Name: examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease
Uploaded: 2021-01-18T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

Vi vil takke Dr. Alex Fulcher og Monash Micro Imaging for hjelp med vedlikehold og oppsett av mikroskop. Australian Regenerative Medicine Institute støttes av tilskudd fra delstatsregjeringen i Victoria og den australske regjeringen. Dette arbeidet ble finansiert av et muskeldystrofiforening (USA) prosjektstipend til P.D.C (628882).

Sebrafiskvedlikehold ble utført i henhold til standard driftsprosedyrer godkjent av Monash University Animal Ethics Committee under avlskolonilisens ERM14481.
1. Bestemmelse av genotypen av levende embryoer ved hjelp av en embryogenotypingsplattform.
<ol><li>Bedøv 3 dager etter befruktning (dpf) sebrafiskembryoer ved å tilsette trikainmetansulfat til en endelig konsentrasjon på 0,016% (v / v) i embryomedium (5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl2, 0,33 mM MgSO4 i van...

<ol>
	<li>Egan, B., Zierath, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+Metabolism+and+the+Molecular+Regulation+of+Skeletal+Muscle+Adaptation.">Exercise Metabolism and the Molecular Regulation of Skeletal Muscle Adaptation.</a> Cell Metabolism. 17 (2), 162-184 (2013).</li><li>Seale, P., Sabourin, L. A., Girgis-Gabardo, A., Mansouri, A., Gruss, P., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells.">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li><li>Relaix, F., Rocancourt, D., Mansouri, A., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Pax3/Pax7-dependent+population+of+skeletal+muscle+progenitor+cells.">A Pax3/Pax7-dependent population of skeletal muscle progenitor cells.</a> Nature. 435 (7044), 948-953 (2005).</li><li>Sousa-Victor, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geriatric+muscle+stem+cells+switch+reversible+quiescence+into+senescence.">Geriatric muscle stem cells switch reversible quiescence into senescence.</a> Nature. 506 (7488), 316-321 (2014).</li><li>Egerman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GDF11+Increases+with+Age+and+Inhibits+Skeletal+Muscle+Regeneration.">GDF11 Increases with Age and Inhibits Skeletal Muscle Regeneration.</a> Cell Metabolism. 22 (1), 164-174 (2015).</li><li>Emery, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+muscular+dystrophies.">The muscular dystrophies.</a> The Lancet. 359 (9307), 687-695 (2002).</li><li>Emery, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Duchenne muscular dystrophy. , (1993).</li><li>Anne Helbling-Leclerc, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+laminin+&#945;2-chain+gene+(LAMA2)+cause+merosin-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">Mutations in the laminin &#945;2-chain gene (LAMA2) cause merosin-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Nature Genetics. (11), 216-218 (1995).</li><li>Campbell, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+muscular+dystrophies:+loss+of+cytoskeleton-extracellular+matrix+linkage.">Three muscular dystrophies: loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage.</a> Cell. 80 (5), 675-679 (1995).</li><li>Cerletti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient,+functional+engraftment+of+skeletal+muscle+stem+cells+in+dystrophic+muscles.">Highly efficient, functional engraftment of skeletal muscle stem cells in dystrophic muscles.</a> Cell. 134 (1), 37-47 (2008).</li><li>Dumont, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin+expression+in+muscle+stem+cells+regulates+their+polarity+and+asymmetric+division.">Dystrophin expression in muscle stem cells regulates their polarity and asymmetric division.</a> Nature Medicine. 21 (12), 1455-1463 (2015).</li><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+disease:+zebrafish+swim+into+view.">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nature Reviews. Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).</li><li>Gurevich, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+division+of+clonal+muscle+stem+cells+coordinates+muscle+regeneration+in+vivo.">Asymmetric division of clonal muscle stem cells coordinates muscle regeneration in vivo.</a> Science. 353 (6295), (2016).</li><li>Lambert, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+system+for+rapid+cellular+extraction+from+live+zebrafish+embryos+and+larvae:+Development+and+application+to+genotyping.">An automated system for rapid cellular extraction from live zebrafish embryos and larvae: Development and application to genotyping.</a> PloS One. 13 (3), 0193180 (2018).</li><li>Berger, J., Sztal, T., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+birefringence+readily+measures+the+level+of+muscle+damage+in+zebrafish.">Quantification of birefringence readily measures the level of muscle damage in zebrafish.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 423 (4), 785-788 (2012).</li><li>Hall, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+candyfloss+mutant+implicates+extracellular+matrix+adhesion+failure+in+laminin+alpha2-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">The zebrafish candyfloss mutant implicates extracellular matrix adhesion failure in laminin alpha2-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (17), 7092-7097 (2007).</li><li>Otten, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xirp+Proteins+Mark+Injured+Skeletal+Muscle+in+Zebrafish.">Xirp Proteins Mark Injured Skeletal Muscle in Zebrafish.</a> PLOS ONE. 7 (2), 31041 (2012).</li><li>Otten, C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-inflicted+Injury+of+Zebrafish+Embryonic+Skeletal+Muscle.">Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (71), e4351 (2013).</li><li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Stem+Cells+Undergo+Extensive+Clonal+Drift+during+Tissue+Growth+via+Meox1-Mediated+Induction+of+G2+Cell-Cycle+Arrest.">Muscle Stem Cells Undergo Extensive Clonal Drift during Tissue Growth via Meox1-Mediated Induction of G2 Cell-Cycle Arrest.</a> Cell Stem Cell. 21 (1), 107-119 (2017).</li><li>Ruparelia, A. A., Ratnayake, D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+skeletal+muscle+growth+and+regeneration+in+amniotes+and+teleosts:+Emerging+themes.">Stem cells in skeletal muscle growth and regeneration in amniotes and teleosts: Emerging themes.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews. Developmental Biology. 9 (2), 365 (2020).</li></ol>

