Name: a step-by-step guide to mosquito electroantennography
Uploaded: 2021-03-10T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

Jeg er takknemlig for Dr. Clément Vinauger og Dr. Jeffrey Riffell for nyttige diskusjoner. Følgende reagenser ble oppnådd gjennom BEI Resources, NIAID, NIH: Anopheles stephensi, stamme STE2, MRA-128, bidratt av Q. Benedict; Aedes aegypti, Strain ROCK, MRA-734, bidratt av David W. Severson; Culex quinquefasciatus, stamme JHB, egg, NR-43025. Forfatteren takker Dr. Jake Tu, Dr. Nisha Duggal, Dr. James Weger og Jeffrey Marano for å gi Culex quinquefasciatus og Anopheles stephensi (stamme: Liston) myggegg. Aedes albopictus og Toxorhynchites rutilus septentrionalis er avledet fra feltmygg samlet av forfatteren i New Valley-området (VA, USA). Dette arbeidet ble støttet av Institutt for biokjemi og The Fralin Life Science Institute.

1. Forberedelse av saltoppløsning
<ol><li>Forbered saltvannet på forhånd og oppbevar i kjøleskapet.</li>
	<li>Følg Beyenbach og Masia26 for å klargjøre løsningen. MERK: Saltvannsoppskrift i mM: 150,0 NaCl, 25,0 HEPES, 5,0 glukose, 3,4 KCl, 1,8 NaHCO3, 1,7 CaCl 2 og 1,0 MgCl2. pH justeres til 7,1 med 1 M NaOH. Ikke tilsett glukose eller sukrose til preparatet på dette tidspunktet for å øke hylleoppbevaringen. Legg den nødvendige mengden til saltvann...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=World+health+statistics+2019:+monitoring+health+for+the+SDGs,+sustainable+development+goals.">World health statistics 2019: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals.</a> World Health Organization. , (2019).</li><li>Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+olfaction+in+host-seeking+of+mosquitoes:+a+review.">The role of olfaction in host-seeking of mosquitoes: a review.</a> International Journal of Tropical Insect Science. 12 (1-2-3), 287-295 (1991).</li><li>Zwiebel, L. J., Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+regulation+of+mosquito-host+interactions.">Olfactory regulation of mosquito-host interactions.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 34 (7), 645-652 (2004).</li><li>Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stop+the+biting:+targeting+a+mosquito's+sense+of+smell.">Stop the biting: targeting a mosquito's sense of smell.</a> Cell. 156 (5), 878-881 (2014).</li><li>Paluch, G., Bartholomay, L., Coats, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+repellents:+a+review+of+chemical+structure+diversity+and+olfaction.">Mosquito repellents: a review of chemical structure diversity and olfaction.</a> Pest Management Science. 66 (9), 925-935 (2010).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+investigation+on+the+antennal+receptors+of+the+silk+moth+during+chemical+and+mechanical+stimulation.">Electrophysiological investigation on the antennal receptors of the silk moth during chemical and mechanical stimulation.</a> Experientia. 13 (2), 89-91 (1957).</li><li>Raguso, R. A., Light, D. M., Pickersky, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+of+Hyles+lineata+(Sphingidae:+Lepidoptera)+to+volatile+compounds+from+Clarkia+breweri+(Onagraceae)+and+other+moth-pollinated+flowers.">Electroantennogram responses of Hyles lineata (Sphingidae: Lepidoptera) to volatile compounds from Clarkia breweri (Onagraceae) and other moth-pollinated flowers.</a> Journal of Chemical Ecology. 22 (10), 1735-1766 (1996).</li><li>Schweitzer, E. S., Sanes, J. R., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+electroantennogram+responses+in+the+moth,+Manduca+sexta.">Ontogeny of electroantennogram responses in the moth, Manduca sexta.</a> Journal of Insect Physiology. 22 (7), 955-960 (1976).</li><li>Martel, V., Anderson, P., Hansson, B. S., Schlyter, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+modulation+of+olfaction+by+physiological+state+in+the+Egyptian+leaf+worm+Spodoptera+littoralis+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Peripheral modulation of olfaction by physiological state in the Egyptian leaf worm Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 793-797 (2009).</li><li>Spaethe, J., Brockmann, A., Halbig, C., Tautz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+determines+antennal+sensitivity+and+behavioral+threshold+to+odors+in+bumblebee+workers.">Size determines antennal sensitivity and behavioral threshold to odors in bumblebee workers.