Name: examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease
Uploaded: 2021-01-18T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

Vi vil gerne takke Dr. Alex Fulcher, og Monash Micro Imaging for hjælp med mikroskop vedligeholdelse og opsætning. Den australske Regenerative Medicine Institute er støttet af tilskud fra staten regering Victoria og den australske regering. Dette arbejde blev finansieret af en muskelsvind Association (USA) projekt tilskud til P.D.C (628882).

Zebrafisk vedligeholdelse blev udført i henhold til standard driftsprocedurer godkendt af Monash University Animal Ethics Committee under avl koloni licens ERM14481.
1. Bestemmelse af genotypen af levende embryoner ved hjælp af en embryongenotypingplatform.
<ol><li>Bedøve 3 dage efter befrugtning (dpf) zebrafisk embryoner ved at tilføje tricain metansulfonat til en endelig koncentration på 0,016% (v / v) i embryo medium (5 mM NaCl, 0,17mM KCl, 0,33 mM CaCl2, 0,33 mM MgSO...

<ol>
	<li>Egan, B., Zierath, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+Metabolism+and+the+Molecular+Regulation+of+Skeletal+Muscle+Adaptation.">Exercise Metabolism and the Molecular Regulation of Skeletal Muscle Adaptation.</a> Cell Metabolism. 17 (2), 162-184 (2013).</li><li>Seale, P., Sabourin, L. A., Girgis-Gabardo, A., Mansouri, A., Gruss, P., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells.">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li><li>Relaix, F., Rocancourt, D., Mansouri, A., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Pax3/Pax7-dependent+population+of+skeletal+muscle+progenitor+cells.">A Pax3/Pax7-dependent population of skeletal muscle progenitor cells.</a> Nature. 435 (7044), 948-953 (2005).</li><li>Sousa-Victor, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geriatric+muscle+stem+cells+switch+reversible+quiescence+into+senescence.">Geriatric muscle stem cells switch reversible quiescence into senescence.</a> Nature. 506 (7488), 316-321 (2014).</li><li>Egerman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GDF11+Increases+with+Age+and+Inhibits+Skeletal+Muscle+Regeneration.">GDF11 Increases with Age and Inhibits Skeletal Muscle Regeneration.</a> Cell Metabolism. 22 (1), 164-174 (2015).</li><li>Emery, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+muscular+dystrophies.">The muscular dystrophies.</a> The Lancet. 359 (9307), 687-695 (2002).</li><li>Emery, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Duchenne muscular dystrophy. , (1993).</li><li>Anne Helbling-Leclerc, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+laminin+&#945;2-chain+gene+(LAMA2)+cause+merosin-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">Mutations in the laminin &#945;2-chain gene (LAMA2) cause merosin-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Nature Genetics. (11), 216-218 (1995).</li><li>Campbell, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+muscular+dystrophies:+loss+of+cytoskeleton-extracellular+matrix+linkage.">Three muscular dystrophies: loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage.</a> Cell. 80 (5), 675-679 (1995).</li><li>Cerletti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient,+functional+engraftment+of+skeletal+muscle+stem+cells+in+dystrophic+muscles.">Highly efficient, functional engraftment of skeletal muscle stem cells in dystrophic muscles.</a> Cell. 134 (1), 37-47 (2008).</li><li>Dumont, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin+expression+in+muscle+stem+cells+regulates+their+polarity+and+asymmetric+division.">Dystrophin expression in muscle stem cells regulates their polarity and asymmetric division.</a> Nature Medicine. 21 (12), 1455-1463 (2015).</li><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+disease:+zebrafish+swim+into+view.">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nature Reviews. Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).</li><li>Gurevich, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+division+of+clonal+muscle+stem+cells+coordinates+muscle+regeneration+in+vivo.">Asymmetric division of clonal muscle stem cells coordinates muscle regeneration in vivo.</a> Science. 353 (6295), (2016).</li><li>Lambert, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+system+for+rapid+cellular+extraction+from+live+zebrafish+embryos+and+larvae:+Development+and+application+to+genotyping.">An automated system for rapid cellular extraction from live zebrafish embryos and larvae: Development and application to genotyping.</a> PloS One. 13 (3), 0193180 (2018).</li><li>Berger, J., Sztal, T., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+birefringence+readily+measures+the+level+of+muscle+damage+in+zebrafish.">Quantification of birefringence readily measures the level of muscle damage in zebrafish.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 423 (4), 785-788 (2012).</li><li>Hall, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+candyfloss+mutant+implicates+extracellular+matrix+adhesion+failure+in+laminin+alpha2-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">The zebrafish candyfloss mutant implicates extracellular matrix adhesion failure in laminin alpha2-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (17), 7092-7097 (2007).</li><li>Otten, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xirp+Proteins+Mark+Injured+Skeletal+Muscle+in+Zebrafish.">Xirp Proteins Mark Injured Skeletal Muscle in Zebrafish.</a> PLOS ONE. 7 (2), 31041 (2012).</li><li>Otten, C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-inflicted+Injury+of+Zebrafish+Embryonic+Skeletal+Muscle.">Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (71), e4351 (2013).</li><li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Stem+Cells+Undergo+Extensive+Clonal+Drift+during+Tissue+Growth+via+Meox1-Mediated+Induction+of+G2+Cell-Cycle+Arrest.">Muscle Stem Cells Undergo Extensive Clonal Drift during Tissue Growth via Meox1-Mediated Induction of G2 Cell-Cycle Arrest.</a> Cell Stem Cell. 21 (1), 107-119 (2017).</li><li>Ruparelia, A. A., Ratnayake, D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+skeletal+muscle+growth+and+regeneration+in+amniotes+and+teleosts:+Emerging+themes.">Stem cells in skeletal muscle growth and regeneration in amniotes and teleosts: Emerging themes.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews. Developmental Biology. 9 (2), 365 (2020).</li></ol>

