Name: semi-quantitative determination of dopaminergic neuron density in the substantia nigra of rodent models using automated image analysis
Uploaded: 2021-02-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis at JoVE.com

Yazarlar, Üniversite Sağlık Ağı'ndaki İleri Optik Mikroskopi Tesisi'ndeki (AOMF) tüm personele bu protokolün geliştirilmesinde zamanları ve yardımları için teşekkür eder.

Tüm prosedürler Üniversite Sağlık Ağı Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylandı ve Kanada Hayvan Bakımı Konseyi tarafından belirlenen kılavuz ve yönetmeliklere uygun olarak gerçekleştirildi.
1. Stereotaktik enjeksiyon
<ol><li>Çift ev yetişkin dişi Sprague-Dawley sıçanları (250-280 g) ahşap yatak ve yiyecek ve suya ad lib erişimi ile kafeslerde. Hayvan kolonisini sabit sıcaklık ve nem ile düzenli 12 saat açık / karanlık döngüde (06:30'da ışıklar) koruyun.<...

<ol>
	<li>Kalia, L. V., Lang, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parkinson's+disease.">Parkinson's disease.</a> Lancet. 386 (9996), 896-912 (2015).</li><li>West, M. J., Slomianka, L., Gundersen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+thesubdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator.">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in thesubdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> The Anatomical Record. 231 (4), 482-497 (1991).</li><li>Nair-Roberts, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimates+of+dopaminergic,+GABAergic+and+glutamatergic+neurons+in+the+ventral+tegmental+area,+substantia+nigra+and+retrorubral+field+in+the+rat.">Stereological estimates of dopaminergic, GABAergic and glutamatergic neurons in the ventral tegmental area, substantia nigra and retrorubral field in the rat.</a> Neuroscience. 152 (4), 1024-1031 (2008).</li><li>Golub, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurostereology+protocol+for+unbiased+quantification+of+neuronal+injury+and+neurodegeneration.">Neurostereology protocol for unbiased quantification of neuronal injury and neurodegeneration.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 7, 196 (2015).</li><li>Schmitz, C., Hof, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design-based+stereology+in+neuroscience.">Design-based stereology in neuroscience.</a> Neuroscience. 130 (4), 813-831 (2005).</li><li>Penttinen, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementation+of+deep+neural+networks+to+count+dopamine+neurons+in+substantia+nigra.">Implementation of deep neural networks to count dopamine neurons in substantia nigra.</a> European Journal of Neuroscience. 48 (6), 2354-2361 (2018).</li><li>Yousef, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron+loss+and+degeneration+in+the+progression+of+TDP-43+in+frontotemporal+lobar+degeneration.">Neuron loss and degeneration in the progression of TDP-43 in frontotemporal lobar degeneration.</a> Acta Neuropathologica Communications. 5 (1), 68 (2017).</li><li>Koprich, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+human+A53T+alpha-synuclein+in+the+rat+substantia+nigra+using+a+novel+AAV1/2+vector+produces+a+rapidly+evolving+pathology+with+protein+aggregation,+dystrophic+neurite+architecture+and+nigrostriatal+degeneration+with+potential+to+model+the+pathology+of+Parkinson's+disease.">Expression of human A53T alpha-synuclein in the rat substantia nigra using a novel AAV1/2 vector produces a rapidly evolving pathology with protein aggregation, dystrophic neurite architecture and nigrostriatal degeneration with potential to model the pathology of Parkinson's disease.</a> Molecular Neurodegeneration. 5, 43 (2010).</li><li>Koprich, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+neurodegeneration+or+endogenous+compensation+in+an+animal+model+of+Parkinson's+disease+produced+by+decreasing+doses+of+alpha-synuclein.">Progressive neurodegeneration or endogenous compensation in an animal model of Parkinson's disease produced by decreasing doses of alpha-synuclein.</a> PLoS One. 6 (3), 17698 (2011).</li><li>McKinnon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early-onset+impairment+of+the+ubiquitin-proteasome+system+in+dopaminergic+neurons+caused+by+alpha-synuclein.">Early-onset impairment of the ubiquitin-proteasome system in dopaminergic neurons caused by alpha-synuclein.</a> Acta Neuropathologica Communications. 8 (1), 17 (2020).</li><li>Henderson, M. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spread+of+alpha-synuclein+pathology+through+the+brain+connectome+is+modulated+by+selective+vulnerability+and+predicted+by+network+analysis.">Spread of alpha-synuclein pathology through the brain connectome is modulated by selective vulnerability and predicted by network analysis.</a> Nature Neuroscience. 22 (8), 1248-1257 (2019).</li><li>Ip, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV1/2-induced+overexpression+of+A53T-alpha-synuclein+in+the+substantia+nigra+results+in+degeneration+of+the+nigrostriatal+system+with+Lewy-like+pathology+and+motor+impairment:+a+new+mouse+model+for+Parkinson's+disease.">AAV1/2-induced overexpression of A53T-alpha-synuclein in the substantia nigra results in degeneration of the nigrostriatal system with Lewy-like pathology and motor impairment: a new mouse model for Parkinson's disease.</a> Acta Neuropathologica Communications. 5 (1), 11 (2017).</li><li>Webster, J. D., Dunstan, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-slide+imaging+and+automated+image+analysis:+considerations+and+opportunities+in+the+practice+of+pathology.">Whole-slide imaging and automated image analysis: considerations and opportunities in the practice of pathology.</a> Veterinary Pathology. 51 (1), 211-223 (2014).</li></ol>