</a> Naturwissenschaften. 94 (9), 733-739 (2007).</li><li>Suchet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+scent+variation+in+two+Antirrhinum+majus+subspecies+influences+the+choice+of+na&#239;ve+bumblebees.">Floral scent variation in two Antirrhinum majus subspecies influences the choice of na&#239;ve bumblebees.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 65 (5), 1015-1027 (2011).</li><li>De Jong, R., Pham-Del&#232;gue, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+related+to+olfactory+conditioning+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+ligustica).">Electroantennogram responses related to olfactory conditioning in the honeybee (Apis mellifera ligustica).</a> Journal of Insect Physiology. 37 (4), 319-324 (1991).</li><li>Patte, F., Etcheto, M., Marfaing, P., Laffort, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+stimulus-response+curves+for+59+odourants+in+the+honeybee,+Apis+mellifica.">Electroantennogram stimulus-response curves for 59 odourants in the honeybee, Apis mellifica.</a> Journal of Insect Physiology. 35 (9), 667-675 (1989).</li><li>Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+electroantennogram+in+Drosophila+melanogaster+and+its+use+for+identifying+olfactory+capture+and+transduction+mutants.">Characterization of the electroantennogram in Drosophila melanogaster and its use for identifying olfactory capture and transduction mutants.</a> Journal of Neurophysiology. 65 (3), 702-714 (1991).</li><li>Park, K. C., Ochieng, S. A., Zhu, J., Baker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+discrimination+using+insect+electroantennogram+responses+from+an+insect+antennal+array.">Odor discrimination using insect electroantennogram responses from an insect antennal array.</a> Chemical Senses. 27 (4), 343-352 (2002).</li><li>Du, Y. J., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+oviposition+bioassay+responses+of+Culex+quinquefasciatus+and+Culex+tarsalis+(Diptera:+Culicidae)+to+chemicals+in+odors+from+Bermuda+grass+infusions.">Electroantennogram and oviposition bioassay responses of Culex quinquefasciatus and Culex tarsalis (Diptera: Culicidae) to chemicals in odors from Bermuda grass infusions.</a> Journal of Medical Entomology. 36 (2), 158-166 (1999).</li><li>Costantini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioural+responses+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae+to+human-specific+sweat+components.">Electroantennogram and behavioural responses of the malaria vector Anopheles gambiae to human-specific sweat components.</a> Medical and Veterinary Entomology. 15 (3), 259-266 (2001).</li><li>Collins, L. E., Blackwell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+studies+of+potential+oviposition+attractants+for+Toxorhynchites+moctezuma+and+T.+amboinensis+mosquitoes.">Electroantennogram studies of potential oviposition attractants for Toxorhynchites moctezuma and T. amboinensis mosquitoes.</a> Physiological Entomology. 23 (3), 214-219 (1998).</li><li>Seenivasagan, T., Sharma, K. R., Sekhar, K., Ganesan, K., Prakash, S., Vijayaraghavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram,+flight+orientation,+and+oviposition+responses+of+Aedes+aegypti+to+the+oviposition+pheromone+n-heneicosane.">Electroantennogram, flight orientation, and oviposition responses of Aedes aegypti to the oviposition pheromone n-heneicosane.</a> Parasitology Research. 104 (4), 827-833 (2009).</li><li>Puri, S. N., Mendki, M. J., Sukumaran, D., Ganesan, K., Prakash, S., Sekhar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioral+responses+of+Culex+quinquefasciatus+(Diptera:+Culicidae)+females+to+chemicals+found+in+human+skin+emanations.">Electroantennogram and behavioral responses of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) females to chemicals found in human skin emanations.</a> Journal of Medical Entomology. 43 (2), 207-213 (2014).</li><li>Cooperband, M. F., McElfresh, J. S., Millar, J. G., Carde, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+female+Culex+quinquefasciatus+Say+(Diptera:+Culicidae)+to+odors+from+chicken+feces.">Attraction of female Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae) to odors from chicken feces.</a> Journal of Insect Physiology. 54 (7), 1184-1192 (2008).