Name: extraction and dissection of the domesticated pig brain
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00
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저자는 짐 노블라우치와 마틴 부스 호지스 농업, 소비자 및 환경 과학 정보 기술 및 통신 서비스 대학의 촬영, 녹음 및 오디오 및 비디오 편집에 대한 전문 지식을 인정하고 싶습니다.

어바나 샴페인 일리노이 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 동물 과목과 관련된 절차가 승인되었습니다.
참고 : 안락사 전에, 돼지는 텔라졸 : 케타민 : 자일라진의 조합과 근육 주사를 통해 마취되었다 (50.0 타일 타민 HCl 플러스 졸라제팜 H의 50.0 mg Cl은 케타민 HCl (100 g/L)의 2.50 mL및 자일라진 (100 g /L)의 2.50 mL로 재구성하고 0.06 mg / kg BW로 투여됩니다. 일단 마취?...

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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion+fixation+in+brain+banking:+a+systematic+review.">Perfusion fixation in brain banking: a systematic review.</a> Acta Neuropathologica Communications. 7, 146 (2019).</li><li>F&#233;lix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+atlas+of+the+pig+brain.">Stereotaxic atlas of the pig brain.</a> Brain Research Bulletin. 49, 1 (1999).</li></ol>

본 명세서에 기술된 기술은 약 4주 의 돼지를 위해 디자인되었다. 돼지가 뇌 조직 구조의 무결성을 유지하기 위해 인도적으로 안락사 된 직후이러한 단계를 수행하는 것이 중요합니다, 특히 후속 생화학 적 분석을 고려할 때. 처음 기술을 배울 때 아틀라스 또는 섬유16 해부 가이드를 사용하는 것이 도움이됩니다. 실험자는 데이터 수집을 위한 샘플을 얻기 전에 여러 뇌 추출 및 ?...

돼지는 잘 문서화되어 심혈 관계 시스템1,위장 시스템2,영양3,4,당뇨병5,독성학6및 수술 기술7에서연구를위한 번역 가능한 동물 모델로 받아들여졌습니다. PubMed가 "돼지 뇌 동물 모델"이라는 키워드를 검색하여 1996-2005년 보다 4배 더 많은 결과를 초래함에 따라 신경 과학에서 돼지의 사용이 증가하기시작했으며,현재는 더 많은 결과가 나타나고 있습니다. 돼지 모델의 인기가 확대되는 주된 이유는 인간과 비교할 때 뇌의 성장, 구조 및 기능의 유사성 때문입니다. 인간의 뇌에 비해 돼지 뇌는 회색과 백색 물질의 유사한 자랄 패터닝, 혈관화 및 분포를 나타낸다9. 더욱이, 돼지 뇌는 신경 이미징 절차에 사용되어, 잠재적인 기록을 불러 일으켰으며, 신경외과 기술수립8,9. 다른 동물 모델과는 달리, 그러나, 돼지와 인간의 경험 주산기 뇌 성장 분출, 산전 또는 산후 성장 분출 반대로. 출생 시, 인간과 돼지 뇌는 성인 뇌 체중의 약 27%와 25%의 무게를 가지고 있으며, 성인 뇌 체중의 12%와 성인 체중10%의rhesus 원숭이 뇌의 무게가 있는 쥐 뇌에 비해 각각 무게를 측정합니다.
돼지가 신경 과학을 위한 동물 모형으로 서게 채택된 한 가지 이유는 많은 연구원이 이 맥락에서 동물에 익숙하지 하기 때문입니다. 연구원은 필드에 있는 그것의 잠재적인 사용을 인식하지 않을 수 있습니다 또는 그 같은 모형을 사용하는 데 필요한 적당한 기술을 모르는 수 있습니다. 생물 의학 및 전임상 모델로 돼지를 사용하면 신경 과학에 대한 관심과 사용이 증가함에 따라 연구 전반에 걸친 데이터의 정확한 비교를 보장하기 위해 조직 제거의 표준화 된 절차를 수립해야합니다. 돼지 뇌와 관련된 해부 및 외과 기술은 다른 곳에서 출판되었지만11,12,13,돼지 뇌 조직을 수집하는 간단하고 표준화 된 프로토콜에 대한 필요성이있다, 특히 생화학 적 분석에 사용하기 위해. 따라서 이 비디오의 목적은 연구원이 표준화된 뇌 추출 및 해부를 수행할 수 있도록 하는 데 필요한 지식을 제공하는 것입니다. 이 비디오는 피질과 뇌간을 그대로 유지하면서 돼지 뇌를 제거하는 하나의 적절한 기술을 설명하고, 그 후 여러 주요 뇌 영역을 해부하는 방법을 검토합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#22 Scalpel Blades for #4 Handles</td>
			<td>Ted Pella, inc.</td>
			<td>549-4S-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11 1/2&#34; Satterlee Bone Saw</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>38DI13425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 1/2&#34; Skull Breaker with Chisel End (Meat Hook)</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>38DI37636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-inch Heavy Duty Workshop Bench Vise</td>
			<td>Pony</td>
			<td>29050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butcher Knife 25cm</td>
			<td>Victorinox</td>
			<td>5.7403.25</td>
			<td>Sharpen before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CM40 Light Duty Drop Forged C Clamps</td>
			<td>Bessey</td>
			<td>00655BC3120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond Hone Knife Shaper</td>
			<td>Chef&#8217;s Choice</td>
			<td>436-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shandon Stainless-Steel Scalpel Blade Handle #4</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>5334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Forceps</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>101-5132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Dissecting pad</td>
			<td>Carolina</td>
			<td>629006</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction and dissection of the domesticated pig brain

