Name: a step-by-step guide to mosquito electroantennography
Uploaded: 2021-03-10T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

Je remercie le Dr Clément Vinauger et le Dr Jeffrey Riffell pour leurs discussions utiles. Les réactifs suivants ont été obtenus par l’intermédiaire de BEI Resources, NIAID, NIH : Anopheles stephensi, souche STE2, MRA-128, contribution de Mark Q. Benedict; Aedes aegypti, Strain ROCK, MRA-734, contribution de David W. Severson; Culex quinquefasciatus, souche JHB, Oeufs, NR-43025. L’auteur remercie le Dr Jake Tu, la Dre Nisha Duggal, le Dr James Weger et Jeffrey Marano d’avoir fourni des œufs de moustiques Culex quinquefasciatus et Anopheles stephensi (souche : Liston). Aedes albopictus et Toxorhynchites rutilus septentrionalis sont dérivés de moustiques de terrain collectés par l’auteur dans la région de New River Valley (VA, États-Unis). Ce travail a été soutenu par le Département de biochimie et l’Institut des sciences de la vie Fralin.

1. Préparation de la solution saline
<ol><li>Préparez la solution saline à l’avance et conservez-la au réfrigérateur.</li>
	<li>Suivre Beyenbach et Masia26 pour préparer la solution. REMARQUE: Recette saline en mM: 150,0 NaCl, 25,0 HEPES, 5,0 glucose, 3,4 KCl, 1,8 NaHCO3, 1,7 CaCl 2 et 1,0 MgCl2. Le pH est ajusté à 7,1 avec 1 M NaOH. N’ajoutez pas de glucose ou de saccharose à la préparation à ce moment-là pour augmenter le stockage en rayon. A...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=World+health+statistics+2019:+monitoring+health+for+the+SDGs,+sustainable+development+goals.">World health statistics 2019: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals.</a> World Health Organization. , (2019).</li><li>Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+olfaction+in+host-seeking+of+mosquitoes:+a+review.">The role of olfaction in host-seeking of mosquitoes: a review.</a> International Journal of Tropical Insect Science. 12 (1-2-3), 287-295 (1991).</li><li>Zwiebel, L. J., Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+regulation+of+mosquito-host+interactions.">Olfactory regulation of mosquito-host interactions.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 34 (7), 645-652 (2004).</li><li>Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stop+the+biting:+targeting+a+mosquito's+sense+of+smell.">Stop the biting: targeting a mosquito's sense of smell.</a> Cell. 156 (5), 878-881 (2014).</li><li>Paluch, G., Bartholomay, L., Coats, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+repellents:+a+review+of+chemical+structure+diversity+and+olfaction.">Mosquito repellents: a review of chemical structure diversity and olfaction.</a> Pest Management Science. 66 (9), 925-935 (2010).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+investigation+on+the+antennal+receptors+of+the+silk+moth+during+chemical+and+mechanical+stimulation.">Electrophysiological investigation on the antennal receptors of the silk moth during chemical and mechanical stimulation.</a> Experientia. 13 (2), 89-91 (1957).</li><li>Raguso, R. A., Light, D. M., Pickersky, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+of+Hyles+lineata+(Sphingidae:+Lepidoptera)+to+volatile+compounds+from+Clarkia+breweri+(Onagraceae)+and+other+moth-pollinated+flowers.">Electroantennogram responses of Hyles lineata (Sphingidae: Lepidoptera) to volatile compounds from Clarkia breweri (Onagraceae) and other moth-pollinated flowers.</a> Journal of Chemical Ecology. 22 (10), 1735-1766 (1996).</li><li>Schweitzer, E. S., Sanes, J. R., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+electroantennogram+responses+in+the+moth,+Manduca+sexta.">Ontogeny of electroantennogram responses in the moth, Manduca sexta.</a> Journal of Insect Physiology. 22 (7), 955-960 (1976).</li><li>Martel, V., Anderson, P., Hansson, B. S., Schlyter, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+modulation+of+olfaction+by+physiological+state+in+the+Egyptian+leaf+worm+Spodoptera+littoralis+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Peripheral modulation of olfaction by physiological state in the Egyptian leaf worm Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 793-797 (2009).</li><li>Spaethe, J., Brockmann, A., Halbig, C., Tautz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+determines+antennal+sensitivity+and+behavioral+threshold+to+odors+in+bumblebee+workers.">Size determines antennal sensitivity and behavioral threshold to odors in bumblebee workers.