Name: examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease
Uploaded: 2021-01-18T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

Vi vill tacka Dr. Alex Fulcher och Monash Micro Imaging för hjälp med underhåll och installation av mikroskop. Australian Regenerative Medicine Institute stöds av bidrag från delstatsregeringen i Victoria och australiensiska regeringen. Detta arbete finansierades av ett projektbidrag för muskeldystrofi (USA) till P.D.C (628882).

Zebrafiskunderhåll utfördes enligt de standardrutiner som godkänts av Monash University Animal Ethics Committee under avelskolonilicens ERM14481.
1. Bestämning av genotypen av levande embryon med hjälp av en embryogenotypningsplattform.
<ol><li>Bedöva 3 dagar efter befruktning (dpf) zebrafiskembryon genom att tillsätta trikainmetansulfonat till en slutlig koncentration på 0,016% (v/v) i embryomedium (5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl2, 0,33 mM MgSO4 i vatten)...

<ol>
	<li>Egan, B., Zierath, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+Metabolism+and+the+Molecular+Regulation+of+Skeletal+Muscle+Adaptation.">Exercise Metabolism and the Molecular Regulation of Skeletal Muscle Adaptation.</a> Cell Metabolism. 17 (2), 162-184 (2013).</li><li>Seale, P., Sabourin, L. A., Girgis-Gabardo, A., Mansouri, A., Gruss, P., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax7+is+required+for+the+specification+of+myogenic+satellite+cells.">Pax7 is required for the specification of myogenic satellite cells.</a> Cell. 102 (6), 777-786 (2000).</li><li>Relaix, F., Rocancourt, D., Mansouri, A., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Pax3/Pax7-dependent+population+of+skeletal+muscle+progenitor+cells.">A Pax3/Pax7-dependent population of skeletal muscle progenitor cells.</a> Nature. 435 (7044), 948-953 (2005).</li><li>Sousa-Victor, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geriatric+muscle+stem+cells+switch+reversible+quiescence+into+senescence.">Geriatric muscle stem cells switch reversible quiescence into senescence.</a> Nature. 506 (7488), 316-321 (2014).</li><li>Egerman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GDF11+Increases+with+Age+and+Inhibits+Skeletal+Muscle+Regeneration.">GDF11 Increases with Age and Inhibits Skeletal Muscle Regeneration.</a> Cell Metabolism. 22 (1), 164-174 (2015).</li><li>Emery, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+muscular+dystrophies.">The muscular dystrophies.</a> The Lancet. 359 (9307), 687-695 (2002).</li><li>Emery, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Duchenne muscular dystrophy. , (1993).</li><li>Anne Helbling-Leclerc, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+laminin+&#945;2-chain+gene+(LAMA2)+cause+merosin-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">Mutations in the laminin &#945;2-chain gene (LAMA2) cause merosin-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Nature Genetics. (11), 216-218 (1995).</li><li>Campbell, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+muscular+dystrophies:+loss+of+cytoskeleton-extracellular+matrix+linkage.">Three muscular dystrophies: loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage.</a> Cell. 80 (5), 675-679 (1995).</li><li>Cerletti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient,+functional+engraftment+of+skeletal+muscle+stem+cells+in+dystrophic+muscles.">Highly efficient, functional engraftment of skeletal muscle stem cells in dystrophic muscles.</a> Cell. 134 (1), 37-47 (2008).</li><li>Dumont, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin+expression+in+muscle+stem+cells+regulates+their+polarity+and+asymmetric+division.">Dystrophin expression in muscle stem cells regulates their polarity and asymmetric division.</a> Nature Medicine. 21 (12), 1455-1463 (2015).</li><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+disease:+zebrafish+swim+into+view.">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nature Reviews. Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).</li><li>Gurevich, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+division+of+clonal+muscle+stem+cells+coordinates+muscle+regeneration+in+vivo.">Asymmetric division of clonal muscle stem cells coordinates muscle regeneration in vivo.</a> Science. 353 (6295), (2016).</li><li>Lambert, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+system+for+rapid+cellular+extraction+from+live+zebrafish+embryos+and+larvae:+Development+and+application+to+genotyping.">An automated system for rapid cellular extraction from live zebrafish embryos and larvae: Development and application to genotyping.</a> PloS One. 13 (3), 0193180 (2018).</li><li>Berger, J., Sztal, T., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+birefringence+readily+measures+the+level+of+muscle+damage+in+zebrafish.">Quantification of birefringence readily measures the level of muscle damage in zebrafish.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 423 (4), 785-788 (2012).</li><li>Hall, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+candyfloss+mutant+implicates+extracellular+matrix+adhesion+failure+in+laminin+alpha2-deficient+congenital+muscular+dystrophy.">The zebrafish candyfloss mutant implicates extracellular matrix adhesion failure in laminin alpha2-deficient congenital muscular dystrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (17), 7092-7097 (2007).</li><li>Otten, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xirp+Proteins+Mark+Injured+Skeletal+Muscle+in+Zebrafish.">Xirp Proteins Mark Injured Skeletal Muscle in Zebrafish.</a> PLOS ONE. 7 (2), 31041 (2012).</li><li>Otten, C., Abdelilah-Seyfried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-inflicted+Injury+of+Zebrafish+Embryonic+Skeletal+Muscle.">Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (71), e4351 (2013).</li><li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Stem+Cells+Undergo+Extensive+Clonal+Drift+during+Tissue+Growth+via+Meox1-Mediated+Induction+of+G2+Cell-Cycle+Arrest.">Muscle Stem Cells Undergo Extensive Clonal Drift during Tissue Growth via Meox1-Mediated Induction of G2 Cell-Cycle Arrest.</a> Cell Stem Cell. 21 (1), 107-119 (2017).</li><li>Ruparelia, A. A., Ratnayake, D., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+skeletal+muscle+growth+and+regeneration+in+amniotes+and+teleosts:+Emerging+themes.">Stem cells in skeletal muscle growth and regeneration in amniotes and teleosts: Emerging themes.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews. Developmental Biology. 9 (2), 365 (2020).</li></ol>

