Name: semi-quantitative determination of dopaminergic neuron density in the substantia nigra of rodent models using automated image analysis
Uploaded: 2021-02-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis at JoVE.com

De auteurs willen alle medewerkers van de Advanced Optical Microscopy Facility (AOMF) van het University Health Network bedanken voor hun tijd en hulp bij het ontwikkelen van dit protocol.

Alle procedures werden goedgekeurd door het University Health Network Animal Care Committee en uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften van de Canadian Council on Animal Care.
1. Stereotactische injectie
<ol><li>Paar-huis volwassen vrouwelijke Sprague-Dawley ratten (250-280 g) in kooien met houten beddengoed en ad lib toegang tot voedsel en water. Houd de dierenkolonie in een regelmatige 12 uur licht/donker cyclus (lichten op 06:30) met constante temperatuur en vocht...

<ol>
	<li>Kalia, L. V., Lang, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parkinson's+disease.">Parkinson's disease.</a> Lancet. 386 (9996), 896-912 (2015).</li><li>West, M. J., Slomianka, L., Gundersen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+thesubdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator.">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in thesubdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> The Anatomical Record. 231 (4), 482-497 (1991).</li><li>Nair-Roberts, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimates+of+dopaminergic,+GABAergic+and+glutamatergic+neurons+in+the+ventral+tegmental+area,+substantia+nigra+and+retrorubral+field+in+the+rat.">Stereological estimates of dopaminergic, GABAergic and glutamatergic neurons in the ventral tegmental area, substantia nigra and retrorubral field in the rat.</a> Neuroscience. 152 (4), 1024-1031 (2008).</li><li>Golub, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurostereology+protocol+for+unbiased+quantification+of+neuronal+injury+and+neurodegeneration.">Neurostereology protocol for unbiased quantification of neuronal injury and neurodegeneration.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 7, 196 (2015).</li><li>Schmitz, C., Hof, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design-based+stereology+in+neuroscience.">Design-based stereology in neuroscience.</a> Neuroscience. 130 (4), 813-831 (2005).</li><li>Penttinen, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementation+of+deep+neural+networks+to+count+dopamine+neurons+in+substantia+nigra.">Implementation of deep neural networks to count dopamine neurons in substantia nigra.</a> European Journal of Neuroscience. 48 (6), 2354-2361 (2018).</li><li>Yousef, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron+loss+and+degeneration+in+the+progression+of+TDP-43+in+frontotemporal+lobar+degeneration.">Neuron loss and degeneration in the progression of TDP-43 in frontotemporal lobar degeneration.</a> Acta Neuropathologica Communications. 5 (1), 68 (2017).</li><li>Koprich, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+human+A53T+alpha-synuclein+in+the+rat+substantia+nigra+using+a+novel+AAV1/2+vector+produces+a+rapidly+evolving+pathology+with+protein+aggregation,+dystrophic+neurite+architecture+and+nigrostriatal+degeneration+with+potential+to+model+the+pathology+of+Parkinson's+disease.">Expression of human A53T alpha-synuclein in the rat substantia nigra using a novel AAV1/2 vector produces a rapidly evolving pathology with protein aggregation, dystrophic neurite architecture and nigrostriatal degeneration with potential to model the pathology of Parkinson's disease.</a> Molecular Neurodegeneration. 5, 43 (2010).</li><li>Koprich, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+neurodegeneration+or+endogenous+compensation+in+an+animal+model+of+Parkinson's+disease+produced+by+decreasing+doses+of+alpha-synuclein.">Progressive neurodegeneration or endogenous compensation in an animal model of Parkinson's disease produced by decreasing doses of alpha-synuclein.</a> PLoS One. 6 (3), 17698 (2011).</li><li>McKinnon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-onset+impairment+of+the+ubiquitin-proteasome+system+in+dopaminergic+neurons+caused+by+alpha-synuclein.">Early-onset impairment of the ubiquitin-proteasome system in dopaminergic neurons caused by alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathologica Communications. 8 (1), 17 (2020).</li><li>Henderson, M. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spread+of+alpha-synuclein+pathology+through+the+brain+connectome+is+modulated+by+selective+vulnerability+and+predicted+by+network+analysis.">Spread of alpha-synuclein pathology through the brain connectome is modulated by selective vulnerability and predicted by network analysis.</a> Nature Neuroscience. 22 (8), 1248-1257 (2019).</li><li>Ip, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV1/2-induced+overexpression+of+A53T-alpha-synuclein+in+the+substantia+nigra+results+in+degeneration+of+the+nigrostriatal+system+with+Lewy-like+pathology+and+motor+impairment:+a+new+mouse+model+for+Parkinson's+disease.">AAV1/2-induced overexpression of A53T-alpha-synuclein in the substantia nigra results in degeneration of the nigrostriatal system with Lewy-like pathology and motor impairment: a new mouse model for Parkinson's disease.</a> Acta Neuropathologica Communications. 5 (1), 11 (2017).</li><li>Webster, J. D., Dunstan, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-slide+imaging+and+automated+image+analysis:+considerations+and+opportunities+in+the+practice+of+pathology.">Whole-slide imaging and automated image analysis: considerations and opportunities in the practice of pathology.</a> Veterinary Pathology. 51 (1), 211-223 (2014).</li></ol>