PD'nin klinik öncesi modellerinde dopaminerjik sistemin bütünlüğünün güvenilir bir şekilde değerlendirilmesi, potansiyel hastalık değiştirici terapötiklerin etkinliğini belirlemek için kritik öneme sahiptir. Bu nedenle, histopatolojik verilerin güvenilirliğini ve tekrarlanabilirliğini azaltabilecek potansiyel kafa karıştırıcıları kontrol etmek ve en aza indirmek önemlidir. Dikkatli nicel sonuçlar, tek başına nitel veya yarı nicel açıklamalardan daha fazla bilgi sağlayabilir. Aynı zamand...

Parkinson hastalığı (PD), α-sinüklein (α-syn) içeren protein agregalarının varlığı ve substantia nigra pars compacta (SNpc)1'dedopaminerjik nöronların tercihli kaybı ile karakterize yaygın bir nörodejeneratif hareket bozukluğudur. Dopaminerjik nöron sayısının ölçülmesi, nigrostriatal sistemin bütünlüğünün değerlendirilmesine izin verdiği için PD araştırmasının hayati bir parçasıdır, bu nedenle potansiyel hastalık değiştirici terapötiklerin etkinliğini değerlendirmek için önemli bir uç nokta sağlar. Şu anda, hücre sayısının ölçülmesi için standart, üç boyutlu (3D) yapılarda hacimsel özellikleri tahmin etmek için dokunun iki boyutlu (2D) kesitlerini kullanan tarafsız stereolojiksayımdır 2,3,4. Modern tasarım tabanlı stereolojik yöntemler, kapsamlı rastgele örnekleme prosedürleri uygular ve potansiyel yapıtları ve sistematik hataları önlemek için sayım protokolleri (problar olarak bilinir) uygular ve farklılıkların hayvanlar arası varyasyondan sadece biraz daha büyük güvenilir bir şekilde tespit edilmesine izin verir5. Stereology in vivo histolojik çalışmalar için güçlü bir analitik araç sağlarken, zaman yoğundur, tek tip numune hazırlamayı varsayar ve klinik öncesi çevirisel araştırma için giderek daha fazla gerekli olan verimliliği etkileyebilecek birkaç adımda doğrulama gerektirir.
Dijital bilimdeki son teknolojik gelişmeler, bir yandan stereomikroskop olmadan patolojinin daha verimli değerlendirilmesi için yeni uygulamaların benimsenmesini mümkün getirirken, bir yandan da tarafsız stereolojinin bir vekili olarak bir ihtiyacı dolduruyor. Bu yöntemler hızı arttırır, insan hatasını azaltır vesterolojik tekniklerin tekrarlanabilirliğini artırır6,7. HALO, dijital patolojide nicel doku analizi için böyle bir görüntü analizi platformudur. Çeşitli modüllerden oluşur ve örüntü tanıma algoritmalarını kullanarak tüm doku bölümlerinde hücre bazında morfolojik ve çoklanmış ifade verilerini raporlar. Cytonükleer FL modülü, çekirdek veya sitoplazmadaki floresan belirteçlerin immünofluoresan pozitifliğini ölçer. Bu, her işaretleyici için pozitif hücre sayısının ve her hücrenin yoğunluk puanının bildirilmesini sağlar. Modül, dopaminerjik nöronların ölçülmesi için gerekli olmasa da, bireysel hücre boyutları ve yoğunluk ölçümleri sağlamak için uyarlanabilir.
Bu çalışmanın amacı, nigral nörodejenerasyon 8 ,9,10'undahaönce doğrulanmış viral vektör bazlı α-syn sıçan modeli ile bu yöntemi doğrulamaktır. Bu modelde, insan mutant A53T α-syn, SNpc'de adeno ilişkili virüs hibrid serotip 1/2'nin (AAV1/2) stereotaktik enjeksiyonu ile ifade edilir ve 6 haftalık bir süre boyunca önemli nörodejenerasyon ile sonuçlanır. Kontrallateral uninjected SNpc, bazı çalışmalarda, enjekte edilen taraf için bir iç kontrol görevi görebilir. Daha yaygın olarak, hayvanların bir kontrol kohortuna AAV-Boş Vektör (AAV-EV) enjeksiyonu negatif kontrol olarak kullanılır. Otomatik bir görüntü analiz yazılımı kullanarak 6 hafta sonra enjekte edilen SNpc'de kalan dopaminerjik nöronların yoğunluğunu tahmin etmek için adım adım bir kılavuz sunuyoruz (Şekil 1).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>A-Syn Antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>32-8100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABC Elite</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>PK-6102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 secondary antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 secondary antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-28180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alkaline phosphatase-conjugated anti-rabbit igG</td>
			<td>Jackson Immuno</td>
			<td>111-055-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated anti-mouse IgG</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>BA-9200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAKO fluorescent mouting medium</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HALO&#8482;</td>
			<td>Indica Labs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histo-Clear II</td>
			<td>Diamed</td>
			<td>HS202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Peroxidase substrate</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM880 Confocal Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeuN Antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>S-1000-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT</td>
			<td>Tissue-Tek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>PAR070.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sliding microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SM2010 R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Investigator</td>
			<td>MBF Bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>BioShop</td>
			<td>SUC700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TH Antibody</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P21962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaMount mounting medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector Blue Alkaline Phosphatase substrate</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SK-5300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen Black Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen Blue Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

