Name: extraction and dissection of the domesticated pig brain
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00
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Les auteurs aimeraient remercier Jim Knoblauch et Martin-Booth Hodges du College of Agricultural, Consumer and Environmental Sciences Information Technology and Communication Services pour leur expertise dans le tournage, l’enregistrement et l’édition audio et vidéo.

Les procédures impliquant des sujets animaux ont été approuvées par l’Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) de l’Université de l’Illinois à Urbana-Champaign
NOTE: Avant l’euthanasie, le porc a été anesthésié par injection intramusculaire avec une combinaison de telazol:kétamine:xylazine (50,0 mg de tiletamine HCl plus 50,0 mg de zolazepam HCl reconstitué avec 1 2,50 mL de kétamine HCl (100 g/L) et 2,50 mL de xylazine (100 g/L) et administrés à 0,06 mg/kg BW...

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Les techniques décrites ci-après ont été conçues pour les porcs âgés d’environ 4 semaines. Il est essentiel d’effectuer ces étapes immédiatement après que le porc a été euthanasié humainement pour s’assurer que l’intégrité de la structure des tissus cérébraux est maintenue, en particulier lors de l’examen des essais biochimiques ultérieurs. Il est utile d’utiliser un atlas ou des guides de dissectionde fibre 16 lors de l’apprentissage des techniques. Il est recomman...

Le porc a été bien documenté et accepté comme modèle animal traduisible pour la recherche dans les systèmescardio-vasculaires 1,les systèmes gastro-intestinaux2,la nutrition3,4,lediabète 5,la toxicologie6,et les techniqueschirurgicales 7. L’utilisation du porc en neurosciences commence à augmenter, car PubMed recherche les mots clés « modèle animal du cerveau porcin » se traduire par quatre fois plus de résultats de 1996-2005 que la période précédente de 10 ans8, et encore plus de résultats à l’heure actuelle. Une raison principale que la popularité du modèle de porc est en expansion est due à ses similitudes dans la croissance, la structure et la fonction du cerveau par rapport aux humains. Par rapport au cerveau humain, le cerveau du porc présente des motifs gyraux similaires, la vascularisation et la distribution de la matière grise et blanche9. En outre, le cerveau de porc a été employé dans les procédures de neuroimagerie, a évoqué l’enregistrement potentiel, et en établissant des techniques de neurochirurgie8,9. Contrairement à d’autres modèles animaux, cependant, le porc et l’expérience humaine poussées de croissance du cerveau périnatal, par opposition aux poussées de croissance pré- ou post-natal. À la naissance, le cerveau humain et porcin pèse environ 27 et 25 pour cent de leur poids cérébral adulte, respectivement, par rapport au cerveau de rat qui pèse 12 pour cent de son poids cérébral adulte et le cerveau de singe rhésus à 76 pour cent du poids adulte10.
L’une des raisons pour laquelle le porc n’a été adopté que lentement comme modèle animal pour les neurosciences est que de nombreux chercheurs ne connaissent pas l’animal dans ce contexte. Les chercheurs peuvent ne pas être conscients de ses utilisations potentielles sur le terrain ou ne pas connaître les techniques appropriées requises pour utiliser un tel modèle. Comme l’utilisation du porc comme modèle biomédical et préclinique attire l’attention et l’utilisation en neurosciences, il est nécessaire d’établir des procédures normalisées d’enlèvement des tissus afin d’assurer une comparaison précise des données entre les études. Bien que la dissection et les techniques chirurgicales impliquant le cerveau de porc ont étépubliées ailleurs 11,12,13, il est nécessaire de protocoles simples et normalisés pour recueillir les tissus cérébraux des porcs, en particulier pour une utilisation dans les essais biochimiques. En tant que tel, le but de cette vidéo est de fournir les connaissances nécessaires pour permettre aux chercheurs d’effectuer une extraction et une dissection normalisées du cerveau. Cette vidéo illustre une technique appropriée pour enlever le cerveau du porc tout en gardant le cortex et le tronc cérébral intacts, et ensuite examiner les méthodes pour disséquer plusieurs régions clés du cerveau.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#22 Scalpel Blades for #4 Handles</td>
			<td>Ted Pella, inc.</td>
			<td>549-4S-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11 1/2&#34; Satterlee Bone Saw</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>38DI13425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 1/2&#34; Skull Breaker with Chisel End (Meat Hook)</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>38DI37636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-inch Heavy Duty Workshop Bench Vise</td>
			<td>Pony</td>
			<td>29050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butcher Knife 25cm</td>
			<td>Victorinox</td>
			<td>5.7403.25</td>
			<td>Sharpen before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CM40 Light Duty Drop Forged C Clamps</td>
			<td>Bessey</td>
			<td>00655BC3120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond Hone Knife Shaper</td>
			<td>Chef&#8217;s Choice</td>
			<td>436-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Stainless-Steel Scalpel Blade Handle #4</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>5334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Forceps</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>101-5132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Dissecting pad</td>
			<td>Carolina</td>
			<td>629006</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction and dissection of the domesticated pig brain

