Name: a step-by-step guide to mosquito electroantennography
Uploaded: 2021-03-10T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

Jeg er taknemmelig over for Dr. Clément Vinauger og Dr. Jeffrey Riffell for nyttige drøftelser. Følgende reagenser blev opnået gennem BEI Resources, NIAID, NIH: Anopheles stephensi, Strain STE2, MRA-128, bidraget af Mark Q. Benedict; Aedes aegypti, Strain ROCK, MRA-734, bidraget af David W. Severson; Culex quinquefasciatus, stamme JHB, æg, NR-43025. Forfatteren takker Dr. Jake Tu, Dr. Nisha Duggal, Dr. James Weger og Jeffrey Marano for at give Culex quinquefasciatus og Anopheles stephensi (stamme: Liston) myggeæg. Aedes albopictus og Toxorhynchites rutilus septentrionalis stammer fra feltmyg indsamlet af forfatteren i New River Valley-området (VA, USA). Dette arbejde blev støttet af Institut for Biokemi og Fralin Life Science Institute.

1. Fremstilling af saltopløsning
<ol><li>Forbered saltvand på forhånd og opbevar i køleskabet.</li>
	<li>Følg Beyenbach og Masia26 for at forberede løsningen. BEMÆRK: Saltvandsopskrift i mM: 150,0 NaCl, 25,0 HEPES, 5,0 glucose, 3,4 KCl, 1,8 NaHCO3, 1,7CaCl2 og 1,0 MgCl2. pH-værdien justeres til 7,1 med 1 M NaOH. Tilsæt ikke glukose eller saccharose til præparatet på dette tidspunkt for at øge hyldeopbevaringen. Tilsæt den nødvendige mængde til s...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=World+health+statistics+2019:+monitoring+health+for+the+SDGs,+sustainable+development+goals.">World health statistics 2019: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals.</a> World Health Organization. , (2019).</li><li>Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+olfaction+in+host-seeking+of+mosquitoes:+a+review.">The role of olfaction in host-seeking of mosquitoes: a review.</a> International Journal of Tropical Insect Science. 12 (1-2-3), 287-295 (1991).</li><li>Zwiebel, L. J., Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+regulation+of+mosquito-host+interactions.">Olfactory regulation of mosquito-host interactions.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 34 (7), 645-652 (2004).</li><li>Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stop+the+biting:+targeting+a+mosquito's+sense+of+smell.">Stop the biting: targeting a mosquito's sense of smell.</a> Cell. 156 (5), 878-881 (2014).</li><li>Paluch, G., Bartholomay, L., Coats, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+repellents:+a+review+of+chemical+structure+diversity+and+olfaction.">Mosquito repellents: a review of chemical structure diversity and olfaction.</a> Pest Management Science. 66 (9), 925-935 (2010).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+investigation+on+the+antennal+receptors+of+the+silk+moth+during+chemical+and+mechanical+stimulation.">Electrophysiological investigation on the antennal receptors of the silk moth during chemical and mechanical stimulation.</a> Experientia. 13 (2), 89-91 (1957).</li><li>Raguso, R. A., Light, D. M., Pickersky, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+of+Hyles+lineata+(Sphingidae:+Lepidoptera)+to+volatile+compounds+from+Clarkia+breweri+(Onagraceae)+and+other+moth-pollinated+flowers.">Electroantennogram responses of Hyles lineata (Sphingidae: Lepidoptera) to volatile compounds from Clarkia breweri (Onagraceae) and other moth-pollinated flowers.</a> Journal of Chemical Ecology. 22 (10), 1735-1766 (1996).</li><li>Schweitzer, E. S., Sanes, J. R., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+electroantennogram+responses+in+the+moth,+Manduca+sexta.">Ontogeny of electroantennogram responses in the moth, Manduca sexta.</a> Journal of Insect Physiology. 22 (7), 955-960 (1976).</li><li>Martel, V., Anderson, P., Hansson, B. S., Schlyter, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+modulation+of+olfaction+by+physiological+state+in+the+Egyptian+leaf+worm+Spodoptera+littoralis+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Peripheral modulation of olfaction by physiological state in the Egyptian leaf worm Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 793-797 (2009).</li><li>Spaethe, J., Brockmann, A., Halbig, C., Tautz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+determines+antennal+sensitivity+and+behavioral+threshold+to+odors+in+bumblebee+workers.">Size determines antennal sensitivity and behavioral threshold to odors in bumblebee workers.