Name: a step-by-step guide to mosquito electroantennography
Uploaded: 2021-03-10T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

Ik ben Dr. Clément Vinauger en Dr. Jeffrey Riffell dankbaar voor de nuttige discussies. De volgende reagentia werden verkregen via BEI Resources, NIAID, NIH: Anopheles stephensi, Strain STE2, MRA-128, bijgedragen door Mark Q. Benedict; Aedes aegypti, Strain ROCK, MRA-734, bijgedragen door David W. Severson; Culex quinquefasciatus, Stam JHB, Eieren, NR-43025. De auteur bedankt Dr. Jake Tu, Dr. Nisha Duggal, Dr. James Weger en Jeffrey Marano voor het verstrekken van Culex quinquefasciatus en Anopheles stephensi (stam: Liston) muggeneieren. Aedes albopictus en Toxorhynchites rutilus septentrionalis zijn afgeleid van veldmuggen verzameld door de auteur in het New River Valley-gebied (VA, VS). Dit werk werd ondersteund door de afdeling Biochemie en het Fralin Life Science Institute.

1. Bereiding van zoutoplossing
<ol><li>Bereid de zoutoplossing van tevoren en bewaar in de koelkast.</li>
	<li>Volg Beyenbach en Masia26 om de oplossing voor te bereiden. OPMERKING: Zoutoplossing recept in mM: 150,0 NaCl, 25,0 HEPES, 5,0 glucose, 3,4 KCl, 1,8 NaHCO3, 1,7 CaCl 2 en 1,0 MgCl2. De pH wordt met 1 M NaOH ingesteld op 7,1. Voeg op dit moment geen glucose of sucrose toe aan het preparaat om de opslag van de plank te vergroten. Voeg de benodigde hoeve...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=World+health+statistics+2019:+monitoring+health+for+the+SDGs,+sustainable+development+goals.">World health statistics 2019: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals.</a> World Health Organization. , (2019).</li><li>Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+olfaction+in+host-seeking+of+mosquitoes:+a+review.">The role of olfaction in host-seeking of mosquitoes: a review.</a> International Journal of Tropical Insect Science. 12 (1-2-3), 287-295 (1991).</li><li>Zwiebel, L. J., Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+regulation+of+mosquito-host+interactions.">Olfactory regulation of mosquito-host interactions.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 34 (7), 645-652 (2004).</li><li>Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stop+the+biting:+targeting+a+mosquito's+sense+of+smell.">Stop the biting: targeting a mosquito's sense of smell.</a> Cell. 156 (5), 878-881 (2014).</li><li>Paluch, G., Bartholomay, L., Coats, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+repellents:+a+review+of+chemical+structure+diversity+and+olfaction.">Mosquito repellents: a review of chemical structure diversity and olfaction.</a> Pest Management Science. 66 (9), 925-935 (2010).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+investigation+on+the+antennal+receptors+of+the+silk+moth+during+chemical+and+mechanical+stimulation.">Electrophysiological investigation on the antennal receptors of the silk moth during chemical and mechanical stimulation.</a> Experientia. 13 (2), 89-91 (1957).</li><li>Raguso, R. A., Light, D. M., Pickersky, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+of+Hyles+lineata+(Sphingidae:+Lepidoptera)+to+volatile+compounds+from+Clarkia+breweri+(Onagraceae)+and+other+moth-pollinated+flowers.">Electroantennogram responses of Hyles lineata (Sphingidae: Lepidoptera) to volatile compounds from Clarkia breweri (Onagraceae) and other moth-pollinated flowers.</a> Journal of Chemical Ecology. 22 (10), 1735-1766 (1996).</li><li>Schweitzer, E. S., Sanes, J. R., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+electroantennogram+responses+in+the+moth,+Manduca+sexta.">Ontogeny of electroantennogram responses in the moth, Manduca sexta.</a> Journal of Insect Physiology. 22 (7), 955-960 (1976).</li><li>Martel, V., Anderson, P., Hansson, B. S., Schlyter, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+modulation+of+olfaction+by+physiological+state+in+the+Egyptian+leaf+worm+Spodoptera+littoralis+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Peripheral modulation of olfaction by physiological state in the Egyptian leaf worm Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 793-797 (2009).</li><li>Spaethe, J., Brockmann, A., Halbig, C., Tautz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+determines+antennal+sensitivity+and+behavioral+threshold+to+odors+in+bumblebee+workers.">Size determines antennal sensitivity and behavioral threshold to odors in bumblebee workers.