L’utilisation du porc comme modèle animal préclinique et traduisible a été bien documentée et acceptée par les domaines de recherche qui étudient les systèmes cardiovasculaires, les systèmes gastro-intestinaux et la nutrition, et le porc est de plus en plus utilisé comme un grand modèle animal en neurosciences. En outre, le porc est un modèle accepté pour étudier le neurodéveloppement car il affiche des modèles de croissance et de développement du cerveau similaires à ce qui se produit chez l’homme. En tant que modèle animal moins courant en neurosciences, les interventions chirurgicales et dissection sur les porcs peuvent ne pas être aussi familières ou bien pratiquées chez les chercheurs. Par conséquent, un protocole visuel normalisé détaillant des méthodes cohérentes d’extraction et de dissection peut s’avérer utile pour les chercheurs travaillant avec le porc. La vidéo suivante présente une technique pour enlever le cerveau du porc tout en gardant le cortex et le tronc cérébral intacts et passe en revue les méthodes pour disséquer plusieurs régions cérébrales couramment étudiées, y compris le tronc cérébral, le cervelet, le midbrain, l’hippocampe, le striatum, le thalamus et le cortex préfrontal médial. Le but de cette vidéo est de fournir aux chercheurs les outils et les connaissances nécessaires pour effectuer systématiquement une extraction cérébrale et une dissection sur le porc de quatre semaines.

Cette section décrit des exemples de résultats obtenus après l’extraction et la dissection correctes d’un cerveau de porc de 4 semaines. La figure 1 décrit la forme de chaque région du cerveau pour être utilisé comme guide pendant la dissection. Une partie du tronc cérébral peut rester dans le crâne après l’ablation du cervelet (Figure 1B). Ceci peut être enlevé tout en isolant la région désirée du cervelet. Le tableau 1 af...

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Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Ce protocole détaille la technique d’ablation du cerveau porcin dans son intégralité et la dissection de plusieurs régions du cerveau couramment étudiées en neurosciences.