De betrouwbare beoordeling van de integriteit van het dopaminerge systeem in preklinische modellen van PD is van cruciaal belang om de effectiviteit van potentiële ziektemodificerende therapieën te bepalen. Daarom is het belangrijk om potentiële verwarringen te beheersen en te minimaliseren die de betrouwbaarheid en reproduceerbaarheid van histopathologische gegevens kunnen verminderen. Zorgvuldige kwantitatieve uitkomsten kunnen meer informatie opleveren dan alleen kwalitatieve of semi-kwantitatieve beschrijvingen. T...

De ziekte van Parkinson (PD) is een veel voorkomende neurodegeneratieve bewegingsstoornis die wordt gekenmerkt door de aanwezigheid van eiwitaggregaten die α-synucleïne (α-syn) bevatten en het voorkeursverlies van dopaminerge neuronen in de substantia nigra pars compacta (SNpc)1. Kwantificering van dopaminerge neuronen is een essentieel onderdeel van PD-onderzoek omdat het de evaluatie van de integriteit van het nigrostriatale systeem mogelijk maakt, waardoor het een belangrijk eindpunt is om de effectiviteit van potentiële ziekte-modificerende therapieën te beoordelen. Momenteel is de standaard voor kwantificering van celgetal onbevooroordeeld stereologisch tellen, dat tweedimensionale (2D) doorsneden van weefsel gebruikt om volumetrische kenmerken in driedimensionale (3D) structuren te schatten2,3,4. Moderne op ontwerpen gebaseerde stereologische methoden maken gebruik van uitgebreide steekproefprocedures en passen telprotocollen (bekend als sondes) toe om potentiële artefacten en systematische fouten te voorkomen, waardoor betrouwbare detectie van verschillen slechts iets groter is dan variatie tussen dieren5. Hoewel stereologie een krachtig analytisch instrument is voor in vivo histologische studies, is het tijdsintensief, veronderstelt het een uniforme monstervoorbereiding en vereist validatie in verschillende stappen, wat van invloed kan zijn op de efficiëntie die steeds meer nodig is voor preklinisch translationeel onderzoek.
Recente technologische vooruitgang in de digitale wetenschap maakt het mogelijk om nieuwe toepassingen aan te nemen voor efficiëntere beoordelingen van pathologie zonder een stereomicroscoop, terwijl het een behoefte vervult als surrogaat van onbevooroordede stereologie. Deze methoden verhogen de snelheid, verminderen menselijke fouten en verbeteren de reproduceerbaarheid van stereologische technieken6,7. HALO is zo'n beeldanalyseplatform voor kwantitatieve weefselanalyse in digitale pathologie. Het bestaat uit een verscheidenheid aan verschillende modules en rapporteert morfologische en multiplexed expressiegegevens per cel over hele weefselsecties met behulp van patroonherkenningsalgoritmen. De cytonucleaire FL-module meet de immunofluorescente positiviteit van fluorescerende markers in de kern of cytoplasma. Dit maakt het mogelijk om het aantal positieve cellen voor elke markering en de intensiteitsscore voor elke cel te rapporteren. De module kan worden aangepast om individuele celgroottes en intensiteitsmetingen te bieden, hoewel deze functie niet nodig is voor kwantificering van dopaminerge neuronen.
Het doel van deze studie is deze methode te verifiëren met een eerder gevalideerd viraal vectorgebaseerd α-syn rat model van nigrale neurodegeneratie8,9,10. In dit model wordt humaan mutant A53T α-syn uitgedrukt in de SNpc door stereotactische injectie van adeno-geassocieerd virus hybride serotype 1/2 (AAV1/2), resulterend in significante neurodegeneratie over een periode van 6 weken. De contralaterale niet-geïnjecteerde SNpc kan in sommige studies dienen als een interne controle voor de geïnjecteerde kant. Vaker wordt injectie van AAV-Empty Vector (AAV-EV) in een controlecohort van dieren gebruikt als een negatieve controle. We presenteren een stapsgewijze handleiding om de dichtheid van dopaminerge neuronen te schatten die na 6 weken in de geïnjecteerde SNpc achterblijven met behulp van een geautomatiseerde beeldanalysesoftware (figuur 1).