</a> Naturwissenschaften. 94 (9), 733-739 (2007).</li><li>Suchet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+scent+variation+in+two+Antirrhinum+majus+subspecies+influences+the+choice+of+na&#239;ve+bumblebees.">Floral scent variation in two Antirrhinum majus subspecies influences the choice of na&#239;ve bumblebees.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 65 (5), 1015-1027 (2011).</li><li>De Jong, R., Pham-Del&#232;gue, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+related+to+olfactory+conditioning+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+ligustica).">Electroantennogram responses related to olfactory conditioning in the honeybee (Apis mellifera ligustica).</a> Journal of Insect Physiology. 37 (4), 319-324 (1991).</li><li>Patte, F., Etcheto, M., Marfaing, P., Laffort, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+stimulus-response+curves+for+59+odourants+in+the+honeybee,+Apis+mellifica.">Electroantennogram stimulus-response curves for 59 odourants in the honeybee, Apis mellifica.</a> Journal of Insect Physiology. 35 (9), 667-675 (1989).</li><li>Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+electroantennogram+in+Drosophila+melanogaster+and+its+use+for+identifying+olfactory+capture+and+transduction+mutants.">Characterization of the electroantennogram in Drosophila melanogaster and its use for identifying olfactory capture and transduction mutants.</a> Journal of Neurophysiology. 65 (3), 702-714 (1991).</li><li>Park, K. C., Ochieng, S. A., Zhu, J., Baker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+discrimination+using+insect+electroantennogram+responses+from+an+insect+antennal+array.">Odor discrimination using insect electroantennogram responses from an insect antennal array.</a> Chemical Senses. 27 (4), 343-352 (2002).</li><li>Du, Y. J., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+oviposition+bioassay+responses+of+Culex+quinquefasciatus+and+Culex+tarsalis+(Diptera:+Culicidae)+to+chemicals+in+odors+from+Bermuda+grass+infusions.">Electroantennogram and oviposition bioassay responses of Culex quinquefasciatus and Culex tarsalis (Diptera: Culicidae) to chemicals in odors from Bermuda grass infusions.</a> Journal of Medical Entomology. 36 (2), 158-166 (1999).</li><li>Costantini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioural+responses+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae+to+human-specific+sweat+components.">Electroantennogram and behavioural responses of the malaria vector Anopheles gambiae to human-specific sweat components.</a> Medical and Veterinary Entomology. 15 (3), 259-266 (2001).</li><li>Collins, L. E., Blackwell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+studies+of+potential+oviposition+attractants+for+Toxorhynchites+moctezuma+and+T.+amboinensis+mosquitoes.">Electroantennogram studies of potential oviposition attractants for Toxorhynchites moctezuma and T. amboinensis mosquitoes.</a> Physiological Entomology. 23 (3), 214-219 (1998).</li><li>Seenivasagan, T., Sharma, K. R., Sekhar, K., Ganesan, K., Prakash, S., Vijayaraghavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram,+flight+orientation,+and+oviposition+responses+of+Aedes+aegypti+to+the+oviposition+pheromone+n-heneicosane.">Electroantennogram, flight orientation, and oviposition responses of Aedes aegypti to the oviposition pheromone n-heneicosane.</a> Parasitology Research. 104 (4), 827-833 (2009).</li><li>Puri, S. N., Mendki, M. J., Sukumaran, D., Ganesan, K., Prakash, S., Sekhar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioral+responses+of+Culex+quinquefasciatus+(Diptera:+Culicidae)+females+to+chemicals+found+in+human+skin+emanations.">Electroantennogram and behavioral responses of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) females to chemicals found in human skin emanations.</a> Journal of Medical Entomology. 43 (2), 207-213 (2014).</li><li>Cooperband, M. F., McElfresh, J. S., Millar, J. G., Carde, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+female+Culex+quinquefasciatus+Say+(Diptera:+Culicidae)+to+odors+from+chicken+feces.">Attraction of female Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae) to odors from chicken feces.</a> Journal of Insect Physiology. 54 (7), 1184-1192 (2008).