Name: a step-by-step guide to mosquito electroantennography
Uploaded: 2021-03-10T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

أنا ممتن للدكتور كليمان فينوجر والدكتور جيفري ريفيل على المناقشات المفيدة. تم الحصول على الكواشف التالية من خلال موارد BEI ، NIAID ، المعاهد الوطنية للصحة: Anopheles stephensi ، Strain STE2 ، MRA-128 ، بمساهمة مارك ك. بنديكت. Aedes aegypti ، Strain ROCK ، MRA-734 ، ساهم بها ديفيد دبليو سيفرسون ؛ كوليكس كوينكويفاسياتوس ، سلالة JHB ، بيض ، NR-43025. يشكر المؤلف الدكتور جيك تو والدكتورة نيشا دوجال والدكتور جيمس ويجر وجيفري مارانو على توفير بيض البعوض Culex quinquefasciatus و Anopheles stephensi (سلالة: ليستون). الزاعجة المرقطة و Toxorhynchites rutilus septentrionalis مشتقة من البعوض الحقلي الذي جمعه المؤلف في منطقة وادي النهر الجديد (فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم دعم هذا العمل من قبل قسم الكيمياء الحيوية ومعهد فرالين لعلوم الحياة.

1. إعداد محلول ملحي
<ol><li>تحضير المياه المالحة مقدما وتخزينها في الثلاجة.</li>
	<li>اتبع Beyenbach و Masia26 لإعداد الحل. ملاحظة: وصفة المالحة في mM: 150.0 كلوريد الصوديوم ، 25.0 HEPES ، 5.0 الجلوكوز ، 3.4 KCl ، 1.8 NaHCO3 ، 1.7 CaCl 2 ، و 1.0 MgCl2. يتم ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.1 مع 1 M NaOH. لا تضيف الج...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=World+health+statistics+2019:+monitoring+health+for+the+SDGs,+sustainable+development+goals.">World health statistics 2019: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals.</a> World Health Organization. , (2019).</li><li>Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+olfaction+in+host-seeking+of+mosquitoes:+a+review.">The role of olfaction in host-seeking of mosquitoes: a review.</a> International Journal of Tropical Insect Science. 12 (1-2-3), 287-295 (1991).</li><li>Zwiebel, L. J., Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+regulation+of+mosquito-host+interactions.">Olfactory regulation of mosquito-host interactions.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 34 (7), 645-652 (2004).</li><li>Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stop+the+biting:+targeting+a+mosquito's+sense+of+smell.">Stop the biting: targeting a mosquito's sense of smell.</a> Cell. 156 (5), 878-881 (2014).</li><li>Paluch, G., Bartholomay, L., Coats, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+repellents:+a+review+of+chemical+structure+diversity+and+olfaction.">Mosquito repellents: a review of chemical structure diversity and olfaction.</a> Pest Management Science. 66 (9), 925-935 (2010).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+investigation+on+the+antennal+receptors+of+the+silk+moth+during+chemical+and+mechanical+stimulation.">Electrophysiological investigation on the antennal receptors of the silk moth during chemical and mechanical stimulation.</a> Experientia. 13 (2), 89-91 (1957).</li><li>Raguso, R. A., Light, D. M., Pickersky, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+of+Hyles+lineata+(Sphingidae:+Lepidoptera)+to+volatile+compounds+from+Clarkia+breweri+(Onagraceae)+and+other+moth-pollinated+flowers.">Electroantennogram responses of Hyles lineata (Sphingidae: Lepidoptera) to volatile compounds from Clarkia breweri (Onagraceae) and other moth-pollinated flowers.</a> Journal of Chemical Ecology. 22 (10), 1735-1766 (1996).</li><li>Schweitzer, E. S., Sanes, J. R., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+electroantennogram+responses+in+the+moth,+Manduca+sexta.">Ontogeny of electroantennogram responses in the moth, Manduca sexta.</a> Journal of Insect Physiology. 22 (7), 955-960 (1976).</li><li>Martel, V., Anderson, P., Hansson, B. S., Schlyter, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+modulation+of+olfaction+by+physiological+state+in+the+Egyptian+leaf+worm+Spodoptera+littoralis+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Peripheral modulation of olfaction by physiological state in the Egyptian leaf worm Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 793-797 (2009).</li><li>Spaethe, J., Brockmann, A., Halbig, C., Tautz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+determines+antennal+sensitivity+and+behavioral+threshold+to+odors+in+bumblebee+workers.">Size determines antennal sensitivity and behavioral threshold to odors in bumblebee workers.