı olmuştur 5,6. Ancak farmakolojik ve kateter bazlı müdahalelere rağmen, ilgili sayıda hasta hala tekrarlayan VA7'denmuzdariptir.
Kalbe sempatik giriş çoğunlukla, beyin sapından kalbe çok sayıda intratorasik sinir yoluyla bilgi aktaran sempatik zincirin yıldız gangliyonlarındaki (SG) çift taraflı yıldız şeklindeki yapılarındaki nöronal hücre cisimleri aracılığıylaaracılıkeder 8 ,9,10. Yaralanmadan sonra SG'den filizlenen sinir VA ve ani kardiyak ölüm ile ilişkilidir11,12, SG'yi otonom modülasyon için bir hedef olarak vurgulayarak13,14. Kalbe sempatik girişin azaltılması geçici olarak lokal anesteziklerin perkütan enjeksiyonu ile veya video destekli torakoskopi ile SG'nin kısmen çıkarılması ile kalıcı olarak elde edilebilir15,16. Kardiyak sempatik denervasyon, umut verici sonuçlarla tedavi-refrakter VA'lı hastalar için bir seçenek sunar14,16,17. Bu hastaların eksiz SG'lerinden nöronal ve nörokimyasal remodeling, nöro-inflamasyon ve glial aktivasyonun otonomik disfonksiyona katkıda bulunabilecek veya ağırlaştırabilecek sempatik yeniden şekillendirmenin ayırt edici özellikleri olduğunu öğrendik18,19. Yine de, bu nöronlardaki altta yatan hücresel ve moleküler süreçler, örneğin, nöronal transdifferentiasyonun kolinerjik fenotip20,21'erolü gibi bugüne kadar belirsizliğini korumamaktadır. Deneysel çalışmalar VA'yı tedavi etmek için yeni yaklaşımlar sunar, örneğin, optogenetik22yoluyla sempatik sinir aktivitesinin azaltılması , ancak SG'nin derinlemesine karakterizasyonu VA ile birlikte giden birçok kardiyak patolojide hala eksiktir. Bu patolojileri taklit eden fare modelleri, aritmilerin başlangıcından önce potansiyel olarak12,23olan nöronal yeniden şekillendirmeyi incelemeye izin verir. Bunlar, kalbin ve sinir sisteminin otonom karakterizasyonu için daha fazla morfolojik ve fonksiyonel analizlerle tamamlanabilir. Mevcut protokolde, VA'nın anlaşılmasını geliştirmek için murine SG'yi parçalamaya ve karakterize etmeye izin veren temel bir yöntem repertuarı sunuyoruz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92097</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesion Slides SuperFrost plus&#160; 25 x 75 x 1 mm</td>
			<td>R. Langenbrinck</td>
			<td>03-0060</td>
			<td>Microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumin bovine Fraction V receptor grade lyophil.</td>
			<td>Serva</td>
			<td>11924.03</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bisBenzimide H33342 trihydrochloride (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA</td>
			<td>B2261</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti neurofilament</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB5539</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8418</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti chicken IgY Alexa 647&#160;</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>AP194SA6</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti goat IgG Alexa 568&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A11057</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti rabbit IgG Alexa 488&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying block 37-100 mm</td>
			<td>Whatman (Sigma Aldrich)</td>
			<td>WHA10310992&#160;</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E4009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99 % denatured with MEK, IPA and Bitrex (min. 99,8 %)</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>2212.5000</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eukitt mounting medium</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>253681.0008</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G + DAPI</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-20</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti choline acetyltransferase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AP144P</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2 30% (w/w)</td>
			<td>Merck, KGA, Darmstadt, Germany</td>
			<td>H1009</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium 25.000 UI / 5ml</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>PZN: 3862340</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-capacity cDNA reverse transctiption kit</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>&#160;4368813</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane (Forene)</td>
			<td>Abbott Laboratories</td>
			<td>2594.00.00</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hemalum solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.09249.0500</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glasses 20x20 mm or smaller</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>0101040</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>miRNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 2000c</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opal 570 Reagent Pack</td>
			<td>Akoya Bioscience</td>
			<td>FP1488001KT</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde, 16% w/v aq. soln., methanol free&#160;</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>43368</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes, LDPE, unsterile, 3 ml, 154 mm</td>
			<td>Th.Geyer</td>
			<td>7691202</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline tablets</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>18912-014</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pinzette Dumont SS Forceps</td>
			<td>FineScienceTools</td>
			<td>11203-25</td>
			<td>Preparation SG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAzol Lysis Reagent</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>79306</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti tyrosine hydroxylase</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R0901-100ML</td>
			<td>RNA isolation (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>323100</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-S100b-C2</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>431738-C2</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope Probe-Mm-Tubb3</td>
			<td>biotechne (ACD)</td>
			<td>423391</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel beads 7 mm&#160;</td>
			<td>Qiagen&#160;</td>
			<td>69990</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sudan black B</td>
			<td>Roth</td>
			<td>0292.2</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Cdkn1b (Mm00438168_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Choline acetyltransferase (Mm01221880_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay MKi67 (Mm01278617_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay PTPCR (Mm01293577_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay S100b (Mm00485897_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Gene Expression Assay Tyrosin Hydroxylase (Mm00447557_m1)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>4331182</td>
			<td>Gene expression analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan mastermix</td>
			<td>Applied biosystems</td>
			<td>4370074</td>
			<td>Gene Expression analysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Lyser II</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>85300</td>
			<td>RNA isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 10% solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93443-100ml</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9416-100ML</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wacom bamboo pen</td>
			<td>Wacom</td>
			<td>CTL-460/K</td>
			<td>Cell size measurements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman prepleated qualitative filter paper, Grade 595 1/2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WHA10311647</td>
			<td>Whole mount staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 633 Conjugate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>W21404</td>
			<td>RNAscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

