Name: separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish
Uploaded: 2021-04-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish at JoVE.com

עבודת מחקר זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין [32060170, 31601205 ו- 31560334], פרויקט חוקרים אורחים שנתמך על ידי מועצת המלגות של סין וקרן המעבדה המרכזית של המדינה לאקולוגיה של מים מתוקים וביוטכנולוגיה [2020FB05].

כל ההליכים המבוצעים בניסויי דגים הם בהתאם לתקנות ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים של האוניברסיטה הנורמלית הצפון-מערבית.
1. הכנות
<ol><li>חיות<ol>
<li>השתמש זברה נקבה בוגרת עם אורך גוף של 4-6 ס"מ. הערה: השתמשנו בזברהפיש משוק מקומי.</li>
		<li>שמור את דג הזברה במערכת מים מופצת עם אור 14 שעות...

<ol>
	<li>Clelland, E., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine/paracrine+control+of+zebrafish+development.">Endocrine/paracrine control of zebrafish development.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 312, 42-52 (2009).</li><li>Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrafollicular+paracrine+communication+in+the+zebrafish+ovary:+the+state+of+the+art+of+an+emerging+model+for+the+study+of+vertebrate+folliculogenesis.">Intrafollicular paracrine communication in the zebrafish ovary: the state of the art of an emerging model for the study of vertebrate folliculogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 237, 1-10 (2005).</li><li>Li, J., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+studying+ovarian+development:+Recent+advances+from+targeted+gene+knockout+studies.">Zebrafish as a model for studying ovarian development: Recent advances from targeted gene knockout studies.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 507, 1-19 (2020).</li><li>Selman, K., Wallace, R. A., Sarka, A., Qi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+oocyte+development+in+the+zebrafish,+Brachydanio+rerio.">Stages of oocyte development in the zebrafish, Brachydanio rerio.</a> Journal of Morphology. 218, 203-224 (1993).</li><li>Matzuk, M. M., Burns, K. H., Viveiros, M. M., Eppig, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intercellular+communication+in+the+mammalian+ovary:+oocytes+carry+the+conversation.">Intercellular communication in the mammalian ovary: oocytes carry the conversation.</a> Science. 296, 2178-2180 (2002).</li><li>Liu, L., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+differentiation+factor+9+and+its+spatiotemporal+expression+and+regulation+in+the+zebrafish+ovary.">Growth differentiation factor 9 and its spatiotemporal expression and regulation in the zebrafish ovary.</a> Biology of Reproduction. 76, 294-302 (2007).</li><li>Zhou, R., Tsang, A. H., Lau, S. W., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide+(PACAP)+and+its+receptors+in+the+zebrafish+ovary:+evidence+for+potentially+dual+roles+of+PACAP+in+controlling+final+oocyte+maturation.">Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) and its receptors in the zebrafish ovary: evidence for potentially dual roles of PACAP in controlling final oocyte maturation.</a> Biology of Reproduction. 85, 615-625 (2011).</li><li>Li, J., Liu, Z., Wang, D., Cheng, C. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+growth+factor+3+is+involved+in+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Insulin-like growth factor 3 is involved in oocyte maturation in zebrafish.</a> Biology of Reproduction. 84, 476-486 (2011).</li><li>Pang, Y., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+G+protein-coupled+estrogen+receptor+1,+GPER,+in+inhibition+of+oocyte+maturation+by+endogenous+estrogens+in+zebrafish.">Role of G protein-coupled estrogen receptor 1, GPER, in inhibition of oocyte maturation by endogenous estrogens in zebrafish.</a> Developmental Biology. 342, 194-206 (2010).</li><li>Peyton, C., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+estrogen+inhibition+of+oocyte+maturation+mediated+through+the+G+protein-coupled+estrogen+receptor+(Gper)+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Involvement of epidermal growth factor receptor signaling in estrogen inhibition of oocyte maturation mediated through the G protein-coupled estrogen receptor (Gper) in zebrafish (Danio rerio).</a> Biology of Reproduction. 85, 42-50 (2011).</li><li>Welch, E. L., Eno, C. C., Nair, S., Lindeman, R. E., F, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+manipulation+of+maternal+gene+products+using+in+vitro+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Functional manipulation of maternal gene products using in vitro oocyte maturation in zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55213 (2017).</li><li>Nair, S., Lindeman, R. E., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+oocyte+culture-based+manipulation+of+zebrafish+maternal+genes.">In vitro oocyte culture-based manipulation of zebrafish maternal genes.</a> Developmental Dynamics. 242, 44-52 (2013).</li><li>Seki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+reliable+in+vitro+maturation+system+for+zebrafish+oocytes.">Development of a reliable in vitro maturation system for zebrafish oocytes.</a> Reproduction. 135, 285-292 (2008).</li><li>Baars, D. L., Takle, K. A., Heier, J., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ploidy+manipulation+of+zebrafish+embryos+with+heat+shock+2+treatment.">Ploidy manipulation of zebrafish embryos with heat shock 2 treatment.</a> Journal of Visualized Experiments. , e54492 (2016).</li><li>Xie, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+based+on+in+vitro+oocyte+injection+to+improve+CRISPR/Cas9+gene+editing+in+zebrafish.">A novel technique based on in vitro oocyte injection to improve CRISPR/Cas9 gene editing in zebrafish.</a> Scientific Reports. 6, 34555 (2016).</li><li>Li, J., Bai, L., Liu, Z., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+roles+of+PDE9a+in+meiotic+maturation+of+zebrafish+oocytes.">Dual roles of PDE9a in meiotic maturation of zebrafish oocytes.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. , (2020).</li></ol>

