Name: examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease
Uploaded: 2021-01-18T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

We willen Dr. Alex Fulcher en Monash Micro Imaging bedanken voor hulp bij het onderhoud en de installatie van microscopen. Het Australian Regenerative Medicine Institute wordt ondersteund door subsidies van de staatsregering van Victoria en de Australische regering. Dit werk werd gefinancierd door een projectsubsidie van de Muscular Dystrophy Association (USA) aan P.D.C (628882).

Zebravisonderhoud werd uitgevoerd volgens de standaard operationele procedures die zijn goedgekeurd door de Monash University Animal Ethics Committee onder fokkolonielicentie ERM14481.
1. Bepaling van het genotype van levende embryo's met behulp van een embryo-genotyperingsplatform.
<ol><li>Verdoof 3 dagen na de bevruchting (dpf) zebravisembryo's door tricainemethaansulfaat toe te voegen aan een eindconcentratie van 0,016% (v/v) in embryomedium (5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl2</su...

<ol>
	<li>Egan, B., Zierath, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+Metabolism+and+the+Molecular+Regulation+of+Skeletal+Muscle+Adaptation.">Exercise Metabolism and the Molecular Regulation of Skeletal Muscle Adaptation.</a> Cell Metabolism. 17 (2), 162-184 (2013).</li><li>Seale, P., Sabourin, L. A., Girgis-Gabardo, A., Mansouri, A., Gruss, P., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells.">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li><li>Relaix, F., Rocancourt, D., Mansouri, A., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Pax3/Pax7-dependent+population+of+skeletal+muscle+progenitor+cells.">A Pax3/Pax7-dependent population of skeletal muscle progenitor cells.</a> Nature. 435 (7044), 948-953 (2005).</li><li>Sousa-Victor, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geriatric+muscle+stem+cells+switch+reversible+quiescence+into+senescence.">Geriatric muscle stem cells switch reversible quiescence into senescence.</a> Nature. 506 (7488), 316-321 (2014).</li><li>Egerman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GDF11+Increases+with+Age+and+Inhibits+Skeletal+Muscle+Regeneration.">GDF11 Increases with Age and Inhibits Skeletal Muscle Regeneration.</a> Cell Metabolism. 22 (1), 164-174 (2015).</li><li>Emery, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+muscular+dystrophies.">The muscular dystrophies.</a> The Lancet. 359 (9307), 687-695 (2002).</li><li>Emery, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Duchenne muscular dystrophy. , (1993).</li><li>Anne Helbling-Leclerc, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+laminin+&#945;2-chain+gene+(LAMA2)+cause+merosin-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">Mutations in the laminin &#945;2-chain gene (LAMA2) cause merosin-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Nature Genetics. (11), 216-218 (1995).</li><li>Campbell, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+muscular+dystrophies:+loss+of+cytoskeleton-extracellular+matrix+linkage.">Three muscular dystrophies: loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage.</a> Cell. 80 (5), 675-679 (1995).</li><li>Cerletti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient,+functional+engraftment+of+skeletal+muscle+stem+cells+in+dystrophic+muscles.">Highly efficient, functional engraftment of skeletal muscle stem cells in dystrophic muscles.</a> Cell. 134 (1), 37-47 (2008).</li><li>Dumont, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin+expression+in+muscle+stem+cells+regulates+their+polarity+and+asymmetric+division.">Dystrophin expression in muscle stem cells regulates their polarity and asymmetric division.</a> Nature Medicine. 21 (12), 1455-1463 (2015).</li><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+disease:+zebrafish+swim+into+view.">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nature Reviews. Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).</li><li>Gurevich, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+division+of+clonal+muscle+stem+cells+coordinates+muscle+regeneration+in+vivo.">Asymmetric division of clonal muscle stem cells coordinates muscle regeneration in vivo.</a> Science. 353 (6295), (2016).</li><li>Lambert, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+system+for+rapid+cellular+extraction+from+live+zebrafish+embryos+and+larvae:+Development+and+application+to+genotyping.">An automated system for rapid cellular extraction from live zebrafish embryos and larvae: Development and application to genotyping.</a> PloS One. 13 (3), 0193180 (2018).</li><li>Berger, J., Sztal, T., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+birefringence+readily+measures+the+level+of+muscle+damage+in+zebrafish.">Quantification of birefringence readily measures the level of muscle damage in zebrafish.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 423 (4), 785-788 (2012).</li><li>Hall, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+candyfloss+mutant+implicates+extracellular+matrix+adhesion+failure+in+laminin+alpha2-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">The zebrafish candyfloss mutant implicates extracellular matrix adhesion failure in laminin alpha2-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (17), 7092-7097 (2007).</li><li>Otten, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xirp+Proteins+Mark+Injured+Skeletal+Muscle+in+Zebrafish.">Xirp Proteins Mark Injured Skeletal Muscle in Zebrafish.</a> PLOS ONE. 7 (2), 31041 (2012).</li><li>Otten, C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-inflicted+Injury+of+Zebrafish+Embryonic+Skeletal+Muscle.">Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (71), e4351 (2013).</li><li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Stem+Cells+Undergo+Extensive+Clonal+Drift+during+Tissue+Growth+via+Meox1-Mediated+Induction+of+G2+Cell-Cycle+Arrest.">Muscle Stem Cells Undergo Extensive Clonal Drift during Tissue Growth via Meox1-Mediated Induction of G2 Cell-Cycle Arrest.</a> Cell Stem Cell. 21 (1), 107-119 (2017).</li><li>Ruparelia, A. A., Ratnayake, D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+skeletal+muscle+growth+and+regeneration+in+amniotes+and+teleosts:+Emerging+themes.">Stem cells in skeletal muscle growth and regeneration in amniotes and teleosts: Emerging themes.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews. Developmental Biology. 9 (2), 365 (2020).</li></ol>