</li><li>Dekker, T., Ignell, R., Ghebru, M., Glinwood, R., Hopkins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+mosquito+repellent+odours+from+Ocimum+forskolei.">Identification of mosquito repellent odours from Ocimum forskolei.</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 183 (2011).</li><li>Choo, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+chemical+ecology+approach+for+the+identification+of+an+oviposition+attractant+for+Culex+quinquefasciatus.">Reverse chemical ecology approach for the identification of an oviposition attractant for Culex quinquefasciatus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 714-719 (2018).</li><li>Wolff, G. H., Lahond&#232;re, C., Vinauger, C., Riffell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromodulation+and+differential+learning+across+mosquito+species.">Neuromodulation and differential learning across mosquito species.</a> bioRxiv. , 755017 (2019).</li><li>Lahond&#232;re, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+olfactory+basis+of+orchid+pollination+by+mosquitoes.">The olfactory basis of orchid pollination by mosquitoes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (1), 708-716 (2020).</li><li>Beyenbach, K., Masia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+conductances+of+principal+cells+in+Malpighian+tubules+of+Aedes+aegypti.">Membrane conductances of principal cells in Malpighian tubules of Aedes aegypti.</a> Journal of Insect Physiology. 48, 375-386 (2002).</li><li>Oesterle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Pipette Cookbook. , (2018).</li><li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R:+A+language+and+environment+for+statistical+computing.">R: A language and environment for statistical computing.</a> R Foundation for Statistical Computing. , (2018).</li><li>Afify, A., Betz, J. F., Riabinina, O., Lahond&#232;re, C., Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+insect+repellents+hide+human+odors+from+Anopheles+mosquitoes.">Commonly used insect repellents hide human odors from Anopheles mosquitoes.</a> Current Biology. 29 (21), 3669-3680 (2019).</li><li>Martin, F., Riveron, J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+temperature+modulates+olfactory+reception+in+Drosophila+melanogaster.">Environmental temperature modulates olfactory reception in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 57 (12), 1631-1642 (2011).</li><li>Qiu, Y. T., Gort, G., Torricelli, R., Takken, W., van Loon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+blood-feeding+on+olfactory+sensitivity+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae:+application+of+mixed+linear+models+to+account+for+repeated+measurements.">Effects of blood-feeding on olfactory sensitivity of the malaria mosquito Anopheles gambiae: application of mixed linear models to account for repeated measurements.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (11), 1111-1118 (2013).</li><li>Taylor, B., Jones, M. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+flight+activity+in+the+mosquito+Aedes+aegypti+(L.):+the+phase-setting+effects+of+light-on+and+light+off.">The circadian rhythm of flight activity in the mosquito Aedes aegypti (L.): the phase-setting effects of light-on and light off.</a> Journal of Experimental Biology. 51 (1), 59-70 (1969).</li><li>Eilerts, D. F., VanderGiessen, M., Bose, E. A., Broxton, K., Vinauger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor-specific+daily+rhythms+in+the+olfactory+sensitivity+and+behavior+of+Aedes+aegypti+mosquitoes.">Odor-specific daily rhythms in the olfactory sensitivity and behavior of Aedes aegypti mosquitoes.</a> Insects. 9 (4), 147 (2018).</li><li>Krishnan, B., Dryer, S. E., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+in+olfactory+responses+of+Drosophila+melanogaster.">Circadian rhythms in olfactory responses of Drosophila melanogaster.</a> Nature. 400 (6742), 375-378 (1999).</li><li>Pelletier, J., Guidolin, A., Syed, Z., Cornel, A. J., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockdown+of+a+mosquito+odorant-binding+protein+involved+in+the+sensitive+detection+of+oviposition+attractants.">Knockdown of a mosquito odorant-binding protein involved in the sensitive detection of oviposition attractants.</a> Journal of Chemical Ecology. 36 (3), 245-248 (2010).</li></ol>