semi-quantitative determination of dopaminergic neuron density in the substantia nigra of rodent models using automated image analysis

Substantia nigradaki dopaminerjik nöronların sayısının tahmin edilmesi klinik öncesi Parkinson hastalığı araştırmalarında önemli bir yöntemdir. Şu anda, tarafsız stereolojik sayım bu hücrelerin ölçülmesi için standarttır, ancak tüm projeler için mümkün olmayabilecek zahmetli ve zaman alıcı bir süreç olmaya devam etmektedir. Burada, önceden tanımlanmış bir ilgi alanında etiketli hücrelerin miktarını doğru bir şekilde tahmin edebilen bir görüntü analizi platformunun kullanımını açıklıyoruz. Sıçan beyninde bu analiz yöntemi için adım adım bir protokol açıklıyoruz ve substantia nigradaki mutant α-sinüklein ekspresyumu nedeniyle tirozin hidroksilaz pozitif nöronlarında önemli bir azalma tanımlayabileceğini gösteriyoruz. Bu metodolojiyi tarafsız stereoloji ile elde edilen sonuçlarla karşılaştırarak doğruladık. Birlikte ele alındığında, bu yöntem dopaminerjik nöron sayısındaki değişiklikleri tespit etmek için zaman verimli ve doğru bir süreç sağlar ve bu nedenle müdahalelerin hücre sağkalımı üzerindeki etkisinin verimli bir şekilde belirlenmesi için uygundur.

Yukarıdaki yöntemleri AAV enjeksiyonlarından 6 hafta sonra toplanan beyin dokusuna uygulayarak, sıçan beyninin SNpc'sinde mutant A53T α-syn (AAV-A53T) ifade eden AAV'nin stereotaktik enjeksiyonunun, kontrol olarak boş vektör AAV (AAV-EV) enjeksiyonuna kıyasla dopaminerjik nöronların yoğunluğunda önemli bir azalmaya neden olduğunu gösterdik (Şekil 5A,B). AAV-EV enjekte edilen sıçanların SNpc'sinde ortalama TH pozitif nöron/mm2 sayısı 276.2 ±...