</li><li>Dekker, T., Ignell, R., Ghebru, M., Glinwood, R., Hopkins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+mosquito+repellent+odours+from+Ocimum+forskolei.">Identification of mosquito repellent odours from Ocimum forskolei.</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 183 (2011).</li><li>Choo, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+chemical+ecology+approach+for+the+identification+of+an+oviposition+attractant+for+Culex+quinquefasciatus.">Reverse chemical ecology approach for the identification of an oviposition attractant for Culex quinquefasciatus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 714-719 (2018).</li><li>Wolff, G. H., Lahond&#232;re, C., Vinauger, C., Riffell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromodulation+and+differential+learning+across+mosquito+species.">Neuromodulation and differential learning across mosquito species.</a> bioRxiv. , 755017 (2019).</li><li>Lahond&#232;re, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+olfactory+basis+of+orchid+pollination+by+mosquitoes.">The olfactory basis of orchid pollination by mosquitoes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (1), 708-716 (2020).</li><li>Beyenbach, K., Masia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+conductances+of+principal+cells+in+Malpighian+tubules+of+Aedes+aegypti.">Membrane conductances of principal cells in Malpighian tubules of Aedes aegypti.</a> Journal of Insect Physiology. 48, 375-386 (2002).</li><li>Oesterle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Pipette Cookbook. , (2018).</li><li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R:+A+language+and+environment+for+statistical+computing.">R: A language and environment for statistical computing.</a> R Foundation for Statistical Computing. , (2018).</li><li>Afify, A., Betz, J. F., Riabinina, O., Lahond&#232;re, C., Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+insect+repellents+hide+human+odors+from+Anopheles+mosquitoes.">Commonly used insect repellents hide human odors from Anopheles mosquitoes.</a> Current Biology. 29 (21), 3669-3680 (2019).</li><li>Martin, F., Riveron, J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+temperature+modulates+olfactory+reception+in+Drosophila+melanogaster.">Environmental temperature modulates olfactory reception in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 57 (12), 1631-1642 (2011).</li><li>Qiu, Y. T., Gort, G., Torricelli, R., Takken, W., van Loon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+blood-feeding+on+olfactory+sensitivity+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae:+application+of+mixed+linear+models+to+account+for+repeated+measurements.">Effects of blood-feeding on olfactory sensitivity of the malaria mosquito Anopheles gambiae: application of mixed linear models to account for repeated measurements.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (11), 1111-1118 (2013).</li><li>Taylor, B., Jones, M. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+flight+activity+in+the+mosquito+Aedes+aegypti+(L.):+the+phase-setting+effects+of+light-on+and+light+off.">The circadian rhythm of flight activity in the mosquito Aedes aegypti (L.): the phase-setting effects of light-on and light off.</a> Journal of Experimental Biology. 51 (1), 59-70 (1969).</li><li>Eilerts, D. F., VanderGiessen, M., Bose, E. A., Broxton, K., Vinauger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor-specific+daily+rhythms+in+the+olfactory+sensitivity+and+behavior+of+Aedes+aegypti+mosquitoes.">Odor-specific daily rhythms in the olfactory sensitivity and behavior of Aedes aegypti mosquitoes.</a> Insects. 9 (4), 147 (2018).</li><li>Krishnan, B., Dryer, S. E., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+in+olfactory+responses+of+Drosophila+melanogaster.">Circadian rhythms in olfactory responses of Drosophila melanogaster.</a> Nature. 400 (6742), 375-378 (1999).</li><li>Pelletier, J., Guidolin, A., Syed, Z., Cornel, A. J., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockdown+of+a+mosquito+odorant-binding+protein+involved+in+the+sensitive+detection+of+oviposition+attractants.">Knockdown of a mosquito odorant-binding protein involved in the sensitive detection of oviposition attractants.</a> Journal of Chemical Ecology. 36 (3), 245-248 (2010).</li></ol>

