Name: separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish
Uploaded: 2021-04-18T14:00:00
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Questo lavoro di ricerca è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China [32060170, 31601205 e 31560334], progetto di visiting scholar sostenuto dal China Scholarship Council e dal fondo del Laboratorio chiave statale di ecologia e biotecnologia d'acqua dolce [2020FB05].

Tutte le procedure eseguite negli esperimenti sui pesci sono conformi alle normative del Comitato Etico per la Sperimentazione Animale della Northwest Normal University.
1. Preparativi
<ol><li>animali<ol>
<li>Usa il pesce zebra femmina adulto con una lunghezza del corpo di 4-6 cm. NOTA: Abbiamo usato il pesce zebra di un mercato locale.</li>
		<li>Mantenere il pesce zebra in un sistema idrico circolato con una luce di 14 ore e un ciclo buio di 10 ore a circa 28 °C.</li>
		<li>Nutrire il ...

<ol>
	<li>Clelland, E., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine/paracrine+control+of+zebrafish+development.">Endocrine/paracrine control of zebrafish development.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 312, 42-52 (2009).</li><li>Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrafollicular+paracrine+communication+in+the+zebrafish+ovary:+the+state+of+the+art+of+an+emerging+model+for+the+study+of+vertebrate+folliculogenesis.">Intrafollicular paracrine communication in the zebrafish ovary: the state of the art of an emerging model for the study of vertebrate folliculogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 237, 1-10 (2005).</li><li>Li, J., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+studying+ovarian+development:+Recent+advances+from+targeted+gene+knockout+studies.">Zebrafish as a model for studying ovarian development: Recent advances from targeted gene knockout studies.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 507, 1-19 (2020).</li><li>Selman, K., Wallace, R. A., Sarka, A., Qi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+oocyte+development+in+the+zebrafish,+Brachydanio+rerio.">Stages of oocyte development in the zebrafish, Brachydanio rerio.</a> Journal of Morphology. 218, 203-224 (1993).</li><li>Matzuk, M. M., Burns, K. H., Viveiros, M. M., Eppig, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intercellular+communication+in+the+mammalian+ovary:+oocytes+carry+the+conversation.">Intercellular communication in the mammalian ovary: oocytes carry the conversation.</a> Science. 296, 2178-2180 (2002).</li><li>Liu, L., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+differentiation+factor+9+and+its+spatiotemporal+expression+and+regulation+in+the+zebrafish+ovary.">Growth differentiation factor 9 and its spatiotemporal expression and regulation in the zebrafish ovary.</a> Biology of Reproduction. 76, 294-302 (2007).</li><li>Zhou, R., Tsang, A. H., Lau, S. W., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide+(PACAP)+and+its+receptors+in+the+zebrafish+ovary:+evidence+for+potentially+dual+roles+of+PACAP+in+controlling+final+oocyte+maturation.">Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) and its receptors in the zebrafish ovary: evidence for potentially dual roles of PACAP in controlling final oocyte maturation.</a> Biology of Reproduction. 85, 615-625 (2011).</li><li>Li, J., Liu, Z., Wang, D., Cheng, C. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+growth+factor+3+is+involved+in+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Insulin-like growth factor 3 is involved in oocyte maturation in zebrafish.</a> Biology of Reproduction. 84, 476-486 (2011).</li><li>Pang, Y., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+G+protein-coupled+estrogen+receptor+1,+GPER,+in+inhibition+of+oocyte+maturation+by+endogenous+estrogens+in+zebrafish.">Role of G protein-coupled estrogen receptor 1, GPER, in inhibition of oocyte maturation by endogenous estrogens in zebrafish.</a> Developmental Biology. 342, 194-206 (2010).</li><li>Peyton, C., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+estrogen+inhibition+of+oocyte+maturation+mediated+through+the+G+protein-coupled+estrogen+receptor+(Gper)+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Involvement of epidermal growth factor receptor signaling in estrogen inhibition of oocyte maturation mediated through the G protein-coupled estrogen receptor (Gper) in zebrafish (Danio rerio).</a> Biology of Reproduction. 85, 42-50 (2011).</li><li>Welch, E. L., Eno, C. C., Nair, S., Lindeman, R. E., F, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+manipulation+of+maternal+gene+products+using+in+vitro+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Functional manipulation of maternal gene products using in vitro oocyte maturation in zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55213 (2017).</li><li>Nair, S., Lindeman, R. E., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+oocyte+culture-based+manipulation+of+zebrafish+maternal+genes.">In vitro oocyte culture-based manipulation of zebrafish maternal genes.</a> Developmental Dynamics. 242, 44-52 (2013).</li><li>Seki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+reliable+in+vitro+maturation+system+for+zebrafish+oocytes.">Development of a reliable in vitro maturation system for zebrafish oocytes.</a> Reproduction. 135, 285-292 (2008).</li><li>Baars, D. L., Takle, K. A., Heier, J., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ploidy+manipulation+of+zebrafish+embryos+with+heat+shock+2+treatment.">Ploidy manipulation of zebrafish embryos with heat shock 2 treatment.</a> Journal of Visualized Experiments. , e54492 (2016).</li><li>Xie, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+based+on+in+vitro+oocyte+injection+to+improve+CRISPR/Cas9+gene+editing+in+zebrafish.">A novel technique based on in vitro oocyte injection to improve CRISPR/Cas9 gene editing in zebrafish.</a> Scientific Reports. 6, 34555 (2016).</li><li>Li, J., Bai, L., Liu, Z., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+roles+of+PDE9a+in+meiotic+maturation+of+zebrafish+oocytes.">Dual roles of PDE9a in meiotic maturation of zebrafish oocytes.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. , (2020).</li></ol>