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>A-Syn Antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>32-8100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABC Elite</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>PK-6102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 secondary antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 secondary antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-28180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alkaline phosphatase-conjugated anti-rabbit igG</td>
			<td>Jackson Immuno</td>
			<td>111-055-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated anti-mouse IgG</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>BA-9200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAKO fluorescent mouting medium</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HALO&#8482;</td>
			<td>Indica Labs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histo-Clear II</td>
			<td>Diamed</td>
			<td>HS202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Peroxidase substrate</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM880 Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeuN Antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>S-1000-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT</td>
			<td>Tissue-Tek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>PAR070.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sliding microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SM2010 R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Investigator</td>
			<td>MBF Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TH Antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P21962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaMount mounting medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector Blue Alkaline Phosphatase substrate</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SK-5300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen Black Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen Blue Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

semi-quantitative determination of dopaminergic neuron density in the substantia nigra of rodent models using automated image analysis

Schatting van het aantal dopaminerge neuronen in de substantia nigra is een belangrijke methode in preklinisch onderzoek naar de ziekte van Parkinson. Momenteel is onbevooroordeeld stereologisch tellen de standaard voor kwantificering van deze cellen, maar het blijft een moeizaam en tijdrovend proces, dat misschien niet voor alle projecten haalbaar is. Hier beschrijven we het gebruik van een beeldanalyseplatform, dat de hoeveelheid gelabelde cellen in een vooraf gedefinieerde interesseregio nauwkeurig kan schatten. We beschrijven een stapsgewijs protocol voor deze analysemethode in rattenhersenen en tonen aan dat het een significante vermindering van tyrosine hydroxylase positieve neuronen kan identificeren als gevolg van expressie van mutante α-synucleïne in de substantia nigra. We hebben deze methodologie gevalideerd door te vergelijken met resultaten verkregen door onbevooroordede stereologie. Samen biedt deze methode een tijdsefficiënt en nauwkeurig proces voor het detecteren van veranderingen in het aantal dopaminerge neuronen, en is dus geschikt voor efficiënte bepaling van het effect van interventies op de celoverleving.

Door de bovenstaande methoden toe te passen op hersenweefsel dat 6 weken na AAV-injecties is verzameld, hebben we aangetoond dat stereotactische injectie van AAV-expresserende mutant A53T α-syn (AAV-A53T) in de SNpc van rattenhersenen resulteert in een significante vermindering van de dichtheid van dopaminerge neuronen in vergelijking met injectie van lege vector AAV (AAV-EV) als controle (Figuur 5A, B). Het gemiddelde aantal TH-positieve neuronen/mm2 in de SNpc ...