</a> Naturwissenschaften. 94 (9), 733-739 (2007).</li><li>Suchet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+scent+variation+in+two+Antirrhinum+majus+subspecies+influences+the+choice+of+na&#239;ve+bumblebees.">Floral scent variation in two Antirrhinum majus subspecies influences the choice of na&#239;ve bumblebees.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 65 (5), 1015-1027 (2011).</li><li>De Jong, R., Pham-Del&#232;gue, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+related+to+olfactory+conditioning+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+ligustica).">Electroantennogram responses related to olfactory conditioning in the honeybee (Apis mellifera ligustica).</a> Journal of Insect Physiology. 37 (4), 319-324 (1991).</li><li>Patte, F., Etcheto, M., Marfaing, P., Laffort, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+stimulus-response+curves+for+59+odourants+in+the+honeybee,+Apis+mellifica.">Electroantennogram stimulus-response curves for 59 odourants in the honeybee, Apis mellifica.</a> Journal of Insect Physiology. 35 (9), 667-675 (1989).</li><li>Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+electroantennogram+in+Drosophila+melanogaster+and+its+use+for+identifying+olfactory+capture+and+transduction+mutants.">Characterization of the electroantennogram in Drosophila melanogaster and its use for identifying olfactory capture and transduction mutants.</a> Journal of Neurophysiology. 65 (3), 702-714 (1991).</li><li>Park, K. C., Ochieng, S. A., Zhu, J., Baker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+discrimination+using+insect+electroantennogram+responses+from+an+insect+antennal+array.">Odor discrimination using insect electroantennogram responses from an insect antennal array.</a> Chemical Senses. 27 (4), 343-352 (2002).</li><li>Du, Y. J., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+oviposition+bioassay+responses+of+Culex+quinquefasciatus+and+Culex+tarsalis+(Diptera:+Culicidae)+to+chemicals+in+odors+from+Bermuda+grass+infusions.">Electroantennogram and oviposition bioassay responses of Culex quinquefasciatus and Culex tarsalis (Diptera: Culicidae) to chemicals in odors from Bermuda grass infusions.</a> Journal of Medical Entomology. 36 (2), 158-166 (1999).</li><li>Costantini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioural+responses+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae+to+human-specific+sweat+components.">Electroantennogram and behavioural responses of the malaria vector Anopheles gambiae to human-specific sweat components.</a> Medical and Veterinary Entomology. 15 (3), 259-266 (2001).</li><li>Collins, L. E., Blackwell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+studies+of+potential+oviposition+attractants+for+Toxorhynchites+moctezuma+and+T.+amboinensis+mosquitoes.">Electroantennogram studies of potential oviposition attractants for Toxorhynchites moctezuma and T. amboinensis mosquitoes.</a> Physiological Entomology. 23 (3), 214-219 (1998).</li><li>Seenivasagan, T., Sharma, K. R., Sekhar, K., Ganesan, K., Prakash, S., Vijayaraghavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram,+flight+orientation,+and+oviposition+responses+of+Aedes+aegypti+to+the+oviposition+pheromone+n-heneicosane.">Electroantennogram, flight orientation, and oviposition responses of Aedes aegypti to the oviposition pheromone n-heneicosane.</a> Parasitology Research. 104 (4), 827-833 (2009).</li><li>Puri, S. N., Mendki, M. J., Sukumaran, D., Ganesan, K., Prakash, S., Sekhar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioral+responses+of+Culex+quinquefasciatus+(Diptera:+Culicidae)+females+to+chemicals+found+in+human+skin+emanations.">Electroantennogram and behavioral responses of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) females to chemicals found in human skin emanations.</a> Journal of Medical Entomology. 43 (2), 207-213 (2014).</li><li>Cooperband, M. F., McElfresh, J. S., Millar, J. G., Carde, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+female+Culex+quinquefasciatus+Say+(Diptera:+Culicidae)+to+odors+from+chicken+feces.">Attraction of female Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae) to odors from chicken feces.</a> Journal of Insect Physiology. 54 (7), 1184-1192 (2008).