Name: separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish
Uploaded: 2021-04-18T14:00:00
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Diese Forschungsarbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China [32060170, 31601205 und 31560334] unterstützt, einem Gastwissenschaftlerprojekt, das vom China Scholarship Council und dem Fundus des State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology [2020FB05] unterstützt wurde.

Alle Verfahren, die in Fischversuchen durchgeführt werden, entsprechen den Vorschriften der Animal Experimentation Ethics Committee der Northwest Normal University.
1. Vorbereitungen
<ol><li>Tiere<ol>
<li>Verwenden Sie erwachsene weibliche Zebrafische mit einer Körperlänge von 4-6 cm. HINWEIS: Wir haben Zebrafische von einem lokalen Markt verwendet.</li>
		<li>Halten Sie den Zebrafisch in einem zirkulierenden Wassersystem mit einem 14 h Licht und 10 h dunklen Zyklus bei etwa 28 °C.</l...

<ol>
	<li>Clelland, E., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine/paracrine+control+of+zebrafish+development.">Endocrine/paracrine control of zebrafish development.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 312, 42-52 (2009).</li><li>Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrafollicular+paracrine+communication+in+the+zebrafish+ovary:+the+state+of+the+art+of+an+emerging+model+for+the+study+of+vertebrate+folliculogenesis.">Intrafollicular paracrine communication in the zebrafish ovary: the state of the art of an emerging model for the study of vertebrate folliculogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 237, 1-10 (2005).</li><li>Li, J., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+studying+ovarian+development:+Recent+advances+from+targeted+gene+knockout+studies.">Zebrafish as a model for studying ovarian development: Recent advances from targeted gene knockout studies.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 507, 1-19 (2020).</li><li>Selman, K., Wallace, R. A., Sarka, A., Qi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+oocyte+development+in+the+zebrafish,+Brachydanio+rerio.">Stages of oocyte development in the zebrafish, Brachydanio rerio.</a> Journal of Morphology. 218, 203-224 (1993).</li><li>Matzuk, M. M., Burns, K. H., Viveiros, M. M., Eppig, J. 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W., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide+(PACAP)+and+its+receptors+in+the+zebrafish+ovary:+evidence+for+potentially+dual+roles+of+PACAP+in+controlling+final+oocyte+maturation.">Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) and its receptors in the zebrafish ovary: evidence for potentially dual roles of PACAP in controlling final oocyte maturation.</a> Biology of Reproduction. 85, 615-625 (2011).</li><li>Li, J., Liu, Z., Wang, D., Cheng, C. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+growth+factor+3+is+involved+in+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Insulin-like growth factor 3 is involved in oocyte maturation in zebrafish.</a> Biology of Reproduction. 84, 476-486 (2011).</li><li>Pang, Y., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+G+protein-coupled+estrogen+receptor+1,+GPER,+in+inhibition+of+oocyte+maturation+by+endogenous+estrogens+in+zebrafish.">Role of G protein-coupled estrogen receptor 1, GPER, in inhibition of oocyte maturation by endogenous estrogens in zebrafish.</a> Developmental Biology. 342, 194-206 (2010).</li><li>Peyton, C., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+estrogen+inhibition+of+oocyte+maturation+mediated+through+the+G+protein-coupled+estrogen+receptor+(Gper)+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Involvement of epidermal growth factor receptor signaling in estrogen inhibition of oocyte maturation mediated through the G protein-coupled estrogen receptor (Gper) in zebrafish (Danio rerio).</a> Biology of Reproduction. 85, 42-50 (2011).</li><li>Welch, E. L., Eno, C. C., Nair, S., Lindeman, R. E., F, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+manipulation+of+maternal+gene+products+using+in+vitro+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Functional manipulation of maternal gene products using in vitro oocyte maturation in zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55213 (2017).</li><li>Nair, S., Lindeman, R. E., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+oocyte+culture-based+manipulation+of+zebrafish+maternal+genes.">In vitro oocyte culture-based manipulation of zebrafish maternal genes.</a> Developmental Dynamics. 242, 44-52 (2013).</li><li>Seki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+reliable+in+vitro+maturation+system+for+zebrafish+oocytes.">Development of a reliable in vitro maturation system for zebrafish oocytes.</a> Reproduction. 135, 285-292 (2008).</li><li>Baars, D. L., Takle, K. A., Heier, J., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ploidy+manipulation+of+zebrafish+embryos+with+heat+shock+2+treatment.">Ploidy manipulation of zebrafish embryos with heat shock 2 treatment.</a> Journal of Visualized Experiments. , e54492 (2016).</li><li>Xie, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+based+on+in+vitro+oocyte+injection+to+improve+CRISPR/Cas9+gene+editing+in+zebrafish.">A novel technique based on in vitro oocyte injection to improve CRISPR/Cas9 gene editing in zebrafish.</a> Scientific Reports. 6, 34555 (2016).</li><li>Li, J., Bai, L., Liu, Z., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+roles+of+PDE9a+in+meiotic+maturation+of+zebrafish+oocytes.">Dual roles of PDE9a in meiotic maturation of zebrafish oocytes.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. , (2020).</li></ol>

