Name: separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish
Uploaded: 2021-04-18T14:00:00
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이 연구 작업은 중국 국립 자연과학 재단[32060170, 31601205 및 31560334]에 의해 지원되었으며, 중국 장학위원회가 지원하는 장학금 프로젝트와 담수 생태 및 생명공학 국가 핵심 연구소 기금 [2020FB05]에 의해 지원되었습니다.

어류 실험에서 수행되는 모든 절차는 노스웨스트 사범 대학의 동물 실험 윤리 위원회의 규정에 따라 수행됩니다.
1. 준비
<ol><li>마리<ol>
<li>4-6cm의 몸 길이와 성인 여성 얼룩말 피시를 사용 하십시오. 참고 : 우리는 현지 시장에서 제브라피시를 사용했습니다.</li>
		<li>제브라피쉬를 14h 광및 10시간 암울한 사이클로 순환된 물 시스템에 약 28°C로 보관하십시오.</li>
		<li>새로 ?...

<ol>
	<li>Clelland, E., Peng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine/paracrine+control+of+zebrafish+development.">Endocrine/paracrine control of zebrafish development.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 312, 42-52 (2009).</li><li>Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrafollicular+paracrine+communication+in+the+zebrafish+ovary:+the+state+of+the+art+of+an+emerging+model+for+the+study+of+vertebrate+folliculogenesis.">Intrafollicular paracrine communication in the zebrafish ovary: the state of the art of an emerging model for the study of vertebrate folliculogenesis.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 237, 1-10 (2005).</li><li>Li, J., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+studying+ovarian+development:+Recent+advances+from+targeted+gene+knockout+studies.">Zebrafish as a model for studying ovarian development: Recent advances from targeted gene knockout studies.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 507, 1-19 (2020).</li><li>Selman, K., Wallace, R. A., Sarka, A., Qi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+oocyte+development+in+the+zebrafish,+Brachydanio+rerio.">Stages of oocyte development in the zebrafish, Brachydanio rerio.</a> Journal of Morphology. 218, 203-224 (1993).</li><li>Matzuk, M. M., Burns, K. H., Viveiros, M. M., Eppig, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intercellular+communication+in+the+mammalian+ovary:+oocytes+carry+the+conversation.">Intercellular communication in the mammalian ovary: oocytes carry the conversation.</a> Science. 296, 2178-2180 (2002).</li><li>Liu, L., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+differentiation+factor+9+and+its+spatiotemporal+expression+and+regulation+in+the+zebrafish+ovary.">Growth differentiation factor 9 and its spatiotemporal expression and regulation in the zebrafish ovary.</a> Biology of Reproduction. 76, 294-302 (2007).</li><li>Zhou, R., Tsang, A. H., Lau, S. W., Ge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide+(PACAP)+and+its+receptors+in+the+zebrafish+ovary:+evidence+for+potentially+dual+roles+of+PACAP+in+controlling+final+oocyte+maturation.">Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) and its receptors in the zebrafish ovary: evidence for potentially dual roles of PACAP in controlling final oocyte maturation.</a> Biology of Reproduction. 85, 615-625 (2011).</li><li>Li, J., Liu, Z., Wang, D., Cheng, C. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+growth+factor+3+is+involved+in+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Insulin-like growth factor 3 is involved in oocyte maturation in zebrafish.</a> Biology of Reproduction. 84, 476-486 (2011).</li><li>Pang, Y., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+G+protein-coupled+estrogen+receptor+1,+GPER,+in+inhibition+of+oocyte+maturation+by+endogenous+estrogens+in+zebrafish.">Role of G protein-coupled estrogen receptor 1, GPER, in inhibition of oocyte maturation by endogenous estrogens in zebrafish.</a> Developmental Biology. 342, 194-206 (2010).</li><li>Peyton, C., Thomas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+estrogen+inhibition+of+oocyte+maturation+mediated+through+the+G+protein-coupled+estrogen+receptor+(Gper)+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Involvement of epidermal growth factor receptor signaling in estrogen inhibition of oocyte maturation mediated through the G protein-coupled estrogen receptor (Gper) in zebrafish (Danio rerio).</a> Biology of Reproduction. 85, 42-50 (2011).</li><li>Welch, E. L., Eno, C. C., Nair, S., Lindeman, R. E., F, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+manipulation+of+maternal+gene+products+using+in+vitro+oocyte+maturation+in+zebrafish.">Functional manipulation of maternal gene products using in vitro oocyte maturation in zebrafish.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55213 (2017).</li><li>Nair, S., Lindeman, R. E., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+oocyte+culture-based+manipulation+of+zebrafish+maternal+genes.">In vitro oocyte culture-based manipulation of zebrafish maternal genes.</a> Developmental Dynamics. 242, 44-52 (2013).</li><li>Seki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+reliable+in+vitro+maturation+system+for+zebrafish+oocytes.">Development of a reliable in vitro maturation system for zebrafish oocytes.</a> Reproduction. 135, 285-292 (2008).</li><li>Baars, D. L., Takle, K. A., Heier, J., Pelegri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ploidy+manipulation+of+zebrafish+embryos+with+heat+shock+2+treatment.">Ploidy manipulation of zebrafish embryos with heat shock 2 treatment.</a> Journal of Visualized Experiments. , e54492 (2016).</li><li>Xie, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+technique+based+on+in+vitro+oocyte+injection+to+improve+CRISPR/Cas9+gene+editing+in+zebrafish.">A novel technique based on in vitro oocyte injection to improve CRISPR/Cas9 gene editing in zebrafish.</a> Scientific Reports. 6, 34555 (2016).</li><li>Li, J., Bai, L., Liu, Z., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+roles+of+PDE9a+in+meiotic+maturation+of+zebrafish+oocytes.">Dual roles of PDE9a in meiotic maturation of zebrafish oocytes.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. , (2020).</li></ol>