돼지를 전임상 및 전염성 동물 모델로 사용하는 것은 심혈관 시스템, 위장 시스템 및 영양을 조사하는 연구 분야에서 잘 문서화되고 받아들여졌으며 돼지는 점점 더 신경 과학의 큰 동물 모델로 사용되고 있습니다. 또한, 돼지는 인간에서 일어나는 것과 유사한 두뇌 성장 및 발달 패턴을 표시하기 때문에 신경 발달을 공부하는 허용된 모형입니다. 신경 과학에서 덜 일반적인 동물 모델로, 돼지에 외과 및 해부 절차는 연구원 중 친숙 하거나 잘 연습 되지 않을 수 있습니다. 따라서 일관된 추출 및 해부 방법을 자세히 설명하는 표준화된 시각적 프로토콜은 돼지와 함께 일하는 연구자에게 가치가 있음을 증명할 수 있습니다. 다음 비디오는 피질과 뇌간을 그대로 유지하면서 돼지 뇌를 제거하는 기술을 보여주고 뇌간, 소뇌, 중뇌, 해마, 줄무늬, 시상 및 내측 전두엽 피질을 포함하여 여러 일반적으로 조사되는 뇌 영역을 해부하는 방법을 검토합니다. 이 비디오의 목적은 연구원에게 4주 된 돼지의 뇌 추출 및 해부를 일관되게 수행하는 데 필요한 도구와 지식을 제공하는 것입니다.

이 섹션에서는 4주 된 돼지 뇌의 정확한 추출 및 해부 후 얻은 결과의 예를 설명합니다. 그림 1은 해부 동안 가이드로 사용하기 위해 각 뇌 영역의 모양을 간략하게 설명합니다. 뇌의 일부는 소뇌의 제거 후 두개골에 남아있을 수 있습니다(도 1B). 이것은 소뇌의 원하는 영역을 격리하는 동안 제거 될 수있다. 표 1은 해부된 각 뇌 영역(n=5)에 ?...

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Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

이 프로토콜은 일반적으로 신경 과학에서 공부 여러 뇌 영역의 전체 및 해부에 돼지 뇌의 제거를위한 기술을 자세히 설명합니다.