Luktmediert atferd påvirkes av mange faktorer, inkludert fysiologisk (f.eks. alder, tid på dagen) og miljø (f.eks. temperatur, relativ fuktighet)30. Når du utfører EAG, er det derfor viktig å bruke insekter som har samme fysiologiske status (dvs. overvåking av alder, sult, parring)31 og også å opprettholde et varmt og fuktig miljø rundt preparatet for å unngå uttørking. En temperatur rundt 25 °C er ideelt og 60 % til 80 % luftfuktighet for hovedflyselskapet. D...

Mygg er de dødeligste organismer på jorden, og krever livet til mer enn en million mennesker per år og plasserer mer enn halvparten av verdens befolkning i fare for eksponering for patogenene de overfører, mens de biter1. Disse insektene er avhengige av et bredt spekter av signaler (dvs. termisk, visuell, mekanisk, olfaktorisk, auditiv) for å finne en vert å mate på (både plante og dyr), for parring og oviposisjon, samt å unngå rovdyr i både larve- og voksenstadier 2,3. Blant disse sansene spiller olfaction en kritisk rolle i de ovennevnte atferdene, spesielt for middels til langdistanse deteksjon av luktmolekyler 2,3. Lukt som sendes ut av en vert eller et oviposisjonssted, oppdages av forskjellige spesifikke olfaktoriske reseptorer (f.eks. GR, OR, IR) som ligger på myggpalpene snabel, tarsi og antenne 2,3.
Siden olfaction er en nøkkelkomponent i deres vertssøkende (plante og dyr), parring og oviposisjonsatferd, utgjør det dermed et ideelt mål å studere for å utvikle nye verktøy for myggkontroll4. Forskning på repellenter (f.eks. DEET, IR3535, picaridin) og agn (f.eks. BG sentinel menneskelig lokkemiddel) er ekstremt produktiv5, men på grunn av dagens utfordringer i myggkontroll (f.eks. Insektmiddelresistens, invasive arter), er det viktig å utvikle nye effektive kontrollmetoder informert av myggbiologien.
Mange teknikker (f.eks. Olfactometer, landingsanalyser, elektrofysiologi) har blitt brukt til å vurdere bioaktiviteten til forbindelser eller blandinger av forbindelser i mygg. Blant dem kan elektroantennografi (eller elektroantennogrammer (EAGs)) brukes til å bestemme om luktene oppdages av myggantennene. Denne teknikken ble opprinnelig utviklet av Schneider6 og har blitt brukt i mange forskjellige insektslekter siden da, inkludert møll 7,8,9, humler 10,11, honningbier 12,13 og fruktfluer 14,15 for å nevne noen. Elektroantennografi har også blitt brukt ved hjelp av forskjellige protokoller, inkludert enkelt eller flere antenner i mygg 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25.
Mygg er relativt små og delikate insekter med ganske tynne antenner. Selv om det er relativt enkelt å utføre EAG på større insekter som møll eller humler på grunn av deres større størrelse og tykkere antenner, kan det være utfordrende å lede EAG i mygg. Spesielt opprettholdelse av et godt signal-støy-forhold og en varig responsiv forberedelse er to viktige krav til reproduserbarhet og pålitelighet.
Den trinnvise veiledningen til EAG-er med lite støy som er foreslått her, tilbyr direkte løsninger på disse begrensningene og gjør denne protokollen gjeldende for flere myggarter fra forskjellige slekter, inkludert Aedes, Anopheles, Culex og Toxorhynchites, og beskriver teknikken for både kvinner og menn. Electroantennography tilbyr en rask, men pålitelig måte å skjerme og bestemme bioaktive forbindelser som deretter kan utnyttes i agnutvikling etter at valens er bestemt med atferdsanalyser.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Air table Clean Bench</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog-to-digital board</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>BNC-2090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Flowbuddy Complete</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>59-122BC</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosillicate glass capillary</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B100-78-10</td>
			<td>To make the recording and references capillaries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L</td>
			<td>Chemicals used for the experiments presented here</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Source</td>
			<td>Volpi</td>
			<td>NCL-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>1 mL (309628)&#160; / 3 mL (309657)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>5371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode gel salt free</td>
			<td>Parkerlabs</td>
			<td>12-08-Spectra-360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowmeters</td>
			<td>Bel-art</td>
			<td>65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075)</td>
			<td>One of each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCMS vials and caps</td>
			<td>Thermo-fisher scientific</td>
			<td>2-SVWKA8-CPK</td>
			<td>To prepare odorant dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass syringes (Fortuna)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z314307</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humbug</td>
			<td>Quest Scientific</td>
			<td>http://www.quest-sci.com/</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>675748</td>
			<td>Electrode holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic bases</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>MB-FX</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB + Toolboxes</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td>
			<td>For delivering the pulses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical air</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For main airline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikkon</td>
			<td>SMZ-800N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MHW-3</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode amplifier with headstage</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito rearing supplies</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>25G (305127) / 21G (305165)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE Tubing of different diameters</td>
			<td>Mc Master Carr</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30V/5A DC Power Supply</td>
			<td>Dr. Meter</td>
			<td>PS-305DM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R version 3.5.1</td>
			<td>R project</td>
			<td>https://www.r-project.org/</td>
			<td>For data analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Relay for solenoid valve</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire 0.01&#8221;</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>782500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solenoid valve (3-way)</td>
			<td>The Lee Company</td>
			<td>LHDA0533115H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WinEDR software</td>
			<td>Strathclyde Electrophysiology Software</td>
			<td>WinEDR V3.9.1</td>
			<td>For EAG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman paper</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>UX-06648-03</td>
			<td>To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step-by-step guide to mosquito electroantennography

