Name: estimation of plant biomass lignin content using thioglycolic acid (tga)
Uploaded: 2021-07-24T13:00:00
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이 연구의 부분적인 지원에 대해 식물및 토양 과학 및 면학과에 감사드립니다.

1. 식물 샘플 준비
<ol><li>온실에서 2개월 된 면화 식물을 수집합니다(그림1A).</li>
	<li>식물 냄비를 부드럽게 뒤집어 토양과 뿌리를 그대로 측면 뿌리로 분리하여 식물 주위의 토양을 느슨하게합니다(도1B).</li>
	<li>수집된 식물을 물로 가득 채운 트레이에 철저히 세척하여 모든 먼지(뿌리 샘플용)를 제거합니다(도1C).</li>
	<li>종이 타...

<ol>
	<li>Freudenberg, K., Neish, A. 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C. M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abiotic+and+Biotic+Stresses+and+Changes+in+the+Lignin+Content+and+Composition+in+Plants.">Abiotic and Biotic Stresses and Changes in the Lignin Content and Composition in Plants.</a> Journal of Integrative Plant Biology. 52, 360-376 (2010).</li><li>Vanholme, R., Morreel, K., Ralph, J., Boerjan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignin+engineering.">Lignin engineering.</a> Current Opinion In Plant Biology. 11, 278-285 (2008).</li><li>Lupoi, J. S., Singh, S., Parthasarathi, R., Simmons, B. A., Henry, R. 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K., Chapple, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+biomass+through+lignin+modification.">Improvement of biomass through lignin modification.</a> The Plant Journal: For Cell and Molecular Biology. 54, 569-581 (2008).</li><li>Ponnusamy, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+lignin+structure,+pretreatments,+fermentation+reactions+and+biorefinery+potential.">A review on lignin structure, pretreatments, fermentation reactions and biorefinery potential.</a> Bioresource Technology. 271, 462-472 (2019).</li><li>Hatfield, R., Fukushima, R. 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D., Grabber, J., Ralph, J., Brei, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+Acetyl+Bromide+Assay+To+Determine+Lignin+Concentrations+in+Herbaceous+Plants:+Some+Cautionary+Notes.">Using the Acetyl Bromide Assay To Determine Lignin Concentrations in Herbaceous Plants: Some Cautionary Notes.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 47, 628-632 (1999).</li><li>Suzuki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+determination+of+thioglycolic+acid+lignin+from+rice.">High-throughput determination of thioglycolic acid lignin from rice.</a> Plant Biotechnology. 26, 337-340 (2009).</li><li>Nakatsubo, F., Tanahashi, M., Higuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidolysis+of+Bamboo+Lignin+II+:+Isolation+and+Identification+of+Acidolysis+Products.">Acidolysis of Bamboo Lignin II : Isolation and Identification of Acidolysis Products.</a> Wood research. 53, 9-18 (1972).</li><li>Aro, T., Fatehi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+Application+of+Lignosulfonates+and+Sulfonated+Lignin.">Production and Application of Lignosulfonates and Sulfonated Lignin.</a> ChemSusChem. 10, 1861-1877 (2017).</li><li>Frei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lignin:+Characterization+of+a+Multifaceted+Crop+Component.">Lignin: Characterization of a Multifaceted Crop Component.</a> The Scientific World Journal. 2013, 436517 (2013).</li><li>Lora, J. H., Glasser, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Industrial+Applications+of+Lignin:+A+Sustainable+Alternative+to+Nonrenewable+Materials.">Recent Industrial Applications of Lignin: A Sustainable Alternative to Nonrenewable Materials.</a> Journal of Polymers and the Environment. 10, 39-48 (2002).</li><li>Wang, R., Zhou, B., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+the+Preparation+and+Application+of+Lignin-Derived+Polycarboxylic+Acids.">Study on the Preparation and Application of Lignin-Derived Polycarboxylic Acids.</a> Journal of Chemistry. 2019, 5493745 (2019).</li><li>Welker, C. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Acetyl+Bromide+Method+Is+Faster,+Simpler+and+Presents+Best+Recovery+of+Lignin+in+Different+Herbaceous+Tissues+than+Klason+and+Thioglycolic+Acid+Methods.">The Acetyl Bromide Method Is Faster, Simpler and Presents Best Recovery of Lignin in Different Herbaceous Tissues than Klason and Thioglycolic Acid Methods.</a> PLoS One. 9, 110000 (2014).</li><li>Iwaasa, A. D., Beauchemin, K. A., Acharya, S. N., Buchanan-Smith, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+stage+of+maturity+and+growth+cycle+on+shearing+force+and+cell+wall+chemical+constituents+of+alfalfa+stems.">Effect of stage of maturity and growth cycle on shearing force and cell wall chemical constituents of alfalfa stems.</a> Canadian Journal of Animal Science. 76, 321-328 (1996).</li><li>Arai-Sanoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotypic+Variations+in+Non-Structural+Carbohydrate+and+Cell-Wall+Components+of+the+Stem+in+Rice,+Sorghum,+and+Sugar+Vane.">Genotypic Variations in Non-Structural Carbohydrate and Cell-Wall Components of the Stem in Rice, Sorghum, and Sugar Vane.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. , 1105072478 (2011).</li></ol>

