Name: an economical and versatile high-throughput protein purification system using a multi-column plate adapter
Uploaded: 2021-05-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System Using a Multi-Column Plate Adapter at JoVE.com

Forskning rapporteret i denne publikation blev støttet af en Institutional Development Award (IDeA) fra National Institute of General Medical Sciences af National Institutes of Health under tilskud nummer P20GM103451 og en intern forskning tilskud fra University of Liverpool.

1. Denaturering Af Ni-NTA-kromatografi
<ol><li>Forbereder buffere BEMÆRK: Se tabel 1 for at få yderligere oplysninger om alle buffere.<ol>
<li>Udgør 500 mL af 0,5 M NaOH, og sørg for at tilføje Milli-Q vand først og derefter tilføje NaOH langsomt, mens bægeret er på en omrører. Filtrer med et filter på 0,22 μm.</li>
		<li>Der fremstilles 100 mL nikkelsulfat på 0,1 M og filtreres med et filter på 0,22 μm.</li>
		<li>Der fremstilles 50 mL 2 M imidazol, og der filtreres med et filter på...

<ol>
	<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+Automated+Mid-Scale+Parallel+Protein+Purification+System+for+Antibody+Purification+and+Affinity+Chromatography.">Development of an Automated Mid-Scale Parallel Protein Purification System for Antibody Purification and Affinity Chromatography.</a> Protein Expression and Purification. , 128 (2016).</li><li>Renaud, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysics+in+Drug+Discovery:+Impact,+Challenges+and+Opportunities.+Nature+Reviews.">Biophysics in Drug Discovery: Impact, Challenges and Opportunities. Nature Reviews.</a> Drug Discovery. 15 (10), (2016).</li><li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+Protein+Purification+and+Quality+Assessment+for+Crystallization.">High-throughput Protein Purification and Quality Assessment for Crystallization.</a> Methods (San Diego, Calif). 55 (1), (2011).</li><li>Pan, W., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Metal+Affinity+NCTR+25+Tag+as+a+Better+Alternative+to+the+His-tag+for+the+Expression+of+Recombinant+Fused+Proteins.">A New Metal Affinity NCTR 25 Tag as a Better Alternative to the His-tag for the Expression of Recombinant Fused Proteins.</a> Protein Expression and Purification. , 164 (2019).</li><li>Locatelli-Hoops, S., Sheen, F. C., Zoubak, L., Gawrisch, K., Yeliseev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+HaloTag+Technology+to+Expression+and+Purification+of+Cannabinoid+Receptor+CB2.">Application of HaloTag Technology to Expression and Purification of Cannabinoid Receptor CB2.</a> Protein Expression and Purification. 89 (1), 62-72 (2013).</li><li>Pina, A. S., Lowe, C. R., Roque, A. C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+Opportunities+in+the+Purification+of+Recombinant+Tagged+Proteins.">Challenges and Opportunities in the Purification of Recombinant Tagged Proteins.</a> Biotechnology Advances. 32 (2), (2014).</li><li>Gaberc-Porekar, V., Menart, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+of+Immobilized-Metal+Affinity+Chromatography.">Perspectives of Immobilized-Metal Affinity Chromatography.</a> Journal of Biochemical and Biophysical Methods. 49 (1-3), (2001).</li><li>Anderson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Process+of+Structure-Based+Drug+Design.">The Process of Structure-Based Drug Design.</a> Chemistry &amp; Biology. 10 (9), (2003).</li><li>Cummin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+High-Throughput+Purification+Method+for+Hit+Identification+in+Protein+Screening.">A Simple High-Throughput Purification Method for Hit Identification in Protein Screening.</a> Journal of Immunological Methods. 339 (1), (2008).</li><li>Dominguez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Multi-Column+Plate+Adapter+Provides+an+Economical+and+Versatile+High-Throughput+Protein+Purification+System.">A Multi-Column Plate Adapter Provides an Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System.</a> Protein Expression and Purification. , 152 (2018).</li><li>Bolanos-Garcia, V. M., Davies, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+Analysis+and+Classification+of+Native+Proteins+From+E.+Coli+Commonly+Co-Purified+by+Immobilised+Metal+Affinity+Chromatography.">Structural Analysis and Classification of Native Proteins From E. Coli Commonly Co-Purified by Immobilised Metal Affinity Chromatography.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1760 (9), (2006).</li><li>Ayyar, B. V., Arora, S., Murphy, C., O'Kennedy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+Chromatography+for+Antibody+Purification.">Affinity Chromatography for Antibody Purification.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). , (1129).</li><li>Jubb, H., Higueruelo, A. P., Winter, A., Blundell, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+Biology+and+Drug+Discovery+for+Protein-Protein+Interactions.">Structural Biology and Drug Discovery for Protein-Protein Interactions.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 33 (5), (2012).</li><li>Grabowski, M., Niedzialkowska, E., Zimmerman, M. D., Minor, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Impact+of+Structural+Genomics:+the+First+Quindecennial.">The Impact of Structural Genomics: the First Quindecennial.</a> Journal of Structural and Functional Genomics. 17 (1), 1-16 (2016).</li></ol>