길들여진 돼지 뇌의 추출 및 해부

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

다음 비디오는 돼지 뇌의 제거 및 해부를 시연하는 것입니다. 절차 전이나 시술 중에 아틀라스 또는 섬유 해부 가이드를 참조하는 것이 유용할 수 있습니다. 큰 정육점 칼은 아틀라스와 축 사이의 하나의 깨끗한 절단을 허용하기 때문에 참수에 가장 적합합니다.새 피사체로 시작하기 전에 칼이 날카롭지 않도록 하십시오. 고기 갈고리가 두개골을 제거하는 데 사용됩니다. 메스 손잡이와 같은 긴 날씬한 도구는 두개골에서 뇌를 제거하는 데 사용됩니다.두개골을 자르는 동안 머리를 고정하기 위해 나사 또는 돌출이있는 악이 필요합니다. 일단 동물이 확립된 프로토콜에 따라 인간적으로 안락사되면 다음과 같이 진행됩니다. 어깨와 머리 의 상단 사이에 목의 목덜미 바로 위에 잘라.돼지를 확보하고 참수 하는 동안 길에서 년을 이동 합니다. 메스를 사용하여 절개를 만들어 피부를 두개골과 분리하십시오. 머리의 후방까지 계속되는 두개골 의 중간에 초기 절단을 합니다.두 번째 횡방향 컷은 머리 의 후방에 있어야합니다. 세 번째 컷은 또한 이 주둥이의 후방에서 시작하여 두개골에 쉽게 접근할 수 있도록 눈과 인라인으로 표시됩니다. 뼈 톱을 사용하여 앞쪽으로 절단하여 중간선으로 측면 절단합니다.톱으로 잘라내기 위해 가볍게 표시한 다음 두개골에서 저항이 적을 때까지 톱을 시작합니다. 이 두개골의 가장 얇은 부분을 절단하는 것을 보장합니다으로 절단하는 동안 약간 중간선쪽으로 톱을 베비. 절단이 귀에 너무 가까우면 두개골을 제거하기가 어려울 것입니다.그러나 컷이 미드 라인에 너무 가까우면 개구부가 뇌를 제거하기에는 너무 작습니다. 수직 측면에서 이 프로세스를 반복하여 직사각형 창을 만듭니다. 창의 각 모서리가 완전히 절단되어 두개골의 일부를 제거하여 아래 뇌를 드러낼 수 있는지 확인하십시오.다음으로, 고기 후크 또는 곡선 악기를 사용하여 직사각형 두개골 부분을 위치에서 제거합니다. 먼저 후크를 코너 중 하나에 넣고 압력을 가하여 두개골을 벗는 것으로 시작합니다. 어떤 경우에는 수막이 뇌에 남아 있을 것입니다.그리고 이 경우 조심스럽게 집게와 무딘 가위를 사용, 또는 또는 뇌를 절단하지 않고 수막을 제거하기 위해 메스. 참고로 뇌는 수막 층이 제거되기 전과 후에 다음과 같이 보아야합니다. 소뇌의 노출을 준비하기 위해 머리의 후방에 근육과 지방을 잘라.소뇌를 드러내기 위해 두개골의 후방을 따라 두 개의 횡방향 컷을 만듭니다. 이 상처를 만들 때 노출 된 뇌로 절단하지 주의. 상처가 만들어지면 주부에 한 손, 두개골에 한 손을 놓고 뒤로 압력을 가하여 두개골의 뒤쪽 부분을 머리의 나머지 부분에서 멀리 끌어당깁니다.여기서 강조표시된 바와 같이, 소뇌는 나머지 수막 층 뒤에 자리 잡고 있습니다. 메스 손잡이와 같은 무딘 악기의 끝을 사용하여 뇌를 두개골에서 조심스럽게 분리하여 그 과정에서 뇌를 손상시키지 않도록주의하십시오. 머리를 약간 뒤집어 두개골에서 뇌를 동축시키고 부드러운 스쿱 동작을 사용하여 두개골 신경을 끊고 뇌를 제거하십시오.이 과정은 두뇌와 두개골 구멍 사이 모든 남아 있는 연결을 제거 하는 인내심과 연습을 필요. 돼지의 머리를 반전하는 것은이 과정에서 도움이 될 수 있습니다. 뇌를 해방하기 위해 무딘 악기와 함께 전면적인 움직임을 계속 사용하십시오.여기에서 강조한 바와 같이, 소뇌와 뇌간은 두개골 구멍에 자리 잡고 있기 때문에 제거하기 어려울 수 있습니다. 소뇌와 수질, 또는 뇌간을 제거 할 때주의하십시오. 두개골에서 완전히 분리될 때 뇌는 스스로 떨어져야 합니다.두개골 구멍은 뇌를 제거 한 후 표시된 것처럼 보아야합니다. 뇌 영역 해부에 대비하여 미리 표지된 용기가 구성되고 가까운 거리에 있는지 확인합니다. 예 보존 방법에는 액체 질소로 샘플을 스냅 동결하거나 방부제 용액에 침수하는 것이 포함됩니다.일단 두개골 구멍에서 추출되면 전체 뇌는 다음과 같이 보일 것입니다. 수질 또는 뇌간을 제거하려면 소뇌에 관상 절단 된 소달을 만듭니다. 소뇌를 제거하려면 피질에 관상 절단 후방을 만듭니다.반구를 분리하려면 손상을 방지하기 위해 연속 모션을 사용하여 세로 균열을 따라 미드 자간탈을 절단합니다. 이 비디오의 목적을 위해 우리는 올바른 반구에서 해부만 표시됩니다. 중뇌를 제거하려면 뇌의 후방 부분에 두 개의 범프인 우수한, 열등한 콜리큘리를 찾습니다.이 지역에 단지 복부 뇌 조직의 원하는 양을 제거합니다. 해마를 제거하려면 메스 손잡이를 코퍼스 캘로섬의 후방에 배치하고 해마를 부드럽게 굴려냅니다. 전체 해마 뿔은 콩 모양이 될 것입니다.해마는 후방 코퍼스 캘로섬에서 시작하여 j 모션으로 손가락을 떠올릴 때 쉽게 굴러나야합니다. striatum 또는 caudate 핵을 제거하려면 코퍼스 캘로섬의 전방 부분을 제거합니다. 카우다테 핵은 회색과 흰색으로 칠해진 줄무늬 영역이며 코퍼스 캘로섬 바로 아래에 있습니다.메스 손잡이가 각진되어 주로 카우다테 핵을 포함하는이 영역을 제거합니다. 이 조직을 제거 한 후 뇌 영역이 있던 줄무늬 패턴을 볼 수 있어야합니다. 내측 전두엽 피질을 제거하려면 전두엽 자이루스에서 그 단면의 가장 내측 부분을 복용하는 코퍼스 캘로섬까지 조직을 해부한다.오른쪽 피질은 내측 전두엽 피질을 제거 한 후에도 남아 있어야합니다. 시동을 제거하려면 중도면의 중앙에 구조와 같은 전구를 제거합니다. 시상은 명백한 구형 모양을 가지고 있으며 주변 조직보다 약간 어둡게 보입니다.해부 조직 샘플의 완료 시 특정 실험 결과에 따라 제대로 보존되어야 합니다. 여기에 해부 된 뇌 영역, 젊은 돼지와 함께 작업 할 때 예상 하는 상대적인 크기와 모양을 포함 하 여. 이러한 기술을 마스터하면 전체 뇌 추출 및 해부 절차는 피사체 당 15 분 미만이 소요되며 일관된 결과를 생성합니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