Lignin은 식물 의 성장과 개발에 중요한 역할을하며 최근 바이오 연료, 바이오 에너지 및 바이오 제품 응용 분야에서 광범위하게 연구되었습니다. Lignin은 모든 혈관 식물 이차 세포벽에 저장되는 방향족 화합물이 풍부합니다. 목재 패널 제품, 바이오 분산제, 플릿, 폴리우레탄 폼 및 회로 기판29,30,31의 수지와 같은 여러 산업 응?...

Lignin은 식물 세포벽의 중요한 하중 베어링 구성 요소 중 하나이며 지구 1에서 두 번째로 풍부한폴리머입니다. 화학적으로, 리그닌은 아로마 폴리머의 자연 재생 가능한 공급원을 형성하는 고분자량 복합 페놀 화합물로 구성된 교차형 이성포합체이며 생체 재료2,3. 이 천연 폴리머는 식물 성장, 발달, 생존, 기계적 지원, 세포벽 강성, 물 수송, 광물 수송, 숙박 저항, 조직 및 장기 개발, 에너지 증착 및 생체 및 생물학적 스트레스4,5,6,7로부터의보호에 중요한 역할을 한다. Lignin은 주로 세 가지 다른 모노리그놀로 구성됩니다: 코니페릴, 시나필 및 페닐 프로파노이드통로에서파생된 p-coumaryl 알코올8,9. 리닌의 양과 단량의 조성물은 식물 종, 조직/장기 유형 및 식물 개발의 상이한 단계에 따라다릅니다(10). 리그닌은 소스와 모노리그놀 조성에 기초하여 침엽수, 나무, 잔디 리그닌으로 광범위하게 분류됩니다. 소프트우드는 주로 4% p-coumaryl과 1% 시나필 알코올로 95%의 침엽수 알코올로 구성됩니다. 나무는 같은 비율로 수막과 시나필 알코올을 가지고 있으며, 잔디 리그닌은 40eryl, 시나필 및 p-coumaryl 알코올11,12의다양한 비율로 구성됩니다. 단량체의 조성은 세포벽의 리그닌 강도, 분해 및 분해뿐만 아니라 분자 구조, 분기 및 다른다당류(13,14)와교차하는 것을 결정하기 때문에 중요하다.
Lignin 연구는 저비용과 높은풍요로움15,16로인해 섬유 산업, 제지 산업 및 바이오 에탄올, 바이오 연료 및 바이오 제품에 대한 중요성을 얻고 있습니다. 다양한 화학적 방법(예를 들어, 아세틸 브로마이드, 산세제, 클라손, 퍼망가네이트 산화)와 기악방법(예를 들어, 근적외선(NIR) 분광법, 핵자기공명(NMR) 분광법 및 자외선(UV) 분광성제17호에사용하였다. 리그닌의 분석 방법은 일반적으로 전자기 방사선, 중력 및 용해도에 따라 분류됩니다. 전자기 방사선에 의한 리그닌 추정의 원리는 특정 파장에서 빛을 흡수하는 리그닌의 화학적 특성에 기초했다. 이러한 결과는 리그닌이 탄수화물보다 더 강한 UV 흡광도를 가지고 있다는 원리에 따라 추정되었다. 1962년 볼커와 서머빌은 염화칼륨 펠릿을 사용하여18번나무의 리그닌 함량을 추정했다. 그러나, 이 방법은 비리닌 페놀 화합물의 존재와 적절한 소멸 계수의 부재로 인해 초본 샘플로부터 의 리그닌 함량의 추정에 단점이 있다. 1970년 퍼거스와 고링은 구아실과 실리실 화합물 흡수 극대화가 280nm와 270nm에 있는 것으로 나타났으며, 볼커와 서머빌 방법19의멸종 계수 문제를 수정했다. 나중에 페놀을 특성화하기 위한 매우 민감한 기술인 적외선 분광법은 소량의 식물 바이오매스 샘플을 가진 리그닌 추정에도 사용되었습니다. 이러한 기술의 한 가지 예는 분산 반사포리미티에 변형 분광측정법이었습니다. 그러나 이 방법은 UV방법(20)과유사한 적절한 표준이 부족하다. 나중에, 리그닌 함량은 NIRS (근적외선 분광법) 및 NMR (핵 자기 공명 분광법)에 의해 추정되었다. 그러나, 이러한 방법에단점이 있다, 그들은 리그닌의 화학 구조를 변경하지 않습니다, 그 순도유지 20.
그레이비메트릭 클라슨 방법은 우디 줄기의 리그닌 추정을 위한 직접적이고 신뢰할 수 있는 분석 방법입니다. 그레이비메트릭 리그닌 추정의 기초는 비리그닌 화합물의 가수분해/용해화 및 중력에 대한 불용성 리그닌의수집이다(21). 이 방법에서, 탄수화물은 농축 된 H2SO4를 가진 바이오 매스의 가수분해에 의해 제거되어 리그닌 잔류물20,22를추출한다. 이 방법에 의해 추정된 리그닌 함량은 산 불용성 리그닌 또는 클라손 리그닌이라고 합니다. Klason 방법의 적용은 식물 종, 조직 유형 및 세포벽 유형에 따라 다릅니다. 탄닌, 다당류 및 단백질과 같은 비 리그닌 성분의 가변적인 양의 존재는 산 불용성/수용성 리그닌 함량의 추정에 비례적인 차이를 초래합니다. 따라서, 클라슨 방법은 우디줄기(17,23)와같은 고리닌 함량 바이오매스의 리닌 추정에만 권장된다. 아세틸 브로마이드(AcBr), 산불용성 리그닌, 티오글리콜산(TGA)과 같은 용해도 방법은 다양한 식물 바이오매스 소스로부터 리그닌 함량을 추정하는 데 가장 일반적으로 사용되는 방법이다. 김 외는 용해도에 의한 리그닌 추출을 위한 두 가지 방법을 확립했다. 제1방법은 셀룰로오스와 헤미셀룰로오스를 용해시킴으로써 용해성 잔류물로서 리그닌을 추출하고, 두 번째 방법은 용해 분획에서 리그닌을 분리하여 셀룰로오스와 헤미셀룰로오스를 용해성잔류물(24)로남겨두는다.
용해도에 기초하여 리그닌 추정에 사용되는 유사한 방법은 티글리글리콜산(TGA) 및 아세틸 브로마이드(AcBr)방법(25)이다. TGA와 아세틸 브로마이드 방법 모두 280 nm에서 용액화된 리그닌의 흡광도를 측정하여 리그닌 함량을 추정합니다. 그러나, AcBr 방법은 리그닌 용해화 과정에서 자일란을 저하시키고 리그닌함량(26)의잘못된 증가를 나타낸다. 티오글리콜레이트(TGA) 방법은 TGA를 이용한 리그닌의 벤실 알코올 그룹의 티오에테르 그룹과의 특정 결합에 의존하기 때문에 보다 신뢰할 수 있는 방법입니다. TGA 바운드 리그닌은 HCl을 이용한 산성 조건하에서 침전되며, 리그닌 함량은 280nm27에서흡광도를 이용하여 추정된다. TGA 방법은 덜 구조적 수정, 리그닌 추정의 가용성 형태, 비 리그닌 성분의 간섭 감소, TGA와의 특정 결합으로 인한 리그닌의 정확한 추정의 추가 이점이 있습니다.
이러한 TGA 방법은 리그닌 함량 추정에 사용되는 식물 바이오매스 샘플의 종류에 따라 수정된다. 여기서, 우리는 리닌 함량을 추정하기 위해 면 조직에 쌀 빨대(27)의 급속한 TGA 방법을 수정하고 적응시켰다. 간단히, 건조된 분말 식물 샘플은 단백질 및 알코올 용해 분획을 제거하기 위해 단백질 용해화 완충제 및 메탄올 추출을 실시하였다. 알코올 불용성 잔류물은 산성 조건하에서 TGA와 침전 된 리그닌으로 치료되었다. 리닌 표준 곡선은 상업적 대나무 리그닌을 사용하여 생성되었고 회귀 라인(y = mx+c)이 얻어졌다. "x" 값은 280nm에서 리그닌의 평균 흡광도 값을 사용하며, "m" 및 "c" 값은 회귀 라인에서 입력되어 면 식물 바이오매스 샘플에서 알 수 없는 리그닌 농도를 계산합니다. 이 방법은 5단계로 나뉩니다: 1) 식물 시료의 준비; 2) 물과 메탄올로 샘플을 세척; 3) 리그닌을 침전시키는 TGA 및 산으로 펠릿의 치료; 4) 리그닌의 강수량; 및 5) 샘플의 표준 곡선 제제 및 리그닌 함량 추정. 처음 2단계는 주로 식물 재료 제제에 초점을 맞추고 물, PSB(단백질 용해화 완충제) 및 메탄올 추출을 통해 알코올 불용성 물질을 얻습니다. 이어서, TGA(티오글리콜산) 및 HCl로 처리되어 제3상에서 리그닌을 가진 복합체를 형성하였다. 결국, HCl은 280 nm28에서흡광도를 측정하기 위해 수산화 나트륨에 용해된 리그닌을 침전시키는 데 사용되었다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BioSpectrophotometer kinetic</td>