Descriviamo qui un nuovo metodo per la semplice e rapida separazione delle cellule follicolari e degli ovociti dai follicoli ovarici di zebrafish. Questo metodo ha diversi vantaggi rispetto al metodo convenzionale. Il principale di questi è la facilità di separazione notevolmente aumentata con alta efficienza ed efficacia, in quanto è necessaria una sola manipolazione esterna. Questo punto aumenta l'applicabilità ai ricercatori che non sono bravi nell'anatomia microscopica. Secondo la nostra esperienza, si possono se...

Zebrafish è un importante organismo modello per lo studio dello sviluppo e della fisiologia dei vertebrati. Il pesce zebra può servire come un buon modello per lo studio dei meccanismi molecolari dello sviluppoovarico 1,2,3. Molte caratteristiche dello sviluppo ovarico sono molto conservate durante l'evoluzione dai pesci ai mammiferi1,2. Simile agli altri vertebrati, gli adulti zebrafish hanno ovaie asincrone, contenenti follicoli ovarico di tutte le fasi di sviluppo4. Il follicolo è l'elemento riproduttivo fondamentale dell'ovaio. Il follicolo è costituito dall'ovocitio che è circondato da uno o più strati di cellule somatiche chiamate cellule follicolari. Lo sviluppo dei follicoli dipende dalla comunicazione bidirezionale tra ovociti e cellule follicolari5. È fondamentale separare le cellule follicolari e gli ovociti dai follicoli ovarici per diversi scopi di ricerca come la coltura primaria delle cellule follicolari, l'analisi dell'espressione genica, la maturazione degli ovociti e la fecondazione in vitro.
I metodi di separazione tradizionali includono la separazione meccanica mediante forcep e digestioneenzimatica 6,7,8,9,10. Tuttavia, la separazione meccanica per forcep è dispendiosa in termini di tempo e laboriosa. Causerà anche l'alto danno all'ovocita durante la separazione. Sebbene il metodo di digestione enzimatica sia semplice da usare e richieda un breve periodo di tempo, il tempo di trattamento e la concentrazione enzimatica devono essere convalidati e il tasso di integrità e sopravvivenza degli ovociti isolati non è l'ideale. Pertanto, abbiamo stabilito un metodo semplice per separare entrambi i compartimenti in diversi stadi di sviluppo utilizzando tubi capillari in vetro tirato.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >17&#945;,20&#946;-DHP</td>
			<td >Cayman</td>
			<td >16146-5 (5 mg)</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >24-well plate</td>
			<td >Corning</td>
			<td >3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ampoule cutter</td>
			<td >AS ONE</td>
			<td >5-124-22 1 bag (100 pieces)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anhydrous Na2HPO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brine shrimp</td>
			<td >Hongjie</td>
			<td >250 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CaCl2</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Culture dish</td>
			<td >Biosharp</td>
			<td >BS-90-D (10PCS/PK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >S2110 (25mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissecting Microscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection forcep</td>
			<td >VETUS</td>
			<td >HRC30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection scissor</td>
			<td >Kefu</td>
			<td >160 mm&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescence Stereomicroscope&#160;</td>
			<td >Leica</td>
			<td >M205C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass capillary</td>
			<td >IWAKI</td>
			<td >IK-PAS-5P (200 pcs/PACK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hoechst 33342</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >C0031 (1 mg)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KH2PO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leibovitz&#8217;s L-15 medium</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >41300-039 (10&#215;1L)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette tips</td>
			<td >Axygen</td>
			<td >MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaHCO3</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicilia-streptomycia</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >#15140122 (100 mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereomicroscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Discover.v20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish

Zebrafish è diventato un modello ideale per studiare lo sviluppo ovarico dei vertebrati. Il follicolo è l'unità di base dell'ovaio, che consiste di ovociti e cellule follicolari circostanti. È fondamentale separare sia le cellule follicolari che gli ovociti per vari scopi di ricerca come per la coltura primaria di cellule follicolari, l'analisi dell'espressione genica, la maturazione degli ovociti e la fecondazione in vitro, ecc. Il metodo convenzionale utilizza le forcep per separare entrambi i compartimenti, il che è laborioso, richiede molto tempo e ha alti danni all'ovocita. Qui, abbiamo stabilito un metodo semplice per separare entrambi i compartimenti utilizzando un capillare in vetro tirato. Sotto uno stereomicroscopio, gli ovociti e le cellule follicolari possono essere facilmente separati mediante pipettazione in un capillare di vetro fine tirato (il diametro dipende dal diametro del follicolo). Rispetto al metodo convenzionale, questo nuovo metodo ha un'alta efficienza nella separazione sia degli ovociti che delle cellule follicolari e ha bassi danni agli ovociti. Ancora più importante, questo metodo può essere applicato ai follicoli in fase iniziale anche nella fase pre-vitellogenesi. Pertanto, questo semplice metodo può essere utilizzato per separare le cellule follicolari e gli ovociti del pesce zebra.

Questo metodo può essere utilizzato per separare cellule follicolari e ovociti in diverse fasi dello sviluppo del follicolo ovarico nel pesce zebra. La figura 1 mostra la separazione degli ovociti zebrafish e delle cellule follicolari dai follicoli ovarici utilizzando un tubo di vetro capillare (Figura 1). Per verificare se le cellule follicolari fossero separate da follicoli intatti, i follicoli intatti e gli ovociti separati da diversi stadi dei follicoli dal...

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Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish

Qui presentiamo un metodo semplice per separare le cellule follicolari e gli ovociti nei follicoli ovarici di zebrafish, che faciliterà le indagini sullo sviluppo ovarico nel pesce zebra.

Separazione delle cellule follicolari e degli ovociti nei follicoli ovarici di Zebrafish

Zebrafish has become an ideal model to study the ovarian development of vertebrates. The follicle is the basic unit of the ovary, which consists of ...