Skeletmuskulatur regenerering er drevet af obligate væv hjemmehørende muskel stamceller, hvis funktion er ændret i mange muskelsygdomme såsom muskelsvind, efterfølgende hæmmer processen med muskel regenerering. Her beskriver vi en høj gennemløbsprotokol til at undersøge muskelgendannelse i levende zebrafiskmodeller af muskelsygdom. Det første trin i rørledningen bruger en embryogenotyping platform14, som er en brugervenlig og præcis metode til at bestemme genotypen af levende larver, f...

Skeletmuskulatur tegner sig for 30-50% af den menneskelige kropsmasse og er ikke kun uundværlig for bevægelse, men det fungerer også som et kritisk metabolisk og opbevaringsorgan1. På trods af at være postmitotisk, skeletmuskulatur er meget dynamisk og bevarer en enorm regenerativ kapacitet efter skade. Dette tilskrives tilstedeværelsen af væv bosiddende stamceller (også kaldet satellitceller), placeret under basal lamina af myofibers og præget af transskription faktorer parret kasse protein 7 (pax7) og / eller parret kasse protein 3 (pax3), blandt andre2,3. Efter skade aktiveres satellitcellen og gennemgår cellespredning for at generere en pulje af myoblaster, som efterfølgende differentierer sig for at danne nye muskelfibre. Den stærkt bevarede kaskade af pro-regenerative signaler, der regulerer satellitcelleaktivering og robust muskelreparation, påvirkes under forskellige forhold såsom myopatier og homøostatiskaldring 4,5.
En så forskelligartet gruppe af myopatier er muskeldystrofi, karakteriseret ved progressiv muskelsvind og degeneration6. Disse sygdomme er konsekvensen af genetiske mutationer i nøgleproteiner, herunder dystrophin og laminin-α2 (LAMA2), der er ansvarlig for fastgørelse af muskelfibre til den ekstracellulære matrix7,8. I betragtning af at proteiner impliceret i muskeldystrofi spiller en så central rolle i opretholdelsen af muskelstruktur, troede man i mange år, at en fiasko i denne proces var den mekanisme, der var ansvarlig for sygdomspatogenese9. Nylige undersøgelser har imidlertid identificeret defekter i reguleringen af muskelstamceller og efterfølgende svækkelse i muskelgendannelse som et andet muligt grundlag for muskelpatologi observeret i muskeldystrofi10,11. Som sådan er der behov for yderligere undersøgelser for at undersøge, hvordan en svækkelse i muskelstamcellefunktion og tilknyttede nicheelementer bidrager til muskeldystrofi.
I løbet af det seneste årti har zebrafisk (Danio rerio) vist sig som en vigtig hvirveldyr model for sygdom modellering12. Dette tilskrives den hurtige eksterne udvikling af zebrafiskembryoet kombineret med dets optiske klarhed, som muliggør direkte visualisering af muskeldannelse, vækst og funktion. Derudover er ikke kun udviklingen og strukturen af muskler stærkt bevaret i zebrafisk, de viser også en stærkt bevaret proces med muskelgendannelse13. Derfor repræsenterer zebrafisk et fremragende system til at studere patobiologien af muskelsygdomme og undersøge, hvordan muskelgendannelse påvirkes i det. Til dette formål har vi udviklet en metode, der muliggør rettidig undersøgelse af skeletmuskulatur regenerering i zebrafisk modeller af muskelsygdom. Denne høj gennemstrømningsrørledning involverer en metode til genotype levende embryoner14, hvorefter der udføres en nålestikskade, og omfanget af muskelgendannelse afbildes ved hjælp af polariserende lysmikroskopi. Anvendelsen af denne teknik vil derfor afsløre den regenerative kapacitet af muskler i zebrafisk modeller af muskelsygdom.