			<td>Eppendorf kinetic</td>
			<td>6136000010</td>
			<td>For measuring absorbance at 280 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424</td>
			<td>For centrifuging&#160; samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Commercial bamboo lignin</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>1002171289</td>
			<td>Used in the preparation of the standard curve</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distilled water</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>16690382</td>
			<td>Used in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>734-0448</td>
			<td>Containers for solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer mill</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>68-701-15</td>
			<td>For fine grinding of plant tissue samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat block/ Thermal mixer</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>13527550</td>
			<td>For temperature controlled steps during lignin extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hotplate stirrer</td>
			<td>Walter</td>
			<td>WP1007-HS</td>
			<td>Used for preparation of solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid (HCL)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221677</td>
			<td>Used in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>150152633</td>
			<td>For thorough drying of plant tissue samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Measuring scale</td>
			<td>Mettler toledo</td>
			<td>30243386</td>
			<td>For measuring plant tissue weight, standards and microfuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (100 %)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>67-56-1</td>
			<td>Used in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfuge tubes (2 mL)</td>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Z628034-500EA</td>
			<td>Containers for extraction of lignin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plant biomass gerinder</td>
			<td>Hanchen</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>Used for crushing dried samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AE150</td>
			<td>Measuring pH for solutions prepared for lignin extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature controlled incubator/oven</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-015-2633</td>
			<td>Used in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thioglycolic acid (TGA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>68-11-1</td>
			<td>Used in the protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum dryer</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22820001</td>
			<td>Used for drying samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3340001</td>
			<td>For proper mixing of samples</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of plant biomass lignin content using thioglycolic acid (tga)

