Name: separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish
Uploaded: 2021-04-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish at JoVE.com

Dit onderzoekswerk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China [32060170, 31601205 en 31560334], visiting scholar project ondersteund door China Scholarship Council en het fonds van State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology [2020FB05].

Alle procedures die worden uitgevoerd in visexperimenten zijn in overeenstemming met de voorschriften van de Animal Experimentation Ethics Committee van Northwest Normal University.
1. Voorbereidingen
<ol><li>Dieren<ol>
<li>Gebruik volwassen vrouwelijke zebravissen met een lichaamslengte van 4-6 cm. OPMERKING: We gebruikten zebravissen van een lokale markt.</li>
		<li>Houd de zebravis in een circulerend watersysteem met een licht van 14 uur en een donkere cyclus van 10 uur bij ongeveer 28...

<ol>
	<li>Clelland, E., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine/paracrine+control+of+zebrafish+development.">Endocrine/paracrine control of zebrafish development.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 312, 42-52 (2009).</li><li>Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrafollicular+paracrine+communication+in+the+zebrafish+ovary:+the+state+of+the+art+of+an+emerging+model+for+the+study+of+vertebrate+folliculogenesis.">Intrafollicular paracrine communication in the zebrafish ovary: the state of the art of an emerging model for the study of vertebrate folliculogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 237, 1-10 (2005).</li><li>Li, J., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+studying+ovarian+development:+Recent+advances+from+targeted+gene+knockout+studies.">Zebrafish as a model for studying ovarian development: Recent advances from targeted gene knockout studies.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 507, 1-19 (2020).</li><li>Selman, K., Wallace, R. A., Sarka, A., Qi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+oocyte+development+in+the+zebrafish,+Brachydanio+rerio.">Stages of oocyte development in the zebrafish, Brachydanio rerio.</a> Journal of Morphology. 218, 203-224 (1993).</li><li>Matzuk, M. M., Burns, K. H., Viveiros, M. M., Eppig, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intercellular+communication+in+the+mammalian+ovary:+oocytes+carry+the+conversation.">Intercellular communication in the mammalian ovary: oocytes carry the conversation.</a> Science. 296, 2178-2180 (2002).</li><li>Liu, L., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+differentiation+factor+9+and+its+spatiotemporal+expression+and+regulation+in+the+zebrafish+ovary.">Growth differentiation factor 9 and its spatiotemporal expression and regulation in the zebrafish ovary.</a> Biology of Reproduction. 76, 294-302 (2007).</li><li>Zhou, R., Tsang, A. H., Lau, S. W., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide+(PACAP)+and+its+receptors+in+the+zebrafish+ovary:+evidence+for+potentially+dual+roles+of+PACAP+in+controlling+final+oocyte+maturation.">Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) and its receptors in the zebrafish ovary: evidence for potentially dual roles of PACAP in controlling final oocyte maturation.</a> Biology of Reproduction. 85, 615-625 (2011).</li><li>Li, J., Liu, Z., Wang, D., Cheng, C. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+growth+factor+3+is+involved+in+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Insulin-like growth factor 3 is involved in oocyte maturation in zebrafish.</a> Biology of Reproduction. 84, 476-486 (2011).</li><li>Pang, Y., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+G+protein-coupled+estrogen+receptor+1,+GPER,+in+inhibition+of+oocyte+maturation+by+endogenous+estrogens+in+zebrafish.">Role of G protein-coupled estrogen receptor 1, GPER, in inhibition of oocyte maturation by endogenous estrogens in zebrafish.</a> Developmental Biology. 342, 194-206 (2010).</li><li>Peyton, C., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+estrogen+inhibition+of+oocyte+maturation+mediated+through+the+G+protein-coupled+estrogen+receptor+(Gper)+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Involvement of epidermal growth factor receptor signaling in estrogen inhibition of oocyte maturation mediated through the G protein-coupled estrogen receptor (Gper) in zebrafish (Danio rerio).</a> Biology of Reproduction. 85, 42-50 (2011).</li><li>Welch, E. L., Eno, C. C., Nair, S., Lindeman, R. E., F, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+manipulation+of+maternal+gene+products+using+in+vitro+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Functional manipulation of maternal gene products using in vitro oocyte maturation in zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55213 (2017).</li><li>Nair, S., Lindeman, R. E., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+oocyte+culture-based+manipulation+of+zebrafish+maternal+genes.">In vitro oocyte culture-based manipulation of zebrafish maternal genes.</a> Developmental Dynamics. 242, 44-52 (2013).</li><li>Seki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+reliable+in+vitro+maturation+system+for+zebrafish+oocytes.">Development of a reliable in vitro maturation system for zebrafish oocytes.</a> Reproduction. 135, 285-292 (2008).</li><li>Baars, D. L., Takle, K. A., Heier, J., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ploidy+manipulation+of+zebrafish+embryos+with+heat+shock+2+treatment.">Ploidy manipulation of zebrafish embryos with heat shock 2 treatment.</a> Journal of Visualized Experiments. , e54492 (2016).</li><li>Xie, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+based+on+in+vitro+oocyte+injection+to+improve+CRISPR/Cas9+gene+editing+in+zebrafish.">A novel technique based on in vitro oocyte injection to improve CRISPR/Cas9 gene editing in zebrafish.</a> Scientific Reports. 6, 34555 (2016).</li><li>Li, J., Bai, L., Liu, Z., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+roles+of+PDE9a+in+meiotic+maturation+of+zebrafish+oocytes.">Dual roles of PDE9a in meiotic maturation of zebrafish oocytes.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. , (2020).</li></ol>