Metoden er robust og enkel at bruge til relativt uerfarne proteinbiokemikere, men der er et par overvejelser at huske på.
Forsigtig med overfyldning af opsamlingsplader
Selve 48-brønds kollektionspladen holder kun 5 mL pr. brønd, mens hver 96-brønd kun holder 2 mL. Dette skal holdes for øje, når du tilføjer buffer og kører prøve gennem kolonnen, da der er risiko for overfyldning af brøndene. Der skal især udvises forsigtighed ved overfør...

Proteinrensningsteknikker til at opnå milligrammængder af rensede proteiner er afgørende for deres karakterisering og analyse, især for biofysiske metoder som NMR. Proteinrensning er også central på tværs af andre studieområder såsom lægemiddelopdagelsesprocesser og interaktionsundersøgelser af proteinprotein; men at opnå sådanne mængder rent protein kan blive en flaskehals for disse teknikker1,2,3. Den vigtigste metode til proteinrensning er kromatografi, som omfatter en række metoder, der er afhængige af proteiners individuelle egenskaber og deres tags. I affinitetskromatografi har proteiner et ekstra protein- eller peptidmotiv, der fungerer som et tag, der har en affinitet for et bestemt substrat på kromatografiharpiksen4. Den mest almindelige affinitetsmetode er immobiliseret metal affinitetskromatografi (IMAC) ved hjælp af his-mærkede proteiner, mens en anden populær metode er ionbytningskromatografi, der adskiller proteiner baseret på deres ladning. For højeste renhed, en kombination af affinitet kromatografi og ion udveksling bruges ofte sammen, som regel kræver dyrt laboratorieudstyr til høj-gennemløb.
Den udviklende æra af funktionelle proteomics giver næring til efterspørgslen efter højoverførselshastighedsteknikker til rensning af ikke enestående proteiner til specifik analyse, men et stort antal proteiner samtidig til omfattende analyse og genomdækkende undersøgelser5. Immobiliseret metal affinitet kromatografi (IMAC) er en af de mest anvendte metoder til højoverførselsproteinrensning6,7 mendets automatiserede systemer er dyre og uoverkommelige for mindrelaboratorier 8. De mere overkommelige pladebaserede alternativer, der i øjeblikket er tilgængelige, anvender brugen af tilgængeligt laboratoriebaseret udstyr, såsom et vakuum. Selv om disse metoder har succes med at forbedre rensningshastigheden, kan det kun opnå højgennemstrømningsrensning i mindre skala, hvilket kun giver protein i mikrogramområdet. Disse begrænsninger betyder, at de færdigpakkede 96 brøndfilterplader (f.eks. fra GE Healthcare, der nu ejes af Cytiva) ikke kan anvendes før biofysiske teknikker9. Gravity kromatografi er den mest omkostningseffektive metode til rensning; Det er dog ubelejligt at oprette flere kolonner og kan være tilbøjelige til fejl for flere proteiner.
En multi kolonne plade adapter (MCPA) er blevet udviklet og vist sig at kunne med succes og bekvemt køre parallelle affinitet kromatografi kolonner på én gang for at rense His-tagged gær SH3 domæner10. MCPA tilbyder en omkostningseffektiv højgennemstrømningsrensningsmetode, der ikke afhænger af dyre instrumentering. Dens fleksible design kan effektivt rense milligram protein ved flere affinitet kromatografi kolonner under tyngdekraften eller vakuum mangfoldighed. Desuden kan harpikstype, volumen og andre parametre justeres for hver enkelt kolonne for hurtigere optimering. Denne undersøgelse viser, at MCPA's ionudvekslingskromatografi kan bruges sammen med AFFINITY-kromatografien af MCPA til at forbedre rensningen af Abp1 SH3-domænet. Derudover kan op til 24 forskellige proteiner adskilles parallelt ved hjælp af disse metoder.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mL/ well collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201240-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL/ well collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201238-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 mL chromatography columns</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>7311550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well long drip plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>200919-100</td>
			<td>Come with 0.25 um filters which are to be removed.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate seal/mat</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201158-100</td>
			<td>Should be peirceable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>His60 Ni Superflow Resin</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td>635660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Q HP anion exchange column</td>
			<td>GE Healthcare (Cytiva)</td>
			<td>17115301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lvis plate reader</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td>Compatible with FLUOstar Omega plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male leur plugs</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-45503-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PlatePrep 96 well Vacuum Manifold Starter kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>575650-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoir collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201244-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Repeater Plus</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>2226020</td>
			<td>With 5 mL and 50 mL syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VACUSAFE vacuum</td>
			<td>INTEGRA</td>
			<td>158 320</td>
			<td>The vacusafe vacuum has a vacuum range from 300 mBar to 600 mBar and a 4 L waste collection bottle</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an economical and versatile high-throughput protein purification system using a multi-column plate adapter