L'obiettivo generale di questa procedura è separare le cellule follicolari e gli ovociti nel follicolo ovarico di Zebrafish. Il follicolare è l'unità di base dell'ovaio, che consiste degli ovociti e delle cellule follicolari circostanti. È l'ampio strumento per separare sia la cellula follicolare che i compartimenti esterni per politiche ben ricercate tra cui la cattura primaria delle cellule follicolari e l'aumento dell'espressione genica, tutta la saturazione e la fecondazione in vitro.Recentemente, zebrafish è diventato un potente modello di Nissan, che studia un controllo dello sviluppo già. Qui, presentiamo un metodo semplice, quindi separa le cellule follicolari e gli ovociti del follicolo Zebrafish che faciliterà le indagini sullo sviluppo già in Zebrafish Lo spot, nessuna massa o i due separati sulle cellule follicolari e su tutti i lati dei giri utilizzano post che ha un labirinto, richiede tempo e ha avuto alti danni all'esterno. Qui, abbiamo stabilito un metodo semplice per due scomparti separati usando o in parte gli occhiali tasso Tamela sotto una barriera corallina pura.Il nostro mirino Metro, sia all'esterno che alle cellule follicolari, può essere facilmente fabbricato digitando il capillare in vetro tirato. In primo luogo, preparare un capillare di vetro poeta. Colpire la testa del capillare di vetro sul bruciatore di alcol.Utilizzare quattro lati per allungare il capillare di vetro al diametro della carta rave. In secondo luogo, desect che sovrascriva dal pesce femmina adulto, isola i follicoli ovarico dall'ovaio. Infine utilizzare un capillare di vetro pollato per separare la cellula follicolare e l'ovocita dai follicoli ovarici.Preparare il capillare in vetro, il contenitore affilato, l'ampia fresa, il bruciatore di alcol e una flesso. Mentire il bruciatore di alcol, portare a casa un bicchiere di capillare e riscaldare un'estremità del vetro capillare sul fuoco del bruciatore di alcol. Utilizzare una forza per tenere un'altra estremità del capillare di vetro, stressare il capillare di vetro in modo rapido e delicato.Metti i rifiuti di vetro nel contenitore affilato. Utilizzare l'ampia fresa Gretch sulla piscina con vetro. Quindi rompere con le forcep Delicatamente per fare un'apertura liscia dello sguardo della porta bruciare rapidamente l'estremità del capillare di vetro sul bruciatore di alcol più volte e strofinare l'estremità aperta con un'ampia fresa con attenzione.Prendi come il acquario del sistema idrico coltivato. E ora lega le femmine adulte posizionando i pesci sull'acqua ghiacciata per almeno due o cinque minuti fino a quando i pesci non fermano il movimento gill. Estraere il pesce dalla ghiacciaia e rimuovere il corpo rimanente del pesce d'acqua con l'asciugamano, posizionare un pesce sul piatto di sezione D con quattro set.I pesci sono stati decapitati servendo l'accordo di Spang usando le loro forbici affilate per garantire la morte. Utilizzare le forbici sezionanti per tagliare come segue. Sezionare dalla Chloe tagliata alle branchie lungo la linea mediana dell'addome, tagliata dalla riva della Chloe, tagliata dalla punta anteriore al lato dorsale.Rimuovere delicatamente la pelle e i muscoli su un lato del corpo, esporre gli organi interni e prendere un'ovaia intera sana con quattro passaggi. Le ovaie sono state posizionate delicatamente immediatamente nei 100 millimetri di coltura, contenitore per piatti 60%L 50 mediana. Inviato un microscopio sezionante con ottica luminosa trasmessa in base alle dimensioni e alla morfologia dei follicoli ovariani di diversi stadi.Isolare manualmente questi follicoli ovarico usando una birra in lizza per quattro set. Raccogliere i follicoli ovarici isolati e metterli in un altro piatto coltivato contenente 60%L 50 medio, bei follicoli ovarici isolati saranno utilizzati per separare le cellule follicolari e gli ovociti. Quindi impostare un dispositivo per la separazione.Utilizzare un tubo di plastica di 30 centimetri. Un'estremità è collegata con una punta di pipetta millilitro con un elemento filtrante. Un'altra estremità è collegata con una punta della pipetta da 200 microliter.Al microscopio disectante, utilizzare la bocca per controllare il flusso d'aria per lasciare che il difettoso si muova in piscina con capillare di vetro, quindi soffiare la follia esce dal capillare di vetro. Durante questo processo, la cellula follicolare e gli ovociti dei follicoli ovarici possono essere separati. Questo è un processo di separazione per un follicolo da stadio maturo.Durante