Name: separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish
Uploaded: 2021-04-18T14:00:00
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इस शोध कार्य को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन [32060170, 31601205 और 31560334] द्वारा समर्थित, चीन छात्रवृत्ति परिषद द्वारा समर्थित विद्वान परियोजना और मीठे पानी पारिस्थितिकी और जैव प्रौद्योगिकी की राज्य कुंजी प्रयोगशाला [2020FB05] द्वारा समर्थित किया गया था।

मछली प्रयोगों में किए गए सभी प्रक्रियाएं नॉर्थवेस्ट नॉर्मल यूनिवर्सिटी की एनिमल एक्सपेरिमेंट एथिक्स कमेटी के नियमों के मुताबिक होती हैं ।
1. तैयारी
<ol><li>जानवरों<ol>
<li>4-6 सेमी की शरीर की लंबाई के...

<ol>
	<li>Clelland, E., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine/paracrine+control+of+zebrafish+development.">Endocrine/paracrine control of zebrafish development.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 312, 42-52 (2009).</li><li>Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrafollicular+paracrine+communication+in+the+zebrafish+ovary:+the+state+of+the+art+of+an+emerging+model+for+the+study+of+vertebrate+folliculogenesis.">Intrafollicular paracrine communication in the zebrafish ovary: the state of the art of an emerging model for the study of vertebrate folliculogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 237, 1-10 (2005).</li><li>Li, J., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+studying+ovarian+development:+Recent+advances+from+targeted+gene+knockout+studies.">Zebrafish as a model for studying ovarian development: Recent advances from targeted gene knockout studies.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 507, 1-19 (2020).</li><li>Selman, K., Wallace, R. A., Sarka, A., Qi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+oocyte+development+in+the+zebrafish,+Brachydanio+rerio.">Stages of oocyte development in the zebrafish, Brachydanio rerio.</a> Journal of Morphology. 218, 203-224 (1993).</li><li>Matzuk, M. M., Burns, K. H., Viveiros, M. M., Eppig, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intercellular+communication+in+the+mammalian+ovary:+oocytes+carry+the+conversation.">Intercellular communication in the mammalian ovary: oocytes carry the conversation.</a> Science. 296, 2178-2180 (2002).</li><li>Liu, L., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+differentiation+factor+9+and+its+spatiotemporal+expression+and+regulation+in+the+zebrafish+ovary.">Growth differentiation factor 9 and its spatiotemporal expression and regulation in the zebrafish ovary.</a> Biology of Reproduction. 76, 294-302 (2007).</li><li>Zhou, R., Tsang, A. H., Lau, S. W., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide+(PACAP)+and+its+receptors+in+the+zebrafish+ovary:+evidence+for+potentially+dual+roles+of+PACAP+in+controlling+final+oocyte+maturation.">Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) and its receptors in the zebrafish ovary: evidence for potentially dual roles of PACAP in controlling final oocyte maturation.</a> Biology of Reproduction. 85, 615-625 (2011).</li><li>Li, J., Liu, Z., Wang, D., Cheng, C. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+growth+factor+3+is+involved+in+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Insulin-like growth factor 3 is involved in oocyte maturation in zebrafish.</a> Biology of Reproduction. 84, 476-486 (2011).</li><li>Pang, Y., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+G+protein-coupled+estrogen+receptor+1,+GPER,+in+inhibition+of+oocyte+maturation+by+endogenous+estrogens+in+zebrafish.">Role of G protein-coupled estrogen receptor 1, GPER, in inhibition of oocyte maturation by endogenous estrogens in zebrafish.</a> Developmental Biology. 342, 194-206 (2010).</li><li>Peyton, C., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+estrogen+inhibition+of+oocyte+maturation+mediated+through+the+G+protein-coupled+estrogen+receptor+(Gper)+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Involvement of epidermal growth factor receptor signaling in estrogen inhibition of oocyte maturation mediated through the G protein-coupled estrogen receptor (Gper) in zebrafish (Danio rerio).</a> Biology of Reproduction. 85, 42-50 (2011).</li><li>Welch, E. L., Eno, C. C., Nair, S., Lindeman, R. E., F, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+manipulation+of+maternal+gene+products+using+in+vitro+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Functional manipulation of maternal gene products using in vitro oocyte maturation in zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55213 (2017).</li><li>Nair, S., Lindeman, R. E., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+oocyte+culture-based+manipulation+of+zebrafish+maternal+genes.">In vitro oocyte culture-based manipulation of zebrafish maternal genes.</a> Developmental Dynamics. 242, 44-52 (2013).</li><li>Seki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+reliable+in+vitro+maturation+system+for+zebrafish+oocytes.">Development of a reliable in vitro maturation system for zebrafish oocytes.</a> Reproduction. 135, 285-292 (2008).</li><li>Baars, D. L., Takle, K. A., Heier, J., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ploidy+manipulation+of+zebrafish+embryos+with+heat+shock+2+treatment.">Ploidy manipulation of zebrafish embryos with heat shock 2 treatment.</a> Journal of Visualized Experiments. , e54492 (2016).</li><li>Xie, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+based+on+in+vitro+oocyte+injection+to+improve+CRISPR/Cas9+gene+editing+in+zebrafish.">A novel technique based on in vitro oocyte injection to improve CRISPR/Cas9 gene editing in zebrafish.</a> Scientific Reports. 6, 34555 (2016).</li><li>Li, J., Bai, L., Liu, Z., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+roles+of+PDE9a+in+meiotic+maturation+of+zebrafish+oocytes.">Dual roles of PDE9a in meiotic maturation of zebrafish oocytes.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. , (2020).</li></ol>