Kvinnelige mygg er de dødeligste dyrene på jorden, og hevder livet til mer enn 1 million mennesker hvert år på grunn av patogener de overfører når de kjøper et blodmåltid. For å finne en vert å mate på, er mygg avhengig av et bredt spekter av sensoriske tegn, inkludert visuell, mekanisk, termisk og olfaktorisk. Studien beskriver en teknikk, elektroantennografi (EAG), som gjør det mulig for forskere å vurdere om myggene kan oppdage individuelle kjemikalier og blandinger av kjemikalier på en konsentrasjonsavhengig måte. Når kombinert med gasskromatografi (GC-EAG), tillater denne teknikken å utsette antennene for en full headspace / kompleks blanding og bestemmer hvilke kjemikalier som er tilstede i prøven av interesse, myggen kan oppdage. Dette gjelder vertskroppslukt samt planteblomsterbuketter eller annen økologisk relevant lukt (f.eks. Her beskrev vi en protokoll som tillater lang varighet av forberedelsesresponstid og gjelder for både kvinnelige og mannlige mygg fra flere slekter, inkludert Aedes, Culex, Anopheles og Toxorhynchites mygg. Siden olfaction spiller en viktig rolle i mygg-vert-interaksjoner og myggbiologi generelt, kan EAG og GC-EAG avsløre forbindelser av interesse for utvikling av nye sykdomsvektorkontrollstrategier (f.eks. Agn). Supplert med atferdsanalyser kan valensen (f.eks. Attractant, repellent) av hvert kjemikalie bestemmes.

