Name: an economical and versatile high-throughput protein purification system using a multi-column plate adapter
Uploaded: 2021-05-21T13:00:00
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本論文では、国立衛生研究所の国立総合医学研究所の助成番号P20GM103451とリバプール大学の内部研究助成金の機関開発賞(IDeA)によって報告された研究が報告されました。

1. ニNTAクロマトグラフィーの変性
<ol><li>バッファの準備 注: すべてのバッファの詳細については 、表 1 を参照してください。<ol>
<li>500 mL の 0.5 M NaOH を構成し、最初にミリ-Q水を加え、ビーカーがスターラーに乗っている間にゆっくりと NaOH を加えます。0.22 μm フィルターを使用してフィルターします。</li>
		<li>0.22 μmフィルターを使用して、0.1 Mの硫酸ニッケルとフィルター?...

<ol>
	<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+Automated+Mid-Scale+Parallel+Protein+Purification+System+for+Antibody+Purification+and+Affinity+Chromatography.">Development of an Automated Mid-Scale Parallel Protein Purification System for Antibody Purification and Affinity Chromatography.</a> Protein Expression and Purification. , 128 (2016).</li><li>Renaud, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysics+in+Drug+Discovery:+Impact,+Challenges+and+Opportunities.+Nature+Reviews.">Biophysics in Drug Discovery: Impact, Challenges and Opportunities. Nature Reviews.</a> Drug Discovery. 15 (10), (2016).</li><li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+Protein+Purification+and+Quality+Assessment+for+Crystallization.">High-throughput Protein Purification and Quality Assessment for Crystallization.</a> Methods (San Diego, Calif). 55 (1), (2011).</li><li>Pan, W., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Metal+Affinity+NCTR+25+Tag+as+a+Better+Alternative+to+the+His-tag+for+the+Expression+of+Recombinant+Fused+Proteins.">A New Metal Affinity NCTR 25 Tag as a Better Alternative to the His-tag for the Expression of Recombinant Fused Proteins.</a> Protein Expression and Purification. , 164 (2019).</li><li>Locatelli-Hoops, S., Sheen, F. C., Zoubak, L., Gawrisch, K., Yeliseev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+HaloTag+Technology+to+Expression+and+Purification+of+Cannabinoid+Receptor+CB2.">Application of HaloTag Technology to Expression and Purification of Cannabinoid Receptor CB2.</a> Protein Expression and Purification. 89 (1), 62-72 (2013).</li><li>Pina, A. S., Lowe, C. R., Roque, A. C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+Opportunities+in+the+Purification+of+Recombinant+Tagged+Proteins.">Challenges and Opportunities in the Purification of Recombinant Tagged Proteins.</a> Biotechnology Advances. 32 (2), (2014).</li><li>Gaberc-Porekar, V., Menart, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+of+Immobilized-Metal+Affinity+Chromatography.">Perspectives of Immobilized-Metal Affinity Chromatography.</a> Journal of Biochemical and Biophysical Methods. 49 (1-3), (2001).</li><li>Anderson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Process+of+Structure-Based+Drug+Design.">The Process of Structure-Based Drug Design.</a> Chemistry &amp; Biology. 10 (9), (2003).</li><li>Cummin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+High-Throughput+Purification+Method+for+Hit+Identification+in+Protein+Screening.">A Simple High-Throughput Purification Method for Hit Identification in Protein Screening.</a> Journal of Immunological Methods. 339 (1), (2008).</li><li>Dominguez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Multi-Column+Plate+Adapter+Provides+an+Economical+and+Versatile+High-Throughput+Protein+Purification+System.">A Multi-Column Plate Adapter Provides an Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System.</a> Protein Expression and Purification. , 152 (2018).</li><li>Bolanos-Garcia, V. M., Davies, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+Analysis+and+Classification+of+Native+Proteins+From+E.+Coli+Commonly+Co-Purified+by+Immobilised+Metal+Affinity+Chromatography.">Structural Analysis and Classification of Native Proteins From E. Coli Commonly Co-Purified by Immobilised Metal Affinity Chromatography.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1760 (9), (2006).</li><li>Ayyar, B. V., Arora, S., Murphy, C., O'Kennedy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+Chromatography+for+Antibody+Purification.">Affinity Chromatography for Antibody Purification.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). , (1129).</li><li>Jubb, H., Higueruelo, A. P., Winter, A., Blundell, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+Biology+and+Drug+Discovery+for+Protein-Protein+Interactions.">Structural Biology and Drug Discovery for Protein-Protein Interactions.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 33 (5), (2012).</li><li>Grabowski, M., Niedzialkowska, E., Zimmerman, M. D., Minor, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Impact+of+Structural+Genomics:+the+First+Quindecennial.">The Impact of Structural Genomics: the First Quindecennial.</a> Journal of Structural and Functional Genomics. 17 (1), 1-16 (2016).</li></ol>