Olfaktorisk medieret adfærd påvirkes af mange faktorer, herunder fysiologiske (f.eks. alder, tidspunkt på dagen) og miljømæssige (f.eks. temperatur, relativ luftfugtighed)30. Når der udføres miljøvurderingsplaner, er det derfor vigtigt at anvende insekter, der har samme fysiologiske status (dvs. overvågning af alder, sult, parring)31 og også at opretholde et varmt og fugtigt miljø omkring præparatet for at undgå udtørring. En temperatur omkring 25 °C er ideel...

Myg er de dødeligste organismer på jorden, der kræver livet for mere end en million mennesker om året og sætter mere end halvdelen af verdens befolkning i fare for eksponering for de patogener, de transmitterer, mens de bider1. Disse insekter er afhængige af en bred vifte af signaler (dvs. termiske, visuelle, mekaniske, olfaktoriske, auditive) for at finde en vært at fodre på (både plante og dyr), til parring og oviposition samt for at undgå rovdyr på både larvestadiet og voksenstadiet 2,3. Blandt disse sanser spiller olfaktion en kritisk rolle i ovennævnte adfærd, især til mellem- til langtrækkende detektion af lugtstofmolekyler 2,3. Lugte udsendt af en vært eller et ovipositionssted detekteres af forskellige specifikke olfaktoriske receptorer (fx GR'er, OR'er, IR'er) placeret på myggepalperne, proboscis, tarsi og antenner 2,3.
Da olfaktion er en nøglekomponent i deres værtssøgende (plante og dyr), parring og ovipositionsadfærd, udgør det således et ideelt mål at studere for at udvikle nye værktøjer til mygkontrol4. Forskning i afskrækningsmidler (f.eks. DEET, IR3535, picaridin) og lokkemad (f.eks. BG sentinel human lokke) er ekstremt produktiv5, men på grund af de nuværende udfordringer inden for mygkontrol (f.eks. Insekticidresistens, invasive arter) er det vigtigt at udvikle nye effektive kontrolmetoder informeret af mygbiologien.
Mange teknikker (f.eks. olfactometer, landingsanalyser, elektrofysiologi) er blevet brugt til at vurdere bioaktiviteten af forbindelser eller blandinger af forbindelser i myg. Blandt dem kan elektroantennografi (eller elektroantenogrammer (EAG'er)) bruges til at bestemme, om lugtstofferne detekteres af mygantennerne. Denne teknik blev oprindeligt udviklet af Schneider6 og er blevet brugt i mange forskellige insektslægter siden da, herunder møl 7,8,9, humlebier 10,11, honningbier 12,13 og bananfluer 14,15 for at nævne nogle få. Elektroantennografi er også blevet anvendt ved hjælp af forskellige protokoller, herunder enkelt eller flere antenner i myg 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25.
Myg er relativt små og sarte insekter med ret tynde antenner. Mens det er relativt let at udføre EAG'er på større insekter som møl eller humlebier på grund af deres større størrelse og tykkere antenner, kan det være udfordrende at udføre EAG'er i myg. Især opretholdelse af et godt signal-støj-forhold og en varig responsiv forberedelse er to vigtige krav til datareproducerbarhed og pålidelighed.
Den trinvise vejledning til støjsvage EAG'er, der foreslås her, tilbyder direkte løsninger på disse begrænsninger og gør denne protokol anvendelig på flere myggearter fra forskellige slægter, herunder Aedes, Anopheles, Culex og Toxorhynchites, og beskriver teknikken for både kvinder og mænd. Elektroantennografi tilbyder en hurtig, men pålidelig måde at screene og bestemme bioaktive forbindelser, der derefter kan udnyttes i agnudvikling, efter at valensen er blevet bestemt med adfærdsmæssige assays.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Air table Clean Bench</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog-to-digital board</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>BNC-2090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Flowbuddy Complete</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>59-122BC</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosillicate glass capillary</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B100-78-10</td>
			<td>To make the recording and references capillaries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L</td>
			<td>Chemicals used for the experiments presented here</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Source</td>
			<td>Volpi</td>
			<td>NCL-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>1 mL (309628)&#160; / 3 mL (309657)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>5371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode gel salt free</td>
			<td>Parkerlabs</td>
			<td>12-08-Spectra-360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowmeters</td>
			<td>Bel-art</td>
			<td>65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075)</td>
			<td>One of each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCMS vials and caps</td>
			<td>Thermo-fisher scientific</td>
			<td>2-SVWKA8-CPK</td>
			<td>To prepare odorant dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass syringes (Fortuna)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z314307</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humbug</td>
			<td>Quest Scientific</td>
			<td>http://www.quest-sci.com/</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>675748</td>
			<td>Electrode holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic bases</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>MB-FX</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB + Toolboxes</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td>
			<td>For delivering the pulses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical air</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For main airline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikkon</td>
			<td>SMZ-800N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MHW-3</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode amplifier with headstage</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito rearing supplies</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>25G (305127) / 21G (305165)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE Tubing of different diameters</td>
			<td>Mc Master Carr</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30V/5A DC Power Supply</td>
			<td>Dr. Meter</td>
			<td>PS-305DM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R version 3.5.1</td>
			<td>R project</td>
			<td>https://www.r-project.org/</td>
			<td>For data analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Relay for solenoid valve</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire 0.01&#8221;</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>782500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solenoid valve (3-way)</td>
			<td>The Lee Company</td>
			<td>LHDA0533115H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WinEDR software</td>
			<td>Strathclyde Electrophysiology Software</td>
			<td>WinEDR V3.9.1</td>
			<td>For EAG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman paper</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>UX-06648-03</td>
			<td>To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step-by-step guide to mosquito electroantennography