</a> Naturwissenschaften. 94 (9), 733-739 (2007).</li><li>Suchet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+scent+variation+in+two+Antirrhinum+majus+subspecies+influences+the+choice+of+na&#239;ve+bumblebees.">Floral scent variation in two Antirrhinum majus subspecies influences the choice of na&#239;ve bumblebees.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 65 (5), 1015-1027 (2011).</li><li>De Jong, R., Pham-Del&#232;gue, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+related+to+olfactory+conditioning+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+ligustica).">Electroantennogram responses related to olfactory conditioning in the honeybee (Apis mellifera ligustica).</a> Journal of Insect Physiology. 37 (4), 319-324 (1991).</li><li>Patte, F., Etcheto, M., Marfaing, P., Laffort, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+stimulus-response+curves+for+59+odourants+in+the+honeybee,+Apis+mellifica.">Electroantennogram stimulus-response curves for 59 odourants in the honeybee, Apis mellifica.</a> Journal of Insect Physiology. 35 (9), 667-675 (1989).</li><li>Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+electroantennogram+in+Drosophila+melanogaster+and+its+use+for+identifying+olfactory+capture+and+transduction+mutants.">Characterization of the electroantennogram in Drosophila melanogaster and its use for identifying olfactory capture and transduction mutants.</a> Journal of Neurophysiology. 65 (3), 702-714 (1991).</li><li>Park, K. C., Ochieng, S. A., Zhu, J., Baker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+discrimination+using+insect+electroantennogram+responses+from+an+insect+antennal+array.">Odor discrimination using insect electroantennogram responses from an insect antennal array.</a> Chemical Senses. 27 (4), 343-352 (2002).</li><li>Du, Y. J., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+oviposition+bioassay+responses+of+Culex+quinquefasciatus+and+Culex+tarsalis+(Diptera:+Culicidae)+to+chemicals+in+odors+from+Bermuda+grass+infusions.">Electroantennogram and oviposition bioassay responses of Culex quinquefasciatus and Culex tarsalis (Diptera: Culicidae) to chemicals in odors from Bermuda grass infusions.</a> Journal of Medical Entomology. 36 (2), 158-166 (1999).</li><li>Costantini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioural+responses+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae+to+human-specific+sweat+components.">Electroantennogram and behavioural responses of the malaria vector Anopheles gambiae to human-specific sweat components.</a> Medical and Veterinary Entomology. 15 (3), 259-266 (2001).</li><li>Collins, L. E., Blackwell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+studies+of+potential+oviposition+attractants+for+Toxorhynchites+moctezuma+and+T.+amboinensis+mosquitoes.">Electroantennogram studies of potential oviposition attractants for Toxorhynchites moctezuma and T. amboinensis mosquitoes.</a> Physiological Entomology. 23 (3), 214-219 (1998).</li><li>Seenivasagan, T., Sharma, K. R., Sekhar, K., Ganesan, K., Prakash, S., Vijayaraghavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram,+flight+orientation,+and+oviposition+responses+of+Aedes+aegypti+to+the+oviposition+pheromone+n-heneicosane.">Electroantennogram, flight orientation, and oviposition responses of Aedes aegypti to the oviposition pheromone n-heneicosane.</a> Parasitology Research. 104 (4), 827-833 (2009).</li><li>Puri, S. N., Mendki, M. J., Sukumaran, D., Ganesan, K., Prakash, S., Sekhar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioral+responses+of+Culex+quinquefasciatus+(Diptera:+Culicidae)+females+to+chemicals+found+in+human+skin+emanations.">Electroantennogram and behavioral responses of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) females to chemicals found in human skin emanations.</a> Journal of Medical Entomology. 43 (2), 207-213 (2014).</li><li>Cooperband, M. F., McElfresh, J. S., Millar, J. G., Carde, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+female+Culex+quinquefasciatus+Say+(Diptera:+Culicidae)+to+odors+from+chicken+feces.">Attraction of female Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae) to odors from chicken feces.</a> Journal of Insect Physiology. 54 (7), 1184-1192 (2008).