Wir beschreiben hier eine neuartige Methode zur einfachen und schnellen Trennung von Follikelzellen und Eizellen von Zebrafisch-Ovarialfollikel. Diese Methode hat gegenüber der herkömmlichen Methode mehrere Vorteile. Dazu gehört vor allem die stark erhöhte Trennungsfreundlichkeit mit hoher Effizienz und Wirksamkeit, da nur eine einzige und externe Manipulation erforderlich ist. Dieser Punkt erhöht die Anwendbarkeit für Forscher, die nicht gut in der mikroskopischen Anatomie sind. Nach unserer Erfahrung kann man Fol...

Zebrafisch ist ein wichtiger Modellorganismus für die Erforschung der Wirbeltierentwicklung und Physiologie. Der Zebrafisch kann als gutes Modell für die Untersuchung der molekularen Mechanismen der Eierstockentwicklungdienen 1,2,3. Viele Merkmale der Eierstockentwicklung sind während der Evolution von Fischen zu Säugetieren sehr erhalten1,2. Ähnlich wie die anderen Wirbeltiere haben Zebrafische Erwachsene asynchrone Eierstöcke, die Eierstockfollikel aller Entwicklungsstadien enthalten4. Der Follikel ist das grundlegende Fortpflanzungselement des Eierstocks. Der Follikel besteht aus der Eizelle, die von einer oder mehreren Schichten somatischer Zellen umgeben ist, die als Follikelzellen bezeichnet werden. Die Entwicklung von Follikel hängt von der bidirektionalen Kommunikation zwischen Eizellen und Follikelzellenab 5. Es ist wichtig, Follikelzellen und Eizellen von Eierstockfollikel für verschiedene Forschungszwecke wie Follikelzellprimärkultur, Genexpressionsanalyse, Eizellenreifung und In-vitro-Fertilisation zu trennen.
Herkömmliche Trennverfahren umfassen die mechanische Trennung durch Zangen und die enzymatische Verdauung6,7,8,9,10. Die mechanische Trennung durch Zangen ist jedoch zeitaufwändig und mühsam. Es wird auch die hohen Schäden an der Oozyte während der Trennung verursachen. Obwohl die Enzymverdauungsmethode einfach zu bedienen ist und eine kurze Zeit erfordert, sollten die Behandlungszeit und die Enzymkonzentration validiert werden, und die Integrität und Überlebensrate der isolierten Eizellen sind nicht ideal. Daher haben wir eine einfache Methode entwickelt, um beide Fächer in verschiedenen Entwicklungsstadien mit gezogenen Glaskapillarrohren zu trennen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >17&#945;,20&#946;-DHP</td>
			<td >Cayman</td>
			<td >16146-5 (5 mg)</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >24-well plate</td>
			<td >Corning</td>
			<td >3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ampoule cutter</td>
			<td >AS ONE</td>
			<td >5-124-22 1 bag (100 pieces)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anhydrous Na2HPO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brine shrimp</td>
			<td >Hongjie</td>
			<td >250 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CaCl2</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Culture dish</td>
			<td >Biosharp</td>
			<td >BS-90-D (10PCS/PK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >S2110 (25mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissecting Microscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection forcep</td>
			<td >VETUS</td>
			<td >HRC30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection scissor</td>
			<td >Kefu</td>
			<td >160 mm&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescence Stereomicroscope&#160;</td>
			<td >Leica</td>
			<td >M205C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass capillary</td>
			<td >IWAKI</td>
			<td >IK-PAS-5P (200 pcs/PACK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hoechst 33342</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >C0031 (1 mg)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KH2PO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leibovitz&#8217;s L-15 medium</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >41300-039 (10&#215;1L)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette tips</td>
			<td >Axygen</td>
			<td >MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaHCO3</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicilia-streptomycia</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >#15140122 (100 mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereomicroscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Discover.v20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish

Zebrafische sind zu einem idealen Modell geworden, um die Eierstockentwicklung von Wirbeltieren zu untersuchen. Der Follikel ist die Grundeinheit des Eierstocks, die aus Eizellen und umgebenden Follikelzellen besteht. Es ist wichtig, sowohl Follikelzellen als auch Eizellen für verschiedene Forschungszwecke zu trennen, wie z. B. für die Primärkultur von Follikelzellen, die Analyse der Genexpression, die Oozytenreifung und die In-vitro-Fertilisation usw. Die herkömmliche Methode verwendet Zangen, um beide Fächer zu trennen, was mühsam, zeitaufwändig ist und hohe Schäden an der Eizelle hat. Hier haben wir eine einfache Methode etabliert, um beide Fächer mit einer gezogenen Glaskapillare zu trennen. Unter einem Stereomikroskop können Eizellen und Follikelzellen leicht durch Pipettieren in einer gezogenen feinen Glaskapillare getrennt werden (der Durchmesser hängt vom Follikeldurchmesser ab). Im Vergleich zur herkömmlichen Methode hat diese neue Methode eine hohe Effizienz bei der Trennung von Eizellen und Follikelzellen und hat geringe Schäden an den Eizellen. Noch wichtiger ist, dass diese Methode auf Follikel im Frühstadium angewendet werden kann, auch im Stadium der Prävitellogenese. Somit kann diese einfache Methode verwendet werden, um Follikelzellen und Eizellen von Zebrafischen zu trennen.

Diese Methode kann verwendet werden, um Follikelzellen und Eizellen in verschiedenen Stadien der Eierstockfollikelentwicklung bei Zebrafischen zu trennen. Abbildung 1 zeigt die Trennung von Zebrafisch-Oozyten und Follikelzellen von Eierstockfollikel mit einem Kapillarglasrohr (Abbildung 1). Um zu untersuchen, ob die Follikelzellen von intakten Follikel getrennt waren, wurden die intakten Follikel und die abgetrennten Eizellen aus verschiedenen Follikelstadien vo...

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Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish

Hier stellen wir eine einfache Methode zur Trennung von Follikelzellen und Eizellen in Zebrafisch-Ovarialfollikel vor, die Untersuchungen der Eierstockentwicklung bei Zebrafischen erleichtern.

Trennung von Follikulärzellen und Oozyten in Denrogarischen Follikel von Zebrafischen