Watch this Scientific Journal Video about Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis at JoVE.com

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

Hier presenteren we een geautomatiseerde methode voor semi-kwantitatieve bepaling van dopaminerge neuron nummer in de rat substantia nigra pars compacta.

Semi-kwantitatieve bepaling van dopaminerge neurondichtheid in de substantia Nigra van knaagdiermodellen met behulp van geautomatiseerde beeldanalyse

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...

Schatting van dopaminerge neuron nummer in de substantia nigra is een belangrijke uitkomstmaat in de ziekte van Parkinson onderzoek. Dit protocol verkort de werklast die nodig is om het neuronnummer te schatten aanzienlijk. Deze methode biedt een tijdsefficiënt en nauwkeurig proces voor het detecteren van veranderingen in het aantal dopaminerge neuronen en is geschikt voor het bepalen van het effect van interventies op de celoverleving.Deze methode kan eenvoudig worden aangepast om nauwkeurige tellingen van neuronen in verschillende hersengebieden te bieden, terwijl de kosten- en tijdvoordelen ten opzichte van traditionele stereologische methoden behouden blijven. Om IHC-beelden vast te leggen, gebruikt u de software die is gekoppeld aan een confocale microscoop met een vergroting van 10x. Open het pingat tot 1,5 gebiedseenheden om een breed vlak van in totaal 1,5 micrometer vast te leggen en de focus op de geïnjecteerde kant van de hersenen te leggen.Controleer op het tabblad acquisitie de optie tegelscanweergave en stel de afmetingen in op 10 bij 4. Stel onder het paneel acquisitiemodus de zoom in op 1.1 om stiksporen tussen de tegelscanafbeeldingen te voorkomen. Stel de framegrootte in op 1024 bij 1024 pixels en de gemiddelde op twee om een hoge beeldkwaliteit te garanderen.Stel in het kanaalpaneel track één in op Alexa 488 en track twee op Alexa 555. Plaats de dia op het podium en kies een sectie met een sterke TH-kleuring. Klik live op het acquisitiepaneel.Stel in het kanaalpaneel de lasersterkte en versterking in op niveaus die het signaal maximaliseren en het achtergrondgeluid beperken. Gebruik de bereikindicator om ervoor te zorgen dat de signalen niet overbelicht zijn. Herhaal dit met meerdere dia's.Schakel op het tabblad Acquisitie het vakje Posities in. Om te beginnen met beeldvorming, gebruikt u het oogstuk en kiest u het eerste gedeelte met positieve TH-kleuring. Stel vervolgens de focus op het punt van belang en verplaats het podium naar de middellijn van de sectie.Hiermee wordt de positie in de X-, Y- en Z-assen opgeslagen en wordt een tegelscan weergegeven die de hele sectie vastlegt. Herhaal dit voor alle andere dia's, inclusief een niet-geïnjecteerde site. Scheid afbeeldingsbestanden met behulp van de juiste software en importeer ze in geautomatiseerde beeldanalysesoftware.Definieer een interessegebied door het gereedschap penannotatie te selecteren om een annotatie rond de substantia nigra pars compacta te tekenen. Ga naar het tabblad analyse en selecteer realtime afstemming in het vervolgkeuzemenu voor analyse. Dit opent een apart venster op de sectieafbeelding, zodat analyseparameters in realtime kunnen worden gewijzigd.Selecteer onder de sectie analysevergroting de juiste beeldzoom. Selecteer onder de celdetectiesectie kernkleurstof als de kleurstof die wordt gebruikt voor TH-kleuring. Pas de nucleaire contrastdrempel, minimale nucleaire intensiteit, nucleaire segmentatieagressiviteit en nucleaire grootte-instellingen aan terwijl u het tijdafstemmingsvenster zorgvuldig bekijkt.Herhaal dit proces met meerdere voorbeelden. Zodra een passend aantal afbeeldingen is gesampled en real-time tuning dienovereenkomstig is aangepast, slaat u de analyse-instellingen op in het vervolgkeuzemenu instellingenacties. Selecteer alle te analyseren afbeeldingen en klik op analyseren.Kies de analyse-instelling die zojuist is opgeslagen en vink in het analysevenster het vakje annotatielagen aan, vink laag één aan en klik op analyseren. Zodra u de samenvattingsanalysegegevens voor alle secties hebt geëxporteerd, selecteert u de optie om objectanalysegegevens te exporteren. Deze dataset kan worden gebruikt om veranderingen in celgrootte te onderzoeken als reactie op een toxine of therapeutisch middel.Zes weken na adeno geassocieerd virus of AAV injecties, stereotactische injectie van AAV uitdrukken mutant A53T alfa synucleïne in de substantia nigra in de rat hersenen resulteerde in een significante vermindering van de dichtheid van dopaminerge neuronen. Het gemiddelde aantal TH-positieve neuronen per millimeter in het kwadraat in de substantia nigra van ratten geïnjecteerd met AAV-A35T was aanzienlijk verminderd in vergelijking met dat van ratten geïnjecteerd met de AAV lege vector. Soortgelijke waarnemingen werden gedaan met behulp van onbevooroordede stereologie.Houd er bij het proberen van dit protocol rekening mee dat de software slechts zo nuttig is als ze is opgeleid. Daarom moet er tijd en zorg worden genomen om ervoor te zorgen dat een enkele cel als één cel wordt geïdentificeerd. De software kan worden aangepast om een fluorescentie-intensiteit van andere eiwitten van belang te meten, zoals alfa-synucleïne om te bepalen of behandelingen eiwitniveaus kunnen moduleren.Deze techniek heeft gezorgd voor een grotere efficiëntie bij het testen van het effect van meerdere potentiële therapeutische stoffen op dopaminerge neurondichtheid.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Automated Sholl Analysis of Digitized Neuronal Morphology at Multiple Scales