</li><li>Dekker, T., Ignell, R., Ghebru, M., Glinwood, R., Hopkins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+mosquito+repellent+odours+from+Ocimum+forskolei.">Identification of mosquito repellent odours from Ocimum forskolei.</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 183 (2011).</li><li>Choo, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+chemical+ecology+approach+for+the+identification+of+an+oviposition+attractant+for+Culex+quinquefasciatus.">Reverse chemical ecology approach for the identification of an oviposition attractant for Culex quinquefasciatus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 714-719 (2018).</li><li>Wolff, G. H., Lahond&#232;re, C., Vinauger, C., Riffell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromodulation+and+differential+learning+across+mosquito+species.">Neuromodulation and differential learning across mosquito species.</a> bioRxiv. , 755017 (2019).</li><li>Lahond&#232;re, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+olfactory+basis+of+orchid+pollination+by+mosquitoes.">The olfactory basis of orchid pollination by mosquitoes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (1), 708-716 (2020).</li><li>Beyenbach, K., Masia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+conductances+of+principal+cells+in+Malpighian+tubules+of+Aedes+aegypti.">Membrane conductances of principal cells in Malpighian tubules of Aedes aegypti.</a> Journal of Insect Physiology. 48, 375-386 (2002).</li><li>Oesterle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Pipette Cookbook. , (2018).</li><li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R:+A+language+and+environment+for+statistical+computing.">R: A language and environment for statistical computing.</a> R Foundation for Statistical Computing. , (2018).</li><li>Afify, A., Betz, J. F., Riabinina, O., Lahond&#232;re, C., Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+insect+repellents+hide+human+odors+from+Anopheles+mosquitoes.">Commonly used insect repellents hide human odors from Anopheles mosquitoes.</a> Current Biology. 29 (21), 3669-3680 (2019).</li><li>Martin, F., Riveron, J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+temperature+modulates+olfactory+reception+in+Drosophila+melanogaster.">Environmental temperature modulates olfactory reception in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 57 (12), 1631-1642 (2011).</li><li>Qiu, Y. T., Gort, G., Torricelli, R., Takken, W., van Loon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+blood-feeding+on+olfactory+sensitivity+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae:+application+of+mixed+linear+models+to+account+for+repeated+measurements.">Effects of blood-feeding on olfactory sensitivity of the malaria mosquito Anopheles gambiae: application of mixed linear models to account for repeated measurements.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (11), 1111-1118 (2013).</li><li>Taylor, B., Jones, M. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+flight+activity+in+the+mosquito+Aedes+aegypti+(L.):+the+phase-setting+effects+of+light-on+and+light+off.">The circadian rhythm of flight activity in the mosquito Aedes aegypti (L.): the phase-setting effects of light-on and light off.</a> Journal of Experimental Biology. 51 (1), 59-70 (1969).</li><li>Eilerts, D. F., VanderGiessen, M., Bose, E. A., Broxton, K., Vinauger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor-specific+daily+rhythms+in+the+olfactory+sensitivity+and+behavior+of+Aedes+aegypti+mosquitoes.">Odor-specific daily rhythms in the olfactory sensitivity and behavior of Aedes aegypti mosquitoes.</a> Insects. 9 (4), 147 (2018).</li><li>Krishnan, B., Dryer, S. E., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+in+olfactory+responses+of+Drosophila+melanogaster.">Circadian rhythms in olfactory responses of Drosophila melanogaster.</a> Nature. 400 (6742), 375-378 (1999).</li><li>Pelletier, J., Guidolin, A., Syed, Z., Cornel, A. J., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockdown+of+a+mosquito+odorant-binding+protein+involved+in+the+sensitive+detection+of+oviposition+attractants.">Knockdown of a mosquito odorant-binding protein involved in the sensitive detection of oviposition attractants.</a> Journal of Chemical Ecology. 36 (3), 245-248 (2010).</li></ol>