אנו מתארים כאן שיטה חדשנית להפרדה פשוטה ומהירה של תאים זקיקים וביציטים מזקיקים בשחלות זברה. לשיטה זו מספר יתרונות על פני השיטה המקובלת. העיקרי ביניהם הוא הקלות המוגברת מאוד של הפרדה עם יעילות ויעילות גבוהה, כמו רק מניפולציה אחת וחיצונית נדרשת. נקודה זו מגבירה את הישימות לחוקרים שאינם טובי...

זברהפיש הוא אורגניזם מודל מרכזי לחקר התפתחות בעלי חוליות ופיזיולוגיה. דג הזברה יכול לשמש מודל טוב לחקר המנגנונים המולקולריים של התפתחות השחלות1,2,3. תכונות רבות של התפתחות השחלות נשמרות הרבה במהלך האבולוציה מדגים ליונקים1,2. בדומה בעלי חוליות אחרים, מבוגרים זברה יש שחלות אסינכרוניות, המכיל זקיקי השחלות של כל השלבים ההתפתחותיים4. הזקיק הוא מרכיב הרבייה הבסיסי של השחלה. הזקיק מורכב מן ביצית כי הוא מוקף אחד או כמה שכבות של תאים סומטיים הנקראים תאים זקיקים. התפתחות הזקיקים תלויה בתקשורת הדו-כיוונית בין ביציות לתאים זקיקיים5. חיוני להפריד תאים זקיקים וביצים מזקיקים בשחלות למטרות מחקר שונות כגון תרבות ראשונית של תאים זקיקים, ניתוח ביטוי גנים, התבגרות ביציות והפריה חוץ גופית.
שיטות ההפרדה המסורתיות כוללות הפרדה מכנית על ידי מלקחיים ועיכול אנזימטי6,7,8,9,10. עם זאת, ההפרדה המכנית על ידי מלקחיים היא זמן רב ומייגע. זה גם יגרום לנזק גבוה ביצית במהלך ההפרדה. למרות ששיטת עיכול האנזים פשוטה לתפעול ודורשת זמן קצר, יש לאמת את זמן הטיפול ואת ריכוז האנזימים, ושיעור השלמות וההישרדות של ביציות מבודדות אינם אידיאליים. לכן, הקמנו שיטה פשוטה להפריד בין שני התאים בשלבים התפתחותיים שונים באמצעות צינורות נימי זכוכית משוכים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >17&#945;,20&#946;-DHP</td>
			<td >Cayman</td>
			<td >16146-5 (5 mg)</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >24-well plate</td>
			<td >Corning</td>
			<td >3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ampoule cutter</td>
			<td >AS ONE</td>
			<td >5-124-22 1 bag (100 pieces)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anhydrous Na2HPO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brine shrimp</td>
			<td >Hongjie</td>
			<td >250 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CaCl2</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Culture dish</td>
			<td >Biosharp</td>
			<td >BS-90-D (10PCS/PK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >S2110 (25mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissecting Microscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection forcep</td>
			<td >VETUS</td>
			<td >HRC30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection scissor</td>
			<td >Kefu</td>
			<td >160 mm&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescence Stereomicroscope&#160;</td>
			<td >Leica</td>
			<td >M205C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass capillary</td>
			<td >IWAKI</td>
			<td >IK-PAS-5P (200 pcs/PACK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hoechst 33342</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >C0031 (1 mg)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KH2PO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leibovitz&#8217;s L-15 medium</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >41300-039 (10&#215;1L)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette tips</td>
			<td >Axygen</td>
			<td >MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaHCO3</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicilia-streptomycia</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >#15140122 (100 mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereomicroscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Discover.v20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish

זברה-פיש הפך למודל אידיאלי לחקר התפתחות השחלות של בעלי חוליות. הזקיק הוא היחידה הבסיסית של השחלה, המורכבת ביציות ותאי זקיקים שמסביב. חיוני להפריד הן תאים זקיקיים והן ביציות למטרות מחקר שונות כגון לתרבות ראשונית של תאים זקיקיים, ניתוח ביטוי גנים, התבגרות ביציות והפריה חוץ גופית וכו '. השיטה המקובלת משתמשת במלקחיים כדי להפריד בין שני התאים, שהם מייגעים, גוזלים זמן רב ויש להם נזק גבוה לבית החרמש. כאן, הקמנו שיטה פשוטה להפריד בין שני התאים באמצעות נימי זכוכית משוכים. תחת סטריאומיקרוסקופ, ביציות ותאי זקיק ניתן להפריד בקלות על ידי pipetting נימי זכוכית דק משך (הקוטר תלוי בקוטר זקיק). בהשוואה לשיטה המקובלת, שיטה חדשה זו יש יעילות גבוהה בהפרדת ביציות ותאים זקיקים ויש לו נזק נמוך ביציות. חשוב מכך, שיטה זו יכולה להיות מיושמת על זקיקים בשלב מוקדם כולל בשלב טרום vitellogenesis. לכן, שיטה פשוטה זו יכולה לשמש כדי להפריד תאים זקיקים וביציטים של זברה.

שיטה זו יכולה לשמש כדי להפריד תאים זקיקים ביציות בשלבים שונים של התפתחות זקיק השחלות ב zebrafish. איור 1 מראה את ההפרדה בין ביציות זברה ותאי זקיקים מזקיקים בשחלות באמצעות צינור זכוכית נימי(איור 1). כדי לחקור אם התאים הזקיקיים הופרדו מזקיקים שלמים, הזקיקים שלמים ו...

Watch this Scientific Journal Video about Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish at JoVE.com

Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish

כאן, אנו מציגים שיטה פשוטה להפרדת תאים זקיקיים וביצית בזקיקים השחלות זברה, אשר יקל על חקירות של התפתחות השחלות ב זברה.