Zebrafish has become an ideal model to study the ovarian development of vertebrates. The follicle is the basic unit of the ovary, which consists of ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Follikelzellen und Oozyten im Eierstock-Follikel von Zebrafischen zu trennen. Der Follikulus ist die Grundeinheit des Eierstocks, die aus den Oozyten und den umgebenden Follikelzellen besteht. Es ist das breite Werkzeug, um sowohl die Follikelzelle als auch die äußeren Kompartimente für eine gut erforschte Politik zu trennen, einschließlich der primären Erfassung von Follikelzellen und steigt auf Genexpression, alle Sättigung und In-vitro-Fertilisation.Kürzlich ist der Zebrafisch zu einem leistungsstarken Modell von Nissan geworden, das eine Kontrolle der bereits Entwicklung untersucht. Hier präsentieren wir eine einfache Methode, so trennt Follikelzellen und Eizellen von Zebrafisch Follilikel, die Untersuchungen der bereits Entwicklung in Zebrafisch erleichtern Die kommerzielle, keine Masse oder die beiden trennt sich über Follikelzellen und alle Seiten von Spins die verwenden Post, die ein Labyrinth hat, zeitaufwändig und hatte hohe Schäden an der Außenseite. Hier haben wir eine einfache Methode zu zwei separaten Fächern mit oder Teilgläser Tamela Rate unter einem reinen Riff etabliert.Unser Metro-Bereich, sowohl außen als auch die Follikelzellen, kann leicht durch Eingabe der gezogenen Glaskapillare hergestellt werden. Zuerst bereiten Sie eine Dichterglaskapillare vor. Schlagen Sie den Kopf der Glaskapillare auf den Alkoholbrenner.Verwenden Sie eine vier Seiten, um die Glaskapillare auf den Rave-Kartendurchmesser zu dehnen. Zweitens, desect, die von den erwachsenen weiblichen Fischen überfischen, isolieren Eierstockfollikel aus dem Eierstock. Schließlich verwenden Sie eine abgewogene Glaskapillare, um Follikel und Oozyten von Eierstockfollikel zu trennen.Bereiten Sie die Glaskapillare, scharfen Behälter, reichlich Cutter, Alkoholbrenner, und eine Zange. Legen Sie den Alkoholbrenner, nehmen Sie ein Glas Kapillare mit nach Hause und erhitzen Sie ein Ende der Glaskapillare auf dem Feuer des Alkoholbrenners. Verwenden Sie eine Zange, um ein weiteres Ende der Glaskapillare zu halten, bebetonen Sie die Glaskapillare schnell und sanft.Legen Sie den Glasabfall in den scharfen Behälter. Verwenden Sie den reichlichen Cutter Gretch am Pool mit Glas. Dann brechen Sie durch die Zange Sanft, um eine glatte Öffnung des Hafenblicks schnell brennen das Ende der Glaskapillare auf Alkoholbrenner mehrmals und reiben Sie das offene Ende durch reichlich Cutter sorgfältig.Nehmen Sie, wie der Fischtank aus dem kultivierten Wassersystem. Und jetzt bindet die erwachsene Weibchen, indem sie Fische mindestens zwei bis fünf Minuten auf das Eiswasser legen, bis Fische die Gill-Bewegung stoppen. Nehmen Sie den Fisch aus der Eiskiste und entfernen Sie den restlichen Wasserfischkörper mit dem Handtuch, legen Sie einen Fisch auf die D-Sektionsplatte mit vier Sätzen.Fische wurden enthauptet, indem sie Spang Akkord mit ihrer scharfen Schere servierten, um den Tod zu sichern. Verwenden Sie sezierende Schere wie folgt zu schneiden. Sezieren Sie von der Chloe Schnitt zu den Kiemen entlang der Mittellinie des Bauches, von der Bank der Chloe geschnitten, von der vorderen Spitze auf die dorsale Seite geschnitten.Entfernte vorsichtig die Haut und Muskeln auf einer Seite des Körpers, belichte die inneren Organe und nehmen gesunde ganze Eierstöcke mit vier Schritten. Die Eierstöcke wurden sofort in den 100 Millimeter in Kultur, Tellerbehälter 60%L 50 Median gelegt. Gesendet ein Sezieren Mikroskop mit Durchlichtoptik basierend auf der Größe und Morphologie der Eierstockfollikel verschiedener Stadien.Isolieren Sie diese Ovarialfollikel manuell mit einem Bier von vier Sätzen. Sammeln Sie die isolierten Ovarialfollikel und legen Sie sie in eine andere kultivierte Schale mit 60%L 50 Medium, schöne isolierte Eierstockfollikel werden verwendet, um für die Trennung von Follikelzellen und Oozyten zu trennen. Stellen Sie dann ein Gerät für die Trennung ein.Verwenden Sie ein 30 Zentimeter langes Kunststoffrohr. Ein Ende ist mit einer Ein-Milliliter-Pipettenspitze mit einem Filterelement verbunden. Ein weiteres Ende ist mit einer 200-Mikroliter-Pipettenspitze verbunden.Unter dem Trennmikroskop, verwenden Sie den Mund, um den Luftstrom zu steuern, um den defekten geht in den Pool mit Glaskapillare dann blasen die Torheit geht aus der Glaskapillare. Dabei können Follikelzellen und Oozyten von Eierstockfollikel getrennt werden. Dies ist ein Trennprozess für einen reifen Stadiumfollikel.Während des Inhalationsprozesses wird die follikelzellige Schicht von der Oozyte gelöst, tut dies nach dem Ausblasen der Follikelzelle und Oozyte kann getrennt werden. Dies ist ein vollständiger Bodenstadium Follikel. Wir können sehen, dass die follikelische Zellschicht von der Oozyte gelöst ist.Diese Methode kann auch in der Frühphase Der Eierstockfollikel angewendet werden. Dies ist ein Follikel im mittleren Latella Genesis Stadium. Dies ist ein Follikel im frühen vatella Genesis Stadium.Dies ist ein Follikel in einem Pre-vatalla Genesis Stadium. Aus diesem Bild können Sie den Prozess der Trennung sehen. Panel eins zeigt einen intakten Follikel bei ausgewachsenem Bühnenpanel.Panel zwei zeigt die Winkelung dieses Follikels in gezogene Glaskapillare. Panel drei zeigt, dass der Follikel aus der gezogenen Glaskapillare herausgeblasen wurde. Panel vier zeigt die erfolgreiche Trennung F denuded Oocyte und Follikuläre Zelle.Auch bei dieser Methode kann die Trennung der Follikelzelle in Oozyte an verschiedenen Stadiumfollikelen durchgeführt werden. Untersuchen Sie, ob die Follikelzellen von den intakten Follikel getrennt wurden. Intakt ein Follikel und ist von verschiedenen Stadien der Follikel von BV-Stadium zu FG-Stufe getrennt wurden mit DAPI gefärbt.Der Kern der Follikelzellen kann durch DAPI gefärbt werden. Das blaue Signal von DAPI wurde in intakten Follikel beobachtet, aber nicht denuded Oocytes in diesen verschiedenen Stadium Follikel. Um die klare Trennung weiter zu bestätigen, wurden die intakten Follikel und getrennten Oozyten zu den histologischen Abschnitten entkernt.DAPI-Angaben zeigten, dass Follikelzellen eindeutig entfernt und Oozyten denudiert wurden. Mit dieser Methode wurden denuded Oocytes getrennt von ausgewachsenen Stadium Follikel gefunden, um die spontane Oozytenreifung zu durchlaufen. ohne Behandlung nach vier Stunden Inkubation.Nach aktivierung durch Wasser können diese gereiften Oozyten die volle Chorionexpansion durchlaufen. Dieses Ergebnis zeigt den geringen Schaden an der Oozyte mit dieser Methode an. So kann dieser Senf verwendet werden, um die denuded Oocyte für das Studium der Oocyte gereiften Ration von Zebrafischen zu erhalten.Die Follikelschicht des Follikel kann durch ein Kapillarglasrohr entfernt werden. Diese können befruchtet werden und in die Schraffurphase delegiert werden. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass diese Methode für die In-Vitro-Fertilisation bei Zebrafischen verwendet werden kann.Wir beschreiben hier eine neuartige Methode für die schnelle und einfache Trennung von Follikelzelle und Oozyte von Zebrafischen Eierstockfollikel. Diese Methode hat mehrere wesentliche Vorteile, gekippte Methoden. In erster Linie besteht die Seisgefahr bei der Trennung, da nur eine einzige und externe Manipulation erforderlich ist.Die erhöhte Leichtigkeit der Trennung erhöht die Verfügbarkeit dieser Methode für die Forscher, die nicht in Mikrodissektion qualifiziert sind. Zweitens kann diese Methode verwendet werden, um Follikelund und Oozyte von Eierstockfollikel und frühen Entwicklungsstadien, einschließlich PV, EBV MV-Stadium, zu trennen, eine solche Trennung kann nicht im frühen Stadium Follikel mit aktuellen Methoden durchgeführt werden. Drittens führt diese neue Methode zu weniger Schaden an den Oozyten.Die durch diese Methode getrennten denuded Oocytes können der Oozytenreifung unterzogen und befruchtet werden. Darüber hinaus kann diese Methode auch bei anderen Fischen angewendet werden.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