Lignin은 셀룰로오스 다음으로 지구상에서 두 번째로 풍부한 중합체인 천연 중합체입니다. Lignin은 주로 식물 이차 세포벽에 증착되며 주로 산업적 중요성이 있는 3개의 모노리그놀로 구성된 방향족 이성포성입니다. Lignin은 식물 의 성장과 개발에 중요한 역할을하며, 생체 및 생물학적 스트레스로부터 보호하며, 동물 사료, 목재 및 산업용 리그닌 제품의 품질에서 보호합니다. 리그닌 함량의 정확한 추정은 리그닌 생합성과 바이오매스의 산업 응용 에 대한 근본적인 이해 모두에 필수적입니다. 티오글리콜산(TGA) 방법은 식물 바이오매스의 총 리그닌 함량을 추정하는 매우 신뢰할 수 있는 방법입니다. 이 방법은 알칼리성 조건에서 용해되고 산성 조건에서 불용성인 리그닌의 벤질 알코올 군으로 티오에테르를 형성하여 리그닌 함량을 추정한다. 총 리그닌 함량은 상업용 대나무 리그닌에서 생성된 표준 곡선을 사용하여 추정됩니다.

두 개의 다른 면 실험 라인은 다른 조직에서 그들의 리그닌 내용의 차이에 대 한 비교 되었다. 각 시료의 추출된 리그닌 함량은 280nm에서 측정되고 각각의 흡광도 값을 기록했다. 각 생물학적 복제의 평균 흡광도 값은 리그닌 표준 곡선의 회귀선(표 2, 도 3C)과비교하였다. 회귀 라인, y =mx + c는 추출된 실험 선, 샘플 1 및 샘플 2의 알 수 없는 리그닌 함량을 계산하는...

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Estimation of Plant Biomass Lignin Content using Thioglycolic Acid TGA

여기서, 우리는 초본 식물 바이오 매스에서 리그닌 함량의 추정을위한 수정 된 TGA 방법을 제시한다. 이 방법은 리그닌과 특정 티오에테르 결합을 형성하여 리그닌 함량을 추정하고, 리그닌 함량 추정을 위해 상대적으로 작은 샘플을 필요로 하기 때문에 클라슨 방법에 비해 이점을 제시한다.

티오글리콜산(TGA)을 이용한 식물바이오매스 리그닌 함량 추정

Lignin is a natural polymer that is the second most abundant polymer on Earth after cellulose. Lignin is mainly deposited in plant secondary cell walls ...

