Name: examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease
Uploaded: 2021-01-18T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

نود أن نشكر الدكتور أليكس فولتشر، وموناش مايكرو إيماجينج للمساعدة في صيانة المجهر والإعداد. 129- ويساند المعهد الأسترالي للطب التجديدي منح من حكومة ولاية فيكتوريا والحكومة الأسترالية. تم تمويل هذا العمل من خلال منحة مشروع جمعية ضمور العضلات (USA) إلى P.D.C (628882).

تم تنفيذ صيانة سمك الحمار الوحشي وفقا لإجراءات التشغيل القياسية التي وافقت عليها لجنة أخلاقيات الحيوان في جامعة موناش بموجب ترخيص مستعمرة التربية ERM14481.
1. تحديد النمط الجيني للأجنة الحية باستخدام منصة جينوتيبينج الجنين.
<ol><li>تخدير 3 أيام بعد الإخصاب (dpf) أجنة حمار وحشي بإضا?...

<ol>
	<li>Egan, B., Zierath, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+Metabolism+and+the+Molecular+Regulation+of+Skeletal+Muscle+Adaptation.">Exercise Metabolism and the Molecular Regulation of Skeletal Muscle Adaptation.</a> Cell Metabolism. 17 (2), 162-184 (2013).</li><li>Seale, P., Sabourin, L. A., Girgis-Gabardo, A., Mansouri, A., Gruss, P., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells.">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li><li>Relaix, F., Rocancourt, D., Mansouri, A., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Pax3/Pax7-dependent+population+of+skeletal+muscle+progenitor+cells.">A Pax3/Pax7-dependent population of skeletal muscle progenitor cells.</a> Nature. 435 (7044), 948-953 (2005).</li><li>Sousa-Victor, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geriatric+muscle+stem+cells+switch+reversible+quiescence+into+senescence.">Geriatric muscle stem cells switch reversible quiescence into senescence.</a> Nature. 506 (7488), 316-321 (2014).</li><li>Egerman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GDF11+Increases+with+Age+and+Inhibits+Skeletal+Muscle+Regeneration.">GDF11 Increases with Age and Inhibits Skeletal Muscle Regeneration.</a> Cell Metabolism. 22 (1), 164-174 (2015).</li><li>Emery, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+muscular+dystrophies.">The muscular dystrophies.</a> The Lancet. 359 (9307), 687-695 (2002).</li><li>Emery, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Duchenne muscular dystrophy. , (1993).</li><li>Anne Helbling-Leclerc, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+laminin+&#945;2-chain+gene+(LAMA2)+cause+merosin-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">Mutations in the laminin &#945;2-chain gene (LAMA2) cause merosin-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Nature Genetics. (11), 216-218 (1995).</li><li>Campbell, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+muscular+dystrophies:+loss+of+cytoskeleton-extracellular+matrix+linkage.">Three muscular dystrophies: loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage.</a> Cell. 80 (5), 675-679 (1995).</li><li>Cerletti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient,+functional+engraftment+of+skeletal+muscle+stem+cells+in+dystrophic+muscles.">Highly efficient, functional engraftment of skeletal muscle stem cells in dystrophic muscles.</a> Cell. 134 (1), 37-47 (2008).</li><li>Dumont, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin+expression+in+muscle+stem+cells+regulates+their+polarity+and+asymmetric+division.">Dystrophin expression in muscle stem cells regulates their polarity and asymmetric division.</a> Nature Medicine. 21 (12), 1455-1463 (2015).</li><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+disease:+zebrafish+swim+into+view.">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nature Reviews. Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).</li><li>Gurevich, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+division+of+clonal+muscle+stem+cells+coordinates+muscle+regeneration+in+vivo.">Asymmetric division of clonal muscle stem cells coordinates muscle regeneration in vivo.</a> Science. 353 (6295), (2016).</li><li>Lambert, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+system+for+rapid+cellular+extraction+from+live+zebrafish+embryos+and+larvae:+Development+and+application+to+genotyping.">An automated system for rapid cellular extraction from live zebrafish embryos and larvae: Development and application to genotyping.</a> PloS One. 13 (3), 0193180 (2018).</li><li>Berger, J., Sztal, T., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+birefringence+readily+measures+the+level+of+muscle+damage+in+zebrafish.">Quantification of birefringence readily measures the level of muscle damage in zebrafish.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 423 (4), 785-788 (2012).</li><li>Hall, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+candyfloss+mutant+implicates+extracellular+matrix+adhesion+failure+in+laminin+alpha2-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">The zebrafish candyfloss mutant implicates extracellular matrix adhesion failure in laminin alpha2-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (17), 7092-7097 (2007).</li><li>Otten, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xirp+Proteins+Mark+Injured+Skeletal+Muscle+in+Zebrafish.">Xirp Proteins Mark Injured Skeletal Muscle in Zebrafish.</a> PLOS ONE. 7 (2), 31041 (2012).</li><li>Otten, C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-inflicted+Injury+of+Zebrafish+Embryonic+Skeletal+Muscle.">Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (71), e4351 (2013).</li><li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Stem+Cells+Undergo+Extensive+Clonal+Drift+during+Tissue+Growth+via+Meox1-Mediated+Induction+of+G2+Cell-Cycle+Arrest.">Muscle Stem Cells Undergo Extensive Clonal Drift during Tissue Growth via Meox1-Mediated Induction of G2 Cell-Cycle Arrest.</a> Cell Stem Cell. 21 (1), 107-119 (2017).</li><li>Ruparelia, A. A., Ratnayake, D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+skeletal+muscle+growth+and+regeneration+in+amniotes+and+teleosts:+Emerging+themes.">Stem cells in skeletal muscle growth and regeneration in amniotes and teleosts: Emerging themes.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews. Developmental Biology. 9 (2), 365 (2020).</li></ol>