우리는 여기에 제브라피시 난소 여포에서 여포 세포와 난모세포의 간단하고 신속한 분리를위한 새로운 방법을 설명합니다. 이 방법은 종래의 방법에 비해 몇 가지 장점이 있습니다. 이들 중 1 차는 단일 및 외부 조작이 필요하므로 고효율 및 효과로 분리의 용이성을 크게 증가시다. 이 점은 현미경 해부학에 좋지 않은 연구원에 대한 적용성을 증가시킵니다. 우리의 경험에 따르면, 하나는 성공적?...

Zebrafish는 척추 동물 발달 및 생리학연구를 위한 주요 모형 유기체입니다. 제브라피쉬는 난소발달1,2,3의분자 메커니즘을 연구하는 좋은 모델이 될 수 있다. 난소 발달의 많은 특징은 물고기에서 포유류1,2로진화하는 동안 많이 보존된다. 다른 척추동물과 유사하게, 제브라피시 성인은 비동기 난소를 가지고 있으며, 모든 발달 단계4의난소 여포를 함유하고 있다. 여포는 난소의 기본 생식 요소입니다. 여포는 여포 세포에게 불린 체세포의 하나 또는 여러 층으로 포위되는 oocyte로 이루어져 있습니다. 여포의 발달은 난모세포와 여포 세포5사이의 양방향 통신에 의존한다. 여포 세포 원발문화, 유전자 발현 분석, 난소 성숙도 및 체외 수정과 같은 다른 연구 목적을 위해 난소 여포에서 여포와 난모세포를 분리하는 것이 중요합니다.
전통적인 분리 방법은 집게 및 효소소화6,7,8,9,10에의한 기계적분리를포함한다. 그러나, 집게에 의한 기계적 분리는 시간이 많이 걸리고 힘들다. 또한 분리 시 난소에 높은 손상을 입힙니다. 효소 소화 방법은 조작이 간단하고 짧은 시간이 필요하지만, 치료 시간과 효소 농도를 검증해야 하며, 고립된 난모세포의 무결성과 생존율은 이상적이지 않다. 따라서, 우리는 당겨진 유리 모세관 관을 사용하여 다른 발달 단계에서 두 구획을 분리하는 간단한 방법을 설립했다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >17&#945;,20&#946;-DHP</td>
			<td >Cayman</td>
			<td >16146-5 (5 mg)</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >24-well plate</td>
			<td >Corning</td>
			<td >3524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ampoule cutter</td>
			<td >AS ONE</td>
			<td >5-124-22 1 bag (100 pieces)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anhydrous Na2HPO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Brine shrimp</td>
			<td >Hongjie</td>
			<td >250 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CaCl2</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Culture dish</td>
			<td >Biosharp</td>
			<td >BS-90-D (10PCS/PK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >S2110 (25mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissecting Microscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection forcep</td>
			<td >VETUS</td>
			<td >HRC30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection scissor</td>
			<td >Kefu</td>
			<td >160 mm&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescence Stereomicroscope&#160;</td>
			<td >Leica</td>
			<td >M205C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass capillary</td>
			<td >IWAKI</td>
			<td >IK-PAS-5P (200 pcs/PACK)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hoechst 33342</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td >C0031 (1 mg)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KH2PO4</td>
			<td >Kaixin Chemical</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leibovitz&#8217;s L-15 medium</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >41300-039 (10&#215;1L)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette tips</td>
			<td >Axygen</td>
			<td >MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaHCO3</td>
			<td >Beichen Fangzheng</td>
			<td >500 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicilia-streptomycia</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >#15140122 (100 mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Stereomicroscope</td>
			<td >ZEISS</td>
			<td >Discover.v20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of follicular cells and oocytes in ovarian follicles of zebrafish