Skeletspierregeneratie wordt aangedreven door obligate weefsel ingezetene spierstamcellen, waarvan de functie wordt gewijzigd bij veel spierziekten zoals spierdystrofie, waardoor het proces van spierregeneratie wordt belemmerd. Hier beschrijven we een protocol met hoge doorvoer om spierregeneratie te onderzoeken in levende zebravismodellen van spierziekte. De eerste stap van de pijpleiding maakt gebruik van een embryo genotypering platform14, dat is een gebruiksvriendelijke en nauwkeurige methode ...

Skeletspieren zijn goed voor 30-50% van de menselijke lichaamsmassa en zijn niet alleen onmisbaar voor voortbeweging, maar het dient ook als een kritisch metabolisch en opslagorgaan1. Ondanks het feit dat postmitotisch, skeletspieren is zeer dynamisch en behoudt een enorme regeneratieve capaciteit na blessure. Dit wordt toegeschreven aan de aanwezigheid van in weefsel ingezeten stamcellen (ook wel satellietcellen genoemd), gelegen onder de basale lamina van myofiberen en gekenmerkt door de transcriptiefactoren gekoppeld dooseiwit 7 (pax7) en/of gepaard dooseiwit 3 (pax3), onder andere2,3. Na letsel wordt de satellietcel geactiveerd en ondergaat celproliferatie om een pool van myoblasten te genereren, die vervolgens differentiëren om nieuwe spiervezels te vormen. De sterk geconserveerde cascade van pro-regeneratieve signalen die satellietcelactivering en robuust spierherstel reguleren , wordt beïnvloed in verschillende omstandigheden zoals myopathieën en homeostatische veroudering4,5.
Een dergelijke diverse groep myopathieën is spierdystrofie, gekenmerkt door progressieve spierverspilling en degeneratie6. Deze ziekten zijn het gevolg van genetische mutaties in belangrijke eiwitten, waaronder dystrofine en laminine-α2 (LAMA2), verantwoordelijk voor de aanhechting van spiervezels aan de extracellulaire matrix7,8. Gezien het feit dat eiwitten die betrokken zijn bij spierdystrofie zo'n centrale rol spelen bij het behoud van de spierstructuur, werd jarenlang aangenomen dat een mislukking in dit proces het mechanisme was dat verantwoordelijk was voor ziektepathogenese9. Recente studies hebben echter defecten in de regulatie van spierstamcellen en daaropvolgende stoornissen in spierregeneratie geïdentificeerd als een tweede mogelijke basis voor de spierpathologie waargenomen bij spierdystrofie10,11. Als zodanig zijn verdere studies nodig om te onderzoeken hoe een stoornis in de spierstamcelfunctie en bijbehorende niche-elementen bijdraagt aan spierdystrofie.
In de afgelopen tien jaar is zebravis (Danio rerio) naar voren gekomen als een belangrijk gewerveld model voor ziektemodellering12. Dit wordt toegeschreven aan de snelle externe ontwikkeling van het zebravisembryo, in combinatie met de optische helderheid, die de directe visualisatie van spiervorming, groei en functie mogelijk maakt. Bovendien is niet alleen de ontwikkeling en structuur van spieren sterk geconserveerd in zebravissen, ze vertonen ook een zeer geconserveerd proces van spierregeneratie13. Bijgevolg vertegenwoordigen zebravissen een uitstekend systeem om de pathobiologie van spierziekten te bestuderen en te onderzoeken hoe spierregeneratie erin wordt beïnvloed. Hiervoor hebben we een methode ontwikkeld die het mogelijk maakt om skeletspierregeneratie tijdig te bestuderen in zebravismodellen van spierziekten. Deze