Kultur und Co-Kultur von Maus Eierstöcke und Eibläschen

The mammalian ovary is composed of ovarian follicles, each follicle consisting of a single oocyte surrounded by somatic granulosa cells, enclosed together ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse von Zebrafisch-Larven Skelettmuskel Integrität mit Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

Isolierung und Charakterisierung von Einzelzellen aus Zebrafischembryonen

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells (ASCs)

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells ASCs

Immunomagnetische Trennung von Fett Depot-spezifische Sca1<sup&gt; Hoch</sup&gt; Fettgewebe gewonnene Stammzellen (ASC)

The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix ...

Analysis of Chromosome Segregation, Histone Acetylation, and Spindle Morphology in Horse Oocytes

Analyse der Chromosomensegregation, Histonacetylierung und Spindelmorphologie in Pferdeozyten

The field of assisted reproduction has been developed to treat infertility in women, companion animals, and endangered species. In the horse, assisted ...

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In-vitro- Wachstum der Maus Preantral Follikel in simulierter Schwerelosigkeit

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Orthotopen Eierstock Transplantationsverfahren zu untersuchen, die Gesundheit und Lebensdauer Einfluss der Eierstöcke Seneszenz bei weiblichen Mäusen

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Einzellige Ladungszustand im lebendigen intakten Zebrafisch

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computergestützte Analyse der Keimbahn Caenorhabditis Elegans , die Verteilung der Kerne, Proteine und das Zytoskelett zu studieren

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Culture and Transfection of Zebrafish Primary Cells

Kultur und Transfektion von Primärzellen Zebrafisch

Zebrafish embryos are transparent and develop rapidly outside the mother, thus allowing for excellent in vivo imaging of dynamic biological processes in ...