Zebrafish는 척추동물의 난소 발달을 연구하기에 이상적인 모델이 되었습니다. 여포는 난소와 주변 여포 세포로 구성된 난소의 기본 단위입니다. 여포 세포의 1차 배양, 유전자 발현 분석, 난낭 성숙및 체외 수정 등과 같은 다양한 연구 목적을 위해 여포 세포와 난미세포를 분리하는 것이 중요합니다. 종래의 방법은 집게를 사용하여 두 구획을 분리하는데, 이는 힘들고 시간이 많이 걸리며 난소세포에 높은 손상을 줍니다. 여기서, 우리는 당겨진 유리 모세관을 사용하여 두 구획을 분리하는 간단한 방법을 확립했습니다. 스테레오 현미경의 밑에, oocytes 및 여포 세포는 뽑아낸 미세 유리 모세관에서 파이펫으로 쉽게 분리될 수 있습니다 (직경은 여포 직경에 달려 있습니다). 종래의 방법에 비해, 이 새로운 방법은 난모세포와 여포 세포를 분리하는 데 있어서 고효율을 가지며 난모세포에 대한 손상이 낮습니다. 더 중요한 것은, 이 방법은 사전 vitellogenesis 단계에서를 포함하여 초기 단계 여포에 적용될 수 있습니다. 따라서, 이 간단한 방법은 제브라피시의 여포 세포 및 난모세포를 분리하는 데 사용될 수 있다.

이 방법은 제브라피시에서 난소 여포 발달의 다른 단계에서 여포 세포와 난모세포를 분리하는 데 사용할 수 있습니다. 도 1은 모세관 유리 튜브를 사용하여 난소 여포로부터 얼룩말 피낭 및 여포 세포의 분리를나타낸다(도 1). 여포 세포가 그대로 여포로부터 분리되었는지 여부를 조사하기 위해, 태양광 단계에서 FG 단계로의 여포의 상이한 단계에서 분...

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Separation of Follicular Cells and Oocytes in Ovarian Follicles of Zebrafish

여기서는 제브라피시 난소 여포에 여포 세포와 난소 세포를 분리하는 간단한 방법을 제시하여 제브라피시의 난소 발달에 대한 조사를 용이하게 합니다.

얼룩말 피시의 난소 여포에서 여포 세포와 난소 세포의 분리

Zebrafish has become an ideal model to study the ovarian development of vertebrates. The follicle is the basic unit of the ovary, which consists of ...