Skjelettmuskelregenerering er drevet av obligatoriske vev bosatt muskel stamceller, hvis funksjon er endret i mange muskelsykdommer som muskeldystrofi, og deretter hindrer prosessen med muskelregenerering. Her beskriver vi en protokoll med høy gjennomstrømning for å undersøke muskelregenerering i levende sebrafiskmodeller av muskelsykdom. Det første trinnet i rørledningen bruker en embryo genotyping plattform14, som er en brukervennlig og nøyaktig metode for å bestemme genotypen av levende...

Skjelettmuskulatur står for 30-50% av kroppsmassen, og er ikke bare uunnværlig for bevegelse, men det fungerer også som et kritisk metabolsk og lagringsorgan1. Til tross for at den er postmitotisk, er skjelettmuskelen svært dynamisk og beholder en enorm regenerativ kapasitet etter skade. Dette tilskrives tilstedeværelsen av vev bosatt stamceller (også kalt satellittceller), plassert under basal lamina av myofibers og preget av transkripsjonsfaktorene parret boksprotein 7 (pax7) og / eller parret boksprotein 3 (pax3), blant annet2,3. Etter skade aktiveres satellittcellen og gjennomgår celleproliferasjon for å generere et basseng av myoblaster, som senere skiller seg ut for å danne nye muskelfibre. Den svært konserverte kaskaden av pro-regenerative signaler som regulerer satellittcelleaktivering og robust muskelreparasjon påvirkes under ulike forhold som myopatier og homeostatiskaldring 4,5.
En slik mangfoldig gruppe myopatier er muskeldystrofi, preget av progressiv muskels kaste bort og degenerasjon6. Disse sykdommene er konsekvensen av genetiske mutasjoner i viktige proteiner, inkludert dystrofin og laminin-α2 (LAMA2), ansvarlig for vedlegg av muskelfibre til den ekstracellulære matrisen7,8. Gitt at proteiner implisert i muskeldystrofi spiller en så sentral rolle i å opprettholde muskelstruktur, ble det i mange år antatt at en svikt i denne prosessen var mekanismen som var ansvarlig for sykdomspatogenese9. Nyere studier har imidlertid identifisert feil i reguleringen av muskelstammeceller og påfølgende svekkelse i muskelregenerering som andre mulige grunnlag for muskelpatologien observert i muskeldystrofi10,11. Som sådan er det nødvendig med ytterligere studier for å undersøke hvordan en svekkelse i muskel stamcellefunksjon og tilhørende nisjeelementer bidrar til muskeldystrofi.
I løpet av det siste tiåret har sebrafisk (Danio rerio) dukket opp som en viktig virveldyrmodell for sykdomsmodellering12. Dette tilskrives den raske eksterne utviklingen av sebrafiskembryoet, kombinert med sin optiske klarhet, noe som gjør det mulig direkte visualisering av muskeldannelse, vekst og funksjon. I tillegg er ikke bare utviklingen og strukturen av muskel høyt bevart i sebrafisk, de viser også en svært bevart prosess med muskelregenerering13. Følgelig representerer sebrafisk et utmerket system for å studere patobiologien til muskelsykdommer, og utforske hvordan muskelregenerering påvirkes i den. For dette formål har vi utviklet en metode som muliggjør rettidig studie av skjelettmuskulaturregenerering i sebrafiskmodeller av muskelsykdom. Denne rørledningen med høy gjennomstrømning innebærer en metode for å genotype levende embryoer14, hvoretter en nålstikkskade utføres og omfanget av muskelregenerering er avbildet ved hjelp av polariserende lysmikroskopi. Utnyttelsen av denne teknikken vil derfor avsløre den regenerative kapasiteten til muskler i sebrafiskmodeller av muskelsykdom.