हम यहां ज़ेब्राफ़िश ओवेरियन रोम से कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स के सरल और तेजी से पृथक्करण के लिए एक उपन्यास विधि का वर्णन करते हैं। इस विधि पारंपरिक विधि पर कई फायदे हैं। इनमें से प्राथमिक उच्च दक्षता और प?...

जेब्राफिश कशेरुकी विकास और शरीर विज्ञान के अध्ययन के लिए एक प्रमुख मॉडल जीव है। जेब्राफिश ओवेरियन डेवलपमेंट 1 ,2,3के आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक अच्छे मॉडल के रूप में काम करसकताहै । मछली से लेकर स्तनधारियों तक विकास के दौरान ओवेरियन विकास की कई विशेषताएं संरक्षित हैं1,2. अन्य कशेरुकी के समान, जेब्राफिश वयस्कों में अतुल्णीय अंडाशय होते हैं, जिनमें सभी विकासात्मक चरणों के अंडाशय के रोम होते हैं4। कूप अंडाशय का मौलिक प्रजनन तत्व है। कूप में ओसाइट होता है जो दैहिक कोशिकाओं की एक या कई परतों से घिरा होता है जिसे कूप कोशिकाएं कहा जाता है। रोम का विकास ओसाइट्स और कूप कोशिकाओं के बीच द्विदिशात्मक संचार पर निर्भर करता है5. कूप कोशिका प्राथमिक संस्कृति, जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, ओसाइट परिपक्वता और इन विट्रो निषेचन जैसे विभिन्न शोध उद्देश्यों के लिए ओवेरियन रोम से कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स को अलग करना महत्वपूर्ण है।
पारंपरिक पृथक्करण विधियों में बलदे और एंजाइमेटिक पाचन द्वारा यांत्रिक पृथक्करण शामिल हैं6,7,8,9,10. हालांकि, संदंश द्वारा यांत्रिक जुदाई समय लेने वाली और श्रमसाध्य है। यह भी जुदाई के दौरान ऊसाइट को अधिक नुकसान का कारण होगा। यद्यपि एंजाइम पाचन विधि संचालित करने के लिए सरल है और थोड़े समय की आवश्यकता होती है, उपचार समय और एंजाइम एकाग्रता को मान्य किया जाना चाहिए, और अलग-थलग ओसाइट्स की अखंडता और जीवित रहने की दर आदर्श नहीं है। इसलिए, हमने खींचे गए ग्लास केशिका ट्यूबों का उपयोग करके विभिन्न विकासात्मक चरणों में दोनों डिब्बों को अलग करने के लिए एक सरल विधि स्थापित की है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >17&#945;,20&#946;-DHP</td>
			<td >Cayman</td>
			<td >16146-5 (5 mg)</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >24-well plate</td>
			<td >Corning</td>
			<td >3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ampoule cutter</td>
			<td >AS ONE</td>
			<td >5-124-22 1 bag (100 pieces)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anhydrous Na2HPO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brine shrimp</td>
			<td >Hongjie</td>
			<td >250 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CaCl2</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Culture dish</td>
			<td >Biosharp</td>
			<td >BS-90-D (10PCS/PK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >S2110 (25mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissecting Microscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection forcep</td>
			<td >VETUS</td>
			<td >HRC30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection scissor</td>
			<td >Kefu</td>
			<td >160 mm&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescence Stereomicroscope&#160;</td>
			<td >Leica</td>
			<td >M205C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass capillary</td>
			<td >IWAKI</td>
			<td >IK-PAS-5P (200 pcs/PACK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hoechst 33342</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >C0031 (1 mg)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KH2PO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leibovitz&#8217;s L-15 medium</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >41300-039 (10&#215;1L)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette tips</td>
			<td >Axygen</td>
			<td >MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaHCO3</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicilia-streptomycia</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >#15140122 (100 mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereomicroscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Discover.v20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish

जेब्राफिश कशेरुकी के अंडाशय के विकास का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श मॉडल बन गया है। कूप अंडाशय की मूल इकाई है, जिसमें ओसाइट्स और आसपास के कूप कोशिकाएं होती हैं। विभिन्न शोध उद्देश्यों के लिए कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स दोनों को अलग करना महत्वपूर्ण है जैसे कि कूप कोशिकाओं की प्राथमिक संस्कृति, जीन अभिव्यक्ति का विश्लेषण, ओसाइट परिपक्वता और इन विट्रो निषेचन आदि। पारंपरिक विधि दोनों डिब्बों को अलग करने के लिए संदंश का उपयोग करती है, जो श्रमसाध्य, समय लेने वाली है और ओसाइट को उच्च क्षति होती है। यहां, हमने खींचे गए ग्लास केशिका का उपयोग करके दोनों डिब्बों को अलग करने के लिए एक सरल विधि स्थापित की है। एक स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के तहत, ओसाइट्स और कूप कोशिकाओं को आसानी से एक खींचे गए ठीक ग्लास केशिका (व्यास कूप व्यास पर निर्भर करता है) में पाइपिंग द्वारा अलग किया जा सकता है। पारंपरिक विधि के साथ तुलना में, इस नई विधि दोनों oocytes और कूप कोशिकाओं को अलग करने में उच्च दक्षता है और oocytes को कम नुकसान है । इससे भी महत्वपूर्ण बात, इस विधि को पूर्व-विटेलोजेनेसिस चरण सहित प्रारंभिक चरण के रोम पर लागू किया जा सकता है। इस प्रकार, इस सरल विधि का उपयोग कूप कोशिकाओं और जेब्राफिश के ओसाइट्स को अलग करने के लिए किया जा सकता है।

इस विधि का उपयोग जेब्राफिश में ओवेरियन कूप विकास के विभिन्न चरणों में कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स को अलग करने के लिए किया जा सकता है। चित्रा 1 एक केशिका ग्लास ट्यूब(चित्रा 1)का उपयोग क?...

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Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish

यहां, हम जेब्राफिश ओवेरियन रोम में कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स को अलग करने के लिए एक सरल विधि प्रस्तुत करते हैं, जो जेब्राफिश में अंडाशय के विकास की जांच की सुविधा प्रदान करेगा।

जेब्राफिश के ओवेरियन रोम में कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स का पृथक्करण

Zebrafish has become an ideal model to study the ovarian development of vertebrates. The follicle is the basic unit of the ovary, which consists of ...