この方法は、比較的経験の浅いタンパク質生化学者に対して堅牢で使いやすいものですが、留意すべき考慮事項がいくつかあります。
コレクション プレートの過剰充填に関する注意
48ウェルコレクションプレート自体はウェルあたり5mLしか保持しませんが、各96ウェルは2mLしか保持しません。これは、井戸を過剰充填するリスクがある?...

精製タンパク質のミリグラム量を達成するためのタンパク質精製技術は、特にNMRなどの生物物理学的方法において、その特性評価と分析に不可欠です。タンパク質精製は、創薬プロセスやタンパク質とタンパク質相互作用の研究など、他の研究分野の中心でもあります。しかし、このような純粋なタンパク質の量を達成することは、これらの技術1、2、3のボトルネックになる可能性があります。タンパク質精製の主な方法は、タンパク質の個々の特性とそのタグに依存する様々な方法を含むクロマトグラフィーです。アフィニティークロマトグラフィーにおいて、タンパク質は、クロマトグラフィー樹脂4上の特定の基質に対する親和性を有するタグとして働く追加のタンパク質またはペプチドモチーフを有する。最も一般的な親和性法は、Hisタグ付きタンパク質を用いた固定化金属親和クロマトグラフィー(IMAC)であるのに対し、別の一般的な方法は、その電荷に基づいてタンパク質を分離するイオン交換クロマトグラフィーである。高純度のため、アフィニティークロマトグラフィーとイオン交換の組み合わせが頻繁に使用され、通常は高スループットのために高価なラボ機器が必要です。
機能性プロテオミクスの進化する時代は、特定の分析のために単数形のタンパク質ではなく、多数のタンパク質を同時に精製して包括的な解析とゲノム全体の研究のために、ハイスループット技術の需要を促進している5。固定化金属親和性クロマトグラフィー(IMAC)は、高スループットタンパク質精製6、7に最も広く使用されている方法の1つですが、その自動化システムは、より小さな実験室8のために高価で手頃な価格です。現在利用可能な、より手頃な価格のプレートベースの代替品は、真空などのアクセス可能な実験室ベースの機器の使用を採用しています。これらの方法は精製速度の向上に成功しているが、より小さなスケールでしか高スループット精製を達成でき、マイクログラム範囲でタンパク質を生み出すだけである。これらの制限は、プレパックされた96ウェルフィルタープレート(例えば、Cytivaが現在所有しているGEヘルスケアから)を生物物理学的技術の前に使用できないことを意味します。重力クロマトグラフィーは、最もコスト効率の高い精製方法です。ただし、複数の列を設定するのは不便であり、複数のタンパク質ではエラーが発生しやすくなります。
マルチカラムプレートアダプタ(MCPA)が開発され、一度に平行アフィニティークロマトグラフィーカラムを正常かつ便利に実行し、Hisタグ付き酵母SH3ドメイン10を精製することが実証されています。MCPAは費用がかかる器械使用に依存しない費用効率の高い高い効率の精製方法を提供する。その柔軟な設計は、重力または真空マニホールドの下で複数の親和性クロマトグラフィーカラムによって効果的にタンパク質のミリグラムを精製することができます。さらに、樹脂の種類、体積、およびその他のパラメータを個々のカラムごとに調整して、最適化を高速化することができます。この研究は、MCPAによるイオン交換クロマトグラフィーがMCPAによるアフィニティークロマトグラフィーと組み合わせて使用され、Abp1 SH3ドメインの精製を強化できることを示している。さらに、これらの方法を用いて、最大24種類のタンパク質を並列に分離することができます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mL/ well collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201240-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL/ well collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201238-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 mL chromatography columns</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>7311550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well long drip plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>200919-100</td>
			<td>Come with 0.25 um filters which are to be removed.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate seal/mat</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201158-100</td>
			<td>Should be peirceable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>His60 Ni Superflow Resin</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td>635660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Q HP anion exchange column</td>
			<td>GE Healthcare (Cytiva)</td>
			<td>17115301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lvis plate reader</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td>Compatible with FLUOstar Omega plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male leur plugs</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-45503-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PlatePrep 96 well Vacuum Manifold Starter kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>575650-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoir collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201244-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Repeater Plus</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>2226020</td>
			<td>With 5 mL and 50 mL syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VACUSAFE vacuum</td>
			<td>INTEGRA</td>
			<td>158 320</td>
			<td>The vacusafe vacuum has a vacuum range from 300 mBar to 600 mBar and a 4 L waste collection bottle</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an economical and versatile high-throughput protein purification system using a multi-column plate adapter