הפרדת תאים זקיקים וביצים בזקיקי השחלות של זברהפיש

Zebrafish has become an ideal model to study the ovarian development of vertebrates. The follicle is the basic unit of the ovary, which consists of ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להפריד תאים זקיקיים ו Oocytes בזקיק השחלות של זברה. הזקיקים הם היחידה הבסיסית של השחלה, המורכבת מהאוציטים ומהתאים הזקיקיים שמסביב. זהו הכלי הרחב להפריד הן את התא הזקיקי והן את התאים החיצוניים למדיניות מחקרית היטב, כולל לכידה ראשונית של תאים זקיקיים ועולה על ביטוי גנים, כל הרוויה והפריה חוץ גופית.לאחרונה, הזברהפיש הפך למודל רב עוצמה של ניסאן, שחוקרת שליטה בהתפתחות כבר. כאן, אנו מציגים שיטה פשוטה, כך מפריד תאים זקיקיים וביציתות של זברהפיש זקיק אשר יאפשר חקירות של התפתחות כבר זברה המסחרי, אין מסה או שני נפרדים על תאים זקיקיים וכל הצדדים של ספינים משתמשים פוסט אשר יש מבוך, זמן רב היה נזק גבוה מבחוץ. כאן, הקמנו שיטה פשוטה לשני תאים נפרדים באמצעות משקפיים או חלק שיעור טמלה תחת שונית טהורה.היקף המטרו שלנו, הן בחוץ והן בתאים הזקיקיים ניתן לפברק בקלות על ידי הקלדת נימי זכוכית משך. ראשית, להכין נימי זכוכית משורר. הכה את ראשו של נימי זכוכית על מבער האלכוהול.השתמש בארבעה צדדים כדי למתוח את נימי הזכוכית לקוטר כרטיס הרייב. שנית, לדכא את זה overate מן הדגים נקבה בוגרת, לבודד זקיקי השחלות מן השחלה. לבסוף להשתמש נימי זכוכית נשאל כדי להפריד תא זקיקים ו Oocyte מזקיקי השחלות.מכינים את נימי הזכוכית, מיכל חדות, חותך בשפע, מבער אלכוהול ומלקחיים. שקר מבער אלכוהול, לקחת הביתה נימי לחמם קצה אחד של נימי זכוכית על האש של מבער אלכוהול. השתמש מלקחיים להחזיק קצה נוסף של נימי זכוכית, להדגיש את נימי זכוכית במהירות ובעדינות.שים את פסולת הזכוכית למיכל החדים. השתמש חותך בשפע Gretch על הבריכה עם זכוכית. ואז לשבור על ידי מלקחיים בעדינות כדי להפוך פתיחה חלקה של מבט הנמל במהירות לשרוף את קצה נימי הזכוכית על מבער אלכוהול מספר פעמים ולשפשף את הקצה הפתוח על ידי חותך בשפע בזהירות.קח איך מיכל הדגים ממערכת המים המעובדים. ועכשיו הנקבות הבוגרות קושרות על ידי הנחת דגים על מי הקרח לפחות שתיים עד חמש דקות עד שהדגים עוצרים את תנועת גיל. מוציאים את הדגים מקופסת הקרח ומסירים את גוף דגי המים הנותר במגבת, מניחים דג על צלחת החלק D עם ארבעה סטים.דגים נערפו על ידי הגשת אקורד Spang באמצעות המספריים החדים שלהם כדי להבטיח את המוות. השתמש בניתוח מספריים כדי לחתוך כדלקמן. לנתח מחיתוך קלואי לזימים לאורך קו האמצע של הבטן, לחתוך מגדת קלואי, לחתוך מהקצה הצדדי לצד הגבי.הסיר בעדינות את העור והשרירים בצד אחד של הגוף, לחשוף את האיברים הפנימיים ולקחת שחלה שלמה בריאה עם ארבעה שלבים. השחלות הונחו בעדינות מיד בתרבות 100 מילימטר, מיכל צלחת 60%L 50 חציון. שלח מיקרוסקופ מנתח עם אופטיקת אור משודרת המבוססת על הגודל והמורפולוגיה של זקיקי השחלות בשלבים שונים.לבודד זקיקי השחלות האלה באופן ידני באמצעות בירה של מתחרה ארבעה סטים. לאסוף את זקיקי השחלות המבודדים ולשים אותם בצלחת תרבותית אחרת המכילה 60%L 50 בינוני, זקיקי השחלות מבודדים נחמד ישמש להפרדת תאים זקיקים ו Oocytes. לאחר מכן הגדר התקן להפרדה.השתמש בצינור פלסטיק 30 ס"מ. קצה אחד מחובר עם קצה פיפטה מיליליטר אחד עם אלמנט מסנן. קצה נוסף מחובר עם קצה פיפטה 200 מיקרוליטר.תחת מיקרוסקופ מנתח, להשתמש בפה כדי לשלוט על זרימת האוויר כדי לאפשר את הפגום הולך לעבור לבריכה עם נימי זכוכית ואז לפוצץ את האיוולת יוצא נימי זכוכית. במהלך תהליך זה, תא זקיקים ו Oocytes של זקיקי השחלות ניתן להפריד. זהו תהליך פרידה לזקיק שלב בוגר.במהלך תהליך השאיפה, שכבת התא הזקיקי מנותקת מן Oocyte, עושה לאחר נושבת את התא הזקיקי ו Oocyte ניתן להפריד. זהו זקיק שלב קרקע מלא. אנחנו יכולים לראות את שכבת התא הזקיקי מנותקת מהאוציטה.שיטה זו יכולה להיות מיושמת גם בשלב מוקדם זקיקי השחלות. זהו זקיק בשלב הלייטלה ג'נסיס האמצעי. זהו זקיק בשלב מוקדם של ואטלה בראשית.זהו זקיק בשלב טרום ואטלה בראשית. מתמונה זו, באפשרותך לראות את תהליך ההפרדה. פאנל אחד מציג זקיק שלם בלוח במה בוגר מלא.פאנל 2 מראה את הזווית של זקיק זה לתוך נימי זכוכית משוך. פאנל 3 מראה שהזקיקי פוצץ מתוך נימי הזכוכית שנמשכו. פאנל 4 מציין את ההפרדה המוצלחת F denuded Oocyte ותא זקיק.אפילו שיטה זו, הפרדת תא זקיק ב Oocyte יכול להתבצע בשלבים שונים זקיקים. לחקור אם התאים הזקיקיים הופרדו מן הזקיקים שלמים. שלם זקיק והוא מופרד Oocyte משלבים שונים של זקיקים משלב BV לשלב FG היו מוכתמים DAPI.הגרעין של תאים זקיקיים יכול להיות מוכתם על ידי DAPI. האות הכחול של DAPI נצפה בזקיקים שלמים אך לא באוציטים מנוכרים בזקיקי השלב השונים האלה. כדי לאשר עוד יותר את ההפרדה הברורה, הזקיקים השלמים והאוציטים המופרדים היו הרוסים לחלקים ההיסטולוגיים.DAPI המציין תוצאות הראו כי תאים זקיקיים הוסרו בבירור ו denuded Oocytes. בשיטה זו, אוציטים מנודים מופרדים מזקיקי במה בוגרים נמצאו לעבור את התבגרות Oocyte ספונטנית. ללא כל טיפול לאחר ארבע שעות דגירה.לאחר הפעלה על ידי מים, אלה Oocytes התבגר יכול לעבור את הרחבת chorion מלא. תוצאה זו מציינת את הנזק הנמוך ל- Oocyte בשיטה זו. לכן, חרדל זה יכול לשמש כדי לקבל את Oocyte denuded ללימוד Oocyte התבגר מנה של דגי זברה.ניתן להסיר את שכבת החומר הזקיקית לזקיקים על ידי צינור זכוכית נימי. אלה יכולים להיות מופרים ולהתפתח לשלב הבקיעה. התוצאות מראות כי שיטה זו יכולה לשמש הפריה חוץ גופית בדגי זברה.אנו מתארים כאן שיטה חדשנית להפרדה מהירה וקלה של תא זקיקים וביצית מזקיקי השחלות של דגי זברה. לשיטה זו מספר יתרונות משמעותיים, מתודולוגיות הפוכות. העיקרי ביניהם הוא להגדיל מאוד את קלות ההפרדה כמו רק מניפולציה אחת וחיצונית נדרשת.הקלות המוגברת של ההפרדה מגדילה את הזמינות של שיטה זו לאותם חוקרים שאינם מיומנים במיקרו-דיסקציה. שנית, שיטה זו יכולה לשמש כדי להפריד תא זקיקי ו Oocyte של זקיקי השחלות ושלבים התפתחותיים מוקדמים, כולל PV, שלב MV EBV, הפרדה כזו לא ניתן לבצע בשלב מוקדם זקיק באמצעות מתודולוגיות הנוכחי. שלישית, שיטה חדשה זו מובילה לפחות נזק לאוציטים.הביציות המופרדות בשיטה זו יכולות לעבור את התבגרות הביצית וניתן להפרותן. בנוסף, שיטה זו יכולה להיות מיושמת גם דגים אחרים.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