</li><li>Dekker, T., Ignell, R., Ghebru, M., Glinwood, R., Hopkins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+mosquito+repellent+odours+from+Ocimum+forskolei.">Identification of mosquito repellent odours from Ocimum forskolei.</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 183 (2011).</li><li>Choo, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+chemical+ecology+approach+for+the+identification+of+an+oviposition+attractant+for+Culex+quinquefasciatus.">Reverse chemical ecology approach for the identification of an oviposition attractant for Culex quinquefasciatus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 714-719 (2018).</li><li>Wolff, G. H., Lahond&#232;re, C., Vinauger, C., Riffell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromodulation+and+differential+learning+across+mosquito+species.">Neuromodulation and differential learning across mosquito species.</a> bioRxiv. , 755017 (2019).</li><li>Lahond&#232;re, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+olfactory+basis+of+orchid+pollination+by+mosquitoes.">The olfactory basis of orchid pollination by mosquitoes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (1), 708-716 (2020).</li><li>Beyenbach, K., Masia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+conductances+of+principal+cells+in+Malpighian+tubules+of+Aedes+aegypti.">Membrane conductances of principal cells in Malpighian tubules of Aedes aegypti.</a> Journal of Insect Physiology. 48, 375-386 (2002).</li><li>Oesterle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Pipette Cookbook. , (2018).</li><li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R:+A+language+and+environment+for+statistical+computing.">R: A language and environment for statistical computing.</a> R Foundation for Statistical Computing. , (2018).</li><li>Afify, A., Betz, J. F., Riabinina, O., Lahond&#232;re, C., Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+insect+repellents+hide+human+odors+from+Anopheles+mosquitoes.">Commonly used insect repellents hide human odors from Anopheles mosquitoes.</a> Current Biology. 29 (21), 3669-3680 (2019).</li><li>Martin, F., Riveron, J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+temperature+modulates+olfactory+reception+in+Drosophila+melanogaster.">Environmental temperature modulates olfactory reception in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 57 (12), 1631-1642 (2011).</li><li>Qiu, Y. T., Gort, G., Torricelli, R., Takken, W., van Loon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+blood-feeding+on+olfactory+sensitivity+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae:+application+of+mixed+linear+models+to+account+for+repeated+measurements.">Effects of blood-feeding on olfactory sensitivity of the malaria mosquito Anopheles gambiae: application of mixed linear models to account for repeated measurements.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (11), 1111-1118 (2013).</li><li>Taylor, B., Jones, M. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+flight+activity+in+the+mosquito+Aedes+aegypti+(L.):+the+phase-setting+effects+of+light-on+and+light+off.">The circadian rhythm of flight activity in the mosquito Aedes aegypti (L.): the phase-setting effects of light-on and light off.</a> Journal of Experimental Biology. 51 (1), 59-70 (1969).</li><li>Eilerts, D. F., VanderGiessen, M., Bose, E. A., Broxton, K., Vinauger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor-specific+daily+rhythms+in+the+olfactory+sensitivity+and+behavior+of+Aedes+aegypti+mosquitoes.">Odor-specific daily rhythms in the olfactory sensitivity and behavior of Aedes aegypti mosquitoes.</a> Insects. 9 (4), 147 (2018).</li><li>Krishnan, B., Dryer, S. E., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+in+olfactory+responses+of+Drosophila+melanogaster.">Circadian rhythms in olfactory responses of Drosophila melanogaster.</a> Nature. 400 (6742), 375-378 (1999).</li><li>Pelletier, J., Guidolin, A., Syed, Z., Cornel, A. J., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockdown+of+a+mosquito+odorant-binding+protein+involved+in+the+sensitive+detection+of+oviposition+attractants.">Knockdown of a mosquito odorant-binding protein involved in the sensitive detection of oviposition attractants.</a> Journal of Chemical Ecology. 36 (3), 245-248 (2010).</li></ol>