location, dissection, and analysis of the murine stellate ganglion

Otonom sinir sistemi, kardiyak elektrofizyolojinin önemli bir sürücüsüdür. Özellikle sempatik dalının rolü, ventriküler aritmilerin (VA) patofizyolojisinde devam eden bir araştırma konusudur. Sempatik zincirin çift taraflı yıldız şeklindeki yapıları olan yıldız gangliyonlarındaki (SG)     nöronlar sempatik altyapının önemli bir bileşenidir. SG, tedavi-refrakter VA'lı hastalarda kardiyak sempatik denervasyon yoluyla tedavi için tanınan bir hedeftir. VA'lı hastalarda SG'de nöronal remodeling ve glial aktivasyon tanımlanmış olmakla birlikte, aritmi başlangıcından önce potansiyel olarak altta kalan hücresel ve moleküler süreçler sadece yeterince anlaşılmamıştır ve otonom modülasyonu iyileştirmek için aydınlatılmalıdır. Fare modelleri sempatik nöronal yeniden şekillendirmeyi incelememize izin verir, ancak murine SG'nin tanımlanması deneyimsiz araştırmacı için zordur. Bu nedenle, murine SG'nin derinlemesine hücresel ve moleküler biyolojik çalışmaları birçok yaygın kardiyak hastalık için eksiktir. Burada, yetişkin farelerde SG'nin RNA düzeyinde analizler (gen ekspresyon analizleri için RNA izolasyonu, yerinde hibridizasyon), protein seviyesi (immünofluoresan bütün montaj lekelenmesi) ve hücresel düzeyde (temel morfoloji, hücre büyüklüğü ölçümü) incelenmesi ve incelenmesi için temel bir repertuar açıklıyoruz. Hazırlık tekniğindeki zorlukların üstesinden gelmek için potansiyel çözümler sunuyoruz ve otofluoresansların söndürülerek boyamanın nasıl iyileştirileceği. Bu, hücre kompozisyonunu ve yeniden şekillendirme süreçlerini belirlemek için nöronların yanı sıra glial hücrelerin yerleşik belirteçler aracılığıyla görselleştirilmesine izin verir. Burada sunulan yöntemler, SG'nin VA'ya eğilimli farelerde otonomik disfonksiyon hakkında daha fazla bilgi edinmesine izin verir ve kalpteki otonom sinir sisteminin nöronal ve glial bileşenlerini araştıran ek tekniklerle tamamlanabilir.

Şekil 1, SG'nin nasıl tanımılacağını ve inceldiğini görselleştirir. Şekil 1A, konumun şematik bir çizimini gösterirken, Şekil 1B, kalp-akciğer paketinin çıkarılmasından sonra görünümü toraksa sunar. SG ve göğüs kafesinden gelen sol ve sağ longus colli kasları oryantasyon için önemli yerlerdir. Diseksiyon kaslar ve ilk kaburga arasındaki noktalı çizgiler boyunca gerçekleştirilir. SG ve sempatik zin...

Watch this Scientific Journal Video about Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion at JoVE.com

Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion

Kardiyak otonom sinir sistemindeki patofizyolojik değişiklikler, özellikle sempatik branşında, ventriküler aritmilerin başlamasına ve korunmasına katkıda bulunur. Mevcut protokolde, alttaki moleküler ve hücresel süreçlerin anlaşılmasını geliştirmek için murine stellat gangliyonunun nasıl karakterize edilir olduğunu gösteriyoruz.

Murine Stellate Ganglion'un Yeri, Diseksiyonu ve Analizi

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Murin Islet İzolasyon ve subkapsüler Böbrek Nakli Bir Yöntem

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

Proteomik Analizi İnsan Vitreus Gövde Elemanları diseksiyonu

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Vitreodynamic Analiz Tüm Vitreus Mizah Diseksiyon

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Mürin Prostat Mikro-diseksiyon ve Cerrahi Kastrasyon

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Fare pankreas diseksiyon histolojik analiz ve metabolik profil oluşturma

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Diseksiyon ve Explant kültür Allantoic eki Vitro analizi için fare Allantois ve

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Aortopathy aort anevrizması β-aminopropionitrile-indüklenen ve diseksiyon, fare modeli nicel mikro-CT Analizi

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

Sıçan Dizinin Döngüsel Yüklemeye Bağlı Eklem İçi Kıkırdak Lezyon Modelini Oluşturmak için Non-İnvaziv Bir Yöntem

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Robot-assisted Total Mesorectal Excision and Lateral Pelvic Lymph Node Dissection for Locally Advanced Middle-low Rectal Cancer

Lokal İlerlemiş Orta-Düşük Rektum Kanseri için Robot Destekli Total Mezorektal Eksizyon ve Lateral Pelvik Lenf Nodu Diseksiyonu

Since their approval for clinical use, da Vinci surgical robots have shown great advantages in gastrointestinal surgical operations, especially in complex ...