il processo di inalazione, lo strato cellulare follicolare viene staccato dall'Ovocita, fa dopo aver soffiato la cellula follicolare e l'ovocita può essere separato. Questo è un follicolo a fasi a terra completo. Possiamo vedere che lo strato cellulare follicolare è staccato dall'Ovocita.Questo metodo può essere applicato anche nei follicoli ovarico nella fase iniziale. Questo è un follicolo nella fase centrale di Latella Genesis. Questo è un follicolo all'inizio della fase della Genesi vatella.Questo è un follicolo in una fase pre-vatalla Genesis. Da questa immagine, puoi vedere il processo di separazione. Il primo pannello mostra un follicolo intatto nel pannello del palco adulto.Il secondo pannello mostra l'angolazione di questo follicolo nel capillare di vetro tirato. Il pannello tre mostra che il follicolare è stato soffiato fuori dal capillare di vetro tirato. Il quarto pannello indica la separazione riuscita F denudato ovocita e cellula follicolare.Anche questo metodo, la separazione della cellula follicolare negli ovocite può essere eseguita in follicoli a diversi stadio. Esaminare se le cellule follicolari sono state separate dai follicoli intatti. Intatto un follicolo ed è separato Ovocita da diversi stadi di follicoli dallo stadio BV allo stadio FG sono stati macchiati con DAPI.Il nucleo delle cellule follicolari può essere macchiato da DAPI. Il segnale blu del DAPI è stato osservato nei follicoli intatti ma non gli ovociti denudati in questi diversi follicoli dello stadio. Per confermare ulteriormente la netta separazione, i follicoli intatti e gli ovociti separati stavano esorbiando le sezioni istologiche.Dapi che ha indicato i risultati ha mostrato che le cellule follicolari sono state chiaramente rimosse e denudato gli ovociti. Usando questo metodo, gli ovociti denudati separati dai follicoli a stadio adulto sono stati trovati sottoposti alla maturazione spontanea degli ovociti. senza alcun trattamento dopo quattro ore di incubazione.Dopo l'attivazione con acqua, questi ovociti maturi possono subire la piena espansione del chorion. Questo risultato indica il basso danno all'ovocita utilizzando questo metodo. Pertanto, questa senape può essere utilizzata per ottenere l'ovocita denudato per lo studio della razione maturata di ovocita del pesce Zebra.Lo strato follicolare del materiale ai follicoli può essere rimosso da un tubo di vetro capillare. Questi possono essere fecondati e devoluti nella fase di schiusa. I risultati suggeriscono che questo metodo può essere utilizzato per la fecondazione in vitro nei pesci Zebra.Descriviamo qui un nuovo metodo per la rapida e facile separazione delle cellule follicolari e degli ovocite dai follicoli ovarici di pesce zebra. Questo metodo presenta diversi vantaggi significativi, metodologie rovesciate. Il principale di questi è aumentare notevolmente la facilità di separazione in quanto è necessaria una sola manipolazione esterna.La maggiore facilità di separazione aumenta la disponibilità di questo metodo per i ricercatori non qualificati nella microdisezione. In secondo luogo, questo metodo può essere utilizzato per separare la cellula follicolare e l'ovocita dei follicoli ovarici e delle prime fasi di sviluppo, incluso lo stadio PV, EBV MV, tale separazione non può essere eseguita nel follicolo in fase iniziale utilizzando le metodologie attuali. In terzo luogo, questo nuovo metodo porta a meno danni agli ovociti.Gli ovociti denudati separati da questo metodo possono subire la maturazione degli ovociti e possono essere fecondati. Inoltre, questo metodo può essere applicato anche in altri pesci.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

Cultura e co-coltura di mouse ovaie e follicoli ovarici

The mammalian ovary is composed of ovarian follicles, each follicle consisting of a single oocyte surrounded by somatic granulosa cells, enclosed together ...

Ricerca

Biologia dello sviluppo

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Analisi delle larve Zebrafish muscolo scheletrico Integrità con Blu di Evans Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

Isolamento e caratterizzazione di singole cellule da embrioni di zebrafish

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells (ASCs)

Immunomagnetic Separation of Fat Depot-specific Sca1high Adipose-derived Stem Cells ASCs

Separazione immunomagnetica di Sca1 Fat Depot-specifica<sup&gt; alta</sup&gt; derivate da tessuto adiposo cellule staminali (ASC)

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