تتأثر السلوكيات بوساطة حاسة الشم بالعديد من العوامل ، بما في ذلك الفسيولوجية (على سبيل المثال ، العمر ، الوقت من اليوم) والبيئية (مثل درجة الحرارة والرطوبة النسبية)30. وبالتالي ، عند إجراء EAGs ، من الضروري استخدام الحشرات التي هي في نفس الحالة الفسيولوجية (أي مراقبة العمر ، والجو...

البعوض هو أكثر الكائنات فتكا على وجه الأرض ، حيث يودي بحياة أكثر من مليون شخص سنويا ويعرض أكثر من نصف سكان العالم لخطر التعرض لمسببات الأمراض التي ينقلونها ، بينما يلدغ1. تعتمد هذه الحشرات على مجموعة واسعة من الإشارات (أي الحرارية والبصرية والميكانيكية والشمية والسمعية) لتحديد موقع مضيف يتغذى عليه (نباتيا وحيوانيا) ، للتزاوج ووضع البيض ، وكذلك لتجنب الحيوانات المفترسة في كل من مراحل اليرقات والبالغين 2,3. من بين هذه الحواس ، يلعب حاسة الشم دورا مهما في السلوكيات المذكورة أعلاه ، لا سيما للكشف المتوسط إلى بعيد المدى عن جزيئات الرائحة 2,3. يتم الكشف عن الروائح المنبعثة من مضيف أو موقع وضع البيض بواسطة مستقبلات شمية محددة مختلفة (على سبيل المثال ، GRs ، ORs ، IRs) الموجودة على خرطوم ملامسة البعوض ، الترسي ، والهوائيات2،3.
نظرا لأن حاسة الشم هي عنصر أساسي في سلوكيات البحث عن المضيف (النبات والحيوان) والتزاوج ووضع البيض ، فإنها تشكل بالتالي هدفا مثاليا للدراسة لتطوير أدوات جديدة لمكافحة البعوض4. البحث عن المواد الطاردة (على سبيل المثال ، DEET ، IR3535 ، picaridin) والطعوم (على سبيل المثال ، إغراء الإنسان BG الحارس) غزير الإنتاج5 ، ولكن بسبب التحديات الحالية في مكافحة البعوض (على سبيل المثال ، مقاومة المبيدات الحشرية ، الأنواع الغازية) ، من الضروري تطوير طرق مكافحة فعالة جديدة مستنيرة ببيولوجيا البعوض.
تم استخدام العديد من التقنيات (مثل مقياس الشم ، ومقايسات الهبوط ، والفيزيولوجيا الكهربية) لتقييم النشاط الحيوي للمركبات أو مخاليط المركبات في البعوض. من بينها ، يمكن استخدام electroantennography (أو electroantennograms (EAGs)) لتحديد ما إذا كان يتم الكشف عن الروائح بواسطة هوائيات البعوض. تم تطوير هذه التقنية في البداية بواسطة Schneider6 وتم استخدامها في العديد من أجناس الحشرات المختلفة منذ ذلك الحين ، بما في ذلك العث7،8،9 ، النحل الطنان10،11 ، نحل العسل12،13 ، وذباب الفاكهة14،15 على سبيل المثال لا الحصر. كما تم استخدام تخطيط كهربية الأنتنانت باستخدام بروتوكولات مختلفة ، بما في ذلك هوائيات مفردة أو متعددة في البعوض16،17،18،19،20،21،22،23،24،25.
البعوض حشرات صغيرة وحساسة نسبيا مع هوائيات رقيقة إلى حد ما. في حين أن إجراء EAGs على الحشرات الكبيرة مثل العث أو النحل الطنان أمر سهل نسبيا بسبب حجمها الأكبر وهوائياتها الأكثر سمكا ، فإن إجراء EAGs في البعوض قد يكون أمرا صعبا. على وجه الخصوص ، يعد الحفاظ على نسبة إشارة إلى ضوضاء جيدة وإعداد سريع الاستجابة متطلبين رئيسيين لاستنساخ البيانات وموثوقيتها.
يقدم الدليل التفصيلي لمجموعات EAG منخفضة الضوضاء المقترحة هنا حلولا مباشرة لهذه القيود ويجعل هذا البروتوكول قابلا للتطبيق على العديد من أنواع البعوض من أجناس مختلفة ، بما في ذلك الزاعجة والأنوفيليس وكوليكس وتوكسورينكيتس ، ويصف التقنية لكل من الإناث والذكور. يوفر تخطيط كهربية الأنتل طريقة سريعة وموثوقة لفحص وتحديد المركبات النشطة بيولوجيا التي يمكن بعد ذلك الاستفادة منها في تطوير الطعم بعد تحديد التكافؤ باستخدام المقايسات السلوكية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Air table Clean Bench</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog-to-digital board</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>BNC-2090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Flowbuddy Complete</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>59-122BC</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosillicate glass capillary</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B100-78-10</td>
			<td>To make the recording and references capillaries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L</td>
			<td>Chemicals used for the experiments presented here</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Source</td>
			<td>Volpi</td>
			<td>NCL-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>1 mL (309628)&#160; / 3 mL (309657)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>5371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode gel salt free</td>
			<td>Parkerlabs</td>
			<td>12-08-Spectra-360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowmeters</td>
			<td>Bel-art</td>
			<td>65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075)</td>
			<td>One of each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCMS vials and caps</td>
			<td>Thermo-fisher scientific</td>
			<td>2-SVWKA8-CPK</td>
			<td>To prepare odorant dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass syringes (Fortuna)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z314307</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humbug</td>
			<td>Quest Scientific</td>
			<td>http://www.quest-sci.com/</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>675748</td>
			<td>Electrode holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic bases</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>MB-FX</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB + Toolboxes</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td>
			<td>For delivering the pulses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical air</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For main airline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikkon</td>
			<td>SMZ-800N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MHW-3</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode amplifier with headstage</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito rearing supplies</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>25G (305127) / 21G (305165)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE Tubing of different diameters</td>
			<td>Mc Master Carr</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30V/5A DC Power Supply</td>
			<td>Dr. Meter</td>
			<td>PS-305DM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R version 3.5.1</td>
			<td>R project</td>
			<td>https://www.r-project.org/</td>
			<td>For data analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Relay for solenoid valve</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire 0.01&#8221;</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>782500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solenoid valve (3-way)</td>
			<td>The Lee Company</td>
			<td>LHDA0533115H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WinEDR software</td>
			<td>Strathclyde Electrophysiology Software</td>
			<td>WinEDR V3.9.1</td>
			<td>For EAG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman paper</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>UX-06648-03</td>
			<td>To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step-by-step guide to mosquito electroantennography