Skelettmuskelregenerering drivs av obligate vävnad bosatta muskelstamceller, vars funktion ändras i många muskelsjukdomar såsom muskeldystrofi, därefter imped processen för muskelregenerering. Här beskriver vi ett högt genomströmningsprotokoll för att undersöka muskelregenerering i levande zebrafiskmodeller av muskelsjukdom. Det första steget i rörledningen använder en embryo genotypningsplattform14, som är en användarvänlig och exakt metod för att bestämma genotypen av levande ...

Skelettmuskulatur står för 30-50% av människokroppens massa, och är inte bara oumbärlig för rörelse, men det fungerar också som ett kritiskt metaboliskt och lagringsorgan1. Trots att det är postmitotic, skelettmuskulaturen är mycket dynamisk och behåller en enorm regenerativ kapacitet efter skada. Detta tillskrivs förekomsten av vävnad bosatta stamceller (även kallade satellitceller), som ligger under basala lamina av myofibers och markeras av transkriptionsfaktorerna parat box protein 7 (pax7) och / eller parat boxprotein 3 (pax3), blandandra 2,3. Efter skada aktiveras satellitcellen och genomgår cellproliferation för att generera en pool av myoblaster, som därefter skiljer sig åt för att bilda nya muskelfibrer. Den mycket bevarade kaskaden av pro-regenerativa signaler som reglerar satellitcellsaktivering och robust muskelreparation påverkas under olika förhållanden som myopatier och homeostatiskt åldrande4,5.
En sådan mångfaldig grupp myopatier är muskeldystrofi, kännetecknad av progressiv muskelförtvining och degeneration6. Dessa sjukdomar är följden av genetiska mutationer i viktiga proteiner, inklusive dystroin och laminin-α2 (LAMA2), ansvarig för fastsättning av muskelfibrer till den extracelluläramatrisen 7,8. Med tanke på att proteiner som är inblandade i muskeldystrofi spelar en så central roll för att upprätthålla muskelstrukturen, trodde man under många år att ett misslyckande i denna process var den mekanism som ansvarar för sjukdomspatogenes9. Nyligen genomförda studier har dock identifierat defekter i regleringen av muskelstamceller och efterföljande försämring av muskelregenerering som en andra möjlig grund för muskelpatologin som observerats i muskeldystrofi10,11. Som sådan behövs ytterligare studier för att undersöka hur en försämring av muskelstamcellsfunktionen och tillhörande nischelement bidrar till muskeldystrofi.
Under det senaste decenniet har zebrafisk (Danio rerio) dykt upp som en viktig ryggradsdjur modell för sjukdom modellering12. Detta tillskrivs zebrafiskembryons snabba externa utveckling, i kombination med dess optiska klarhet, vilket möjliggör direkt visualisering av muskelbildning, tillväxt och funktion. Dessutom är inte bara utvecklingen och strukturen av muskler mycket bevarade i zebrafisk, de visar också en mycket bevarad process av muskelregenerering13. Följaktligen representerar zebrafisk ett utmärkt system för att studera patobiologin hos muskelsjukdomar och utforska hur muskelregenerering påverkas i den. För detta ändamål har vi utvecklat en metod som möjliggör snabb studie av skelettmuskelregenerering i zebrafiskmodeller av muskelsjukdom. Denna pipeline med hög genomströmning innebär en metod för genotyp levande embryon14, varefter en nål-stab skada utförs och omfattningen av muskelregenerering avbildas med polariserande ljusmikroskopi. Användningen av denna teknik kommer därför att avslöja muskelns regenerativa kapacitet i zebrafiskmodeller av muskelsjukdom.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 well plates</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>142475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 gauge needles</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>NN-3013R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90 mm Petri Dishes</td>