इस प्रक्रिया का समग्र लक्ष्य ज़ेब्राफ़िश के ओवेरियन कूप में कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स को अलग करना है। कूप अंडाशय की मूल इकाई है, जिसमें ओसाइट्स और आसपास की कूप कोशिकाएं होती हैं। यह कूप कोशिकाओं के प्राथमिक कब्जे और जीन अभिव्यक्ति, सभी संतृप्ति और इन विट्रो निषेचन पर उगता सहित अच्छी तरह से अनुसंधान नीतियों के लिए दोनों कूप कोशिका और बाहर के डिब्बों को अलग करने के लिए व्यापक उपकरण है ।हाल ही में, ज़ेब्राफिश निसान का एक शक्तिशाली मॉडल बन गया है, जो पहले से ही विकास के नियंत्रण का अध्ययन करता है। यहां, हम एक सरल विधि प्रस्तुत करते हैं, इसलिए ज़ेब्राफ़िश कूप के कूप कोशिकाओं और ओसाइट्स को अलग करता है जो ज़ेब्राफिश कूप में पहले से ही विकास की जांच की सुविधा प्रदान करेगा वाणिज्यिक, कोई द्रव्यमान या दो कूप कोशिकाओं के बारे में अलग करता है और स्पिन के सभी पक्ष पोस्ट का उपयोग कर रहे हैं जिसमें भूलभुलैया, समय लेने वाली है और बाहर को उच्च क्षति हुई है। यहां, हम एक शुद्ध चट्टान के तहत दो अलग डिब्बों या भाग चश्मा Tamela दर का उपयोग करने के लिए एक सरल विधि की स्थापना की है ।हमारे मेट्रो स्कोप, दोनों बाहर और कूप कोशिकाओं को आसानी से खींचा ग्लास केशिका टाइप करके गढ़े जा सकते हैं । सबसे पहले, एक कवि ग्लास केशिका तैयार करें। शराब बर्नर पर कांच केशिका के सिर मारा।बड़बड़ाना कार्ड व्यास के लिए कांच केशिका खिंचाव के लिए एक चार पक्षों का प्रयोग करें । दूसरे, वयस्क मादा मछली से ओवररेट करने वाले डिस् ट, अंडाशय के रोम को अंडाशय से अलग करते हैं। अंत में ओवेरियन रोम से कूप कोशिका और ऊसाइट को अलग करने के लिए एक पोल ग्लास केशिका का उपयोग करें।ग्लास केशिका, शार्प्स कंटेनर, पर्याप्त कटर, अल्कोहल बर्नर और एक संदंश तैयार करें। शराब बर्नर झूठ, घर एक गिलास केशिका ले और शराब बर्नर की आग पर कांच केशिका के एक छोर गर्मी । ग्लास केशिका के एक और छोर को पकड़ने के लिए एक संदंश का उपयोग करें, ग्लास केशिका को जल्दी और धीरे से तनाव दें।कांच के कचरे को शार्प्स कंटेनर में डाल दें। कांच के साथ पूल पर पर्याप्त कटर ग्रेच का प्रयोग करें। फिर धीरे-धीरे संदंश से तोड़ दें ताकि बंदरगाह की नज़र का एक चिकनी उद्घाटन हो सके, जल्दी से अल्कोहल बर्नर पर ग्लास केशिका के अंत को कई बार जलाएं और खुले अंत को पर्याप्त कटर से सावधानी से रगड़ें।खेती की पानी की व्यवस्था से मछली की टंकी कैसे लें। और अब कम से दो से पांच मिनट के लिए बर्फ के पानी पर मछली रखकर वयस्क महिलाओं के संबंधों जब तक मछली गिल आंदोलन बंद करो । बर्फ के बक्से से मछली बाहर ले जाओ और तौलिया द्वारा शेष पानी मछली शरीर को हटा दें, चार सेट के साथ डी अनुभाग प्लेट पर एक मछली रखा ।मछली को मौत सुनिश्चित करने के लिए अपने तेज कैंची का उपयोग करके स्पैंग राग परोसकर decapitated किया गया । इस प्रकार काटने के लिए विच्छेदन कैंची का उपयोग करें। क्लो कट से पेट के मिडलाइन के साथ गिलों में विच्छेदन करें, क्लो के किनारे से काटे जाएं, पूर्वकाल टिप से पृष्ठीय पक्ष में काटे जाएं।धीरे-धीरे शरीर के एक तरफ त्वचा और मांसपेशियों को हटा दें, आंतरिक अंगों को बेनकाब करें और चार चरणों के साथ स्वस्थ संपूर्ण अंडाशय लें। अंडाशय धीरे संस्कृति में १०० मिलीमीटर में तुरंत रखा गया, पकवान कंटेनर ६०% एल ५० औसत । विभिन्न चरणों के अंडाशय के रोम के आकार और आकृति विज्ञान के आधार पर संचारित प्रकाश प्रकाश प्रकाशिकी के साथ एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप भेजा।चार सेटों की होड़ की बियर का उपयोग करके इन अंडाशय के रोम को मैन्युअल रूप से अलग करें। अलग अंडाशय रोम ले लीजिए और उन्हें एक और सुसंस्कृत पकवान में डाल 60% एल 50 मध्यम, अच्छा अलग अंडाशय रोम कूप कोशिकाओं और Oocytes अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा। फिर जुदाई के लिए एक डिवाइस सेट करें।