</a> Naturwissenschaften. 94 (9), 733-739 (2007).</li><li>Suchet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+scent+variation+in+two+Antirrhinum+majus+subspecies+influences+the+choice+of+na&#239;ve+bumblebees.">Floral scent variation in two Antirrhinum majus subspecies influences the choice of na&#239;ve bumblebees.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 65 (5), 1015-1027 (2011).</li><li>De Jong, R., Pham-Del&#232;gue, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+related+to+olfactory+conditioning+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+ligustica).">Electroantennogram responses related to olfactory conditioning in the honeybee (Apis mellifera ligustica).</a> Journal of Insect Physiology. 37 (4), 319-324 (1991).</li><li>Patte, F., Etcheto, M., Marfaing, P., Laffort, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+stimulus-response+curves+for+59+odourants+in+the+honeybee,+Apis+mellifica.">Electroantennogram stimulus-response curves for 59 odourants in the honeybee, Apis mellifica.</a> Journal of Insect Physiology. 35 (9), 667-675 (1989).</li><li>Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+electroantennogram+in+Drosophila+melanogaster+and+its+use+for+identifying+olfactory+capture+and+transduction+mutants.">Characterization of the electroantennogram in Drosophila melanogaster and its use for identifying olfactory capture and transduction mutants.</a> Journal of Neurophysiology. 65 (3), 702-714 (1991).</li><li>Park, K. C., Ochieng, S. A., Zhu, J., Baker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+discrimination+using+insect+electroantennogram+responses+from+an+insect+antennal+array.">Odor discrimination using insect electroantennogram responses from an insect antennal array.</a> Chemical Senses. 27 (4), 343-352 (2002).</li><li>Du, Y. J., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+oviposition+bioassay+responses+of+Culex+quinquefasciatus+and+Culex+tarsalis+(Diptera:+Culicidae)+to+chemicals+in+odors+from+Bermuda+grass+infusions.">Electroantennogram and oviposition bioassay responses of Culex quinquefasciatus and Culex tarsalis (Diptera: Culicidae) to chemicals in odors from Bermuda grass infusions.</a> Journal of Medical Entomology. 36 (2), 158-166 (1999).</li><li>Costantini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioural+responses+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae+to+human-specific+sweat+components.">Electroantennogram and behavioural responses of the malaria vector Anopheles gambiae to human-specific sweat components.</a> Medical and Veterinary Entomology. 15 (3), 259-266 (2001).</li><li>Collins, L. E., Blackwell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+studies+of+potential+oviposition+attractants+for+Toxorhynchites+moctezuma+and+T.+amboinensis+mosquitoes.">Electroantennogram studies of potential oviposition attractants for Toxorhynchites moctezuma and T. amboinensis mosquitoes.</a> Physiological Entomology. 23 (3), 214-219 (1998).</li><li>Seenivasagan, T., Sharma, K. R., Sekhar, K., Ganesan, K., Prakash, S., Vijayaraghavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram,+flight+orientation,+and+oviposition+responses+of+Aedes+aegypti+to+the+oviposition+pheromone+n-heneicosane.">Electroantennogram, flight orientation, and oviposition responses of Aedes aegypti to the oviposition pheromone n-heneicosane.</a> Parasitology Research. 104 (4), 827-833 (2009).</li><li>Puri, S. N., Mendki, M. J., Sukumaran, D., Ganesan, K., Prakash, S., Sekhar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioral+responses+of+Culex+quinquefasciatus+(Diptera:+Culicidae)+females+to+chemicals+found+in+human+skin+emanations.">Electroantennogram and behavioral responses of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) females to chemicals found in human skin emanations.</a> Journal of Medical Entomology. 43 (2), 207-213 (2014).</li><li>Cooperband, M. F., McElfresh, J. S., Millar, J. G., Carde, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+female+Culex+quinquefasciatus+Say+(Diptera:+Culicidae)+to+odors+from+chicken+feces.">Attraction of female Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae) to odors from chicken feces.</a> Journal of Insect Physiology. 