Proteinrensning er afgørende for studiet af proteinstruktur og -funktion og bruges normalt i kombination med biofysiske teknikker. Det er også et centralt element i udviklingen af nye behandlingsfaktorer. Den udviklende æra af funktionelle proteomics giver næring til efterspørgslen efter højoverførselsproteinrensning og forbedrede teknikker til at lette dette. Det blev antaget, at en multi kolonne plade adapter (MCPA) kan interface flere kromatografi kolonner af forskellige harpikser med multi-well plader til parallel rensning. Denne metode tilbyder en økonomisk og alsidig metode til proteinrensning, der kan bruges under tyngdekraften eller vakuum, der konkurrerer med hastigheden på et automatiseret system. MCPA kan bruges til at genvinde milligram udbytter af protein ved en overkommelig og tidseffektiv metode til efterfølgende karakterisering og analyse. MCPA er blevet brugt til høj overførselshastigheds-affinitetsrensning af SH3-domæner. Ionudveksling er også blevet påvist via MCPA for at rense protein efter Ni-NTA-affinitetskromatografi, hvilket indikerer, hvordan dette system kan tilpasses andre rensningstyper. På grund af sin opsætning med flere kolonner kan individuel tilpasning af parametre foretages i samme rensning, der ikke kan opnås ved de nuværende pladebaserede metoder.

Som et eksempel har MCPA med succes renset 14 AbpSH3-mutanter under denatureringsforhold via Ni-NTA (Figur 2A). Et lille forurenende stof ~ 25 kDa kan ses, men proteinet er stadig stort set ren. Dette forurenende stof menes at være YodA, et almindeligt medrenset protein, der findes i E. coli11. Figur 2B viser rensningen af 11 forskellige SH3-domæner under oprindelige forhold. Det lille forurenende stof, der ses under d...

Watch this Scientific Journal Video about An Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System Using a Multi-Column Plate Adapter at JoVE.com

An Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System Using a Multi-Column Plate Adapter

En multi-kolonne plade adapter gør det muligt kromatografi kolonner, der skal interfaces med multi-well indsamling plader til parallel affinitet eller ion udveksling rensning giver en økonomisk høj gennemløb protein rensning metode. Det kan bruges under tyngdekraften eller vakuum giver milligram mængder af protein via overkommelig instrumentering.

Et økonomisk og alsidigt proteinrensningssystem med høj gennemløb ved hjælp af en pladeadapter med flere kolonner

Protein purification is imperative to the study of protein structure and function and is usually used in combination with biophysical techniques. It is ...