쥐의 뇌에서 뇌 표면 Vasculature 및 관련 Meninges의 해부 및 맥락막 얼기의 시각적 설명

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

연구

신경과학

Consensus Brain-derived Protein, Extraction Protocol for the Study of Human and Murine Brain Proteome Using Both 2D-DIGE and Mini 2DE Immunoblotting

합의 뇌 유래 단백질, 2D-DIGE 미니 2DE 면역 블롯을 모두 사용하여 인간과 쥐과 뇌 프로테옴 연구를 위해 추출 프로토콜

Two-dimensional gel electrophoresis (2DE) is a powerful tool to uncover proteome modifications potentially related to different physiological or ...

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

Ex Vivo Optogenetic Dissection of Fear Circuits in Brain Slices

뇌 조각의 공포 회로의 예 생체 Optogenetic 해부

Optogenetic approaches are now widely used to study the function of neural populations and circuits by combining targeted expression of light-activated ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

간단한 한 단계 성인의 전체 마운트 준비에 대한 해부 프로토콜<em&gt; 초파리</em&gt; 두뇌

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal

조직 학적 분석을위한 돼지 CNS의 노출 : 목 베기, 두개골 열기위한 매뉴얼 및 뇌 제거

Pigs have become increasingly popular in large-animal translational neuroscience research as an economically and ethically feasible substitute to ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

급성 Hippocampal 조각에 작은 볼륨 재활용-, 관류-침수 형 챔버 시스템 유지에 시 냅 스가 소성을 기록

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

절연 및 애벌레 Zebrafish 두뇌에서 신경 세포, 대 식 세포 및 Microglia RNA 추출

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...

Dissection and Isolation of Murine Glia from Multiple Central Nervous System Regions

여러 중추 신경계 영역에서 쥐 아교 세포의 해부 및 분리

The methods presented here demonstrate laboratory procedures for the dissection of four different regions of the central nervous system (CNS) from murine ...

Investigation of Spatial Interaction Between Astrocytes and Neurons in Cleared Brains

맑은 뇌에서 성상세포와 뉴런 사이의 공간적 상호작용 조사

Combining viral vector transduction and tissue clearing using the CLARITY method makes it possible to simultaneously investigate several types of brain ...

Magnetic Resonance-Guided Stereotaxy for Infusions to the Pig Brain

돼지 뇌에 주입하기위한 자기 공명 유도 스테레오 택시

The overall goal of this procedure is to perform stereotaxy in the pig brain with real-time magnetic resonance (MR) visualization guidance to provide ...