タンパク質の精製は、タンパク質の構造と機能の研究に不可欠であり、通常、生物物理学的手法と組み合わせて使用されます。また、新しい治療薬の開発における重要な要素でもあります。機能性プロテオミクスの進化する時代は、これを容易にするための高スループットタンパク質精製と改良された技術の需要を促進しています。マルチカラムプレートアダプタ(MCPA)は、並列精製のためにマルチウェルプレートを持つ異なる樹脂の複数のクロマトグラフィーカラムをインターフェースできると仮定しました。この方法は、自動化されたシステムの速度に匹敵する、重力または真空の下で使用することができるタンパク質精製の経済的で汎用性の高い方法を提供する。MCPA は、その後の特性評価と分析のための手頃な価格と時間効率の高い方法によってタンパク質のミリグラムの収率を回復するために使用できます。.MCPAはSH3ドメインのハイスループットアフィニティー精製のために使用されている。また、MCPAを介してイオン交換が実証され、タンパク質ポストNi-NTAアフィニティークロマトグラフィーを精製し、このシステムを他の精製タイプにどのように適合させることができるかを示しています。複数の列を使用した設定により、パラメータの個別カスタマイズは同じ精製で行うことができます。

一例として、MCPAはNi-NTAを介して変性条件で14 AbpSH3変異体を精製することに成功した(図2A)。小さな汚染物質~25kDaが見られますが、タンパク質はまだ大部分が純粋です。この汚染物質は、大腸菌11に見られる一般的な共精製タンパク質であるYodAであると考えられている。図2Bは、天然条件下における11種類のSH3ドメイン?...

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An Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System Using a Multi-Column Plate Adapter

マルチカラムプレートアダプタにより、クロマトグラフィーカラムを並列アフィニティーまたはイオン交換精製用のマルチウェルコレクションプレートとインターフェースして、経済的に高スループットのタンパク質精製方法を提供します。それは現実的な器械使用によって蛋白質のミリグラム量を得る重力または真空の下で使用することができる。

マルチカラムプレートアダプタを用いた経済的で多用途の高スループットタンパク質精製システム

Protein purification is imperative to the study of protein structure and function and is usually used in combination with biophysical techniques. It is ...