이 절차의 전반적인 목표는 제브라피시의 난소 여포에서 여포 세포와 Oocytes를 분리하는 것입니다. 여포는 난소의 기본 단위이며, 이는 난소와 주변 여포 세포로 구성됩니다. 여포 세포의 1 차 적인 캡처를 포함 하 여 잘 연구 정책에 대 한 여포 세포와 외부 구획을 분리 하는 넓은 도구이며 유전자 발현에 상승, 모든 채도 및 체 외 수정.최근 Zebrafish는 닛산의 강력한 모델이 되었으며, 이는 이미 개발의 제어를 연구하고 있습니다. 여기서, 우리는 간단한 방법을 제시하므로, 제브라피시에서 이미 개발의 조사를 용이하게 할 제브라 피쉬 여포의 여포 세포와 난모세포를 분리하여 상업적, 질량 또는 여포 세포에 대한 두 개의 분리및 스핀의 모든 면은 미로가 있는 포스트를 사용하고 있으며, 시간이 많이 걸리고 외부에 높은 손상을 입었다. 여기서, 우리는 순수한 암초 아래 타멜라 비율을 사용하여 두 개의 별도의 구획또는 부품 안경타멜라 속도에 간단한 방법을 설립했습니다.우리의 메트로 범위, 외부와 여포 세포 모두 쉽게 뽑아 유리 모세관을 입력하여 조작 할 수 있습니다. 첫째, 시인 유리 모세관을 준비합니다. 알코올 버너에 유리 모세관의 머리를 명중.유리 모세관을 레이브 카드 직경으로 스트레칭하려면 4면을 사용합니다. 둘째, 성인 여성 물고기에서 과다 모독, 난소 여포를 난소에서 분리. 마지막으로 난소 여포에서 여포 세포와 오키테를 분리하기 위해 설문 조사 유리 모세관을 사용합니다.유리 모세관, 날카로운 용기, 충분한 커터, 알코올 버너 및 집게를 준비합니다. 알코올 버너를 거짓말, 모세관 한 잔을 집에 가져 와서 알코올 버너의 불에 유리 모세관의 한쪽 끝을 가열. 집게를 사용하여 유리 모세관의 또 다른 끝을 잡고 유리 모세관을 빠르고 부드럽게 강조합니다.날카로운 용기에 유리 폐기물을 넣습니다. 유리와 함께 수영장에 충분한 커터 그렛치를 사용합니다. 그런 다음 부드럽게 집게에 의해 분해하여 포트 눈의 매끄러운 개구부를 만들어 신속하게 알코올 버너에 유리 모세관의 끝을 여러 번 구울 하고 충분한 커터로 오픈 엔드를 문지릅니다.재배 된 물 시스템에서 어조를 가져 가라. 그리고 이제 물고기가 길의 움직임을 멈출 때까지 적어도 2 ~ 5 분 동안 얼음 물에 물고기를 배치하여 성인 여성을 묶습니다. 얼음 상자에서 물고기를 꺼내 수건으로 남은 물 물고기 몸을 제거하고 4 세트로 D 섹션 접시에 물고기를 놓습니다.물고기는 죽음을 보장하기 위해 날카로운 가위를 사용하여 Spang 화음을 제공함으로써 참수되었다. 해부 가위를 사용하여 다음과 같이 잘라냅니다. 클로이컷에서 복부의 중간선을 따라 아가미로 해부하고, 클로이 의 은행에서 잘라 내고, 앞쪽 끝에서 등쪽끝으로 잘라낸다.몸의 한쪽에 있는 피부와 근육을 부드럽게 제거하고, 내부 장기를 노출시키고, 4단계로 건강한 전체 난소를 섭취하십시오. 난소는 문화권 100mm, 접시 용기 60%L 50 중앙분리대에서 즉시 부드럽게 배치하였다. 다른 단계의 난소 여포의 크기와 형태에 따라 전송 된 광 광학해부 현미경을 보냈습니다.이 난소 여포를 4세트와 경쟁하는 맥주를 사용하여 수동으로 분리합니다. 고립 된 난소 여포를 수집하고 60 %L 50 배지를 포함하는 다른 배양 요리에 넣어, 좋은 고립 된 난소 여포는 여포 세포와 Oocytes를 분리하는 데 사용됩니다. 그런 다음 분리를 위한 장치를 설정합니다.30센티미터 의 플라스틱 튜브를 사용하십시오. 한쪽 끝은 필터 요소가 있는 1밀리리터 파이펫 팁과 연결됩니다. 또 다른 끝은 200 마이크로리터 파이펫 팁과 연결되어 있습니다.분부 현미경에서, 결함이 유리 모세관수영장으로 이동하게 하기 위해 공기 흐름을 제어하기 위해 입을 사용하여 유리 모세관에서 어리석은 외출을 날려 버릴 수 있습니다. 이 과정에서 난소 여포의 여포 세포와 난소 모낭의 Oocytes를 분리 할 수 있습니다. 이것은 성숙한 단계 여포를 위한 분리 과정입니다.흡입 과정에서 여포 세포 층은 Oocyte에서 분리되며 여포 세포를 불어 낸 후 및 Oocyte를 분리 할 수 있습니다. 이것은 전체 지상 단계 여포입니다. 우리는 여포 세포 층이 오낭에서 분리되는 것을 볼 수 있습니다.이 방법은 또한 초기 단계 난소 여포에서 적용될 수 있습니다. 