أنثى البعوض هي أكثر الحيوانات فتكا على وجه الأرض ، حيث تودي بحياة أكثر من 1 مليون شخص كل عام بسبب مسببات الأمراض التي تنقلها عند الحصول على وجبة دم. لتحديد موقع مضيف يتغذى عليه ، يعتمد البعوض على مجموعة واسعة من الإشارات الحسية ، بما في ذلك البصرية والميكانيكية والحرارية والشمية. تفصل الدراسة تقنية ، تخطيط كهربية (EAG) ، تسمح للباحثين بتقييم ما إذا كان البعوض يمكنه اكتشاف المواد الكيميائية الفردية ومزيج المواد الكيميائية بطريقة تعتمد على التركيز. عندما تقترن هذه التقنية بكروماتوغرافيا الغاز (GC-EAG) ، فإنها تسمح بتعريض الهوائيات لخليط كامل من فراغ الرأس / معقد وتحدد المواد الكيميائية الموجودة في العينة ذات الاهتمام ، والتي يمكن للبعوض اكتشافها. ينطبق هذا على روائح جسم المضيف وكذلك باقات الأزهار النباتية أو الروائح الأخرى ذات الصلة بيئيا (على سبيل المثال ، روائح مواقع وضع البيض). هنا ، وصفنا بروتوكولا يسمح بفترات طويلة من وقت استجابة التحضير وينطبق على كل من إناث وذكور البعوض من أجناس متعددة ، بما في ذلك بعوض الزاعجة و Culex و Anopheles و Toxorhynchite . نظرا لأن حاسة الشم تلعب دورا رئيسيا في التفاعلات بين البعوض والمضيف وبيولوجيا البعوض بشكل عام ، يمكن ل EAGs و GC-EAG الكشف عن مركبات ذات أهمية لتطوير استراتيجيات جديدة لمكافحة ناقلات الأمراض (مثل الطعوم). مع استكمال المقايسات السلوكية ، يمكن تحديد التكافؤ (على سبيل المثال ، جاذب ، طارد) لكل مادة كيميائية.

يعد التصوير الكهربائي أداة قوية لتحديد ما إذا كان يتم اكتشاف مادة كيميائية أو مزيج من المواد الكيميائية بواسطة هوائي الحشرات. يمكن استخدامه أيضا لتحديد عتبة الكشف عن مادة كيميائية معينة باستخدام زيادة تدريجية في التركيز (أي استجابة منحنى الجرعة ، الشكل 4B). علاوة على ذلك ، ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

تفصل هذه المقالة بروتوكولا خطوة بخطوة للمخططات الكهربائية الناجحة ومنخفضة الضوضاء في العديد من أجناس البعوض ، بما في ذلك الإناث والذكور.