54 (7), 1184-1192 (2008).</li><li>Dekker, T., Ignell, R., Ghebru, M., Glinwood, R., Hopkins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+mosquito+repellent+odours+from+Ocimum+forskolei.">Identification of mosquito repellent odours from Ocimum forskolei.</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 183 (2011).</li><li>Choo, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+chemical+ecology+approach+for+the+identification+of+an+oviposition+attractant+for+Culex+quinquefasciatus.">Reverse chemical ecology approach for the identification of an oviposition attractant for Culex quinquefasciatus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 714-719 (2018).</li><li>Wolff, G. H., Lahond&#232;re, C., Vinauger, C., Riffell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromodulation+and+differential+learning+across+mosquito+species.">Neuromodulation and differential learning across mosquito species.</a> bioRxiv. , 755017 (2019).</li><li>Lahond&#232;re, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+olfactory+basis+of+orchid+pollination+by+mosquitoes.">The olfactory basis of orchid pollination by mosquitoes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (1), 708-716 (2020).</li><li>Beyenbach, K., Masia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+conductances+of+principal+cells+in+Malpighian+tubules+of+Aedes+aegypti.">Membrane conductances of principal cells in Malpighian tubules of Aedes aegypti.</a> Journal of Insect Physiology. 48, 375-386 (2002).</li><li>Oesterle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Pipette Cookbook. , (2018).</li><li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R:+A+language+and+environment+for+statistical+computing.">R: A language and environment for statistical computing.</a> R Foundation for Statistical Computing. , (2018).</li><li>Afify, A., Betz, J. F., Riabinina, O., Lahond&#232;re, C., Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+insect+repellents+hide+human+odors+from+Anopheles+mosquitoes.">Commonly used insect repellents hide human odors from Anopheles mosquitoes.</a> Current Biology. 29 (21), 3669-3680 (2019).</li><li>Martin, F., Riveron, J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+temperature+modulates+olfactory+reception+in+Drosophila+melanogaster.">Environmental temperature modulates olfactory reception in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 57 (12), 1631-1642 (2011).</li><li>Qiu, Y. T., Gort, G., Torricelli, R., Takken, W., van Loon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+blood-feeding+on+olfactory+sensitivity+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae:+application+of+mixed+linear+models+to+account+for+repeated+measurements.">Effects of blood-feeding on olfactory sensitivity of the malaria mosquito Anopheles gambiae: application of mixed linear models to account for repeated measurements.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (11), 1111-1118 (2013).</li><li>Taylor, B., Jones, M. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+flight+activity+in+the+mosquito+Aedes+aegypti+(L.):+the+phase-setting+effects+of+light-on+and+light+off.">The circadian rhythm of flight activity in the mosquito Aedes aegypti (L.): the phase-setting effects of light-on and light off.</a> Journal of Experimental Biology. 51 (1), 59-70 (1969).</li><li>Eilerts, D. F., VanderGiessen, M., Bose, E. A., Broxton, K., Vinauger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor-specific+daily+rhythms+in+the+olfactory+sensitivity+and+behavior+of+Aedes+aegypti+mosquitoes.">Odor-specific daily rhythms in the olfactory sensitivity and behavior of Aedes aegypti mosquitoes.</a> Insects. 9 (4), 147 (2018).</li><li>Krishnan, B., Dryer, S. E., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+in+olfactory+responses+of+Drosophila+melanogaster.">Circadian rhythms in olfactory responses of Drosophila melanogaster.</a> Nature. 400 (6742), 375-378 (1999).</li><li>Pelletier, J., Guidolin, A., Syed, Z., Cornel, A. J., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockdown+of+a+mosquito+odorant-binding+protein+involved+in+the+sensitive+detection+of+oviposition+attractants.">Knockdown of a mosquito odorant-binding protein involved in the sensitive detection of oviposition attractants.</a> Journal of Chemical Ecology. 36 (3), 245-248 (2010).</li></ol>