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 gauge needles</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN-3013R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri Dishes</td>
			<td>Pacific Laboratory Products PT</td>
			<td>S9014S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA extraction chips</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG chips</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo genotyping platform</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG base unit</td>
			<td>Zebrafish Embryo Genotyper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pipette</td>
			<td>Hirschmann</td>
			<td>9260101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass plate dish</td>
			<td>WPI</td>
			<td>FD35-100</td>
			<td>Commonly referred to as FluoroDish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermoline Scientific</td>
			<td>TEI-43L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pipette</td>
			<td>Livingstone</td>
			<td>PTP03-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing microscope</td>
			<td>Abrio</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease

Skjelettmuskulaturen har en bemerkelsesverdig evne til å regenerere etter skade, som drives av obligatoriske vev bosatt muskel stamceller. Etter skade aktiveres muskelstammecellen og gjennomgår celleproliferasjon for å generere et basseng av myoblaster, som senere skiller seg ut for å danne nye muskelfibre. I mange muskelsløse forhold, inkludert muskeldystrofi og aldring, er denne prosessen svekket, noe som resulterer i manglende evne til muskel å regenerere. Prosessen med muskelregenerering i sebrafisk er høyt bevart med pattedyrsystemer som gir et utmerket system for å studere muskelstammecellefunksjon og regenerering, i muskelsvjerningsforhold som muskeldystrofi. Her presenterer vi en metode for å undersøke muskelregenerering i sebrafiskmodeller av muskelsykdom. Det første trinnet innebærer bruk av en genotypingsplattform som tillater bestemmelse av larvens genotype før det fremkaller en skade. Etter å ha bestemt genotypen, blir muskelen skadet ved hjelp av et nålestikk, hvoretter polariserende lysmikroskopi brukes til å bestemme omfanget av muskelregenerering. Vi gir derfor en høy gjennomstrømningsrørledning som gjør det mulig å undersøke muskelregenerering i sebrafiskmodeller av muskelsykdom.

Evnen til å kvantifisere birefringence av skjelettmuskulatur gir en ikke-invasiv, men svært reproduserbar metode for å undersøke og sammenligne nivåer av muskelskader, og undersøke muskelregenerering in vivo. Birefringence skyldes diffraksjon av polarisert lys gjennom pseudo-krystallinsk matrise av muskel sarcomeres15, og etter skade eller skade på muskelen, en reduksjon i birefringence er tydelig. På samme måte resulterer aktivering og differensi...

Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease

Skjelettmuskelregenerering er drevet av vev bosatt muskel stamceller, som er svekket i mange muskelsykdommer som muskeldystrofi, og dette resulterer i manglende evne til muskel å regenerere. Her beskriver vi en protokoll som tillater undersøkelse av muskelregenerering i sebrafiskmodeller av muskelsykdom.

Undersøke muskelregenerering i sebrafiskmodeller av muskelsykdom

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, ...

Det overordnede målet med denne protokollen er å undersøke og kvantifisere muskelregenerering i en sebrafiskmodell av muskelsykdom. Denne metoden gir en rørledning med høy gjennomstrømning som ikke bare er kostnadseffektiv, men også svært reproduserbar for å score det regenerative potensialet til en syk muskel i en in vivo-setting. Å demonstrere prosedyren med meg vil være Avnika Ruparelia, en stipendiat ved Australian Regenerative Medicine Institute.For levende embryogenotyping, skrell den klare beskyttelsesfilmen fra den øverste overflaten av en 24-kammer DNA-ekstraksjonsbrikke og bruk en 20 mikroliterfilterspiss med en kuttet spiss for å overføre et enkelt bedøvet embryo i 13 mikroliter embryomedium i hvert kammer av brikken. Når alle embryoene er lastet, monterer du forsiktig brikken på sebrafisk embryogenotypingsplattformen ved å plassere den ene siden i først, etterfulgt av resten av brikken. Fest det magnetiske plattformlokket over brikken for å forhindre fordampning av embryomedium under DNA-ekstraksjonsprotokollen og lukk lokket.Sett baseenheten til 2,4 volt, 0,051 ampere og 0,12 watt og start DNA-ekstraksjonsprotokollen. Plattformen skal begynne å vibrere, noe som kan vurderes ved å berøre lokket forsiktig. Mens programmet kjører, lag en 24-brønns plate ved å legge til en milliliter embryomedium til hver brønn og merke åtte-brønns striperør som skal brukes til innsamling av DNA-materiale fra hvert embryo.Etter åtte minutter med ekstraksjon trykker du på av/på-knappen for å stoppe vibrasjonen på plattformen, forsiktig fjerner det magnetiske lokket og løfter brikken fra plattformen. Overfør 10 mikroliter embryomedium fra ett kammer til riktig brønn av åttebrønns striperøret og tilsett umiddelbart to dråper friskt embryomedium til kamrene. Overfør embryoet fra kammeret til en passende brønn av den tidligere forberedte 24-brønnsplaten.Når alle embryoene er overført, plasser platen i en 28 grader Celsius inkubator. Utfør passende nedstrøms genotypingsanalyser på det genetiske materialet som samles inn i de åtte brønnede striperørene for å bestemme genotypen til hvert embryo. Når genotypen til hvert embryo er identifisert, overfør embryoene til 90 millimeter Petri-retter som inneholder 25 milliliter middels vann og inkuber platene ved 28 grader Celsius til muskelskade.På fire dager etter befruktning, bruk en pipette for å overføre en bedøvet larve til en ny Petri-tallerken og fjern forsiktig overflødig medium fra parabolen under et dissekeringsmikroskop. Orienter fisken slik at hodet er til venstre, halen er til høyre, dorsalområdet er opp, og ventralområdet er nede, og bruk en 30 gauge nål for å lage et raskt presist stikk i en til to somitter i epaxialmuskelen over analporene og horisontalt til myoseptumet. Påfør en dråpe embryomedium til den skadede sebrafisken og overfør forsiktig larven til en brønn på en 24-brønnsplate som inneholder en milliliter fersk embryomedium per brønn.Når alle larver har blitt skadet, plasser platen i 28 grader Celsius inkubatoren til sebrafisken er avbildet. For å kvantifisere muskelregenereringen, åpne et endags bilde etter skade i et passende bildeanalyseprogram og bruk polygonverktøyet til å tegne en form rundt sårstedet. Bruk programvaren til å måle området og bety birefringence intensitet i regionen og kopiere disse verdiene til cellene D3 og E3 av den medfølgende malen.Tegn to ekstra regioner som hver spenner over en til to uskadede somitter og måler området og betyr birefringence-intensiteter i hver av disse regionene. Kopier