pijpleiding met hoge doorvoer omvat een methode om levende embryo's14te genotypen, waarna een naaldsteekletsel wordt uitgevoerd en de mate van spierregeneratie wordt afgebeeld met behulp van polariserende lichtmicroscopie. Het gebruik van deze techniek zal daarom het regeneratieve vermogen van spieren in zebravismodellen van spierziekte onthullen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 gauge needles</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN-3013R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri Dishes</td>
			<td>Pacific Laboratory Products PT</td>
			<td>S9014S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA extraction chips</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG chips</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo genotyping platform</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG base unit</td>
			<td>Zebrafish Embryo Genotyper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pipette</td>
			<td>Hirschmann</td>
			<td>9260101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass plate dish</td>
			<td>WPI</td>
			<td>FD35-100</td>
			<td>Commonly referred to as FluoroDish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermoline Scientific</td>
			<td>TEI-43L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pipette</td>
			<td>Livingstone</td>
			<td>PTP03-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing microscope</td>
			<td>Abrio</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease

Skeletspier heeft een opmerkelijk vermogen om te regenereren na letsel, dat wordt aangedreven door obligate weefsel ingezetene spierstamcellen. Na een blessure wordt de spierstamcel geactiveerd en ondergaat celproliferatie om een pool van myoblasten te genereren, die vervolgens differentiëren om nieuwe spiervezels te vormen. In veel spier verspillen voorwaarden, met inbegrip van spierdystrofie en veroudering, dit proces wordt aangetast, wat resulteert in het onvermogen van de spier om te regenereren. Het proces van spierregeneratie bij zebravissen is zeer geconserveerd met zoogdiersystemen die een uitstekend systeem bieden om de functie en regeneratie van spierstamcellen te bestuderen, in spierverspillende omstandigheden zoals spierdystrofie. Hier presenteren we een methode om spierregeneratie te onderzoeken in zebravismodellen van spierziekte. De eerste stap omvat het gebruik van een genotyperingsplatform dat de bepaling van het genotype van de larven mogelijk maakt voordat een verwonding wordt veroorzaakt. Na het genotype te hebben bepaald, wordt de spier verwond met behulp van een naaldsteek, waarna polariserende lichtmicroscopie wordt gebruikt om de mate van spierregeneratie te bepalen. We bieden daarom een pijpleiding met hoge doorvoer die het mogelijk maakt om spierregeneratie te onderzoeken in zebravismodellen van spierziekten.

Het vermogen om birefringentie van skeletspieren te kwantificeren biedt een niet-invasieve maar zeer reproduceerbare methode om niveaus van spierschade te onderzoeken en te vergelijken en spierregeneratie in vivote onderzoeken . Birefringentie is het gevolg van de diffractie van gepolariseerd licht door de pseudokristallijne array van de spiersarcoom15, en na letsel of schade aan de spier is een vermindering van birefringentie duidelijk. Evenzo resulteert ...

Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease

Skeletspierregeneratie wordt aangedreven door weefsel ingezeten spierstamcellen, die bij veel spierziekten zoals spierdystrofie worden aangetast, en dit resulteert in het onvermogen van spieren om te regenereren. Hier beschrijven we een protocol dat het mogelijk maakt om spierregeneratie te onderzoeken in zebravismodellen van spierziekte.

Het onderzoeken van Spierregeneratie in Zebrafish Modellen van Spierziekte

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, ...

Het algemene doel van dit protocol is om spierregeneratie te onderzoeken en te kwantificeren in een zebravismodel van spierziekte. Deze methode biedt een pijpleiding met hoge doorvoer die niet alleen kosteneffectief is, maar ook zeer reproduceerbaar in het scoren van het regeneratieve potentieel van een zieke spier in een in vivo omgeving. Avnika Ruparelia, een onderzoeker aan het Australian Regenerative Medicine Institute, demonstreert de procedure met mij.Voor het genotyperen van levende embryo's, schil de heldere beschermende film van het bovenoppervlak van een 24-kamer DNA-extractiechip en gebruik een 20 microliter filtertip met een snijpunt om een enkel verdoofd embryo in 13 microliters embryomedium in elke kamer van de chip over te brengen. Wanneer alle embryo's zijn geladen, monteert u de chip voorzichtig op het zebravisembryo genotyperingsplatform door één kant als eerste te plaatsen, gevolgd door de rest van de chip. Bevestig het magnetische platformdeksel over de chip om verdamping van embryomedium tijdens het DNA-extractieprotocol te voorkomen en sluit het deksel.Stel de basiseenheid in op 2,4 volt, 0,051 ampère en 0,12 watt en start het DNA-extractieprotocol. Het platform moet beginnen te trillen, wat kan worden beoordeeld door het deksel voorzichtig aan te raken. Terwijl het programma loopt, bereidt u een 24-put plaat voor door een milliliter embryomedium aan elke put toe te voegen en acht-put stripbuizen te labelen die moeten worden gebruikt voor het verzamelen van DNA-materiaal van elk embryo.Druk na acht minuten afzuigen op de aan/uit-knop om de trillingen van het platform te stoppen, verwijder voorzichtig het magnetische deksel en til de chip van het platform. Breng 10 microliters embryomedium van één kamer over in de juiste put van de acht-put stripbuis en voeg onmiddellijk twee druppels vers embryomedium toe aan de kamers. Breng het embryo over van de kamer naar een geschikte put van de eerder voorbereide 24-well plaat.Wanneer alle embryo's zijn overgedragen, plaatst u de plaat in een incubator van 28 graden Celsius. Voer de juiste downstream genotyperingstesten uit op het genetisch materiaal dat is verzameld in de acht-put stripbuizen om het genotype van elk embryo te bepalen. Zodra het genotype van elk embryo is geïdentificeerd, breng de embryo's over op 90 millimeter Petrischalen met 25 milliliter medium water en incubeer de platen bij 28 graden Celsius tot spierletsel.Gebruik na vier dagen na de bevruchting een pipet om een verdoofde larve in een nieuwe petrischaal over te brengen en verwijder voorzichtig elk overtollig medium uit de schaal onder een ontledende microscoop. Oriënteer de vis zodanig dat de kop zich aan de linkerkant bevindt, de staart aan de rechterkant, het dorsale gebied omhoog is en het ventrale gebied naar beneden is, en gebruik een naald van 30 gauge om een snelle nauwkeurige steek te maken in één tot twee somieten in de epaxiale spier boven de anale porie en horizontaal naar het myoseptum. Breng een druppel embryomedium aan op de gewonde zebravis en breng de larve voorzichtig over in één put van een 24-putplaat met één milliliter vers embryomedium per put.Wanneer alle larven gewond zijn geraakt, plaatst u de plaat in de incubator van 28 graden Celsius totdat de zebravissen in beeld zijn gebracht. Om de spierregeneratie te kwantificeren, opent u een afbeelding van één dag na de verwonding in een geschikt softwareprogramma voor beeldanalyse en gebruikt u het polygoongereedschap om een vorm rond de wondplaats te tekenen. Gebruik de software om het gebied en de gemiddelde birefringentie-intensiteit van het gebied te meten en kopieer deze waarden naar de cellen D3 en E3 van de meegeleverde sjabloon.Teken twee extra regio's die elk één tot twee ongewonde somieten beslaan en meet het gebied en de gemiddelde birefringentie-intensiteiten van