Watch this Scientific Journal Video about Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis at JoVE.com

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

Burada sıçan substantia nigra pars compacta dopaminerjik nöron sayısının yarı nicel belirlenmesi için otomatik bir yöntem sunuyoruz.

Otomatik Görüntü Analizi Kullanılarak Kemirgen Modellerinin Substantia Nigra'sında Dopaminerjik Nöron Yoğunluğunun Yarı Nicel Belirlenmesi

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...

Substantia nigrada dopaminerjik nöron sayısının tahmin edilmesi Parkinson hastalığı araştırmalarında önemli bir sonuç ölçüsüdür. Bu protokol, nöron sayısını tahmin etmek için gereken iş yükünü önemli ölçüde kısaltır. Bu yöntem, dopaminerjik nöron sayısındaki değişiklikleri tespit etmek için zaman verimli ve doğru bir süreç sağlar ve müdahalelerin hücre sağkalımı üzerindeki etkisini belirlemek için uygundur.Bu yöntem, geleneksel stereolojik yöntemlere göre maliyet ve zaman avantajlarını korurken, farklı beyin bölgelerindeki nöronların doğru sayılarını sağlamak için kolayca uyarlanabilir. IHC görüntülerini yakalamak için yazılımı 10X büyütmede bir konfokal mikroskopla birleştirilmiş olarak kullanın. Toplam 1,5 mikro metre geniş bir düzlemi yakalamak için pim deliğini 1,5 alan birimine açın ve odağı beynin enjekte edilen tarafına ayarlayın.Edinme sekmesinde döşeme tarama görüntüleme seçeneğini işaretleyin ve boyutları 10'a dört olarak ayarlayın. Alma modu panelinin altında, döşeme tarama görüntüleri arasında dikiş işareti olmaması için yakınlaştırmayı 1,1 olarak ayarlayın. Yüksek kaliteli görüntü alımını sağlamak için çerçeve boyutunu 1024 x 1024 piksel ve ortalamayı ikiye ayarlayın.Kanallar panelinde bir parçayı Alexa 488'e ve ikinci parçayı Alexa 555'e ayarlayın. Slaydı sahne alanına yükleyin ve güçlü bir TH boyamaya sahip bir bölüm seçin. Satın alma panelinde canlı olarak tıklayın.Kanallar panelinde lazer gücünü ve kazancını sinyali en üst düzeye çıkaran ve arka plan gürültüsünü sınırlayan seviyelere ayarlayın. Sinyallerin aşırı pozlanmamasını sağlamak için aralık göstergesini kullanın. Bunu birden çok slaytla tekrarlayın.Edinme sekmesinde pozisyonlar kutusunu işaretleyin. Görüntülemeye başlamak için göz parçasını kullanın ve pozitif TH lekesi gösteren ilk bölümü seçin. Ardından odağı ilgi çekici noktaya ayarlayın ve sahneyi bölümün orta çizgisine taşıyın.Bu, X, Y ve Z eksenlerindeki konumu kaydeder ve tüm bölümü yakalayan bir döşeme taraması görüntüler. Eklenmemiş bir site de dahil olmak üzere diğer tüm slaytlar için bunu yineleyin. Uygun yazılımı kullanarak görüntü dosyalarını ayırıp otomatik görüntü analiz yazılımına aktarın.Substantia nigra pars compacta'nın etrafına ek açıklama çizmek için kalem ek açıklama aracını seçerek ilgi çekici bir bölge tanımlayın. Analiz sekmesine gidin ve açılır çözümleme menüsünden gerçek zamanlı ayarlamayı seçin. Bu, bölüm görüntüsünde analiz parametrelerinin gerçek zamanlı olarak değiştirilmesine izin sağlayan ayrı bir pencere açar.Analiz büyütme bölümünün altında uygun görüntü yakınlaştırmayı seçin. Hücre algılama bölümünün altında TH boyama için kullanılan boya olarak nükleer boyayı seçin. Zaman ayarlama penceresini dikkatle izlerken nükleer kontrast eşiğini, minimum nükleer yoğunluğu, nükleer segmentasyon agresifliğini ve nükleer boyut ayarlarını yapın.Bu işlemi birden çok örnekle tekrarlayın. Uygun sayıda görüntü örneklendikten ve gerçek zamanlı ayarlama buna göre ayarlandıktan sonra, analiz ayarlarını ayarlar eylemleri açılır menüsüne kaydedin. Analiz edilecek tüm görüntüleri seçin ve analize tıklayın.Yeni kaydedilmiş analiz ayarını seçin ve analiz penceresinde ek açıklama katmanları kutusunu işaretleyin, sonra birinci katmanı işaretleyin ve çözümle'yi tıklatın. Nesne çözümleme verilerini dışa aktarma seçeneğini belirleyerek tüm bölümlerin özet çözümleme verilerini dışa aktarmayı tamamladıktan sonra. Bu veri kümesi, bir toksine veya terapötik yanıt olarak hücre boyutundaki değişiklikleri incelemek için kullanılabilir.Adeno ilişkili virüs veya AAV enjeksiyonlarından altı hafta sonra, sıçan beynindeki substantia nigra içine mutant A53T alfa sinükleini ifade eden AAV'nin stereotaktik enjeksiyonu dopaminerjik nöronların yoğunluğunda önemli bir azalmaya neden oldu. AAV-A35T enjekte edilen sıçanların substantia nigra'sında kare başına ortalama TH pozitif nöron sayısı, AAV boş vektörü ile enjekte edilen sıçanlara kıyasla önemli ölçüde azaldı. Benzer gözlemler tarafsız stereology kullanılarak yapılmıştır.Bu protokolü denerken, yazılımın yalnızca eğitilmiş olduğu kadar yararlı olduğunu unutmayın. Bu nedenle tek bir hücrenin tek bir hücre olarak tanımlanmasını sağlamak için zaman ve özen verilmelidir. Yazılım, tedavilerin protein seviyelerini modüle edip edep gösteremeyeceği belirlemek için alfa-sinüklein gibi diğer ilgi alanlarının floresan yoğunluğunu ölçmek için uyarlanabilir.Bu teknik, birden fazla potansiyel terapötikin dopaminerjik nöron yoğunluğu üzerindeki etkisini test ederken daha fazla verimlilik sağladı.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Automated Sholl Analysis of Digitized Neuronal Morphology at Multiple Scales