マルチカラムプレートアダプタを使用した経済的で多用途の高スループットタンパク精製システム。こんにちは、タンパク質の構造と機能の研究にはタンパク質精製が不可欠です。そして、それは通常、生物物理学的技術と組み合わせて使用されます。これは、高スループットタンパク質の生産を必要とする機能プロテオミクスの時代に特に重要です。我々は、マルチカラムプレートアダプターであるMCPAが、並列精製のためにマルチウェルプレートと異なる樹脂の複数のクロマトグラフィーカラムをインターフェースすることができると仮定した。このアダプターを使用して、我々は自動化システムの速度で重力または真空のライバルの下で使用することができるタンパク質浄化の経済的で、汎用性の高い方法を開発しました。ここでは、ニッケル親和性クロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーに関するこの方法を示す。穿刺されたシールマットを長いドリッププレートに置いてMCPAを組み立て、シーリングマットの穴に所望の列数を挿入します。マニホールドの基部に開いたコレクションプレートを置き、マニホールドの上部で閉じます。チューブを取り付け、上部に柱を持つ組み立てられた MCPA を配置します。ニッケルNTA溶液のピペット1.2ミルを柱に入れます。ピペットしながら、ビーズが完全に混合されたままであることを確認してください。ポンプのスイッチを入れ、20%エタノールをカラムから下のコレクションプレートに流します。液体が通ったらポンプをオフにします。回収板の中身をゴミ箱に入れなさい。すべての列にEDTAバッファーの3つの樹脂ボリュームを追加します。ポンプの電源を入れ、液体を通します。今0.5モル水酸化ナトリウムバッファーの3つの樹脂ボリュームでカラムを洗浄します。100ミリモルニッケル硫酸の4つの樹脂容積、ミリQ水の10樹脂ボリュームでカラムを洗浄します。カラムの動作が遅い場合は、シリンジプランジャーで液体を押し通します。回収プレートの中身をゴミ箱に注ぎます。その後、10ミリモルイミダゾール洗浄バッファーの4つの樹脂ボリュームでカラムを2回洗浄し、コレクションプレートを空にします。複数のサンプルを精製する場合は、開いた回収プレートを48ウェルプレートに交換します。真空をオフにして、ライセートをカラムにロードします。薄いプラスチック製のスターラーを使用して、ビーズとライゼを列内に穏やかに混ぜて結合を最大化します。ポンプの電源を入れ、液体を通します。カラムがブロックされた場合は、新しいフィルターを使用して、ライセート樹脂混合物をカラムに移します。フロースルーを含めるには、コレクションプレートをフリーズします。開いたコレクションプレートに交換し、10ミリモルイミダゾール洗浄バッファーの9樹脂ボリュームでカラムを洗浄します。この手順を 4 回または 5 回繰り返します。オーバーフローを避けるために、定期的に廃棄物プレートを空にします。開いたコレクションプレートを96ウェルプレートに置き換え、A1が左上隅に表示されていることを確認します。変性溶出バッファーの樹脂体積を柱にピペットする。液体を通して、井戸間に汚染がないことを確認するために回収板を点検しなさい。次の希釈のために、前のステップを繰り返し、新鮮なコレクションプレートに集めます。純度および濃度分析のために各溶出の50マイクロリットルのアリコートを取る。次に、20%エタノールの2ミリリットルでカラムを洗浄します。20%エタノールの別の2ミルを列に加え、新鮮な薄いプラスチックスターラーを使用してエタノール中のビーズを混ぜ合わせ、摂氏4度で貯蔵するために50milチューブに移します。すべての柱にオープンコレクションプレートと注射器プランジャーを使用して、MCPAを真空マニホールドで組み立てます。前列からすべての注射器のプランジャーを取り外します。5ミルシリンジプランジャーからゴム製ガスケットを取り出し、中央に穴を開けます。次に、開いた柱の底部を穿刺されたゴム製ガスケットを通して押します。これらの手順を繰り返し、列の最前列に挿入します。Qセファロースビーズが完全に混合されていることを確認します。そして、下から2センチメートルカットされた青いピペットチップで、Qセファローズビーズの800マイクロリットルを開いた柱にピペットします。ビーズがカラムの底に落ち着いたら、20%エタノールを通して実行するのに十分な真空ポンプをオンにします。10ミリモルトリスの2ミルで列を2回洗います。トリスバッファーが通る直前にポンプをオフにして、樹脂が乾燥するのを防ぎます。流出は廃棄され、48ウェルのコレクションプレートに置き換えることができます。精製するすべてのサンプルを最初の行のQセファローズ列に移し、薄いプラスチックスターラーを使用してサンプルとビーズを約2分間混合してから真空ポンプをオンにします。後で分析するためにフロースルーを保存またはフリーズします。オープンコレクションプレートで、10ミリモルトリスの2ミルでカラムを2回洗います。開いたコレクションプレートを96ウェルプレートに交換します。最初の溶出分数は、最初の行または2番目の行に集めることができます。2列目に溶け出すために、これらの位置から注射器のプランジャーを取り外します。Q セファローズ列をこれらの位置に移動し、最初の行の開いた列にシリンジ のプランジャーを配置します。第1塩濃度の1ミリリットルをQセファローズ列にピペットする。ポンプの電源を入れ、溶出を収集します。次の溶出を収集するには、次の位置から注射器のプランジャーを取り外し、Qセファローズ列をこれらの位置に移動し、前の位置のプランジャーを交換します。溶出に使用される連続した塩濃度ごとにこれらのステップを繰り返します。4 つの溶出ごとに新しいコレクション プレートが使用され、すべてのプレートにラベルが付いて保存されていることを確認します。オープンコレクションプレートで、4つのモル塩化ナトリウム、10ミリモルトリスの2ミルで柱を洗います。20%エタノールの2ミルをピレットし、ビーズのすぐ上になるまでこれを実行し、保管のために列を密封します。一例として、MCPAはニッケルNTAによる変性条件下での14個のAbpSH3変異体の精製に成功した。タンパク質はまだ大部分が純粋であるが、小さな汚染物質は25キロダルトンで見ることができます。変性条件で見られる小さな汚染物質は、ネイティブ条件で除去されます。これは、11種類のSH3ドメインを精製した際に示した。これは、MCPAが精製条件の比較に使用できることを示しています。AbpSH3は、イオン交換精製を介して、大部分の汚染物質から、分解物から分離することができる。かなり純粋なAbpSH3タンパク質の良好な収率は、種々のより高い分子量の汚染物質で回収された。MCPAとのイオン交換を用いたニッケル-NTA後の試料の精製は、これらの高重量汚染物質を正常に除去しました。まだわずかな汚染がありますが、分画はまだ大部分が純粋であり、NMRと熱化学的変性アッセイを使用して良好な生物物理学データを生み出しています。結論として、我々の仮説は正しく、MCPAは異なるクロマトグラフィー技術を用いてミリグラム量のタンパク質を正常に精製できることを示している。MCPA システムは、同じ実行内で複数の方法で構成して、精製条件を最適化することができます。セットアップは、特に日常的にタンパク質を精製しないラボでは、シンプルで安価で、経験の浅いユーザーを訓練するのは簡単です。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Identifying Small Molecule Inhibitors of the Protein-protein Interaction Between HCN1 and TRIP8b