يحرك تجديد العضلات الهيكلية الخلايا الجذعية العضلية المقيمة في الأنسجة الملزمة ، والتي يتم تغيير وظيفتها في العديد من أمراض العضلات مثل ضمور العضلات ، مما يعوق في وقت لاحق عملية تجديد العضلات. هنا، ونحن نصف بروتوكول الإنتاجية العالية لفحص تجديد العضلات في نماذج حمار وحشي حية من أمراض الع...

العضلات الهيكل العظمي تمثل 30-50٪ من كتلة جسم الإنسان، وليس فقط لا غنى عنه للحركة، ولكن أيضا بمثابة جهاز الأيض والتخزين الحرجة1. على الرغم من كونها ما بعد العضلات، والهيكل العظمي ديناميكية للغاية ويحتفظ قدرة تجديدية هائلة بعد الإصابة. ويعزى ذلك إلى وجود الخلايا الجذعية المقيمة في الأنسجة (وتسمى أيضا خلايا القمر الصناعي) ، وتقع تحت الصفيحة القاعدية من الألياف العضلية وتتميز بعوامل النسخ المقترنة بروتين مربع 7 (pax7) و / أو يقترن مربع البروتين 3 (pax3) ، من بين أمور أخرى2،3. بعد الإصابة ، يتم تنشيط الخلية الفضائية وتخضع لانتشار الخلايا لتوليد مجموعة من الخلايا العضلية ، والتي تفرق في وقت لاحق لتشكيل ألياف عضلية جديدة. وتتأثر سلسلة محافظة للغاية من الإشارات المؤيدة للتجدد تنظيم تنشيط الخلايا الفضائية وإصلاح العضلات قوية في ظروف مختلفة مثل اعتلالات عضلية والشيخوخة الهواستاتيكي4،5.
واحدة من هذه المجموعة المتنوعة من اعتلال عضلي هو ضمور العضلات، وتتميز الهزال التدريجي العضلات وانحطاط6. هذه الأمراض هي نتيجة للطفرات الوراثية في البروتينات الرئيسية، بما في ذلك الديستروفين واللامين-α2 (LAMA2)، المسؤولة عن تعلق ألياف العضلات إلى مصفوفة خارج الخلية7،8. وبالنظر إلى أن البروتينات المتورطة في ضمور العضلات تلعب مثل هذا الدور المركزي في الحفاظ على بنية العضلات، لسنوات عديدة كان يعتقد أن الفشل في هذه العملية هو الآلية المسؤولة عن مرض الأمراض المسببة للأمراض9. ومع ذلك ، فقد حددت الدراسات الحديثة عيوبا في تنظيم الخلايا الجذعية العضلية وضعفا لاحقا في تجديد العضلات كأساس ثان ممكن لعلم أمراض العضلات الملاحظ في ضمور العضلات10،11. على هذا النحو، هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات للتحقيق في كيفية ضعف في وظيفة الخلايا الجذعية في العضلات والعناصر المتخصصة المرتبطة بها يساهم في ضمور العضلات.
على مدى العقد الماضي، ظهر حمار وحشي(دانيو ريو)كنموذج الفقاريات الهامة للنمذجة المرض12. ويعزى ذلك إلى التطور الخارجي السريع لجنين الحمار الوحشي ، إلى جانب وضوحه البصري ، والذي يسمح بالتصور المباشر لتشكيل العضلات والنمو والوظيفة. بالإضافة إلى ذلك، ليس فقط هو تطوير وهيكل العضلات الحفاظ عليها للغاية في حمار وحشي، كما أنها تعرض عملية الحفاظ عليها للغاية من تجديد العضلات13. وبالتالي، تمثل سمك الحمار الوحشي نظاما ممتازا لدراسة علم الأحياء المرضية لأمراض العضلات، واستكشاف كيفية تأثر تجديد العضلات فيه. وتحقيقا لهذه الغاية، قمنا بتطوير طريقة تمكن من الدراسة في الوقت المناسب لتجديد العضلات الهيكل العظمي في نماذج حمار وحشي من أمراض العضلات. يتضمن خط أنابيب الإنتاجية العالي هذا طريقة للنمط الجيني للأجنة الحية14، وبعد ذلك يتم إجراء إصابة طعنة إبرة ويتم تصوير مدى تجديد العضلات باستخدام المجهر الخفيف المستقطب. وبالتالي فإن استخدام هذه التقنية تكشف عن القدرة على تجديد العضلات في نماذج حمار وحشي من أمراض العضلات.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 gauge needles</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN-3013R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri Dishes</td>
			<td>Pacific Laboratory Products PT</td>
			<td>S9014S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA extraction chips</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG chips</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo genotyping platform</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG base unit</td>
			<td>Zebrafish Embryo Genotyper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pipette</td>
			<td>Hirschmann</td>
			<td>9260101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass plate dish</td>
			<td>WPI</td>
			<td>FD35-100</td>
			<td>Commonly referred to as FluoroDish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermoline Scientific</td>
			<td>TEI-43L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pipette</td>
			<td>Livingstone</td>
			<td>PTP03-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing microscope</td>
			<td>Abrio</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease

العضلات الهيكل العظمي لديه قدرة ملحوظة على تجديد بعد الإصابة, التي تحركها الخلايا الجذعية العضلات المقيمة ملزمة. بعد الإصابة ، يتم تنشيط الخلايا الجذعية العضلية وتخضع لانتشار الخلايا لتوليد مجموعة من الخلايا العضلية ، والتي تفرق لاحقا لتشكيل ألياف عضلية جديدة. في العديد من حالات إهدار العضلات، بما في ذلك ضمور العضلات والشيخوخة، تضعف هذه العملية مما يؤدي إلى عدم قدرة العضلات على التجدد. يتم الحفاظ على عملية تجديد العضلات في حمار وحشي للغاية مع أنظمة الثدييات توفير نظام ممتاز لدراسة وظيفة الخلايا الجذعية العضلية وتجديدها، في ظروف الهزال العضلي مثل ضمور العضلات. هنا، نقدم طريقة لفحص تجديد العضلات في نماذج حمار وحشي من أمراض العضلات. تتضمن الخطوة الأولى استخدام منصة جينية تسمح بتحديد النمط الجيني لليرقات قبل الإصابة. بعد تحديد النمط الجيني ، يتم إصابة العضلات باستخدام طعنة إبرة ، وبعد ذلك يتم استخدام المجهر الخفيف المستقطب لتحديد مدى تجديد العضلات. ولذلك نحن نقدم خط أنابيب الإنتاجية العالية التي تسمح بفحص تجديد العضلات في نماذج حمار وحشي من أمراض العضلات.

القدرة على قياس birefringence من العضلات الهيكل العظمي يوفر طريقة غير الغازية ولكن استنساخها للغاية لفحص ومقارنة مستويات تلف العضلات, ودراسة تجديد العضلات في الجسم الحي. نتائج Birefringence من حيود الضوء المستقطب من خلال مجموعة زائفة بلورية من ساركوميرس العضلات15، ...

Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease

يحرك تجديد العضلات الهيكلية الخلايا الجذعية العضلية المقيمة في الأنسجة، والتي تضعف في العديد من أمراض العضلات مثل ضمور العضلات، وهذا يؤدي إلى عدم قدرة العضلات على التجدد. هنا، ونحن نصف بروتوكول يسمح بفحص تجديد العضلات في نماذج حمار وحشي من أمراض العضلات.

فحص تجديد العضلات في نماذج حمار وحشي من أمراض العضلات

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, ...