elk van deze regio's. Kopieer deze waarden naar de cellen D4 en D5 en E4 en E5 in de sjabloon. Herhaal vervolgens de meting voor dezelfde regio's in het drie dagen na de blessurebeeld.Wanneer de birefringentie in alle afbeeldingen op dezelfde manier is gemeten, berekent u de genormaliseerde birefringentie voor elk gebied door de gemiddelde birefringentie-intensiteit van elk gebied te delen door het gebied. Bereken voor elk tijdspunt de gemiddelde genormaliseerde birefringentie van de twee niet-gewonde regio's om een referentiepunt voor de niet-gewonde spier te bieden. Om de omvang van spierblessures op dag één na de blessure te bepalen, deelt u de genormaliseerde birefringentie van het blessuregebied door de gemiddelde genormaliseerde birefringentie van de niet-gewonde regio's.Om de mate van spierregeneratie te bepalen, deelt u de genormaliseerde birefringentie van het blessuregebied in het drie dagen na de blessurebeeld door de gemiddelde genormaliseerde intensiteit van de niet-gewonde regio's in dit stadium. Bereken ten slotte de regeneratieve index door de waarde voor de omvang van de spierregeneratie op dag drie na de blessure te delen door de waarde voor de omvang van de spierblessure op dag één na de blessure. In deze representatieve analyse werd een koppeling van embryo's van een kruising tussen twee Lama2 heterozygote zebravissen overgebracht naar een DNA-extractiechip en vervolgens genotoxiceerd.Terwijl spierblessure resulteert in een vermindering van de birefringentie intensiteit op dag één post-blessure, de succesvolle regeneratie van de spier resulteert in een verhoogde birefringence binnen dezelfde regio. Het is ook opmerkelijk dat terwijl wilde typelarven een uniforme birefringentie-intensiteit vertonen als gevolg van een normale spierpatronen, de birefringentie-intensiteit in de spier van Lama2 knock-outlarven ongelijk en zeer sporadisch waarschijnlijk is vanwege een verminderde spierintegriteit. Zoals waargenomen, vertonen zowel wilde type als Lama2-deficiënte larven een significant verhoogde birefringentie-intensiteit in de wondplaats na drie dagen na de verwonding in vergelijking met op een dag na de verwonding, wat aangeeft dat de spier is geregenereerd.Bepaling van de regeneratieve index toont aan dat Lama2-deficiënte larven een opvallende toename van spierregeneratie vertonen in vergelijking met wilde dieren. Hoewel dit protocol ons in staat zal stellen om eventuele veranderingen in het vermogen van spieren om te regenereren in modellen van spierziekte te identificeren, moeten downstream cellulaire en moleculaire analyse worden uitgevoerd om de mechanismen te identificeren die verantwoordelijk zijn voor de waargenomen veranderingen. Deze methode heeft ons in staat gesteld om te identificeren hoe verminderde spierstamcelfunctie en een stoornis in bijbehorende niche-elementen bijdraagt aan pathogenese van spierziekten, waardoor we nieuwe ziektemechanismen kunnen identificeren.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse van de zebravis Larven skeletspieren Integriteit met Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Met behulp van Touch-opgeroepen Response en Locomotion Testen om Muscle Prestaties en functie in zebravis Assess

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Inductie van Acute Skeletal Muscle Regeneration door cardiotoxine Injection

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

Voorbereiding en Cultuur van Myogene voorloper cellen / Primary myoblasten uit Skeletal Muscle van Adult en Aged Humans

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluatie van schade-geïnduceerde senescentie en In Vivo herprogrammering in de skeletspieren

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

Toepassing van chronische stimulering te bestuderen contractiele activiteit-geïnduceerde Rat skeletspieren fenotypische aanpassingen

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Identificatie van de skeletspieren satelliet cellen met immunofluorescentie met Pax7 en Laminin antilichamen

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Beeldvorming van de spier-pees morfogenese in Drosophila poppen

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

Röntgendiffractie van intact Murine skeletspieren als een instrument voor het bestuderen van de structurele basis van spierziekte

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...