			<td>Pacific Laboratory Products PT</td>
			<td>S9014S20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA extraction chips</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG chips</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo genotyping platform</td>
			<td>wFluidx</td>
			<td>ZEG base unit</td>
			<td>Zebrafish Embryo Genotyper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pipette</td>
			<td>Hirschmann</td>
			<td>9260101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass plate dish</td>
			<td>WPI</td>
			<td>FD35-100</td>
			<td>Commonly referred to as FluoroDish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Thermoline Scientific</td>
			<td>TEI-43L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic pipette</td>
			<td>Livingstone</td>
			<td>PTP03-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing microscope</td>
			<td>Abrio</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

examining muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease

Skelettmuskeln har en anmärkningsvärd förmåga att regenerera efter skada, som drivs av obligate vävnad bosatta muskelstamceller. Efter skada aktiveras muskelstamcellen och genomgår cellproliferation för att generera en pool av myoblaster, som därefter skiljer sig från att bilda nya muskelfibrer. I många muskelförtvining villkor, inklusive muskeldystrofi och åldrande, denna process är nedsatt vilket resulterar i oförmågan hos muskler att regenerera. Processen med muskelregenerering i zebrafisk är mycket bevarad med däggdjurssystem som ger ett utmärkt system för att studera muskelstamcellsfunktion och regenerering, i muskelförtviningsförhållanden som muskeldystrofi. Här presenterar vi en metod för att undersöka muskelregenerering i zebrafiskmodeller av muskelsjukdom. Det första steget innebär användning av en genotypningsplattform som gör det möjligt att bestämma larvernas genotyp innan en skada framkallas. Efter att ha bestämt genotypen skadas muskeln med hjälp av ett nålhugg, varefter polariserande ljusmikroskopi används för att bestämma omfattningen av muskelregenerering. Vi tillhandahåller därför en hög genomströmning pipeline som möjliggör undersökning av muskel regenerering i zebrafisk modeller av muskelsjukdom.

Förmågan att kvantifiera birefringence av skelettmuskulatur ger en icke-invasiv men mycket reproducerbar metod för att undersöka och jämföra nivåer av muskelskador, och undersöka muskelregenerering in vivo. Birefringence är resultatet av diffraktion av polariserat ljus genom den pseudo-kristallina matrisen av muskel sarkomeres15, och efter skada eller skador på muskeln, en minskning av birefringence är uppenbart. På samma sätt resulterar aktiv...

Watch this Scientific Journal Video about Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease at JoVE.com

Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease

Skelettmuskelregenerering drivs av vävnad bosatta muskelstamceller, som är nedsatta i många muskelsjukdomar såsom muskeldystrofi, och detta resulterar i oförmågan hos muskler att regenerera. Här beskriver vi ett protokoll som tillåter undersökning av muskelregenerering i zebrafiskmodeller av muskelsjukdom.