30 सेंटीमीटर प्लास्टिक ट्यूब का इस्तेमाल करें। एक छोर एक फिल्टर तत्व के साथ एक मिलीलीटर पिपेट टिप के साथ जुड़ा हुआ है। एक और अंत 200 माइक्रोलीटर पिपेट टिप से जुड़ा हुआ है।डिफेक्टिंग माइक्रोस्कोप के तहत, हवा के प्रवाह को नियंत्रित करने के लिए मुंह का उपयोग करें ताकि दोषपूर्ण ग्लास केशिका के साथ पूल में जा रहा हो तो मूर्खता को कांच के केशिका से बाहर चला जाता है। इस प्रक्रिया के दौरान, ओवेरियन रोम के कूप कोशिका और ओसाइट्स को अलग किया जा सकता है। यह एक परिपक्व चरण कूप के लिए एक जुदाई प्रक्रिया है ।साँस लेने की प्रक्रिया के दौरान, कूप कोशिका परत Oocyte से अलग है, कूप सेल बाहर उड़ाने के बाद करता है और Oocyte अलग किया जा सकता है। यह एक पूर्ण जमीनी चरण कूप है । हम देख सकते हैं कि कूप कोशिका परत ओसाइट से अलग है।इस विधि को प्रारंभिक चरण के अंडाशय के रोम में भी लागू किया जा सकता है। यह मध्य लेल्ला उत्पत्ति चरण में एक कूप है। यह प्रारंभिक वाटेला उत्पत्ति चरण में एक कूप है।यह एक पूर्व वात्ला उत्पत्ति चरण में एक कूप है। इस तस्वीर से आप जुदाई की प्रक्रिया देख सकते हैं। पैनल एक पूर्ण विकसित मंच पैनल में एक बरकरार कूप से पता चलता है ।पैनल दो खींचा ग्लास केशिका में इस कूप के अंगगुलाण से पता चलता है । पैनल तीन से पता चलता है कूप खींच लिया ग्लास केशिका से बाहर उड़ा दिया गया था । पैनल चार सफल जुदाई एफ denuded Oocyte और कूप सेल इंगित करता है ।यहां तक कि इस विधि, ऊसाइट में कूप कोशिका का पृथक्करण विभिन्न चरण रोम पर किया जा सकता है। जांच करें कि क्या कूप कोशिकाओं को अक्षुण्ण रोम से अलग किया गया था। एक कूप को बरकरार रखा है और बीवी चरण से एफजी चरण तक रोम के विभिन्न चरणों से ओसाइट को अलग किया गया है, जो डीएपीआई से सना हुआ था।कूप कोशिकाओं के नाभिक दापी द्वारा दाग किया जा सकता है। DAPI का नीला संकेत अक्षुण्ण रोम में देखा गया था, लेकिन इन विभिन्न चरण रोम पर Oocytes denuded नहीं । स्पष्ट अलगाव की पुष्टि करने के लिए, अक्षुण्ण रोम और अलग Oocytes हिस्टोलॉजिकल वर्गों के लिए गटिंग थे ।DAPI बताते हुए परिणामों से पता चला है कि कूप कोशिकाओं को स्पष्ट रूप से हटा दिया गया था और Oocytes denuded । इस विधि का उपयोग करके, पूर्ण विकसित चरण के रोम से अलग किए गए ओसाइट्स को सहज ओसाइट परिपक्वता से गुजरना पाया गया। चार घंटे इनक्यूबेशन के बाद बिना किसी इलाज के।पानी से सक्रियण के बाद, ये परिपक्व ऊसाइट्स पूर्ण तारिण विस्तार से गुजर सकते हैं। यह परिणाम इस विधि का उपयोग करके ओसाइट को कम नुकसान इंगित करता है। इस प्रकार, इस सरसों का उपयोग जेब्रा मछली के ओसाइट परिपक्व राशन का अध्ययन करने के लिए डेन्ड ओसाइट प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है।कूप के लिए सामग्री की कूप परत एक केशिका ग्लास ट्यूब द्वारा हटाया जा सकता है। इन्हें निषेचित किया जा सकता है और हैचिंग चरण में विभाजित किया जा सकता है। परिणाम बताते हैं कि इस विधि का उपयोग जेब्रा मछली में इन विट्रो निषेचन के लिए किया जा सकता है।हम यहां ज़ेबरा मछली अंडाशय रोम से कूप कोशिका और Oocyte के तेजी से और आसान जुदाई के लिए एक उपन्यास विधि का वर्णन करते हैं । इस विधि के कई महत्वपूर्ण फायदे हैं, जो विधियां पलट गए हैं। इनमें से प्राथमिक अलगाव की आसानी को बहुत बढ़ाना है क्योंकि केवल एक और बाहरी हेरफेर की आवश्यकता है ।पृथक्करण की बढ़ी हुई आसानी उन शोधकर्ताओं को माइक्रोडिसेक्शन में कुशल नहीं होने के लिए इस विधि की उपलब्धता बढ़ाती है। दूसरा, इस विधि का उपयोग पीवी, ईबीवी एमवी चरण सहित ओवेरियन रोम और प्रारंभिक विकास चरणों के कूप कोशिका और ओसाइट को अलग करने के लिए किया जा सकता है, इस तरह के पृथक्करण को वर्तमान पद्धतियों का उपयोग करके प्रारंभिक चरण के कूप में नहीं किया जा सकता है। तीसरा, इस नई विधि से ओसाइट्स को कम नुकसान होता है।इस विधि से अलग किए गए ऊसाइट्स ओसाइट परिपक्वता से गुजर सकते हैं और निषेचित किए जा सकते हैं। इसके अलावा इस विधि को अन्य मछलियों में भी लगाया जा सकता है।