Olfactorisch gemedieerd gedrag wordt beïnvloed door vele factoren, waaronder fysiologisch (bijv. Leeftijd, tijdstip van de dag) en omgeving (bijv. Temperatuur, relatieve vochtigheid)30. Bij het uitvoeren van EAG's is het dus essentieel om insecten te gebruiken die zich in dezelfde fysiologische status bevinden (d.w.z. monitoring op leeftijd, verhongering, paring)31 en om ook een warme en vochtige omgeving rond het preparaat te behouden om uitdroging te voorkomen. Een tempe...

Muggen zijn de dodelijkste organismen op aarde, eisen het leven van meer dan een miljoen mensen per jaar en brengen meer dan de helft van de wereldbevolking in gevaar voor blootstelling aan de ziekteverwekkers die ze overbrengen, terwijl zebijten 1. Deze insecten vertrouwen op een breed scala aan signalen (d.w.z. thermisch, visueel, mechanisch, olfactorisch, auditief) om een gastheer te vinden om zich mee te voeden (zowel plant als dier), voor paring en ovipositie, en om roofdieren te vermijden in zowel de larvale als volwassen stadia 2,3. Onder deze zintuigen speelt reukzin een cruciale rol in de bovengenoemde gedragingen, met name voor detectie op middellange tot lange afstand van geurmoleculen 2,3. Geuren die worden uitgezonden door een gastheer of een ovipositieplaats worden gedetecteerd door verschillende specifieke reukreceptoren (bijv. GRs, OK's, IR's) op de muggenpalpen proboscis, tarsi en antennes 2,3.
Omdat reukzin een belangrijk onderdeel is van hun gastheerzoekende (plant en dier), parings- en ovipositiegedrag, vormt het dus een ideaal doelwit om te bestuderen om nieuwe hulpmiddelen voor muggenbestrijdingte ontwikkelen 4. Onderzoek naar insectenwerende middelen (bijv. DEET, IR3535, picaridin) en aas (bijv. BG sentinel menselijk kunstaas) is uiterst productief5, maar vanwege de huidige uitdagingen in muggenbestrijding (bijv. Insecticideresistentie, invasieve soorten), is het essentieel om nieuwe efficiënte bestrijdingsmethoden te ontwikkelen op basis van de muggenbiologie.
Veel technieken (bijv. olfactometer, landingstests, elektrofysiologie) zijn gebruikt om de bioactiviteit van verbindingen of mengsels van verbindingen in muggen te beoordelen. Onder hen kan elektroantennografie (of elektroantennogrammen (EAG's)) worden gebruikt om te bepalen of de geurstoffen worden gedetecteerd door de muggenantennes. Deze techniek werd oorspronkelijk ontwikkeld door Schneider6 en is sindsdien in veel verschillende insectengeslachten gebruikt, waaronder motten 7,8,9, hommels 10,11, honingbijen 12,13 en fruitvliegen 14,15 om er maar een paar te noemen. Elektroantennografie is ook gebruikt met behulp van verschillende protocollen, waaronder enkele of meerdere antennes bij muggen 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25.
Muggen zijn relatief kleine en delicate insecten met vrij dunne antennes. Hoewel het uitvoeren van EAG's op grotere insecten zoals motten of hommels relatief eenvoudig is vanwege hun grotere formaat en dikkere antennes, kan het uitvoeren van EAG's bij muggen een uitdaging zijn. Met name het handhaven van een goede signaal-ruisverhouding en een duurzame responsieve voorbereiding zijn twee belangrijke vereisten voor de reproduceerbaarheid en betrouwbaarheid van gegevens.
De stapsgewijze handleiding voor geluidsarme EAG's die hier wordt voorgesteld, biedt direct oplossingen voor deze beperkingen en maakt dit protocol van toepassing op verschillende muggensoorten uit verschillende geslachten, waaronder Aedes, Anopheles, Culex en Toxorhynchites, en beschrijft de techniek voor zowel vrouwtjes als mannetjes. Elektroantennografie biedt een snelle maar betrouwbare manier om bioactieve stoffen te screenen en te bepalen die vervolgens kunnen worden gebruikt bij de ontwikkeling van aas nadat de valentie is bepaald met gedragstests.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Air table Clean Bench</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog-to-digital board</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>BNC-2090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Flowbuddy Complete</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>59-122BC</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosillicate glass capillary</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B100-78-10</td>
			<td>To make the recording and references capillaries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L</td>
			<td>Chemicals used for the experiments presented here</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Source</td>
			<td>Volpi</td>
			<td>NCL-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>1 mL (309628)&#160; / 3 mL (309657)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>5371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode gel salt free</td>
			<td>Parkerlabs</td>
			<td>12-08-Spectra-360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowmeters</td>
			<td>Bel-art</td>
			<td>65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075)</td>
			<td>One of each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCMS vials and caps</td>
			<td>Thermo-fisher scientific</td>
			<td>2-SVWKA8-CPK</td>
			<td>To prepare odorant dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass syringes (Fortuna)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z314307</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humbug</td>
			<td>Quest Scientific</td>
			<td>http://www.quest-sci.com/</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>675748</td>
			<td>Electrode holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic bases</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>MB-FX</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB + Toolboxes</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td>
			<td>For delivering the pulses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical air</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For main airline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikkon</td>
			<td>SMZ-800N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MHW-3</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode amplifier with headstage</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito rearing supplies</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>25G (305127) / 21G (305165)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE Tubing of different diameters</td>
			<td>Mc Master Carr</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30V/5A DC Power Supply</td>
			<td>Dr. Meter</td>
			<td>PS-305DM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R version 3.5.1</td>
			<td>R project</td>
			<td>https://www.r-project.org/</td>
			<td>For data analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Relay for solenoid valve</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire 0.01&#8221;</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>782500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solenoid valve (3-way)</td>
			<td>The Lee Company</td>
			<td>LHDA0533115H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WinEDR software</td>
			<td>Strathclyde Electrophysiology Software</td>
			<td>WinEDR V3.9.1</td>
			<td>For EAG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman paper</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>UX-06648-03</td>
			<td>To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step-by-step guide to mosquito electroantennography