Undersöka muskelregenerering i zebrafiskmodeller av muskelsjukdom

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, ...

Det övergripande målet med detta protokoll är att undersöka och kvantifiera muskelregenerering i en zebrafiskmodell av muskelsjukdom. Denna metod ger en pipeline med hög genomströmning som inte bara är kostnadseffektiv, men också mycket reproducerbar för att poängsätta den regenerativa potentialen hos en sjuk muskel i en in vivo-inställning. Avnika Ruparelia, forskare vid Australian Regenerative Medicine Institute, demonstrerar proceduren med mig.För levande embryogenotypning, skala den klara skyddsfilmen från den övre ytan av ett DNA-extraktionschip med 24 kammare och använd en 20 mikroliterfilterspets med en skuren spets för att överföra ett enda sövt embryo i 13 mikroliter embryomedium till varje kammare i chippet. När alla embryon har laddats, montera försiktigt chipet på zebrafiskens embryo genotypningsplattform genom att placera ena sidan i först, följt av resten av chippet. Fäst det magnetiska plattformslocket över chippet för att förhindra avdunstning av embryomedium under DNA-extraktionsprotokollet och stäng locket.Ställ basenheten på 2,4 volt, 0,051 ampere och 0,12 watt och starta DNA-extraktionsprotokollet. Plattformen ska börja vibrera, vilket kan bedömas genom att försiktigt vidröra locket. Medan programmet är igång, förbered en 24-brunnsplatta genom att lägga till en milliliter embryomedium till varje brunn och märka åtta-brunns remsrör som ska användas för insamling av DNA-material från varje embryo.Efter åtta minuters utsugning trycker du på på/av-knappen för att stoppa vibrationerna på plattformen, ta försiktigt bort magnetlocket och lyft chippet från plattformen. Överför 10 mikroliter embryomedium från en kammare till lämplig brunn i det åtta brunnsremsaröret och tillsätt omedelbart två droppar färskt embryomedium till kamrarna. Överför embryot från kammaren till en lämplig brunn på den tidigare beredda 24-brunnsplattan.När alla embryon har överförts, placera plattan i en 28 grader Celsius inkubator. Utför lämpliga genotypningsanalyser nedströms på det genetiska material som samlats in i de åtta brunnsliströren för att bestämma genotypen för varje embryo. När genotypen för varje embryo har identifierats, överför embryona till 90 millimeter Petri-rätter som innehåller 25 milliliter medelvatten och inkuberar plattorna vid 28 grader Celsius tills muskelskadan.Vid fyra dagar efter befruktning, använd en pipett för att överföra en bedövad larva till en ny Petri-maträtt och ta försiktigt bort överflödigt medium från skålen under ett dissekerande mikroskop. Orientera fisken så att huvudet är till vänster, svansen är till höger, dorsala regionen är uppe och ventrala regionen är nere och använd en 30 gauge nål för att göra ett snabbt exakt hugg i en till två somiter i epaxialmuskeln ovanför analporen och horisontell till myoseptum. Applicera en droppe embryomedium på den skadade zebrafisken och överför försiktigt larven till en brunn på en 24-brunnsplatta som innehåller en milliliter färskt embryomedium per brunn.När alla larver har skadats, placera plattan i 28 grader Celsius inkubator tills zebrafisken är avbildad. För att kvantifiera muskelregenereringen, öppna en dag efter skada i ett lämpligt bildanalysprogram och använd polygonverktyget för att rita en form runt sårplatsen. Använd programvaran för att mäta området och medelvärdet för birefringensintens i regionen och kopiera dessa värden till cellerna D3 och E3 i den angivna mallen.Rita ytterligare två regioner som var och en sträcker sig över en till två oskadda somiter och mät området och betyder birefringensintensintens i var och en av dessa regioner. Kopiera dessa värden till cellerna D4 och D5 samt E4 och E5 i mallen. Upprepa sedan mätningen för samma regioner under de tre dagarna efter skadan.När birefringensen har mätts på samma sätt i alla bilder beräknar du den normaliserade birefringensen för varje region genom att dividera den genomsnittliga birefringensintensen för varje region med dess område. För varje tidpunkt, beräkna den genomsnittliga normaliserade birefringensen för de två oskadda regionerna för att tillhandahålla en referenspunkt för den oskadda muskeln. För att bestämma omfattningen av muskelskada vid dag ett efter skada, dela den normaliserade birefringence av skaderegionen med den genomsnittliga normaliserade birefringence av de oskadda regionerna.För att bestämma omfattningen av muskelregenerering, dela den normaliserade birefringence av skaderegionen i de tre dagarna efter skada bild av den genomsnittliga normaliserade intensiteten i de oskadda regionerna i detta skede. Slutligen beräkna regenerativa indexet genom att dividera värdet för muskelregenereringens omfattning dag tre efter skada med värdet för muskelskadans omfattning dag ett efter skadan. I denna representativa analys överfördes en koppling av embryon från en korsning mellan två Lama2 heterozygous zebrafisk till ett DNA-extraktionschip och därefter genotypade.Medan muskelskada resulterar i en minskning av birefringence intensitet på dag ett efter skada, den framgångsrika regenerering av muskler resulterar i en ökad birefringence inom samma region. Det är också anmärkningsvärt att medan vilda larver visar en enhetlig birefringensintensintens på grund av en normal muskelmönster, är birefringensintensintensiteten i musen hos Lama2 knockout larver ojämn och mycket sporadisk sannolikt på grund av en minskad muskelintegritet. Som observerats visar både vilda och Lama2-bristfälliga larver en signifikant ökad birefringensintensintens i sårområdet vid tre dagar efter skada jämfört med vid en dag efter skada, vilket indikerar att muskeln har regenererats.Bestämning av regenerativt index visar att Lama2-bristfälliga larver visar en slående ökning av muskelregenerering jämfört med vilda djur. Medan detta protokoll kommer att tillåta oss att identifiera eventuella förändringar i muskel förmåga att regenerera i modeller av muskelsjukdom, nedströms cellulär och molekylär analys måste utföras för att identifiera de mekanismer som är ansvariga för de observerade förändringarna. Denna metod har gjort det möjligt för oss att identifiera hur nedsatt muskelstamcellsfunktion och en försämring av associerade nischelement bidrar till muskelsjukdomspatogenes, vilket gör det möjligt för oss att identifiera nya sjukdomsmekanismer.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analys av Zebrafish Larver skelettmuskulatur Integrity med Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