We beschrijven hier een nieuwe methode voor de eenvoudige en snelle scheiding van folliculaire cellen en oöcyten van eierstokfollikels van zebravissen. Deze methode heeft verschillende voordelen ten opzichte van de conventionele methode. Primair is het sterk toegenomen scheidingsgemak met hoge efficiëntie en effectiviteit, omdat slechts één enkele en externe manipulatie vereist is. Dit punt verhoogt de toepasbaarheid voor onderzoekers die niet goed zijn in microscopische anatomie. Volgens onze ervaring kan men follic...

Zebravis is een belangrijk modelorganisme voor de studie van gewervelde ontwikkeling en fysiologie. De zebravis kan dienen als een goed model voor het bestuderen van de moleculaire mechanismen van eierstokontwikkeling1,2,3. Veel kenmerken van de ontwikkeling van de eierstok zijn veel behouden tijdens de evolutie van vis naar zoogdieren1,2. Net als de andere gewervelde dieren hebben zebravisvolwassenen asynchrone eierstokken, die ovariële follikels van alle ontwikkelingsstadia bevatten4. De follikel is het fundamentele reproductieve element van de eierstok. De follikel bestaat uit de oöcyt die wordt omgeven door een of meerdere lagen somatische cellen die folliculaire cellen worden genoemd. De ontwikkeling van follikels hangt af van de bidirectionele communicatie tussen oöcyten en folliculaire cellen5. Het is van vitaal belang om folliculaire cellen en oöcytcellen van ovariële follikels te scheiden voor verschillende onderzoeksdoeleinden, zoals folliculaire cel primaire cultuur, genexpressieanalyse, oöcytrijping en in-vitrofertilisatie.
Traditionele scheidingsmethoden omvatten mechanische scheiding door tang en enzymatische vergisting6,7,8,9,10. De mechanische scheiding door een tang is echter tijdrovend en arbeidsintensief. Het zal ook de hoge schade aan de oöcyt veroorzaken tijdens de scheiding. Hoewel de enzymverteringsmethode eenvoudig te bedienen is en een korte tijd vereist, moeten de behandelingstijd en enzymconcentratie worden gevalideerd en zijn de integriteit en overlevingskans van de geïsoleerde oöcyten niet ideaal. Daarom hebben we een eenvoudige methode opgezet om beide compartimenten in verschillende ontwikkelingsstadia te scheiden met behulp van getrokken glazen capillaire buizen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >17&#945;,20&#946;-DHP</td>
			<td >Cayman</td>
			<td >16146-5 (5 mg)</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >24-well plate</td>
			<td >Corning</td>
			<td >3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ampoule cutter</td>
			<td >AS ONE</td>
			<td >5-124-22 1 bag (100 pieces)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anhydrous Na2HPO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brine shrimp</td>
			<td >Hongjie</td>
			<td >250 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CaCl2</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Culture dish</td>
			<td >Biosharp</td>
			<td >BS-90-D (10PCS/PK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >S2110 (25mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissecting Microscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection forcep</td>
			<td >VETUS</td>
			<td >HRC30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection scissor</td>
			<td >Kefu</td>
			<td >160 mm&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescence Stereomicroscope&#160;</td>
			<td >Leica</td>
			<td >M205C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass capillary</td>
			<td >IWAKI</td>
			<td >IK-PAS-5P (200 pcs/PACK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hoechst 33342</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >C0031 (1 mg)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KH2PO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leibovitz&#8217;s L-15 medium</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >41300-039 (10&#215;1L)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette tips</td>
			<td >Axygen</td>
			<td >MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaHCO3</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicilia-streptomycia</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >#15140122 (100 mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereomicroscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Discover.v20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish

Zebravissen zijn een ideaal model geworden om de eierstokontwikkeling van gewervelde dieren te bestuderen. De follikel is de basiseenheid van de eierstok, die bestaat uit oöcyten en omliggende folliculaire cellen. Het is van vitaal belang om zowel folliculaire cellen als oöcyten te scheiden voor verschillende onderzoeksdoeleinden, zoals voor primaire cultuur van folliculaire cellen, analyse van genexpressie, oöcytrijping en in-vitrofertilisatie, enz. De conventionele methode gebruikt tangen om beide compartimenten te scheiden, wat arbeidsintensief, tijdrovend en hoge schade aan de oöcyt heeft. Hier hebben we een eenvoudige methode opgezet om beide compartimenten te scheiden met behulp van een getrokken glazen capillair. Onder een stereomicroscoop kunnen oöcyten en folliculaire cellen gemakkelijk worden gescheiden door pipetten in een getrokken fijn glazen capillair (de diameter is afhankelijk van de follikeldiameter). In vergelijking met de conventionele methode heeft deze nieuwe methode een hoog rendement bij het scheiden van zowel oöcyten als folliculaire cellen en heeft het een lage schade aan de oöcyten. Wat nog belangrijker is, deze methode kan worden toegepast op follikels in een vroeg stadium, ook in het stadium vóór vitellogenese. Deze eenvoudige methode kan dus worden gebruikt om folliculaire cellen en oöcyten van zebravissen te scheiden.

Deze methode kan worden gebruikt om folliculaire cellen en oöcyten te scheiden in verschillende stadia van de ontwikkeling van de eierstokfollikel bij zebravissen. Figuur 1 toont de scheiding van zebravisoocyten en folliculaire cellen van ovariële follikels met behulp van een capillaire glazen buis (figuur 1). Om te onderzoeken of de folliculaire cellen gescheiden waren van intacte follikels, werden de intacte follikels en gescheiden oöcyten van verschillende...

Watch this Scientific Journal Video about Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish at JoVE.com

Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish

Hier presenteren we een eenvoudige methode voor het scheiden van folliculaire cellen en oöcyten in eierstokfollikels van zebravissen, wat het onderzoek naar de ontwikkeling van eierstokvissen bij zebravissen zal vergemakkelijken.

Scheiding van folliculaire cellen en oöcyten in ovariële follikels van zebravissen

Zebrafish has become an ideal model to study the ovarian development of vertebrates. The follicle is the basic unit of the ovary, which consists of ...