리그닌은 3개의 모노리그놀로 구성된 복잡한 이성포합체입니다. 셀룰로오스 다음으로 지구상에서 두 번째로 풍부한 폴리머입니다. 여기서, 우리는 리그닌 함량의 추정을 위한 가장 신뢰할 수 있는 방법인 티오글리쿨산 방법을 시연한다.이 방법은 리그닌이 티오에테르 결합을 통해 티오글리콜산에 결합한다는 원리에 기초한다. 또한 이 프로토콜을 5단계로 나눕니다. 첫 번째 단계에서는 식물 재료를 준비합니다.두 번째 단계에서는 알코올 용해성 추출물을 분리합니다. 3상에서는 티오글리콜산및 산성 상태를 사용하여 리그닌을 침전시합니다. 4단계에서는 산업용 대나무 리그닌을 사용하여 리그닌 표준 곡선을 준비합니다.마지막으로, 5단계에서는 4단계에서 준비된 표준 곡선을 사용하여 리그닌 함량을 추정합니다. 식물 재료는 수집, 뿌리를 분리하기 위해 냄비를 뒤집어, 물로 철저히 세척하고, 공기는 이틀 동안 건조하고, 라벨이 부착 된 용기로 옮기고 1 주일에서 10 일 동안 49도 의 인큐베이터에서 배양합니다. 가위를 사용하여 조직은 1mm에서 3mm 크기의 조각으로 더 잘려냅니다.대안적으로 바이오매스 그라인더는 식물 조직을 분쇄하는 데 사용됩니다. 바이오매스 그라인더의 루트 조직 턴을 사용하여 분쇄된 분말을 미리 표지된 용기로 수집합니다. 마찬가지로, 줄기 조직과 잎 조직을 반복합니다.분쇄 된 분말은 다음 냉동고 밀에 배치되는 연삭 꽃병에로드하고 세 사이클에 대한 10 CP 속도의 속도로 냉동실 공장을 실행합니다. 지상 조직 분말의 20 mg의 무게와 미리 만든 2ml 튜브로 전송. 빈 튜브와 튜브에 티슈 파우더와 실험실 노트북의 조직 분말을 적어 둡니다.1시간 동안 60도의 섭씨로 캡이 열려 있는 튜브를 배양합니다. 인큐베이션 후, 10분 동안 15, 000 RPM의 각 샘플 소용돌이 원심분리기에 1.8 ml의 물을 추가합니다. 상체를 버리고 메탄올 1.8 ml를 추가하십시오.15, 000 RPM에서 10분 동안 배양 원심분리기 후 20분 동안 예열된 60도 센티미터 블록에서 소용돌이와 인큐베이션을 합니다. 이 단계를 한 번 더 반복합니다. 원심분리 후 상체를 버리고 진공 건조기에서 펠릿을 2~3시간 동안 또는 팔레트가 완전히 건조할 때까지 건조시다.마지막에 리그닌 함량의 추정을 위해 실험실 노트북에 각 튜브의 무게를 측정하고 기록합니다. 또한 이 시점에서 0.5 mg에서 4 mg으로 트리클리카에 양성 제어 산업 대나무 리그닌을 포함한다. 일반 염산 3분의 1 1ml를 각 샘플 소용돌이에 글리콜산 100마이크로리터를 넣고 3시간 동안 섭씨 80도에서 배양합니다.3시간 의 배양 후 랙으로 옮기고 10 분 동안 식힙니다. 그런 다음 15, 000 RPM에서 10 분 동안 원심 분리기. 원심 분리 후 솔루션의 색상은 다음과 같습니다.상부체를 폐기합니다. 물 1 ml를 추가합니다. 15, 000 RPM에서 10분 동안 소용돌이 원심분리기.상부체를 폐기합니다. 수산화 나트륨 1ml를 추가합니다. 