Kvindelige myg er de dødeligste dyr på jorden og hævder livet for mere end 1 million mennesker hvert år på grund af patogener, de sender, når de erhverver et blodmel. For at finde en vært at fodre på, er myg afhængige af en bred vifte af sensoriske signaler, herunder visuel, mekanisk, termisk og olfaktorisk. Undersøgelsen beskriver en teknik, elektroantenografi (EAG), der gør det muligt for forskere at vurdere, om myggene kan detektere individuelle kemikalier og blandinger af kemikalier på en koncentrationsafhængig måde. Når det kombineres med gaskromatografi (GC-EAG), gør denne teknik det muligt at udsætte antennerne for en fuld headspace / kompleks blanding og bestemmer, hvilke kemikalier der er til stede i prøven af interesse, myggen kan opdage. Dette gælder for værtskropslugt samt planteblomsterbuketter eller andre økologisk relevante lugte (f.eks. Ovipositionssteder lugtstoffer). Her beskrev vi en protokol, der tillader lang varighed af forberedelsesresponstid og gælder for både kvindelige og mandlige myg fra flere slægter, herunder Aedes, Culex, Anopheles og Toxorhynchites myg. Da olfaktion spiller en vigtig rolle i myg-vært interaktioner og mygbiologi generelt, kan EAG'er og GC-EAG afsløre forbindelser af interesse for udvikling af nye sygdomsvektorbekæmpelsesstrategier (f.eks. Lokkemad). Suppleret med adfærdsmæssige assays kan valensen (fx tiltrækningsmiddel, afstødningsmiddel) af hvert kemikalie bestemmes.