Het algemene doel van deze procedure is om folliculaire cellen en Oöcyten in ovariële folliculaire van Zebravissen te scheiden. De folliculaire is de basiseenheid van de eierstok, die bestaat uit de Oöcyten en de omliggende folliculaire cellen. Het is het brede instrument om zowel de folliculaire cel als de externe compartimenten te scheiden voor goed onderzoeksbeleid, waaronder primaire opname van folliculaire cellen en stijgingen op genexpressie, alle verzadiging en in-vitrofertilisatie.Onlangs is de Zebrafish een krachtig model van Nissan geworden, dat een controle van al ontwikkeling bestudeert. Hier presenteren we een eenvoudige methode, dus scheidt folliculaire cellen en oöcyten van Zebrafish folliculaire die het onderzoek naar de reeds ontwikkeling in Zebrafish zal vergemakkelijken De commercial, geen massa of de twee scheidt over folliculaire cellen en alle zijden van spins de gebruiken post die een labyrint heeft, tijdrovend en had hoge schade aan de buitenkant. Hier hebben we een eenvoudige methode vastgesteld voor twee afzonderlijke compartimenten met behulp van of een deel glazen Tamela rate onder een puur rif.Onze Metro scope, zowel buiten als de folliculaire cellen kunnen eenvoudig worden gefabriceerd door het getrokken glazen capillair te typen. Bereid eerst een dichtersglascapillair voor. Raak het hoofd van glazen capillair op de alcoholbrander.Gebruik vier zijden om het glazen capillair uit te rekken tot de diameter van de ravekaart. Ten tweede, ontheilig dat overate van de volwassen vrouwelijke vis, isoleer ovariële follikels van de eierstok. Gebruik ten slotte een gepolste glazen capillair om folliculaire cel en oöcyt van ovariële follikels te scheiden.Bereid de glazen capillaire, scherpe container, ruime frees, alcoholbrander en een tang. Leg de alcoholbrander, neem een glas capillair mee naar huis en verwarm het ene uiteinde van het glazen capillair op het vuur van de alcoholbrander. Gebruik een tang om een ander uiteinde van het glazen capillair vast te houden, belast het glazen capillair snel en voorzichtig.Doe het glasafval in de naaldcontainer. Gebruik de ruime frees Gretch op het zwembad met glas. Breek vervolgens af door de tang Voorzichtig om een soepele opening van de poort te maken, verbrandt u snel het uiteinde van het glazen capillair op de alcoholbrander meerdere keren en wrijft u het open uiteinde voorzichtig door een ruime frees.Neem hoe het aquarium uit het gecultiveerde watersysteem komt. En nu bindt de volwassen vrouwtjes door vissen minstens twee tot vijf minuten op het ijswater te plaatsen totdat vissen de Kieuwbeweging stoppen. Haal de vis uit de ijskast en verwijder het resterende watervislichaam met een handdoek, plaats een vis op de D-sectieplaat met vier sets.Vissen werden onthoofd door Spang-akkoord te serveren met hun scherpe schaar om de dood te garanderen. Gebruik een ontleedschaar om als volgt te snijden. Ontleed van de Chloe gesneden naar de kieuwen langs de middellijn van de buik, gesneden van de oever van de Chloe, gesneden van de voorste punt naar de dorsale kant.Verwijder voorzichtig de huid en spieren aan één kant van het lichaam, stel de inwendige organen bloot en neem een gezonde hele eierstok met vier stappen. De eierstokken werden voorzichtig onmiddellijk in de 100 millimeter in cultuur geplaatst, schotelcontainer 60%L 50 mediaan. Stuurde een ontleedmicroscoop met doorgezonden lichtoptiek gebaseerd op de grootte en morfologie van ovariële follikels van verschillende stadia.Isoleer deze ovariële follikels handmatig met behulp van een bier van vier sets. Verzamel de geïsoleerde ovariële follikels en doe ze in een andere gekweekte schaal met 60% L 50 medium, mooie geïsoleerde ovariële follikels zullen worden gebruikt om folliculaire cellen en Oöcyten te scheiden. Stel vervolgens een apparaat in voor scheiding.Gebruik een plastic buis van 30 centimeter. Het ene uiteinde is verbonden met een pipetpunt van één milliliter met een filterelement. Een ander uiteinde is verbonden met een pipetpunt van 200 microliter.Gebruik onder de disectingmicroscoop de mond om de luchtstroom te regelen om de defecte naar het zwembad te laten bewegen met glazen capillair en blaas vervolgens de folly uit het glazen capillair. Tijdens dit proces kunnen folliculaire cel en Oöcyten van ovariële follikels worden gescheiden. Dit is een scheidingsproces voor een volwassen fase follikel.Tijdens het inademen wordt de folliculaire cellaag losgemaakt van de oöcyt, doet na het uitblazen van de folliculaire cel en kan oöcyt worden gescheiden. Dit is een volledige grondfase follikel. We kunnen zien dat de folliculaire cellaag los is van de oöcyt.Deze methode kan ook worden toegepast in de vroege eierstokfollikels. Dit is een follikel in het midden van Latella Genesis stadium. Dit is een follikel in het vroege vatella Genesis stadium.Dit is een follikel in een pre-vatalla Genesis stadium. Op deze foto ziet u het proces van scheiding. Paneel één toont een intacte follikel bij volgroeid podiumpaneel.Paneel twee toont de verengelsing van deze follikel in getrokken glazen capillair. Paneel drie laat zien dat de folliculaire uit het getrokken glazen capillair is geblazen. Paneel vier geeft de succesvolle scheiding F gedenudeerde oöcyt en folliculaire cel aan.Zelfs deze methode, scheiding van folliculaire cel in oöcyt kan worden uitgevoerd in verschillende stadium follikels. Onderzoek of de folliculaire cellen gescheiden waren van de intacte follikels. Intact een follikel en is gescheiden Oöcyt van verschillende stadia van follikels van BV stadium aan FG stadium werden gekleurd met DAPI.De kern van folliculaire cellen kan worden gekleurd door DAPI. Het blauwe signaal van DAPI werd waargenomen in intacte follikels, maar niet in gedendeerde Oöcyten in deze verschillende stadiumfollikels. Om de duidelijke scheiding verder te bevestigen, werden de intacte follikels en gescheiden Oöcyten naar de histologische secties gestript.DAPI waarin de resultaten werden vermeld, toonde aan dat folliculaire cellen duidelijk werden verwijderd en Oöcyten werden gedenudeerd. Met behulp van deze methode bleken gedenudeerde Oöcytocyten gescheiden van volgroeide stadiumfollikels de spontane oöcytrijping te ondergaan. zonder enige behandeling na vier uur incubatie.Na activering door water kunnen deze gerijpte Oöcyten de volledige koraaluitbreiding ondergaan. Dit resultaat geeft de lage schade aan de oöcyt aan met behulp van deze methode. Deze mosterd kan dus worden gebruikt om de gedenudeerde oöcyt te verkrijgen voor het bestuderen van het Oocyte gerijpte rantsoen van Zebravissen.De folliculaire laag van materiaal aan follikels kan door een capillaire glasbuis worden verwijderd. Deze kunnen worden bemest en gedecentraliseerd in de broedfase. De resultaten suggereren dat deze methode kan worden gebruikt voor in vitro bevruchting bij zebravissen.We beschrijven hier een nieuwe methode voor de snelle en gemakkelijke scheiding van folliculaire cel en oöcyt van zebravissen eierstokfollikels. Deze methode heeft verschillende belangrijke voordelen, omgedraaide methodologieën. Primair onder deze is om het gemak van scheiding aanzienlijk te verhogen, omdat slechts een enkele en externe manipulatie vereist is.Het toegenomen scheidingsgemak verhoogt de beschikbaarheid van deze methode voor onderzoekers die niet bedreven zijn in microdissection. Ten tweede kan deze methode worden gebruikt om folliculaire cel en oöcyt van ovariële follikels en vroege ontwikkelingsfasen, waaronder PV, EBV MV-stadium, te scheiden, een dergelijke scheiding kan niet in een vroeg stadium follikel worden uitgevoerd met behulp van de huidige methodologieën. Ten derde leidt deze nieuwe methode tot minder schade aan de Oöcyten.De gedenudeerde Oöcyten gescheiden door deze methode kunnen de oöcytrijping ondergaan en kunnen worden bevrucht. Bovendien kan deze methode ook bij andere vissen worden toegepast.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