Vrouwelijke muggen zijn de dodelijkste dieren op aarde en eisen elk jaar het leven van meer dan 1 miljoen mensen als gevolg van ziekteverwekkers die ze overbrengen bij het verkrijgen van een bloedmaaltijd. Om een gastheer te vinden om zich mee te voeden, vertrouwen muggen op een breed scala aan sensorische signalen, waaronder visuele, mechanische, thermische en olfactorische. De studie beschrijft een techniek, elektroantennografie (EAG), waarmee onderzoekers kunnen beoordelen of de muggen individuele chemicaliën en mengsels van chemicaliën op een concentratieafhankelijke manier kunnen detecteren. In combinatie met gaschromatografie (GC-EAG) maakt deze techniek het mogelijk om de antennes bloot te stellen aan een volledige headspace / complex mengsel en bepaalt welke chemicaliën aanwezig zijn in het monster van belang dat de mug kan detecteren. Dit is van toepassing op geuren van het gastheerlichaam, maar ook op bloemboeketten van planten of andere ecologisch relevante geuren (bijv. Geurstoffen van ovipositiesites). Hier hebben we een protocol beschreven dat een lange duur van de reactietijd van de voorbereiding mogelijk maakt en van toepassing is op zowel vrouwelijke als mannelijke muggen uit meerdere geslachten, waaronder Aedes, Culex, Anopheles en Toxorhynchites-muggen . Omdat reukzin een belangrijke rol speelt in interacties tussen muggen en gastheer en muggenbiologie in het algemeen, kunnen EAG's en GC-EAG verbindingen onthullen die van belang zijn voor de ontwikkeling van nieuwe strategieën voor de bestrijding van ziektevectoren (bijv. Aas ). Aangevuld met gedragstests kan de valentie (bijv. Lokstof, afweermiddel) van elke chemische stof worden bepaald.