Användning av anslags-framkallat svar och Locomotion Analyser för att bedöma muskel prestanda och funktion i Zebrafish

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Induktion av akut Skeletal Muscle Regeneration av Cardiotoxin Injection

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

Upprättande och kultur Myogenic prekursorceller / Primära myoblaster från skelettmuskulatur av vuxna och äldre människor

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Evaluation of Injury-induced Senescence and In Vivo Reprogramming in the Skeletal Muscle

Utvärdering av nervskade-inducerad åldras och In Vivo omprogrammering i skelettmuskulaturen

Cellular senescence is a stress response that is characterized by a stable cellular growth arrest, which is important for many physiological and ...

Application of Chronic Stimulation to Study Contractile Activity-induced Rat Skeletal Muscle Phenotypic Adaptations

Tillämpningen av kronisk stimulering att studera kontraktila aktivitet-inducerad råtta skelettmuskulaturen fenotypiska anpassningar

Skeletal muscle is a highly adaptable tissue, as its biochemical and physiological properties are greatly altered in response to chronic exercise. To ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Identifiering av skelettmuskulaturen satellit celler genom immunofluorescens med Pax7 och Laminin antikroppar

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Avbildning av muskel-senan morfogenes i Drosophila puppor

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

X-ray Diffraction of Intact Murine Skeletal Muscle as a Tool for Studying the Structural Basis of Muscle Disease

Röntgendiffraktion av intakt murin skelettmuskulaturen som ett verktyg för att studera den strukturella grunden för muskelsjukdom

Transgenic mouse models have been important tools for studying the relationship of genotype to phenotype for human diseases including those of skeletal ...