Cultuur en co-cultuur van de Muis eierstokken en ovariële follikels

The mammalian ovary is composed of ovarian follicles, each follicle consisting of a single oocyte surrounded by somatic granulosa cells, enclosed together ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse van de zebravis Larven skeletspieren Integriteit met Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

Isolatie en karakterisering van enkele cellen van zebravis embryo&#39;s

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells (ASCs)

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells ASCs

Immunomagnetische Scheiding van Fat Depot-specifieke SCA1<sup&gt; hoog</sup&gt;-Vetcellen afgeleide stamcellen (ASC)

The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix ...

Analysis of Chromosome Segregation, Histone Acetylation, and Spindle Morphology in Horse Oocytes

Analyse van Chromosoom Segregatie, Histon Acetylatie, En Spindel Morfologie In Paard Oocyten

The field of assisted reproduction has been developed to treat infertility in women, companion animals, and endangered species. In the horse, assisted ...

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Groei van de Preantral follikels muis onder gesimuleerde microzwaartekracht

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Orthotopic Ovarian transplantatie Procedures te onderzoeken van de invloed en gezondheid-levensduur van ovariële senescentie in vrouwelijke muizen

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Eencellige Photoconversion in levende Intact zebravis

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computationele analyse van de Caenorhabditis elegans Germline te bestuderen van de distributie van kernen, eiwitten en het cytoskelet

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Culture and Transfection of Zebrafish Primary Cells

Cultuur en de transfectie van zebravis primaire cellen

Zebrafish embryos are transparent and develop rapidly outside the mother, thus allowing for excellent in vivo imaging of dynamic biological processes in ...