Electroantennography er et kraftig verktøy for å avgjøre om et kjemikalie eller blanding av kjemikalier oppdages av et insekt antenne. Det kan også brukes til å bestemme deteksjonsterskelen for et gitt kjemikalie ved hjelp av en gradvis økning av konsentrasjonen (dvs. dosekurverespons, figur 4B). Videre er det nyttig å teste effekten av avstøtende middel på responsen på vertsrelatert lukt29.
Positive og negative kontroller bør al...

Watch this Scientific Journal Video about A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography at JoVE.com

A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

Denne artikkelen beskriver en trinnvis protokoll for vellykkede og støysvake elektroantogrammer i flere myggslekter, inkludert både kvinner og menn.

En trinnvis guide til Mosquito Electroantennography

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...

For elektroantennografi er bruk av mygg i en spesifikk og konsistent fysiologisk status avgjørende for å oppnå pålitelige resultater. Den trinnvise protokollen tillater varige elektroantennografiske opptak i mygg. Metoden kan brukes i flere myggarter, og hos både hanner og hunner.Den elektroantennografiske teknikken kan også overføres til andre insektmodeller, inkludert biller, fluer, kysseinsekter og maur. For å begynne, fjern de 1,5 milliliter gule hetteglassene som inneholder luktblandingene og en løsningsmiddelkontroll fra fryseren på 20 grader Celsius der de er lagret for å forhindre nedbrytning. Deretter pipetterer du ut 10 mikroliter av luktoppløsningen på et stykke filterpapir lagt inne i en merket glasssprøyte.Isoler myggene på forsøksdagen. Arbeid under mikroskopet, bryt forsiktig spissen av to borosilikatkapillærer med filamenter ved hjelp av et par tang. Før du kjører elektroantenografien, eller EAG-eksperimentet, må du kontrollere at elektrodeholderne er klare innvendig, uten borosilikatrester.Utfør deretter kloridisering ved å suge sølvtrådene til elektrodeholderne i rent blekemiddel i fem minutter, til ledningene blir mørke, matt grå. Skyll deretter ledningene. Løsne gummiproppen og bruk en 20 gauge nål for å fylle innsiden av kapillæren med saltoppløsning.Skyll kapillærene og sett ledningene inn i de to kapillærene. Hold spissen av ledningen mindre enn en millimeter fra spissen av kapillæren. Før kapillæren gjennom gummiringen inne i elektrodeholderen uten å bryte den, og stram forsiktig gummiproppen etter å ha kontrollert at det ikke er luftbobler.Bruk kapillæren med den bredere åpningen på referanseelektrodeholderen og den mindre åpningen på opptakselektrodeholderen. La de to monterte elektrodeholderne stå på en våtserviett for å forhindre at spissen tørker ut før den er klar til å montere hodet. Sørg for at luftbordet er oppe.Det er ingen blokkering i flyselskapet og luften er på. Kontroller at tanken med medisinsk luft er full for å unngå å bytte den midt i eksperimentet, og bekreft bobler i fukteren. Slå på datamaskinene, programmene og ventilstrømforsyningen.Etter å ha verifisert internettforbindelsen, lever du en kontrollpuls for å bekrefte at ventilen som leverer pulsene, fungerer. Legg en aluminiumsplate på is med et stykke våtrengjøringsserviett over den og legg en liten klatt elektrodegel i et hjørne. Legg en myggkopp på is for å la myggen kjøle seg ned.Klipp spissen av hver myggantenne med mikrosaks. Bruk tang til å dra myggen ved siden av elektrodegelen og dypp tuppen av hver antenne forsiktig i gelen. Bruk tang, trekk myggantennene ut, mens du holder dem ved siden av hverandre.Hakk myggens hode ved hjelp av mikrosaks. Dypp forsiktig spissen av referanseelektroden i gelen og legg den i kontakt med nakken, la hodet feste seg til den. Plasser referansehodeelektroden på en mikromanipulator.Koble begge elektrodeholderne til forsterkeren. Bruk mikromanipulatoren til å plassere opptakselektroden så nær antennespissene som mulig. Sett deretter antennespissene inn i opptakselektroden.Plasser flyslangen nær mygghodets forberedelse, på en centimeter. Slå på forsterkeren og støyreduserende og sørg for at grunnlinjesignalet ikke støyer. Når støynivået er tilfredsstillende, sett den første luktsprøyten i flyhullet for å utføre testen og lukk Faraday-buret.Klikk deretter på opptak på EAG-programvaren for å levere pulsen. Mål EAG-responser som amplitude i millivolt og fortsett deretter med neste lukt eller konsentrasjon. Forsøket demonstrerer vellykket at myggarter kan utvise variable olfaktoriske responser på forskjellige kjemikalier.Det var fravær av respons på mineraloljen, som ble brukt som en negativ kontroll. Feil i resultatene på grunn av elektrisk støy kan reduseres ved å jorde elementene til Faraday-buret ved hjelp av alligatorklemmer. Responsterskelen til samme luktemiddel kan variere i størrelse for ulike myggarter.For eksempel produserer Toxorhynchites rutilus septentrionalis mygg svært store EAGs, sammenlignet med Aedes aegypti, Anopheles stephensi og Culex quinquefasciatus. En stor avbøyning som svar på den positive kontrollen, benzaldehyd, ble lagt merke til. Mens det var mangel på respons på den negative kontrollen, mineralolje.Disse gjennomsnittlige antenneresponsene vises i et stolpediagram. I tillegg ble terskelen for å oppdage et spesifikt kjemikalie for hver myggart bestemt ved å presentere antennen, de økende konsentrasjonene av kjemikaliet og plotte en doseresponskurve. Det er viktig å starte opptaket så snart som mulig etter at hodet er hakket og montert, for å sikre god respons på preparatet.EAG gjør det mulig å bestemme om myggantennene reagerer på et gitt kjemikalie ved en gitt konsentrasjon. Det tillater imidlertid ikke å bestemme balansen mellom dette kjemikaliet. For eksempel, om det er en attractant eller omvendelse.