Les comportements à médiation olfactive sont influencés par de nombreux facteurs, notamment physiologiques (par exemple, l’âge, l’heure de la journée) et environnementaux (par exemple, la température, l’humidité relative)30. Ainsi, lors de la réalisation d’EAG, il est essentiel d’utiliser des insectes qui sont dans le même état physiologique (c.-à-d. surveillance de l’âge, famine, accouplement)31 et de maintenir un environnement chaud et humide autou...

Les moustiques sont les organismes les plus meurtriers sur terre, tuant plus d’un million de personnes par an et exposant plus de la moitié de la population mondiale au risque d’exposition aux agents pathogènes qu’ils transmettent, tout en piquant1. Ces insectes dépendent d’un large éventail d’indices (c.-à-d. thermiques, visuels, mécaniques, olfactifs, auditifs) pour localiser un hôte dont se nourrir (tant végétal qu’animal), pour l’accouplement et la ponte, ainsi que pour éviter les prédateurs aux stades larvaire et adulte 2,3. Parmi ces sens, l’olfaction joue un rôle essentiel dans les comportements mentionnés ci-dessus, en particulier pour la détection à moyenne et longue portée des molécules odorantes 2,3. Les odeurs émises par un hôte ou un site de ponte sont détectées par divers récepteurs olfactifs spécifiques (p. ex. GR, OR, IR) situés sur les palpes des moustiques proboscis, les tarses et les antennes 2,3.
L’olfaction étant un élément clé de leurs comportements de recherche d’hôtes (végétaux et animaux), d’accouplement et de ponte, elle constitue donc une cible idéale à étudier pour développer de nouveaux outils de lutte contre les moustiques4. La recherche sur les répulsifs (p. ex. DEET, IR3535, picaridine) et les appâts (p. ex. leurre humain sentinelle BG) est extrêmement prolifique5, mais en raison des défis actuels dans la lutte contre les moustiques (p. ex. résistance aux insecticides, espèces envahissantes), il est essentiel de mettre au point de nouvelles méthodes de lutte efficaces fondées sur la biologie des moustiques.
De nombreuses techniques (p. ex., olfactomètre, essais d’atterrissage, électrophysiologie) ont été utilisées pour évaluer la bioactivité de composés ou de mélanges de composés chez les moustiques. Parmi eux, l’électroantennographie (ou électroantennogrammes (EAG)) peut être utilisée pour déterminer si les odorants sont détectés par les antennes des moustiques. Cette technique a été initialement développée par Schneider6 et a été utilisée dans de nombreux genres d’insectes depuis lors, y compris les mites 7,8,9, les bourdons 10,11, les abeilles mellifères 12,13 et les mouches des fruits 14,15 pour n’en nommer que quelques-uns. L’électroantennenographie a également été utilisée en utilisant divers protocoles, y compris des antennes simples ou multiples chez les moustiques 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25.
Les moustiques sont des insectes relativement petits et délicats avec des antennes plutôt minces. Bien qu’il soit relativement facile d’effectuer des EAG sur des insectes plus gros tels que les mites ou les bourdons en raison de leur plus grande taille et de leurs antennes plus épaisses, la réalisation d’EAG chez les moustiques peut être difficile. En particulier, le maintien d’un bon rapport signal sur bruit et une préparation réactive durable sont deux exigences majeures pour la reproductibilité et la fiabilité des données.
Le guide étape par étape des EAG à faible bruit proposé ici offre directement des solutions à ces limitations et rend ce protocole applicable à plusieurs espèces de moustiques de différents genres, y compris Aedes, Anopheles, Culex et Toxorhynchites, et décrit la technique pour les femelles et les mâles. L’électroantennenographie offre un moyen rapide mais fiable de dépister et de déterminer les composés bioactifs qui peuvent ensuite être exploités dans le développement d’appâts après que la valence a été déterminée avec des tests comportementaux.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Air table Clean Bench</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog-to-digital board</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>BNC-2090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Flowbuddy Complete</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>59-122BC</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosillicate glass capillary</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B100-78-10</td>
			<td>To make the recording and references capillaries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L</td>
			<td>Chemicals used for the experiments presented here</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Source</td>
			<td>Volpi</td>
			<td>NCL-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>1 mL (309628)&#160; / 3 mL (309657)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>5371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode gel salt free</td>
			<td>Parkerlabs</td>
			<td>12-08-Spectra-360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowmeters</td>
			<td>Bel-art</td>
			<td>65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075)</td>
			<td>One of each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCMS vials and caps</td>
			<td>Thermo-fisher scientific</td>
			<td>2-SVWKA8-CPK</td>
			<td>To prepare odorant dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass syringes (Fortuna)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z314307</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humbug</td>
			<td>Quest Scientific</td>
			<td>http://www.quest-sci.com/</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>675748</td>
			<td>Electrode holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic bases</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>MB-FX</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB + Toolboxes</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td>
			<td>For delivering the pulses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical air</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For main airline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikkon</td>
			<td>SMZ-800N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MHW-3</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode amplifier with headstage</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito rearing supplies</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>25G (305127) / 21G (305165)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE Tubing of different diameters</td>
			<td>Mc Master Carr</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30V/5A DC Power Supply</td>
			<td>Dr. Meter</td>
			<td>PS-305DM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R version 3.5.1</td>
			<td>R project</td>
			<td>https://www.r-project.org/</td>
			<td>For data analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Relay for solenoid valve</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire 0.01&#8221;</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>782500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solenoid valve (3-way)</td>
			<td>The Lee Company</td>
			<td>LHDA0533115H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WinEDR software</td>
			<td>Strathclyde Electrophysiology Software</td>
			<td>WinEDR V3.9.1</td>
			<td>For EAG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman paper</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>UX-06648-03</td>
			<td>To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step-by-step guide to mosquito electroantennography