دليل خطوة بخطوة لتخطيط كهربية البعوض

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...

بالنسبة للتخطيط الكهربائي ، يعد استخدام البعوض في حالة فسيولوجية محددة ومتسقة أمرا بالغ الأهمية للحصول على نتائج موثوقة. يسمح البروتوكول خطوة بخطوة بتسجيلات كهربائية دائمة في البعوض. يمكن استخدام هذه الطريقة في العديد من أنواع البعوض ، وفي كل من الذكور والإناث.يمكن أيضا نقل تقنية electroantennographic إلى نماذج الحشرات الأخرى ، بما في ذلك الخنافس والذباب وبق التقبيل والنمل. للبدء ، قم بإزالة قوارير العنبر سعة 1.5 ملليلتر التي تحتوي على مخاليط الرائحة والتحكم في المذيبات من الفريزر 20 درجة مئوية الذي يتم تخزينها فيه لمنع التدهور. بعد ذلك ، قم بإخراج 10 ميكرولترات من محلول الرائحة على قطعة من ورق الترشيح محملة داخل حقنة زجاجية ملصقة.عزل البعوض في يوم التجربة. العمل تحت المجهر ، وكسر بلطف طرف اثنين من الشعيرات الدموية البورسليكات مع خيوط باستخدام زوج من ملقط. قبل إجراء التصوير الكهربائي ، أو تجربة EAG ، تأكد من أن حوامل الأقطاب الكهربائية واضحة من الداخل ، مع عدم وجود حطام البورسليكات.ثم قم بإجراء الكلورة عن طريق نقع الأسلاك الفضية لحاملات الأقطاب الكهربائية في مبيض نقي لمدة خمس دقائق ، حتى تتحول الأسلاك إلى اللون الرمادي الداكن غير اللامع. ثم شطف الأسلاك. قم بفك السدادة المطاطية واستخدم إبرة قياس 20 لملء الجزء الداخلي من الشعيرات الدموية بمحلول ملحي.شطف الشعيرات الدموية وإدخال الأسلاك في الشعيرات الدموية. أبق طرف السلك أقل من ملليمتر واحد من قمة الشعيرات الدموية. مرر الشعيرات الدموية عبر الحلقة المطاطية داخل حامل القطب دون كسرها وشد السدادة المطاطية برفق ، بعد التحقق من عدم وجود فقاعات هواء.استخدم الشعيرات الدموية ذات الفتحة الأوسع على حامل القطب المرجعي والفتحة الأصغر على حامل قطب التسجيل. اترك حاملي الأقطاب الكهربائية المثبتين على منديل تنظيف مبلل لمنع الطرف من الجفاف حتى يصبح جاهزا لتركيب الرأس. تأكد من أن طاولة الهواء لأعلى.لا يوجد انسداد في شركة الطيران والهواء قيد التشغيل. تحقق من امتلاء خزان الهواء الطبي لتجنب تغييره في منتصف التجربة وتأكيد الفقاعات في جهاز الترطيب. قم بتشغيل أجهزة الكمبيوتر والتطبيقات البرمجية ومصدر طاقة الصمام.بعد التحقق من اتصال الإنترنت ، قم بتوصيل نبضة تحكم للتحقق من أن الصمام الذي يوصل النبضات يعمل. ضع صفيحة من الألومنيوم على الثلج مع قطعة من التنظيف الرطب فوقها وضع القليل من هلام القطب في زاوية. ضع كوبا من البعوض على الثلج للسماح للبعوضة بالتبريد.قص طرف كل هوائي من البعوض مع مقص صغير. استخدم ملقط لسحب البعوض بجوار هلام القطب الكهربائي واغمس طرف كل هوائي برفق في الجل. باستخدام ملقط ، اسحب هوائيات البعوض للخارج ، مع الحفاظ عليها بجانب بعضها البعض.يقطع رأس البعوض باستخدام مقص صغير. اغمس طرف القطب المرجعي برفق في الجل وضعه على اتصال بالرقبة ، واترك الرأس يلتصق به. ضع قطب الرأس المرجعي على مناور دقيق.قم بتوصيل كلا حاملي الأقطاب الكهربائية بمكبر الصوت. استخدم المعالج الدقيق لوضع قطب التسجيل في أقرب مكان ممكن من أطراف الهوائي. ثم أدخل أطراف الهوائي في قطب التسجيل.ضع أنبوب الطيران بالقرب من مستحضر رأس البعوض ، على بعد سنتيمتر واحد. قم بتشغيل مكبر الصوت ومخفض الضوضاء وتأكد من أن إشارة خط الأساس ليست صاخبة. بمجرد أن يصبح مستوى الضوضاء مرضيا ، أدخل أول حقنة رائحة في فتحة الطيران لإجراء الاختبار وإغلاق قفص فاراداي.ثم انقر فوق تسجيل على برنامج EAG لتوصيل النبض. قم بقياس استجابات EAG كسعة بالمللي فولت ثم تابع الرائحة أو التركيز التالي. توضح التجربة بنجاح أن أنواع البعوض يمكن أن تظهر استجابات شمية متغيرة للمواد الكيميائية المختلفة.كان هناك غياب للاستجابة للزيت المعدني ، الذي كان يستخدم كعنصر تحكم سلبي. يمكن تقليل الخطأ في النتائج بسبب الضوضاء الكهربائية عن طريق تأريض العناصر في قفص فاراداي ، باستخدام مقاطع التمساح. يمكن أن تختلف عتبة الاستجابة لنفس الرائحة في الحجم لأنواع مختلفة من البعوض.على سبيل المثال ، ينتج بعوض Toxorhynchites rutilus septentrionalis EAGs كبيرة جدا ، مقارنة ب Aedes aegypti و Anopheles stephensi و Culex quinquefasciatus. لوحظ انحراف كبير استجابة للتحكم الإيجابي ، البنزالديهايد. في حين كان هناك عدم استجابة للسيطرة السلبية ، والزيوت المعدنية.يوضح متوسط استجابات الهوائيات هذه في مخطط شريطي. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد عتبة الكشف عن مادة كيميائية معينة لكل نوع من أنواع البعوض من خلال تقديم الهوائي ، والتركيزات المتزايدة للمادة الكيميائية ، ورسم منحنى استجابة الجرعة. من المهم بدء التسجيل في أقرب وقت ممكن بعد تقطيع الرأس وتركيبه ، لضمان استجابة كبيرة للتحضير.يسمح EAG بتحديد ما إذا كانت هوائيات البعوض تستجيب لمادة كيميائية معينة بتركيز معين. ومع ذلك ، فإنه لا يسمح بتحديد توازن هذه المادة الكيميائية. على سبيل المثال ، سواء كان جاذبا أو توبة.