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 gauge needles</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN-3013R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri Dishes</td>
			<td>Pacific Laboratory Products PT</td>
			<td>S9014S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA extraction chips</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG chips</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo genotyping platform</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG base unit</td>
			<td>Zebrafish Embryo Genotyper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pipette</td>
			<td>Hirschmann</td>
			<td>9260101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass plate dish</td>
			<td>WPI</td>
			<td>FD35-100</td>
			<td>Commonly referred to as FluoroDish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermoline Scientific</td>
			<td>TEI-43L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pipette</td>
			<td>Livingstone</td>
			<td>PTP03-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing microscope</td>
			<td>Abrio</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease

Skeletmuskulatur har en bemærkelsesværdig evne til at regenerere efter skade, som er drevet af obligate væv hjemmehørende muskel stamceller. Efter skade aktiveres muskelstamcellert og gennemgår cellespredning for at generere en pulje af myoblaster, som efterfølgende differentierer sig til at danne nye muskelfibre. I mange muskelsvind betingelser, herunder muskelsvind og aldring, denne proces er nedsat resulterer i manglende evne til muskel til at regenerere. Processen med muskel regenerering i zebrafisk er meget bevaret med pattedyr systemer giver et glimrende system til at studere muskel stamcellefunktion og regenerering, i muskelsvind betingelser såsom muskeldystrofi. Her præsenterer vi en metode til at undersøge muskel regenerering i zebrafisk modeller af muskelsygdom. Det første trin indebærer brug af en genotypingplatform, der gør det muligt at bestemme larvernes genotype, før der fremkaldes en skade. Efter at have bestemt genotypen kommer musklen til skade ved hjælp af et nålestik, hvorefter polariserende lysmikroskopi bruges til at bestemme omfanget af muskelgendannelse. Vi leverer derfor en høj gennemløbspipeline, der gør det muligt at undersøge muskelgendannelse i zebrafiskmodeller af muskelsygdom.

Evnen til at kvantificere birefringence af skeletmuskulatur giver en ikke-invasiv, men meget reproducerbar metode til at undersøge og sammenligne niveauer af muskelskader og undersøge muskelgendannelse in vivo. Birefringence skyldes diffraktion af polariseret lys gennem pseudo-krystallinsk array af muskel sarkomenter15, og efter skade eller skade på musklen, en reduktion i birefringence er indlysende. På samme måde resulterer aktivering og differentie...

Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease

Skeletmuskulatur regenerering er drevet af væv hjemmehørende muskel stamceller, som er svækket i mange muskelsygdomme såsom muskelsvind, og dette resulterer i manglende evne til muskel til at regenerere. Her beskriver vi en protokol, der gør det muligt at undersøge muskelgendannelse i zebrafiskmodeller af muskelsygdom.

Undersøgelse muskel regenerering i zebrafisk modeller af muskelsygdom

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, ...

Det overordnede mål med denne protokol er at undersøge og kvantificere muskel regenerering i en zebrafisk model af muskelsygdom. Denne metode giver en højgennemstrømningsrørledning, der ikke kun er omkostningseffektiv, men også meget reproducerbar til at score det regenerative potentiale hos en syg muskel i en in vivo-indstilling. Demonstrere proceduren med mig vil være Avnika Ruparelia, en forsker ved den australske Regenerative Medicine Institute.For levende embryo genotyping, skræl den klare beskyttende film fra den øverste overflade af en 24-kammer DNA ekstraktion chip og bruge en 20 microliter filter tip med et snit spids til at overføre en enkelt bedøvet embryo i 13 mikroliter af embryo medium i hvert kammer af chippen. Når alle embryonerne er blevet indlæst, forsigtigt montere chippen på zebrafisk embryo genotyping platform ved at placere den ene side i første, efterfulgt af resten af chippen. Fastgør det magnetiske platformslåg over chippen for at forhindre fordampning af fostermediet under DNA-ekstraktionsprotokollen og luk låget.Indstil basisenheden til 2,4 volt, 0,051 ampere og 0,12 watt, og start DNA-udtrækningsprotokollen. Platformen skal begynde at vibrere, hvilket kan vurderes ved forsigtigt at røre ved låget. Mens programmet kører, forberede en 24-brønds plade ved at tilføje en milliliter af embryo medium til hver brønd og mærke otte-godt strip rør, der skal anvendes til indsamling af DNA-materiale fra hvert foster.Efter otte minutters udtrækning skal du trykke på on/off-knappen for at stoppe platformens vibrationer, forsigtigt fjerne det magnetiske låg og løfte chippen fra platformen. Der overføres 10 mikroliter embryomedium fra et kammer til den rette brønd i kamrene med otte brøndsbåndsrøret, og der tilsættes straks to dråber frisk embryomedium til kamrene. Embryoet overføres fra kammeret til en passende brønd af den tidligere forberedte 24-brønds plade.Når alle embryonerne er blevet overført, skal du placere pladen i en 28 grader Celsius inkubator. De relevante genotypinganalyser på det genetiske materiale, der indsamles i 8-brøndsstribene, udføres for at bestemme genotypen for hvert embryon. Når genotypen for hvert foster er identificeret, overføre embryoner til 90 millimeter Petri retter, der indeholder 25 milliliter medium vand og inkubere pladerne ved 28 grader Celsius indtil muskelskade.På fire dage efter befrugtning skal du bruge en pipette til at overføre en bedøvet larve til en ny petriskål og forsigtigt fjerne overskydende medium fra skålen under et dissekerende mikroskop. Orientere fisken sådan, at hovedet er til venstre, halen er til højre, rygregionen er op, og ventralområdet er nede, og brug en 30 gauge nål til at lave et hurtigt præcist stik i en til to somites i epaxial musklen over anal pore og vandret til myoseptumet. Påfør en dråbe embryo medium til de sårede zebrafisk og forsigtigt overføre larven til en brønd af en 24-brønd plade, der indeholder en milliliter frisk embryo medium per brønd.Når alle larverne er blevet såret, skal du placere pladen i 28 grader Celsius inkubatoren, indtil zebrafisken er afbildet. For at kvantificere muskelgenvindingen skal du åbne et endags billede efter skaden i et passende billedanalysesoftwareprogram og bruge polygonværktøjet til at tegne en form omkring sårstedet. Brug softwaren til at måle området og den gennemsnitlige birefringence intensitet af regionen og kopiere disse værdier til cellerne D3 og E3 i den medfølgende skabelon.Træk yderligere to regioner, der hver strækker sig over en til to uskadte somites, og mål området og de gennemsnitlige birefringence-intensiteter i hver af disse regioner. Kopier