이것은 중간 라텔라 창세기 단계에서 여포입니다. 이것은 초기 바텔라 창세기 단계에서 여포입니다.이것은 사전 바칼라 창세기 단계에서 여포입니다. 이 그림에서 분리 과정을 볼 수 있습니다. 패널 하나는 전체 성장 무대 패널에서 그대로 여포를 보여줍니다.패널 2는 이 여포의 협응을 유리 모세관으로 보여줍니다. 패널 세 는 여포가 뽑아 진 유리 모세관에서 날아 갔다 보여줍니다. 패널 4는 성공적인 분리 F 디누드 Oocyte 및 여포 세포를 나타냅니다.심지어이 방법, Oocyte에서 여포 세포의 분리는 다른 단계 여포에서 수행 될 수있다. 여포 세포가 그대로 여포에서 분리되었는지 여부를 조사합니다. 그대로 여포를 분리하고 BV 단계에서 FG 단계로 여포의 다른 단계에서 오키테를 분리DAPI로 염색했다.여포 세포의 핵은 DAPI에 의해 얼룩질 수 있다. DAPI의 파란색 신호는 그대로 여포에서 관찰되었지만 이러한 다른 단계의 여포에서 난모세포는 제거되지 않았습니다. 명확한 분리를 더 확인하기 위해, 그대로 여포와 분리 된 난귀는 조직학적 섹션에 내장했다.DAPI 진술 결과는 여포 세포가 명확하게 제거되고 Oocytes를 삭제했다는 것을 보여주었습니다. 이 방법을 사용하여, 전체 성장 단계 여포에서 분리 된 누드 난귀는 자발적인 Oocyte 성숙을 겪는 것으로 나타났다. 4 시간 잠복 후 어떤 치료없이.물에 의해 활성화 후, 이러한 성숙한 난귀는 전체 초리온 확장을 겪을 수 있습니다. 이 결과는 이 방법을 사용하여 Oocyte의 손상이 낮음을 나타냅니다. 따라서, 이 겨자는 얼룩말 물고기의 오키테 성숙한 배급을 공부하기 위한 누드 Oocyte를 얻기 위하여 이용될 수 있습니다.여포에 대한 물질의 여포 층은 모세관 유리 튜브에 의해 제거 될 수 있습니다. 이들은 수정되고 부화 단계로 변질될 수 있습니다. 결과는 이 방법이 얼룩말 물고기에 있는 체외 수정에 사용될 수 있다는 것을 건의합니다.우리는 여기에 얼룩말 물고기 난소 여포에서 여포 세포와 오키테의 신속하고 쉬운 분리를위한 새로운 방법을 설명합니다. 이 방법은 몇 가지 중요한 장점이 있습니다, 방법을 전복. 이들 중 1차는 단 하나의 외부 조작만요구되기 때문에 분리의 용이성을 크게 높이는 것이다.분리의 증가 용이성은 미세 절에 숙련되지 않은 그 연구원에이 방법의 가용성을 증가. 둘째, 이러한 방법은 PV, EBV MV 단계를 포함한 난소 여포 및 초기 발달 단계의 여포 세포 및 Oocyte를 분리하는 데 사용될 수 있으며, 이러한 분리는 현재 방법론을 사용하여 초기 단계 여포에서 수행될 수 없다. 셋째, 이 새로운 방법은 오사이클에 대한 손상이 줄어듭니다.이 방법에 의해 분리 된 누드 난초는 Oocyte 성숙을 겪을 수 있으며 수정 될 수 있습니다. 또한,이 방법은 다른 물고기에도 적용 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Culture and Co-Culture of Mouse Ovaries and Ovarian Follicles

문화 공동 문화 마우스의 난소와 난소

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연구

발생학

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Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

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꼬마 선 충 생식 핵의 분포, 단백질, 및 골격을 전산 분석

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Culture and Transfection of Zebrafish Primary Cells

문화와 Zebrafish 기본 세포의 Transfection

Zebrafish embryos are transparent and develop rapidly outside the mother, thus allowing for excellent in vivo imaging of dynamic biological processes in ...