소용돌이와 하룻밤 37도 센티미터 쉐이커에서 배양.하룻밤 동안 배양 후 15, 000 RPM에서 튜브를 원심 분리한 후 10 분 동안. 상류층 의 신선한 사전 라벨 2 ml 튜브를 전달하여 200 마이크로리터의 농축 염산을 슈퍼나탈에 추가합니다. 여기에 표시된 것처럼 부드러운 반전으로 섞는다.하룻밤 사이에 섭씨 4도에서 냉장고에 인큐베이션하십시오. 15에서 배양 원심분리기 후, 10분 동안 000 RPM. 상부체를 폐기합니다.수산화 나트륨 1 ml를 추가합니다. 소용돌이와 10~15분 동안 실온에서 셰이커에 인큐베이션합니다. 흡광도측정기를 사용하여 흡광도 측정기 280나노미터를 수집하고, 수산화나트륨에 침전된 리그닌 침전이 수산화나트륨에 용해되기 때문에 수산화나트륨 2 마이크로리터를 블랭크로 섭취하십시오.공백을 0으로 만듭니다. 마찬가지로 샘플을 반복합니다. 각 샘플의 마이크로리터 2개를 사용하여 실험실 노트북에서 흡광도 판독값을 수집합니다.세 가지 기술 복제에 대해 각 샘플에 대해 세 가지 판독값을 수행합니다. 첫 번째 열에는 샘플 번호가 있습니다. 두 번째 컬럼에서, 우리는 R1, R2, R3가 하나의 실험 라인의 세 가지 생물학적 복제를 나타내는 생물학적 복제가 있습니다.세 번째 컬럼에서는 280나노미터에서 얻은 흡광도 판독값을 평균화했습니다. x가 평균 OD인 공식 y=mx-c를 사용하여 네 번째 열의 리그닌 함량을 계산하고.m c 값이 준비된 표준 곡선의 회귀 선에서 플롯됩니다. 다섯 번째 열은 메탄올과 물이 세차한 후의 무게입니다.그래서 이것은 mg에서 리그닌 콘텐츠의 추정에 사용 되는 방법입니다. 따라서 네 번째 열에서 얻은 값을 다섯 번째 열로 나누어 여섯 번째 열에서 리그닌 함량의 mg당 값을 얻습니다. 그리고 이 값은 그램 세포벽 중량당 얻기 위하여 1000을 곱한다.그리고 백분율 리그닌 콘텐츠는 이 값을 1000으로 나누고 100으로 곱하여 계산됩니다. 마지막으로, 각 실험라인의 3개의 생물학적 복제체의 리그닌을 평균화하여 평균 리그닌을 획득하여, 이는 리닌 함량의 차이를 이해하기 위해 바 그래프의 형태로 다른 실험 라인의 평균과 비교될 것이다. 또한 학생 t-테스트를 적용하여 중요성 수준을 테스트할 수도 있습니다.칼럼 A에서는 상업용 대나무 리그닌을 가지고 있으며, 그 다음에는 TGA와 280 나노미터의 각각의 흡광도 판독전에 찍은 대나무 리그닌의 무게가 있습니다. 표 A의 이러한 값은 열 B에서 흩어진 그래프를 플롯하는 데 사용되었으며, 이는 m 및 c 값으로 회귀 선을 제공합니다. C에서는, 표준 곡선과 산업용 대나무 리그닌 실험라인을 사용하여 얻은 값을 1과 2개의 바 그래프 형태로 비교하고 그 결과 서로 차이를 나타내었다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Estimation of Plant Biomass Lignin Content using Thioglycolic Acid (TGA)