الهدف العام لهذا البروتوكول هو دراسة وتحديد تجديد العضلات في نموذج حمار وحشي لمرض العضلات. توفر هذه الطريقة خط أنابيب عالي الإنتاجية ليس فعالا من حيث التكلفة فحسب ، بل يمكن استنساخه أيضا بشكل كبير في تسجيل الإمكانات التجديدية للعضلات المريضة في بيئة الجسم الحي. إظهار الإجراء معي سيكون Avnika روبارليا، زميل باحث في المعهد الأسترالي للطب التجديدي.للكتابة الجينية الجنين الحية، قشر فيلم واقية واضحة من السطح العلوي من رقاقة استخراج الحمض النووي من 24 غرفة واستخدام تلميح مرشح 20 ميكرولتر مع طرف قطع لنقل جنين واحد مخدر في 13 ميكرولتر من المتوسط الجنين في كل غرفة من رقاقة. عندما يتم تحميل جميع الأجنة، قم بتركيب الشريحة بلطف على منصة جينوتيبينج جنين حمار وحشي عن طريق وضع جانب واحد في البداية، تليها بقية الشريحة. لصق غطاء المنصة المغناطيسية على الشريحة لمنع تبخر الجنين المتوسط خلال بروتوكول استخراج الحمض النووي وإغلاق الغطاء.تعيين وحدة قاعدة إلى 2.4 فولت، 0.051 أمبير، و 0.12 واط وبدء بروتوكول استخراج الحمض النووي. يجب أن تبدأ المنصة في الاهتزاز ، والتي يمكن تقييمها عن طريق لمس الغطاء بلطف. أثناء تشغيل البرنامج، قم بإعداد لوحة من 24 بئرا عن طريق إضافة ملليلتر واحد من متوسط الجنين إلى كل بئر وتسمية أنابيب الشريط ذات ثمانية آبار لاستخدامها في جمع مواد الحمض النووي من كل جنين.بعد ثماني دقائق من الاستخراج، اضغط على زر التشغيل/إيقاف التشغيل لإيقاف اهتزاز المنصة، وإزالة الغطاء المغناطيسي برفق ورفع الشريحة من المنصة. نقل 10 ميكرولتر من المتوسط الجنين من غرفة واحدة إلى البئر المناسب للأنبوب الشريط ثمانية آبار وإضافة على الفور قطرتين من المتوسط الجنين الطازج إلى الغرف. نقل الجنين من الغرفة إلى بئر مناسبة من لوحة 24 جيدا المعدة سابقا.عندما يتم نقل جميع الأجنة، ضع اللوحة في حاضنة 28 درجة مئوية. إجراء المقايسات الجينية المناسبة في المصب على المواد الوراثية التي تم جمعها في أنابيب الشريط ثمانية آبار لتحديد النمط الجيني لكل جنين. بمجرد تحديد النمط الجيني لكل جنين، قم بنقل الأجنة إلى أطباق بيتري عيار 90 ملليمترا التي تحتوي على 25 ملليلتر من الماء المتوسط واحتضان الصفائح عند 28 درجة مئوية حتى إصابة العضلات.في أربعة أيام بعد الإخصاب ، استخدم ماصة لنقل يرقة تخدير واحدة إلى طبق بيتري جديد وإزالة أي وسيطة زائدة بعناية من الطبق تحت مجهر تشريح. توجيه الأسماك بحيث الرأس على اليسار، الذيل هو على اليمين، والمنطقة الظهرية هو أعلى، والمنطقة البطنية هو أسفل، واستخدام إبرة قياس 30 لجعل طعنة دقيقة سريعة في واحد إلى اثنين من somites في العضلات epaxial فوق المسام الشرجية والأفقية إلى الميوسبتوم. ضع قطرة من متوسط الجنين على سمك الحمار الوحشي المصاب ونقل اليرقة بعناية إلى بئر واحد من طبق من 24 بئرا يحتوي على ملليلتر واحد من متوسط الجنين الطازج لكل بئر.عندما تصاب جميع اليرقات ، ضع اللوحة في حاضنة 28 درجة مئوية حتى يتم تصوير سمك الحمار الوحشي. لتحديد كمية تجديد العضلات، افتح صورة ما بعد الإصابة ليوم واحد في برنامج تحليل الصور المناسب واستخدم أداة المضلع لرسم شكل حول موقع الجرح. استخدم البرنامج لقياس المنطقة ويعني كثافة ثنائية التخبير في المنطقة ونسخ هذه القيم إلى الخلايا D3 و E3 من القالب المقدم.رسم منطقتين إضافيتين تمتد كل منهما من واحد إلى اثنين من السخامات غير المصابة وقياس المنطقة ويعني كثافة ثنائية التجويف في كل من هذه المناطق. نسخ هذه القيم إلى الخلايا D4 و D5 و E4 و E5 في القالب. ثم كرر القياس لنفس المناطق في صورة ما بعد الإصابة لمدة ثلاثة أيام.