Les moustiques femelles sont les animaux les plus meurtriers sur terre, coûtant la vie à plus de 1 million de personnes chaque année en raison des agents pathogènes qu’ils transmettent lors de l’acquisition d’un repas de sang. Pour localiser un hôte dont se nourrir, les moustiques s’appuient sur un large éventail d’indices sensoriels, notamment visuels, mécaniques, thermiques et olfactifs. L’étude détaille une technique, l’électroantennenographie (EAG), qui permet aux chercheurs d’évaluer si les moustiques peuvent détecter des produits chimiques individuels et des mélanges de produits chimiques d’une manière dépendante de la concentration. Lorsqu’elle est associée à la chromatographie en phase gazeuse (GC-EAG), cette technique permet d’exposer les antennes à un mélange complet d’espace de tête / complexe et détermine quels produits chimiques présents dans l’échantillon d’intérêt le moustique peut détecter. Cela s’applique aux odeurs corporelles de l’hôte ainsi qu’aux bouquets floraux végétaux ou à d’autres odeurs pertinentes sur le plan écologique (p. ex. odeurs des sites de ponte). Ici, nous avons décrit un protocole qui permet de longues durées de temps de réactivité de préparation et qui est applicable aux moustiques femelles et mâles de plusieurs genres, y compris les moustiques Aedes, Culex, Anopheles et Toxorhynchites . Comme l’olfaction joue un rôle majeur dans les interactions moustique-hôte et la biologie des moustiques en général, les EAG et les GC-EAG peuvent révéler des composés d’intérêt pour le développement de nouvelles stratégies de lutte contre les vecteurs de maladies (par exemple, les appâts). Complété par des tests comportementaux, la valence (par exemple, attractif, répulsif) de chaque produit chimique peut être déterminée.

L’électroantennenographie est un outil puissant pour déterminer si un produit chimique ou un mélange de produits chimiques est détecté par une antenne d’insecte. Il peut également être utilisé pour déterminer le seuil de détection d’un produit chimique donné en utilisant une augmentation graduelle de la concentration (c.-à-d. réponse de la courbe de dose, figure 4B). De plus, il est utile de tester les effets du répulsif sur la réponse aux odeurs liées à l’hôte<sup ...

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A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

Le présent article détaille un protocole étape par étape pour des électroantennogrammes réussis et à faible bruit dans plusieurs genres de moustiques, y compris les femelles et les mâles.

Un guide étape par étape de l’électroanténnographie des moustiques

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...