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

소설 불용성 발색 기질 분석 키트를 사용하여 탄수화물 분해 효소의 높은 처리량 검열

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

연구

생화학

Combining Raman Imaging and Multivariate Analysis to Visualize Lignin, Cellulose, and Hemicellulose in the Plant Cell Wall

라만 이미징과 다변량 분석을 결합하여 식물 세포벽에서 리그닌, 셀룰로오스 및 헤미 셀룰로스를 시각화합니다.

The application of Raman imaging to plant biomass is increasing because it can offer spatial and compositional information on aqueous solutions. The ...

Determination of the Glycogen Content in Cyanobacteria

시아 노 박테리아의 글리코겐 함량 측정

Cyanobacteria accumulate glycogen as a major intracellular carbon and energy storage&#160;during photosynthesis. Recent developments in research have ...

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis (QDB)

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis QDB

높은 처리량, 양적 도트를 사용 하 여 조직 수준에서 선택 된 단백질의 내용의 절대 결정 오 점 분석 (QDB)

Lacking a convenient, quantitative, high throughput immunoblot method for absolute determination of the content of a specific protein at cellular and ...

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Spectrophotometric Determination of Phycobiliprotein Content in Cyanobacterium Synechocystis

Spectrophotometric Cyanobacterium Synechocystis 에서 Phycobiliprotein 콘텐츠 결정

This is a simple protocol for the quantitative determination of phycobiliprotein content in the model cyanobacterium Synechocystis. Phycobiliproteins are ...

Affinity Purification of Chloroplast Translocon Protein Complexes Using the TAP Tag

탭 태그를 사용 하 여 엽록체 Translocon 단백질 복합물의 친 화력 정화

Chloroplast biogenesis requires the import of thousands of nucleus-encoded proteins into the plastid. The import of these proteins depends on the ...

Using High Content Imaging to Quantify Target Engagement in Adherent Cells

척도 부착 셀에 대상 참여를 이미징 높은 콘텐츠를 사용 하 여

Quantitating the interaction of small molecules with their intended protein target is critical for drug development, target validation and chemical probe ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

체 외 형광 공명 에너지 전달에 밀리초 시간 규모에서 단백질 복합물의 역학을 공부 하는 사용 하 여

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

Identifying Amino Acid Overproducers Using Rare-Codon-Rich Markers

희귀 코돈이 풍부한 마커를 사용하여 아미노산 과잉 생산자 식별

To satisfy the ever-growing market for amino acids, high-performance production strains are needed. The amino acid overproducers are conventionally ...

Measuring Interactions between Fluorescent Probes and Lignin in Plant Sections by sFLIM Based on Native Autofluorescence

네이티브 오토플루임션을 기반으로 sFLIM에 의한 식물 섹션의 형광 프로브와 리그닌 간의 상호 작용 측정

In lignocellulosic biomass (LB), the activity of enzymes is limited by the appearance of non-specific interactions with lignin during the hydrolysis ...