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

A Practical Approach to Genetic Inducible Fate Mapping: A Visual Guide to Mark and Track Cells In Vivo

Fate maps are generated by marking and tracking cells in vivo to determine how progenitors contribute to specific structures and cell types in developing ...

A Step-by-step Method for the Reconstitution of an ABC Transporter into Nanodisc Lipid Particles

A Step-by-step Metode for Rekonstituering av en ABC Transporter inn Nanodisc lipidpartikler

The nanodisc is a discoidal particle (~ 10-12 nm large) that trap membrane proteins into a small patch of phospholipid bilayer. The nanodisc is a ...

A Practical Guide to Phylogenetics for Nonexperts

En praktisk guide til Phylogenetics for Nonexperts

Many researchers, across incredibly diverse foci, are applying phylogenetics to their research question(s). However, many researchers are new to this ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologiske Recordings og RNA sekvensering av Gustatory vedheng av Yellow-feber Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

A Guide to Modern Kvantitativ Fluorescent Western Blotting med Feilsøking Strategier

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Endotracheal Intubation of Rabbits Using a Polypropylene Guide Catheter

Endotracheal intubasjon kaniner ved hjelp av en polypropylen Guide kateter

Endotracheal intubation in rabbits can be challenging due to their unusual anatomy. Achieving a patent airway during anesthesia is critical for the ...

A Sectioning, Coring, and Image Processing Guide for High-Throughput Cortical Bone Sample Procurement and Analysis for Synchrotron Micro-CT

En snittings-, kordings- og bildebehandlingsveiledning for kortikale beinprøveinnkjøp og -analyse for Synchrotron Micro-CT

Bone is a dynamic and mechanically active tissue that changes in structure over the human lifespan. The products of the bone remodeling process have been ...

A Magnetic-Bead-Based Mosquito DNA Extraction Protocol for Next-Generation Sequencing

En magnetisk-perle-basert mygg DNA-ekstraksjonsprotokoll for neste generasjons sekvensering

A recently published DNA extraction protocol using magnetic beads and an automated DNA extraction instrument suggested that it is possible to extract high ...