disse verdiene til cellene D4 og D5 og E4 og E5 i malen. Gjenta deretter målingen for de samme områdene i bildet etter tre dager etter skaden.Når birefringence har blitt målt på samme måte i alle bildene, beregne normalisert birefringence for hver region ved å dele gjennomsnittlig birefringence intensitet av hver region etter sitt område. For hvert tidspunkt beregner du den gjennomsnittlige normaliserte birefringence av de to uskadede regionene for å gi et referansepunkt for den uskadede muskelen. For å bestemme omfanget av muskelskade på dag én etter skade, del den normaliserte birefringence av skadeområdet med gjennomsnittlig normalisert birefringence av de uskadede regionene.For å bestemme omfanget av muskelregenerering, del den normaliserte birefringence av skadeområdet i de tre dagene etter skadebildet med den gjennomsnittlige normaliserte intensiteten til de uskadede regionene på dette stadiet. Til slutt, beregne regenerativ indeks ved å dele verdien for omfanget av muskel regenerering på dag tre etter skade av verdien for omfanget av muskelskaden på dag én etter skade. I denne representative analysen ble en kobling av embryoer fra en krysning mellom to Lama2 heterozygote sebrafisk overført til en DNA-ekstraksjonsbrikke og deretter genotypet.Mens muskelskade resulterer i en reduksjon i birefringence intensitet på dag én etter skade, vellykket regenerering av muskel resulterer i en økt birefringence innenfor samme region. Det er også bemerkelsesverdig at mens ville type larver viser en jevn birefringence intensitet på grunn av en normal muskelmønster, er birefringence intensiteten i muskelen til Lama2 knockout larver ujevn og svært sporadisk sannsynlig på grunn av redusert muskelintegritet. Som observert viser både vill type og Lama2-mangelfulle larver en betydelig økt birefringence intensitet i sårstedet på tre dager etter skade sammenlignet med en dag etter skade, noe som indikerer at muskelen har regenerert.Bestemmelse av den regenerative indeksen avslører at Lama2-mangelfulle larver viser en slående økning i muskelregenerering sammenlignet med ville type dyr. Selv om denne protokollen vil tillate oss å identifisere eventuelle endringer i muskelens evne til å regenerere i modeller av muskelsykdom, må nedstrøms cellulær og molekylær analyse utføres for å identifisere mekanismene som er ansvarlige for de observerte endringene. Denne metoden har gjort det mulig for oss å identifisere hvordan nedsatt muskel stamcellefunksjon og en svekkelse i tilknyttede nisjeelementer bidrar til muskelsykdom patogenese, slik at vi kan identifisere nye sykdomsmekanismer.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse av Sebrafisk Larver Skeletal Muscle Integrity med Evans blå Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Ved hjelp av Touch-fremkalt respons og locomotion Analyser for å vurdere muskel ytelse og funksjon i Sebrafisk

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Induksjon av akutt Skeletal Muscle Regenerering av Cardiotoxin Injection

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

Utarbeidelse og kultur myogenisk forloperceller / Primær myoblasts fra Skeletal Muscle of Adult og Gamle mennesker

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Vurdering av skaden-indusert Senescence og i Vivo omprogrammering i skjelettmuskelen

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

Anvendelse av kronisk stimulering å studere kontraktile aktivitet-indusert rotte Skjelettmuskel fenotypiske tilpasninger

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Identifikasjon av Skjelettmuskel satellitt celler av Immunofluorescence med Pax7 og Laminin antistoffer

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

I Vivo Avbildning av muskel-sene Morphogenesis i Drosophila Pupae

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

X-ray Diffraksjon av intakt murine skjelettmuskulatur som et verktøy for å studere den strukturelle grunnlaget for muskel sykdom

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...