Elektroantenografi er et kraftfuldt værktøj til at bestemme, om et kemikalie eller en blanding af kemikalier detekteres af en insektantenne. Det kan også bruges til at bestemme detektionstærsklen for et givet kemikalie ved hjælp af en gradvis stigning i koncentrationen (dvs. dosiskurverespons, figur 4B). Desuden er det nyttigt at teste virkningerne af afskrækningsmiddel på responsen på værtsrelaterede lugte29.
Der bør altid anvend...

Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

Denne artikel beskriver en trin-for-trin protokol for vellykkede og støjsvage elektroantenogrammer i flere slægter af myg, herunder både kvinder og mænd.

En trin-for-trin guide til myg elektroantennografi

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...

For elektroantennografi er det afgørende at bruge myg i en specifik og konsekvent fysiologisk status for at opnå pålidelige resultater. Den trinvise protokol giver mulighed for varige elektroantennografiske optagelser i myg. Metoden kan anvendes i flere myggearter, og hos både mænd og kvinder.Den elektroantennografiske teknik kan også overføres til andre insektmodeller, herunder biller, fluer, kyssebugs og myrer. Til at begynde med skal du fjerne de 1,5 ml gule hætteglas, der indeholder lugtblandingerne og en opløsningsmiddelkontrol fra 20 grader Celsius-fryseren, hvor de opbevares for at forhindre nedbrydning. Derefter pipetteres 10 mikroliter af lugtopløsningen ud på et stykke filterpapir, der er lagt inde i en mærket glassprøjte.Isoler myggene på forsøgsdagen. Arbejd under mikroskopet, bryd forsigtigt spidsen af to borosilikatkapillærer med filamenter ved hjælp af et par tang. Før du kører elektroantennografi eller EAG-eksperimentet, skal du sikre dig, at elektrodeholderne er klare indeni uden borosilikataffald.Udfør derefter chloridisering ved at blødgøre sølvtrådene på elektrodeholderne i ren blegemiddel i fem minutter, indtil ledningerne bliver mørke, matgrå. Skyl derefter ledningerne. Løsn gummiproppen og brug en 20 gauge nål til at fylde indersiden af kapillæret med saltopløsning.Skyl kapillærerne og indsæt ledningerne i de to kapillærer. Hold spidsen af ledningen mindre end en millimeter fra spidsen af kapillærrøret. Før kapillærrøret gennem gummiringen inde i elektrodeholderen uden at bryde den, og stram forsigtigt gummiproppen efter at have kontrolleret, at der ikke er luftbobler til stede.Brug kapillærrøret med den bredere åbning på referenceelektrodeholderen og den mindre åbning på optageelektrodeholderen. Lad de to monterede elektrodeholdere stå på en våd renseserviet for at forhindre, at spidsen tørrer ud, indtil den er klar til at montere hovedet. Sørg for, at luftbordet er oppe.Der er ingen blokering i flyselskabet, og luften er tændt. Kontroller, at tanken med medicinsk luft er fuld for at undgå at ændre den midt i eksperimentet, og bekræft bobler i luftfugteren. Tænd computerne, softwareapplikationerne og ventilens strømforsyning.Når du har verificeret internetforbindelsen, skal du levere en kontrolpuls for at kontrollere, at ventilen, der leverer impulserne, fungerer. Placer en aluminiumsplade på is med et stykke vådt rengøringsserviet over det og læg en lille klat elektrodegel i et hjørne. Placer en myggekop på is for at lade myggen køle af.Klip spidsen af hver antenne af myggen med mikrosaks. Brug tang til at trække myggen ved siden af elektrodegelklappen og dypp hver antennes spids forsigtigt i gelen. Brug tang til at trække mygantennerne ud, mens du holder dem ved siden af hinanden.Hak myggens hoved ved hjælp af mikrosaks. Dyp forsigtigt spidsen af referenceelektroden i gelen og sæt den i kontakt med nakken, lad hovedet klæbe til den. Referencehovedelektroden anbringes på en