Research

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The isolation of adipose-derived stem cells (ASCs) is an important method in the field of adipose tissue biology, adipogenesis, and extracellular matrix ...

Analysis of Chromosome Segregation, Histone Acetylation, and Spindle Morphology in Horse Oocytes

क्रोमोजोम अलगाव का विश्लेषण, हिस्टोन एसिटिलेशन, और स्पिंडल मोर्फ़ोलॉजी इन हॉर्स ओक्साइट्स

The field of assisted reproduction has been developed to treat infertility in women, companion animals, and endangered species. In the horse, assisted ...

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

In Vitro Growth of Mouse Preantral Follicles Under Simulated Microgravity

इन विट्रो नकली Microgravity के तहत माउस Preantral कूप की वृद्धि

14 day-old mouse ovarian tissue and preantral follicles isolated from same-aged mice were incubated in a simulated microgravity culture system. We ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Orthotopic डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं मादा चूहों में डिम्बग्रंथि वार्धक्य के जीवन और स्वास्थ्य अवधि के प्रभाव की जांच करने के लिए

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

सिंगल सेल Photoconversion में रह Zebrafish बरकरार

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

नाभिक, प्रोटीन, और Cytoskeleton के वितरण का अध्ययन करने के लिए Caenorhabditis एलिगेंस Germline का अभिकलनी विश्लेषण

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Culture and Transfection of Zebrafish Primary Cells

Zebrafish प्राथमिक कोशिकाओं की संस् कृति और अभिकर्मक

Zebrafish embryos are transparent and develop rapidly outside the mother, thus allowing for excellent in vivo imaging of dynamic biological processes in ...