Elektroantennografie is een krachtig hulpmiddel om te bepalen of een chemische stof of een mengsel van chemicaliën wordt gedetecteerd door een insectenantenne. Het kan ook worden gebruikt om de detectiedrempel voor een bepaalde chemische stof te bepalen met behulp van een geleidelijke toename van de concentratie (d.w.z. dosiscurverespons, figuur 4B). Bovendien is het nuttig om de effecten van afweermiddel op de reactie op gastheergerelateerde geuren te testen29.
...

Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

Het huidige artikel beschrijft een stap-voor-stap protocol voor succesvolle en geluidsarme elektroantennogrammen in verschillende geslachten van muggen, waaronder zowel vrouwtjes als mannetjes.

Een stapsgewijze handleiding voor muggenelektroantennografie

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...

Voor elektroantennografie is het gebruik van muggen in een specifieke en consistente fysiologische status van cruciaal belang om betrouwbare resultaten te verkrijgen. Het stapsgewijze protocol zorgt voor blijvende elektroantennografische opnames bij muggen. De methode kan worden gebruikt bij verschillende muggensoorten en bij zowel mannetjes als vrouwtjes.De elektroantennografische techniek kan ook worden getransponeerd naar andere insectenmodellen, waaronder kevers, vliegen, kussende insecten en mieren. Verwijder om te beginnen de 1,5 milliliter amberkleurige injectieflacons met de geurmengsels en een oplosmiddelcontrole uit de vriezer van 20 graden Celsius waarin ze zijn opgeslagen om degradatie te voorkomen. Pipetteer vervolgens 10 microliter van de geuroplossing op een stuk filterpapier dat in een gelabelde glazen spuit is geplaatst.Isoleer de muggen op de dag van het experiment. Werk onder de microscoop en breek voorzichtig de punt van twee borosilicaatcapillairen met filamenten met behulp van een tang. Voordat u de elektroantennografie of het EAG-experiment uitvoert, moet u ervoor zorgen dat de elektrodehouders van binnen vrij zijn, zonder borosilicaatvuil.Voer vervolgens chloridisatie uit door de zilveren draden van de elektrodehouders gedurende vijf minuten in zuiver bleekmiddel te weken, totdat de draden donker, matgrijs worden. Spoel vervolgens de draden af. Maak de rubberen stop los en gebruik een naald van 20 gauge om de binnenkant van het capillair te vullen met een zoutoplossing.Spoel de haarvaten af en steek de draden in de twee haarvaten. Houd de punt van de draad minder dan een millimeter van de punt van het capillair. Haal het capillair door de rubberen ring in de elektrodehouder zonder deze te breken en draai de rubberen stop voorzichtig vast, nadat je hebt gecontroleerd of er geen luchtbellen aanwezig zijn.Gebruik het capillair met de bredere opening op de referentie-elektrodehouder en de kleinere opening op de opname-elektrodehouder. Laat de twee gemonteerde elektrodehouders op een nat reinigingsdoekje zitten om te voorkomen dat de punt uitdroogt totdat u klaar bent om de kop te monteren. Zorg ervoor dat de luchttafel omhoog is.Er is geen blokkade in de luchtvaartmaatschappij en de lucht staat aan. Controleer of de tank met medische lucht vol is om te voorkomen dat deze in het midden van het experiment wordt vervangen en bevestig bubbels in de luchtbevochtiger. Schakel de computers, de softwaretoepassingen en de voeding van de klep in.Nadat u de internetverbinding hebt gecontroleerd, geeft u een besturingspuls om te controleren of de klep die de pulsen levert, functioneel is. Leg een aluminium plaat op ijs met een stuk nat reinigingsdoekje eroverheen en leg een klein kloddertje elektrodegel in een hoekje. Plaats een muggenbeker op ijs om de mug te laten afkoelen.Knip de punt van elke antenne van de mug met een microschaar. Gebruik een tang om de mug naast de elektrodegel te slepen en dompel de punt van elke antenne voorzichtig in de gel. Trek met een tang de muggenantennes eruit, terwijl je ze naast elkaar houdt.Hak de kop van de mug met een microschaar. Dompel de punt van de referentie-elektrode voorzichtig in de gel en plaats deze in contact met de nek, zodat het hoofd eraan blijft plakken. Plaats de referentiekopelektrode op een micromanipulator.Sluit beide elektrodehouders aan op de versterker. Gebruik de micromanipulator om de opname-elektrode zo dicht mogelijk bij de antennepunten te plaatsen. Plaats vervolgens de antennetips in de opname-elektrode.Plaats de vliegtuigslang dicht bij het muggenkoppreparaat, op één centimeter. Schakel de versterker en de ruisregelaar in en zorg ervoor dat het basissignaal niet luidruchtig is. Zodra het geluidsniveau bevredigend is, steekt u de eerste geurspuit in het gat van de luchtvaartmaatschappij om de test uit te voeren en sluit u de kooi van Faraday.Klik vervolgens op opnemen in de EAG-software om de puls af te leveren. Meet EAG-responsen als amplitude in millivolts en ga dan verder met de volgende geur of concentratie. Het experiment toont met succes aan dat muggensoorten variabele olfactorische reacties op verschillende chemicaliën kunnen vertonen.Er was een gebrek aan reactie op de minerale olie, die werd gebruikt als een negatieve controle. Fouten in de resultaten als gevolg van elektrische ruis kunnen worden verminderd door de elementen naar de kooi van Faraday te aarden, met behulp van krokodillenklemmen. De responsdrempel op dezelfde geurstof kan variëren in grootte voor verschillende soorten muggen.Toxorhynchites rutilus septentrionalis-muggen produceren bijvoorbeeld zeer grote EAG's, vergeleken met Aedes aegypti, Anopheles stephensi en Culex quinquefasciatus. Een grote afbuiging als reactie op de positieve controle, benzaldehyde, werd opgemerkt. Terwijl er een gebrek aan reactie was op de negatieve controle, minerale olie.Deze gemiddelde antennereacties worden weergegeven in een staafdiagram. Bovendien werd de drempel voor het detecteren van een specifieke chemische stof voor elke muggensoort bepaald door de antenne, de toenemende concentraties van de chemische stof te presenteren en een dosisresponscurve uit te zetten. Het is belangrijk om de opname zo snel mogelijk te starten nadat de kop is gehakt en gemonteerd, om een grote responsiviteit van de voorbereiding te garanderen.EAG maakt het mogelijk om te bepalen of de muggenantennes reageren op een bepaalde chemische stof bij een bepaalde concentratie. Het maakt het echter niet mogelijk om de balans van deze chemische stof te bepalen. Bijvoorbeeld of het een lokstof of bekering is.