Pour l’électroanténnographie, l’utilisation de moustiques dans un état physiologique spécifique et cohérent est essentielle pour obtenir des résultats fiables. Le protocole étape par étape permet des enregistrements électroanténnographiques durables chez les moustiques. La méthode peut être utilisée chez plusieurs espèces de moustiques, et chez les mâles et les femelles.La technique électroantennographique peut également être transposée à d’autres modèles d’insectes, y compris les coléoptères, les mouches, les punaises et les fourmis. Pour commencer, retirez les flacons d’ambre de 1,5 millilitre contenant les mélanges odorants et un contrôle de solvant du congélateur à 20 degrés Celsius dans lequel ils sont stockés pour éviter leur dégradation. Ensuite, pipeter 10 microlitres de la solution odorante sur un morceau de papier filtre chargé à l’intérieur d’une seringue en verre étiquetée.Isolez les moustiques le jour de l’expérience. En travaillant au microscope, briser doucement l’extrémité de deux capillaires borosilicatés avec des filaments à l’aide d’une paire de pinces. Avant d’exécuter l’électroanténnographie, ou expérience EAG, assurez-vous que les porte-électrodes sont dégagés à l’intérieur, sans débris borosilicatés.Ensuite, effectuez la chloration en trempant les fils argentés des porte-électrodes dans de l’eau de Javel pure pendant cinq minutes, jusqu’à ce que les fils deviennent gris mat foncé. Rincez ensuite les fils. Desserrez le bouchon en caoutchouc et utilisez une aiguille de calibre 20 pour remplir l’intérieur du capillaire avec une solution saline.Rincez les capillaires et insérez les fils dans les deux capillaires. Gardez la pointe du fil à moins d’un millimètre de l’extrémité du capillaire. Passez le capillaire à travers l’anneau en caoutchouc à l’intérieur du porte-électrode sans le casser et serrez doucement le bouchon en caoutchouc, après avoir vérifié qu’aucune bulle d’air n’est présente.Utilisez le capillaire avec l’ouverture la plus large sur le porte-électrode de référence et l’ouverture plus petite sur le support d’électrode d’enregistrement. Laissez les deux porte-électrodes montés sur une lingette de nettoyage humide pour empêcher l’embout de sécher jusqu’à ce qu’il soit prêt à monter la tête. Assurez-vous que la table d’air est relevée.Il n’y a pas de blocage dans la compagnie aérienne et l’air est allumé. Vérifiez que le réservoir d’air médical est plein pour éviter de le changer au milieu de l’expérience et confirmez la présence de bulles dans l’humidificateur. Mettez sous tension les ordinateurs, les applications logicielles et l’alimentation de la vanne.Après avoir vérifié la connexion Internet, délivrez une impulsion de commande pour vérifier que la vanne délivrant les impulsions est fonctionnelle. Placez une plaque d’aluminium sur de la glace avec un morceau de lingette de nettoyage humide dessus et mettez une petite cuillerée de gel d’électrode dans un coin. Placez une tasse anti-moustique sur de la glace pour laisser le moustique refroidir.Clipser la pointe de chaque antenne du moustique avec des micro-ciseaux. Utilisez une pince pour faire glisser le moustique à côté de la cuillerée de gel d’électrode et trempez doucement l’extrémité de chaque antenne dans le gel. À l’aide de forceps, retirez les antennes des moustiques tout en les maintenant les unes à côté des autres.Hachez la tête du moustique à l’aide de micro-ciseaux. Trempez doucement l’extrémité de l’électrode de référence dans le gel et placez-la en contact avec le cou, en laissant la tête s’y coller. Placez l’électrode de la tête de référence sur un micromanipulateur.Connectez les deux porte-électrodes à l’amplificateur. Utilisez le micromanipulateur pour placer l’électrode d’enregistrement aussi près que possible des extrémités de l’antenne. Insérez ensuite les pointes de l’antenne dans l’électrode d’enregistrement.Placez le tube de la compagnie aérienne près de la préparation de la tête de moustique, à un centimètre. Allumez l’amplificateur et le réducteur de bruit et assurez-vous que le signal de base n’est pas bruyant. Une fois que le niveau sonore est satisfaisant, insérez la première seringue odorante dans le trou de l’avion pour effectuer le test et fermer la cage de Faraday.Cliquez ensuite sur enregistrer sur le logiciel EAG pour donner l’impulsion. Mesurez les réponses EAG en amplitude en millivolts, puis passez à l’odeur ou à la concentration suivante. L’expérience démontre avec succès que les espèces de moustiques peuvent présenter des réponses olfactives variables à différents produits chimiques.Il n’y avait pas de réponse à l’huile minérale, qui a été utilisée comme témoin négatif. L’erreur dans les résultats due au bruit électrique peut être réduite en mettant les éléments à la terre dans la cage de Faraday, à l’aide de pinces crocodiles. Le seuil de réponse à la même substance odorante peut varier en ampleur pour différentes espèces de moustiques.Par exemple, les moustiques Toxorhynchites rutilus septentrionalis produisent de très gros EAG, par rapport à Aedes aegypti, Anopheles stephensi et Culex quinquefasciatus. Une grande déviation en réponse au témoin positif, le benzaldéhyde, a été remarquée. Bien qu’il n’y ait pas eu de réponse au contrôle négatif, l’huile minérale.Ces réponses antennaires moyennes sont présentées dans un diagramme à barres. De plus, le seuil de détection d’un produit chimique spécifique pour chaque espèce de moustique a été déterminé en présentant l’antenne, les concentrations croissantes du produit chimique et en traçant une courbe dose-réponse. Il est important de commencer l’enregistrement le plus tôt possible après que la tête a été hachée et montée, afin d’assurer une grande réactivité de la préparation.L’EAG permet de déterminer si les antennes des moustiques répondent à un produit chimique donné à une concentration donnée. Cependant, il ne permet pas de déterminer l’équilibre de ce produit chimique. Par exemple, s’il s’agit d’un attrait ou d’un repentir.

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