عندما يتم قياس ثنائية التفحم بنفس الطريقة في جميع الصور، احسب ثنائية الefringence العادية لكل منطقة من خلال تقسيم متوسط كثافة ثنائيةefringence لكل منطقة على منطقتها. لكل نقطة زمنية، حساب متوسط birefringence تطبيع المنطقتين غير المصابين لتوفير نقطة مرجعية للعضلات غير مصاب. لتحديد مدى إصابة العضلات في اليوم الأول بعد الإصابة ، قم بتقسيم birefringence الطبيعية لمنطقة الإصابة من خلال متوسط birefringence تطبيع المناطق غير المصابة.لتحديد مدى تجديد العضلات، تقسيم birefringence تطبيع المنطقة إصابة في صورة ما بعد الإصابة ثلاثة أيام من قبل متوسط كثافة تطبيع المناطق غير المصابة في هذه المرحلة. وأخيرا، حساب مؤشر التجديد عن طريق تقسيم قيمة لمدى تجديد العضلات في اليوم الثالث بعد الإصابة على قيمة مدى إصابة العضلات في اليوم الأول بعد الإصابة. في هذا التحليل التمثيلي، تم نقل مخلب من الأجنة من صليب بين اثنين من سمك الحمار الوحشي لاما2 heterozygous إلى رقاقة استخراج الحمض النووي وجنوتية في وقت لاحق.في حين أن إصابة العضلات تؤدي إلى انخفاض في كثافة ثنائية الدماغ في اليوم الأول بعد الإصابة ، فإن التجديد الناجح للعضلات يؤدي إلى زيادة ثنائية التخبير داخل المنطقة نفسها. ومن الجدير بالذكر أيضا أنه في حين أن يرقات النوع البري تعرض كثافة ثنائية تثميط موحدة بسبب نمط العضلات الطبيعي ، فإن كثافة ثنائية التجويف في عضلة يرقات خروج المغلوب Lama2 غير متساوية ومتقطعة للغاية بسبب انخفاض سلامة العضلات. كما لوحظ ، يظهر كل من النوع البري واليرقات التي تعاني من نقص Lama2 زيادة كبيرة في كثافة ثنائية الدماغ في موقع الجرح في ثلاثة أيام بعد الإصابة مقارنة بيوم واحد بعد الإصابة ، مما يشير إلى أن العضلات قد تجددت.يكشف تحديد المؤشر التجديدي أن اليرقات التي تعاني من نقص Lama2 تظهر زيادة مذهلة في تجديد العضلات مقارنة بالحيوانات البرية. في حين أن هذا البروتوكول سيسمح لنا بتحديد أي تعديلات في قدرة العضلات على التجديد في نماذج أمراض العضلات ، يجب إجراء التحليل الخلوي والجزيئي في المصب لتحديد الآليات المسؤولة عن التغييرات الملحوظة. وقد سمحت لنا هذه الطريقة بتحديد كيفية مساهمة ضعف وظيفة الخلايا الجذعية العضلية وضعف العناصر المتخصصة المرتبطة بها في مسببات أمراض العضلات ، مما يسمح لنا بتحديد آليات جديدة للمرض.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

تحليل الزرد اليرقات الهيكل العظمي النزاهة العضلات مع ايفانز الأزرق صبغ

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

عن طريق الاستجابة أثار اللمس والحركة فحوصات لتقييم أداء العضلات وظيفة في الزرد

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

تحريض الحاد الهيكل العظمي تجديد العضلات التي Cardiotoxin حقن

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

إعداد والثقافة من الخلايا عضلي السلائف / Myoblasts الابتدائية من العضلات الهيكلية من الكبار والمسنين البشر

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

تقييم الضرر الناجم عن الشيخوخة و في فيفو إعادة برمجة في العضلات الهيكلية

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

تطبيق التحفيز المزمن لدراسة التعديلات المظهرية الهيكل العظمى والعضلات الهوس الفئران التي يسببها النشاط

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

تحديد خلايا الهيكل العظمى والعضلات الأقمار الصناعية قبل الفلورة مع Pax7 والأجسام المضادة لامينين

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

في فيفو تصوير Morphogenesis وتر العضلات في المورفولوجية الخوادر

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

الأشعة السينية الانعراج من العضلات الهيكلية Murine سليمة كأداة لدراسة الأساس الهيكلي لأمراض العضلات

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...