Geautomatiseerde Sholl Analyse van Gedigitaliseerde Neuronale morfologie op meerdere schalen

Neuronal morphology plays a significant role in determining how neurons function and communicate1-3.  Specifically, it affects the ability of neurons to ...

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

In ovo Elektroporatie in Chick middenhersenen voor het bestuderen van gen-functie in dopaminerge Neuron Ontwikkeling

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualisatie en genetische manipulatie van dendrieten en stekels in de muis Cerebral cortex en de hippocampus met behulp van<em&gt; In utero</em&gt; Elektroporatie

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Comprehensive Profiling of Dopamine Regulation in Substantia Nigra and Ventral Tegmental Area

Uitgebreide Profilering van Dopamine verordening in de substantia nigra en het ventrale tegmentale gebied

Dopamine is a vigorously studied neurotransmitter in the CNS. Indeed, its involvement in locomotor activity and reward-related behaviour has fostered five ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

Geregisseerd Dopaminerge Neuron Differentiatie van menselijke pluripotente stamcellen

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

De neuromusculaire junctie: Meten Synapse Maat, Fragmentatie en Veranderingen in Synaptic Protein dichtheid met behulp van confocale fluorescentie microscopie

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System

Langdurige Continue EEG-monitoring in kleine knaagdieren modellen van de ziekte bij de mens met behulp van de Epoch draadloze transmitter System

Many progressive neurologic diseases in humans, such as epilepsy, require pre-clinical animal models that slowly develop the disease in order to test ...

High-density Electroencephalographic Acquisition in a Rodent Model Using Low-cost and Open-source Resources

High-density Elektro-Aankoop in een knaagdier Model met behulp van goedkope en Open-source Resources

Advanced electroencephalographic analysis techniques requiring high spatial resolution, including electrical source imaging and measures of network ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

Low-Density primaire hippocampus Neuron Cultuur

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Beoordeling van Dopaminerge homeostase in muizen door gebruik van High-performance Liquid Chromatography analyse en Synaptosomal Dopamine opname

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...