Çoklu Ölçeklerde Sayısallaştırılmış Nöronal Morfoloji Otomatik Sholl Analizi

Neuronal morphology plays a significant role in determining how neurons function and communicate1-3.  Specifically, it affects the ability of neurons to ...

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

Dopaminerjik Nöron Geliştirme Gen Fonksiyonunun Çalışılması için Chick orta beyin içinde ovo Elektroporasyon yılında

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Kullanarak Fare Serebral Korteks ve Hippocampus Görselleştirme ve Dendritler ve Spine Genetik Manipülasyon<em&gt; Utero olarak</em&gt; Elektroporasyon

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Comprehensive Profiling of Dopamine Regulation in Substantia Nigra and Ventral Tegmental Area

Substantia nigra ve ventral Tegmental Bölgesi Dopamin Yönetmelik Kapsamlı Profilleme

Dopamine is a vigorously studied neurotransmitter in the CNS. Indeed, its involvement in locomotor activity and reward-related behaviour has fostered five ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent Kök Hücreleri dopaminerjik Nöron Farklılaşma Yönetmen

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Nöromusküler Kavşak: Ölçme Synapse Boyut, Konfokal Floresan Mikroskobu kullanılarak sinaptik Protein Yoğunluk Parçalanma ve Değişiklikler

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System

Epoch Kablosuz Verici Sisteminin Kullanılması İnsan Hastalığı Küçük Kemirgen Modelleri Uzun süreli Sürekli EEG İzleme

Many progressive neurologic diseases in humans, such as epilepsy, require pre-clinical animal models that slowly develop the disease in order to test ...

High-density Electroencephalographic Acquisition in a Rodent Model Using Low-cost and Open-source Resources

Bir Kemirgen Modelinde Yüksek yoğunluklu Elektroensefalografik Toplama Düşük maliyetli ve Açık kaynak Kaynakları Kullanma

Advanced electroencephalographic analysis techniques requiring high spatial resolution, including electrical source imaging and measures of network ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

Düşük Yoğunluk İlköğretim Hipokampal Nöron Kültürü

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Dopaminerjik Homeostasis farelerde yüksek performanslı sıvı Kromatografi analizi ve Synaptosomal dopamin alımı kullanımı tarafından değerlendirilmesi

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...