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

بروتوكول للتربية البعوض (A. الغامبية)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

بناء عالم أفضل البعوض : تحديد الجينات تمكين الملاريا وحمى الضنك حمى المقاومة في الغامبية ألف وألف البعوض بعوض

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

نهج عملي لرسم الخرائط الوراثية محرض مصير : دليل مرئي لمارك وتعقب خلايا في فيفو</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

A Step-by-step Method for the Reconstitution of an ABC Transporter into Nanodisc Lipid Particles

A أسلوب الخطوة بخطوة لإعادة تشكيل ناقلة الى جزيئات الدهون ABC Nanodisc

The nanodisc is a discoidal particle (~ 10-12 nm large) that trap membrane proteins into a small patch of phospholipid bilayer. The nanodisc is a ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

دليل عملي لPhylogenetics لNonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

الفسيولوجية تسجيلات وRNA تسلسل الزوائد ذوقي من البعوض الحمى الصفراء<em&gt; الزاعجة المصرية</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

دليل لمودرن الكمية نيون الغربية التنشيف مع استراتيجيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

التنبيب داخل الرغامى من الأرانب باستخدام قسطرة دليل البولي بروبلين

Endotracheal intubation in rabbits can be challenging due to their unusual anatomy. Achieving a patent airway during anesthesia is critical for the ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

قسم، Coring، ودليل معالجة الصور لارتفاع الإنتاجية اختبار العظام كورتيكية الشراء وتحليل لSynchrotron الدقيقة CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

A Magnetic-Bead-Based Mosquito DNA Extraction Protocol for Next-Generation Sequencing

بروتوكول استخراج الحمض النووي للبعوض القائم على الخرز المغناطيسي لتسلسل الجيل التالي

A recently published DNA extraction protocol using magnetic beads and an automated DNA extraction instrument suggested that it is possible to extract high ...