Et økonomisk og alsidigt højoverførselsproteinrensningssystem ved hjælp af en multisøjlepladeadapter. Hej, proteinrensning er afgørende for studiet af protein struktur og funktion. Og det bruges normalt i kombination med biofysiske teknikker.Dette er især vigtigt i en tid med funktionelle proteomics, der kræver en høj-gennemløb proteinproduktion. Vi hypotese, at en multi-kolonne plade adapter, MCPA, kan interface flere kromatografi kolonner af forskellige harpikser med multi-well plader til parallel rensning. Med denne adapter har vi udviklet en økonomisk og alsidig metode til proteinrensning, der kan bruges under tyngdekraften eller vakuumkontel i hastigheden på et automatiseret system.Her viser vi denne metode til nikkel affinitet kromatografi og ion udveksling kromatografi. Saml MCPA ved at placere en punkteret tætningsmåtte på en lang drypplade, og indsæt derefter det ønskede antal søjler i hullerne i tætningsmåtten. Placer en åben samling plader i bunden af manifold og tæt med toppen af manifold.Fastgør slangen, og placer den samlede MCPA med søjler øverst. Rør 1,2 mil af nikkel-NTA-opløsningen ind i søjlerne. Under pipettering skal du sikre dig, at perlerne forbliver fuldt blandede.Tænd for pumpen og kør 20% ethanol gennem søjlerne og ind i indsamlingspladen nedenfor. Sluk for pumpen, når væsken er kørt igennem. Indholdet af indsamlingspladen hældes i en affaldskasse.Føj tre harpiksvolumener af EDTA-bufferen til alle kolonnerne. Tænd for pumpen og kør væsken igennem. Vask nu søjlerne med tre harpiksvolumener på 0,5 molar natriumhydroxidbuffer.Vask søjlerne med fire harpiksvolumener på 100 millimolar nikkelsulfat, derefter 10 harpiksmængder Mili-Q vand. Hvis en kolonne kører langsommere, skal du skubbe væsken igennem med sprøjtestemplet. Hæld indholdet af opsamlingspladerne ud i en affaldskasse.Vask derefter søjlerne to gange med fire harpiksvolumener på 10 millimolar imidazolvaskbuffer, og tøm opsamlingspladerne. Hvis flere prøver renses, skal de åbne opsamlingsplader udskiftes med 48-brøndsplader. Når vakuumet er slukket, skal du indlæse lysater i kolonnerne.Brug en tynd plast omrører til forsigtigt at blande perler og lysater i kolonnen for at maksimere binding. Tænd for pumpen og kør væsken igennem. Hvis en kolonne blokeres, overføres lysatharpiksblandingen til en kolonne med et nyt filter.Frys opsamlingspladerne, så de indeholder din flow-through. Udskiftes med en åben opsamlingsplade og vaskes derefter søjlerne med ni harpiksvolumener på 10 millimolar imidazolvaskbuffer. Gentag dette trin fire eller fem gange.For at undgå overløb skal affaldspladerne tømmes med jævne mellemrum. Udskift de åbne kollektionsplader med en 96-brønds plade, der sikrer, at A1 er i øverste venstre hjørne. Pipet en harpiks volumen denaturering elution buffer ind i kolonnerne.Kør væsken igennem og kontroller opsamlingspladen for at sikre, at der ikke er nogen forurening mellem brøndene. Til den næste fortynding skal du gentage de foregående trin og samle i en frisk opsamlingsplade. Tag en 50 mikroliter aliquot af hver udligning for renhed og koncentration analyse.Vask derefter søjlerne med to milliliter 20% ethanol. Tilsæt yderligere to mil 20% ethanol til søjlerne og brug den friske tynde plastomrører til at blande perlerne i ethanolen, før de overføres til et 50 mil rør til opbevaring ved fire grader Celsius. Saml MCPA i vakuummanifold med en åben opsamlingsplade og sprøjtestænk i alle søjlerne.Fjern alle sprøjtestænkerne fra forreste række. Fjern gummipakningen fra en fem mil sprøjte stemplet og derefter gennembore et hul i midten. Skub derefter bunden af en åben kolonne gennem den punkterede gummipakning.Gentag disse trin, og indsæt i den forreste række af kolonner. Sørg for, at Q sepharose perlerne er fuldt blandet. Og med den blå pipettespids, der skæres to centimeter fra bunden, pipetter 800 mikroliter af Q sepharose perlerne i de åbne søjler.Når perlerne har slået sig ned til bunden af kolonnerne, tænde vakuumpumpen nok til at køre 20% ethanol igennem. Vask søjlerne to gange med to mil af 10 millimolar Tris. Sluk for pumpen lige før Tris bufferen er løbet igennem for at forhindre harpiksen udtørring.Afstrømning kan kasseres og erstattes med en 48-brønds opsamlingsplader. Overfør alle prøver, der skal renses, til Q Sepharose-kolonnerne i første række, og brug en tynd plastomrører til at blande prøverne og perlerne i ca. to minutter, før vakuumpumpen tændes. Gem eller frys din flow-through til senere analyse.Med en åben opsamlingsplade vaskes søjlerne to gange med to mil på 10 millimolar Tris. Udskift de åbne opsamlingsplader med 96-brøndspladen. Den første elueringsfraktion kan opsamles i første række eller i anden række.For at elute i anden række skal du fjerne sprøjtestændrene fra disse positioner. Flyt Q Sepharose-kolonnerne til disse positioner, og placer derefter sprøjtekastere i de åbne kolonner i den første række. Pipet en milliliter af de første saltkoncentrationer ind i Q Sepharose kolonnerne.Tænd for pumpen og saml elueringen. For at indsamle den næste udtrækning skal du fjerne sprøjtestænkerne fra de næste positioner, flytte Q Sepharose-kolonnerne i disse positioner og derefter udskifte stemplet i de tidligere positioner. Gentag disse trin for hver på hinanden følgende saltkoncentration, der bruges til at elute.Sørg for, at der anvendes en ny kollektionsplade til hver fjerde elution, og at hver plade er mærket og opbevaret. Med en åben samling plader, vask søjlerne med to mil af fire molar natriumchlorid, 10 millimolar Tris. Pipet to mil af 20% ethanol og køre dette igennem, indtil det er lige over perlerne og derefter forsegle kolonnerne til opbevaring.Som et eksempel har MCPA med succes renset 14 AbpSH3 mutanter i denaturering betingelser ved en nikkel-NTA. Et lille forurenende stof kan ses på 25 kilodaltons, selvom proteinet stadig er stort set rent. De små forurenende stoffer, der ses under denatureringsforhold, fjernes under oprindelige forhold.Dette blev vist, da 11 forskellige SH3-domæner blev renset. Dette viser, at MCPA kan bruges til sammenligning af rensningsbetingelser. AbpSH3 kan adskilles fra størstedelen af forurenende stoffer via ionbytningsrensning fra lysater.Gode udbytter af betydeligt rent AbpSH3 protein blev genvundet med forskellige højere molekylvægte forurenende stoffer. Rensning af prøver efter nikkel-NTA ved hjælp af ionudveksling med MCPA har med succes fjernet disse højvægtsforurenende stoffer. Selv om der stadig er en lille forurening, fraktionerne er stadig stort set ren og har givet gode biofysiske data ved hjælp af NMR og termisk kemisk denaturering assays.Afslutningsvis viser vores resultater, at vores hypotese er korrekt, og at MCPA med succes kan rense milligrammængder af proteiner ved hjælp af forskellige kromatografiteknikker. MCPA-systemet kan konfigureres på flere måder inden for de samme kørsler for at optimere rensningsbetingelserne. Opsætningen er enkel, billig og nem at træne uerfarne brugere, især i laboratorier, der ikke rutinemæssigt renser proteiner.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Identifying Small Molecule Inhibitors of the Protein-protein Interaction Between HCN1 and TRIP8b