disse værdier til cellerne D4 og D5 og E4 og E5 i skabelonen. Gentag derefter målingen for de samme områder i billedet efter tre dage efter skaden.Når birefringence er blevet målt på samme måde i alle billederne, skal du beregne den normaliserede birefringence for hver region ved at dividere den gennemsnitlige birefringence intensitet af hver region med sit område. For hvert tidspunkt beregnes den gennemsnitlige normaliserede birefringence af de to ikke-skadede områder for at give et referencepunkt for den uskadte muskel. For at bestemme omfanget af muskelskader på dag ét efter skaden skal den normaliserede birefringence i skadesregionen divideres med den gennemsnitlige normaliserede birefringence i de ikke-skadede regioner.For at bestemme omfanget af muskel regenerering, dividere den normaliserede birefringence af skaden regionen i de tre dage efter skaden billedet med den gennemsnitlige normaliserede intensitet af de uskadte regioner på dette tidspunkt. Endelig skal du beregne det regenerative indeks ved at dividere værdien for muskelgendannelsesgraden ved dag tre efter skaden med værdien for muskelskadens omfang på dag ét efter skaden. I denne repræsentative analyse blev en kobling af embryoner fra en krydsning mellem to Lama2 heterozygobåde zebrafisk overført til en DNA-ekstraktionschip og efterfølgende genotyped.Mens muskelskade resulterer i en reduktion i birefringence intensitet på dag ét efter skaden, den vellykkede regenerering af muskel resulterer i en øget birefringence inden for samme region. Det er også bemærkelsesværdigt, at mens vilde type larver viser en ensartet birefringence intensitet på grund af en normal muskel mønstre, birefringence intensitet i musklen af Lama2 knockout larver er ujævn og meget sporadisk sandsynligvis på grund af en reduceret muskel integritet. Som observeret viser både vilde type og Lama2-mangelfulde larver en signifikant øget birefringence intensitet på sårstedet tre dage efter skaden sammenlignet med på en dag efter skaden, hvilket indikerer, at musklen er regenereret.Bestemmelse af det regenerative indeks afslører, at Lama2-mangelfulde larver viser en slående stigning i muskelgendannelse sammenlignet med vilde type dyr. Mens denne protokol giver os mulighed for at identificere eventuelle ændringer i muskels evne til at regenerere i modeller af muskelsygdom, skal downstream cellulær og molekylær analyse udføres for at identificere de mekanismer, der er ansvarlige for de observerede ændringer. Denne metode har gjort det muligt for os at identificere, hvordan nedsat muskelstamcellefunktion og en svækkelse i tilknyttede nicheelementer bidrager til muskelsygdompatogenese, hvilket giver os mulighed for at identificere nye sygdomsmekanismer.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse af zebrafisk Larver Skeletmuskel Integritet med Evans blå farvestof

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Brug Touch-fremkaldt reaktion og Locomotion Analyser til Vurdere Muskel Ydeevne og funktion i zebrafisk

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Induktion af akut Skeletal Muscle Regeneration af cardiotoxin Injection

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

Forberedelse og Kultur Myogenic precursorceller / Primær Myoblaster af skeletmuskulatur af Voksen og Aged Mennesker

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluering af skade-induceret gulne og In Vivo omprogrammering i den skeletmuskulatur

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

Anvendelse af kronisk stimulering til at studere kontraktile aktivitet-induceret rotte skeletmuskulatur fænotypiske tilpasninger

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Identifikation af skeletmuskulatur satellit celler ved immunfluorescens med Pax7 og Laminin antistoffer

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Billeddannelse af muskel-sene morfogenese i Drosophila pupper

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

Røntgen diffraktion af intakt murin skeletmuskulatur som et redskab til at studere det strukturelle grundlag for muskelsygdom

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...