mikromanipulator.Tilslut begge elektrodeholdere til forstærkeren. Brug mikromanipulatoren til at placere optageelektroden så tæt som muligt på antennespidserne. Indsæt derefter antennespidserne i optageelektroden.Placer flyslangen tæt på myggehovedets forberedelse på en centimeter. Tænd forstærkeren og støjreduktionen, og sørg for, at baselinesignalet ikke er støjende. Når støjniveauet er tilfredsstillende, skal du indsætte den første lugtsprøjte i flyhullet for at udføre testen og lukke Faraday-buret.Klik derefter på optag på EAG-softwaren for at levere pulsen. Mål EAG-responser som amplitude i millivolt, og fortsæt derefter med den næste lugt eller koncentration. Eksperimentet viser med succes, at myggearter kan udvise variable olfaktoriske reaktioner på forskellige kemikalier.Der var mangel på respons på mineralolien, som blev brugt som en negativ kontrol. Fejl i resultaterne på grund af elektrisk støj kan reduceres ved at jordforbinde elementerne til Faraday-buret ved hjælp af alligatorklip. Responstærsklen for det samme lugtstof kan variere i størrelse for forskellige arter af myg.For eksempel producerer Toxorhynchites rutilus septentrionalis myg meget store EAG'er sammenlignet med Aedes aegypti, Anopheles stephensi og Culex quinquefasciatus. En stor afbøjning som reaktion på den positive kontrol, benzaldehyd, blev bemærket. Mens der manglede respons på den negative kontrol, mineralolie.Disse gennemsnitlige antenneresponser er vist i et søjlediagram. Derudover blev tærsklen for påvisning af et specifikt kemikalie for hver myggeart bestemt ved at præsentere antennen, de stigende koncentrationer af kemikaliet og plotte en dosisresponskurve. Det er vigtigt at starte optagelsen så hurtigt som muligt, efter at hovedet er blevet hakket og monteret, for at sikre stor lydhørhed i forberedelsen.EAG gør det muligt at bestemme, om mygantennerne reagerer på et givet kemikalie ved en given koncentration. Det tillader imidlertid ikke at bestemme balancen mellem dette kemikalie. For eksempel, om det er en tiltrækningskraft eller omvendelse.

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

A Step-by-step Method for the Reconstitution of an ABC Transporter into Nanodisc Lipid Particles

En trin-for-trin metode til at rekonstituere en ABC Transporter ind i Nanodisc lipidpartikler

The nanodisc is a discoidal particle (~ 10-12 nm large) that trap membrane proteins into a small patch of phospholipid bilayer. The nanodisc is a ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

En praktisk vejledning til fylogeni for Nonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologiske Recordings og RNA-sekventering af smags- Vedhæng i gul-feber Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

En guide til Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting med fejlfinding Strategies

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

Endotracheal Intubation af kaniner med et polypropylen Guide kateter

Endotracheal intubation in rabbits can be challenging due to their unusual anatomy. Achieving a patent airway during anesthesia is critical for the ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

En vejledning til sektions-, coring- og billedbehandling til indkøb og analyse af kortikale knogleeksempeler med høj overførselshastighed til synkrotronmikro-CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

A Magnetic-Bead-Based Mosquito DNA Extraction Protocol for Next-Generation Sequencing

En magnetisk perle-baseret Mosquito DNA ekstraktion protokol for næste generations sekventering

A recently published DNA extraction protocol using magnetic beads and an automated DNA extraction instrument suggested that it is possible to extract high ...