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

Protocol voor Mosquito Opfok (A. gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

Bouwen aan een betere Mosquito: Het identificeren van de genen Enabling malaria en knokkelkoorts verzet in A. gambiae en A. aegypti muggen

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Een praktische benadering van genetische Induceerbare Fate Mapping: een visuele gids voor Mark en Track Cellen In Vivo</em

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

A Step-by-step Method for the Reconstitution of an ABC Transporter into Nanodisc Lipid Particles

Een stap-voor-stap methode voor de Reconstructie van een ABC-transporter in nanodisc lipide deeltjes

The nanodisc is a discoidal particle (~ 10-12 nm large) that trap membrane proteins into a small patch of phospholipid bilayer. The nanodisc is a ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

Een praktische gids voor Phylogenetics voor Nonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologische Recordings en RNA Sequencing van de Smaak Appendages van de Gele-koorts Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

A Guide to Modern Kwantitatieve TL Western Blotting met Troubleshooting Strategies

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

Endotracheale intubatie van konijnen met behulp van een katheter polypropyleen gids

Endotracheal intubation in rabbits can be challenging due to their unusual anatomy. Achieving a patent airway during anesthesia is critical for the ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

Een sectie-, coring- en beeldverwerkingshandleiding voor aanschaf en analyse van corticale botmonsters met hoge doorvoer voor Synchrotron Micro-CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

A Magnetic-Bead-Based Mosquito DNA Extraction Protocol for Next-Generation Sequencing

Een op magnetische kraal gebaseerd mosquito-DNA-extractieprotocol voor sequencing van de volgende generatie

A recently published DNA extraction protocol using magnetic beads and an automated DNA extraction instrument suggested that it is possible to extract high ...