Extraction et dissection du cerveau de porc domestiqué

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

La vidéo suivante est une démonstration de l’enlèvement et de la dissection du cerveau du porc. Il peut être utile de se référer à un atlas, ou un guide de dissection des fibres avant ou pendant la procédure. Un grand couteau de boucher est le meilleur pour la décapitation car il permettra une coupe propre entre l’atlas et l’axe.Assurez-vous que le couteau est tranchant avant de commencer par un nouveau sujet. Un crochet à viande est utilisé pour enlever le crâne. Un long outil mince comme une poignée de scalpel est utilisé pour enlever le cerveau du crâne.Un vice avec des vis ou des saillies est nécessaire pour fixer la tête tout en coupant le crâne. Une fois que l’animal a été euthanasié sans cruauté selon les protocoles établis procéder comme suit. Couper juste au-dessus de la nuque, entre les épaules et le haut de la tête.Sécurisez le porc et déplacez les années hors de la route pendant la décapitation. Utilisez un scalpel pour faire des incisions pour séparer la peau du crâne. Faire une première coupure au milieu du crâne qui continue au postérieur de la tête.La deuxième coupe transversale doit être sur le postérieur de la tête. La troisième coupe également transversale commencera au postérieur de ce museau, et en ligne avec les yeux pour assurer un accès facile au crâne. Utilisez une scie à os pour faire des coupes antérieures à postérieures latérales à la ligne médiane.Commencez par marquer légèrement la zone pour la coupe avec la scie, puis commencez à scier jusqu’à ce que vous rencontriez moins de résistance du crâne. Biseauté légèrement la scie vers la ligne médiane tout en coupant car cela vous assurera que vous coupez la partie la plus mince du crâne. Si la coupe est trop près de l’oreille, il sera difficile d’enlever le crâne.Mais si la coupe est trop proche de la ligne médiane, l’ouverture sera trop petite pour enlever le cerveau. Répétez ce processus sur les côtés perpendiculaires pour créer une fenêtre rectangulaire. Assurez-vous que chaque coin de la fenêtre est complètement coupé, de sorte qu’une partie du crâne peut être enlevée pour révéler le cerveau en dessous.Ensuite, utilisez un crochet à viande ou un instrument incurvé pour indiscrets de la section rectangulaire du crâne hors de position. Commencez par placer le crochet dans l’un des coins, et en appliquant de la pression pour faire éclater la calotte. Dans certains cas, les méninges resteront sur le cerveau.Et si cela se produit soigneusement utiliser des forceps et des ciseaux émoussés, ou alternativement un scalpel pour enlever les méninges sans couper le cerveau. Pour référence, le cerveau doit regarder comme suit avant et après que les couches méningées ont été enlevées. Couper à travers le muscle et la graisse sur le postérieur de la tête pour se préparer à l’exposition du cervelet.Pour exposer le cervelet faire deux coupes transversales le long du postérieur du crâne. Lorsque vous faites ces coupes prendre soin de ne pas couper dans le cerveau exposé. Une fois que les coupures ont été faites placer une main sur le museau, et une sur le crâne, et appliquer une pression vers l’arrière pour tirer la partie postérieure du crâne loin du reste de la tête.Comme souligné ici, le cervelet est caché derrière les couches méningées restantes. Utilisez l’extrémité d’un instrument contondant comme une poignée de scalpel pour séparer soigneusement le cerveau du crâne, en prenant soin d’éviter d’endommager le cerveau dans le processus. Inversez légèrement la tête pour aider à amadouer le cerveau hors du crâne, et utilisez un mouvement de scooping doux pour couper les nerfs crâniens et enlever le cerveau.Ce processus exige de la patience et de la pratique pour éliminer toutes les connexions restantes entre le cerveau et la cavité crânienne. L’inversion de la tête du porc peut être utile au cours de ce processus. Continuer à utiliser des mouvements de balayage avec l’instrument contondant pour libérer le cerveau.Comme souligné ici, le cervelet et le tronc cérébral peuvent être difficiles à enlever car ils sont cachés dans la cavité du crâne. Prenez soin lors de l’enlèvement du cervelet et medulla, ou tronc cérébral. Le cerveau doit tomber tout seul lorsqu’il est complètement détaché du crâne.La cavité du crâne devrait ressembler à ce qui a été montré après l’ablation du cerveau. En préparation de la dissection de la région du cerveau, assurez-vous que les contenants préétiquetés sont organisés et à proximité. Par exemple, les méthodes de conservation incluent des échantillons de congélation instantanés dans de l’azote liquide, ou leur submerging dans une solution de conservation.Une fois extrait de la cavité crânienne, tout le cerveau devrait ressembler à suit. Pour enlever la médulle ou le tronc cérébral, faire une coupe coronale caudale au cervelet. Pour enlever le cervelet, faire une coupe coronale postérieure au cortex.Pour séparer les hémisphères faire une coupe midsagittal le long de la fissure longitudinale en utilisant un mouvement continu pour prévenir les dommages. Pour les besoins de cette vidéo, nous ne montrerons que des dissections de l’hémisphère droit. Pour enlever le midbrain chercher le supérieur, et colliculi inférieur qui sont deux bosses sur la partie postérieure du cerveau.Enlever la quantité désirée de tissu cérébral juste ventral à ces régions. Pour enlever la position de l’hippocampe, la poignée du scalpel sur le postérieur du corpus callosum, et rouler doucement l’hippocampe. Toute la corne d’hippocampe sera en forme de haricot.L’hippocampe doit facilement se déployer lors de la ramasse de votre doigt dans un j-motion, à partir du corpus postérieur callosum. Pour enlever le striatum ou le noyau caudate effacer la partie antérieure du corpus callosum. Le noyau caudate est la région striée ou rayée qui est de couleur grise et blanche et située juste en dessous du corpus callosum.Avec la poignée du scalpel incliné enlever cette région qui comprend principalement le noyau caudate. Après avoir enlevé ce tissu, vous devriez être en mesure de voir un modèle strié où la région du cerveau avait été localisée. Pour enlever le cortex préfrontal médial dissected tissu du gyrus frontal au corpus callosum prenant la partie la plus médiale de cette section.Le cortex droit doit rester après l’ablation du cortex préfrontal médial. Pour enlever le thalamus, retirez l’ampoule comme structure au centre de la surface midsagittal. Le thalamus a une forme sphérique évidente, et il aura l’air légèrement plus sombre que le tissu environnant.À la fin de la dissection, les échantillons de tissus devraient être conservés correctement en fonction de résultats expérimentaux spécifiques. On y voit les régions du cerveau disséquées, y compris la taille et la forme relatives attendues lorsque l’on travaille avec de jeunes porcs. Lors de la maîtrise de ces techniques, l’extraction complète du cerveau, et la procédure de dissection prendra moins de 15 minutes par sujet, et de produire des résultats cohérents.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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