Fremgangsmåde til at identificere småmolekylære inhibitorer af protein-protein-vekselvirkning mellem HCN1 og TRIP8b

Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN) channels are expressed ubiquitously throughout the brain, where they function to regulate the ...

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

En Protein Forberedelse Metode til High-throughput Identifikation af proteiner Samspil med en Nuclear Cofactor Brug LC-MS / MS-analyse

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis (QDB)

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis QDB

Høj overførselshastighed, absolut bestemmelse af indholdet af en markeret Protein i væv niveauer ved hjælp af kvantitative Dot duppes analyse (QDB)

Lacking a convenient, quantitative, high throughput immunoblot method for absolute determination of the content of a specific protein at cellular and ...

Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

Ekstracellulære Protein Microarray teknologi til High Throughput påvisning af lav affinitet Receptor-Ligand interaktioner

Secreted factors, membrane-tethered receptors, and their interacting partners are main regulators of cellular communication and initiation of signaling ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identifikation af roman CK2 Kinase substrater ved hjælp af en alsidig biokemiske tilgang

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

DNA-sekvens genkendelse af DNA Primase ved hjælp af Primase profilering med høj gennemløb

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

High-Throughput Total Internal Reflection Fluorescence and Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy Using a Photonic Chip

Høj gennemløb total intern refleksion fluorescens og direkte stokastiske optisk genopbygning mikroskopi ved hjælp af en fotonisk chip

Total internal reflection fluorescence (TIRF) is commonly used in single molecule localization based super-resolution microscopy as it gives enhanced ...

A "Dual-Addition" Calcium Fluorescence Assay for the High-Throughput Screening of Recombinant G Protein-Coupled Receptors

Et "dual-addition" calciumfluorescensassay til high-throughput screening af rekombinante G-proteinkoblede receptorer

G protein-coupled receptors (GPCRs) represent the largest superfamily of receptors and are the targets of numerous human drugs. High-throughput screening ...

Optimization of Flow Cytometric Sorting Parameters for High-Throughput Isolation and Purification of Small Extracellular Vesicles

Optimering af flowcytometriske sorteringsparametre til high-throughput isolering og oprensning af små ekstracellulære vesikler

Small extracellular vesicles (sEV) can be released from all cell types and carry protein, DNA, and RNA. Signaling molecules serve as indicators of the ...

High-Throughput Protein Crystallization via Microdialysis

High-Throughput Protein Crystallization via Microdialysis

High-throughput proteinkrystallisering via mikrodialyse

Understanding the structure-function relationships of macromolecules, such as proteins, at the molecular level is vital for biomedicine and modern drug ...