HCN1とTRIP8bの間のタンパク質 - タンパク質相互作用の小分子阻害剤を同定するための方法

Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN) channels are expressed ubiquitously throughout the brain, where they function to regulate the ...

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

LC-MS / MS分析を用いた核補因子と相互作用するタンパク質のハイスループット同定のためのタンパク質調製方法

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis (QDB)

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis QDB

高スループット、定量的なドットを使用して組織レベルで選択されたタンパク質の含有量の絶対測定のしみの分析 (おっ)

Lacking a convenient, quantitative, high throughput immunoblot method for absolute determination of the content of a specific protein at cellular and ...

Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

低親和性受容体-リガンド相互作用のハイスループット検出の細胞外タンパク質マイクロ アレイ技術

Secreted factors, membrane-tethered receptors, and their interacting partners are main regulators of cellular communication and initiation of signaling ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

多彩な生化学的アプローチを用いた新規 CK2 キナーゼ基板の識別

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

ハイスループットプリマゼプロファイリングを用いたDNAプリマゼによるDNA配列認識

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

High-Throughput Total Internal Reflection Fluorescence and Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy Using a Photonic Chip

フォトニックチップを用いたハイスループット全内部反射蛍光と直接確率光学再構成顕微鏡

Total internal reflection fluorescence (TIRF) is commonly used in single molecule localization based super-resolution microscopy as it gives enhanced ...

A "Dual-Addition" Calcium Fluorescence Assay for the High-Throughput Screening of Recombinant G Protein-Coupled Receptors

組換えGタンパク質共役型受容体のハイスループットスクリーニングのための「二重付加」カルシウム蛍光アッセイ

G protein-coupled receptors (GPCRs) represent the largest superfamily of receptors and are the targets of numerous human drugs. High-throughput screening ...

Optimization of Flow Cytometric Sorting Parameters for High-Throughput Isolation and Purification of Small Extracellular Vesicles

低分子細胞外小胞のハイスループット単離および精製のためのフローサイトメトリーソーティングパラメータの最適化(英語)

Small extracellular vesicles (sEV) can be released from all cell types and carry protein, DNA, and RNA. Signaling molecules serve as indicators of the ...

High-Throughput Protein Crystallization via Microdialysis

High-Throughput Protein Crystallization via Microdialysis

マイクロダイアリシス による ハイスループットタンパク質結晶化

Understanding the structure-function relationships of macromolecules, such as proteins, at the molecular level is vital for biomedicine and modern drug ...