תרבות ושיתוף התרבות של עכבר שחלות וזקיקים בשחלות

The mammalian ovary is composed of ovarian follicles, each follicle consisting of a single oocyte surrounded by somatic granulosa cells, enclosed together ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

ניתוח של יושרה שריר שלד דג הזברה זחלים עם אוונס הכחול צבע

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

בידוד ואפיון של תאים בודדים מעוברים דג הזברה

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells (ASCs)

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells ASCs

הפרדת immunomagnetic של שומן דיפו ספציפי Sca1<sup&gt; גבוה</sup&gt; בתאי גזע שמקורם שומן (ASCs)

The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix ...

Analysis of Chromosome Segregation, Histone Acetylation, and Spindle Morphology in Horse Oocytes

ניתוח של הפרדת כרומוזום, אצטון היסטון, ומורפולוגיה ציר ב סוס ביציות

The field of assisted reproduction has been developed to treat infertility in women, companion animals, and endangered species. In the horse, assisted ...

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

במבחנה צמיחה של העכבר זקיקים Preantral תחת Microgravity מדומה

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

נהלים השתלת השחלות Orthotopic לחקור את ההשפעה ואת בריאות-תוחלת החיים של השחלות הזדקנות ביולוגית בעכברים הנשי

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion תא בודד בהמחיה שלם דג זברה

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

ניתוח חישובית של Germline Caenorhabditis elegans ללמוד הפצה של גרעינים, חלבונים ו את שלד התא

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Culture and Transfection of Zebrafish Primary Cells

תרבות, תרביות תאים תאים ראשי דג זברה

Zebrafish embryos are transparent and develop rapidly outside the mother, thus allowing for excellent in vivo imaging of dynamic biological processes in ...