Name: an economical and versatile high-throughput protein purification system using a multi-column plate adapter
Uploaded: 2021-05-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System Using a Multi-Column Plate Adapter at JoVE.com

Forskning rapportert i denne publikasjonen ble støttet av en Institutional Development Award (IDeA) fra National Institute of General Medical Sciences of the National Institutes of Health under tilskuddsnummer P20GM103451 og et internt forskningsstipend fra University of Liverpool.

1. Denaturing Ni-NTA kromatografi
<ol><li>Klargjøre buffere MERK: Se tabell 1 for detaljer om alle buffere.<ol>
<li>Utgjør 500 ml 0,5 M NaOH, sørg for å legge til Milli-Q-vannet først og tilsett deretter NaOH sakte mens begeret er på en rører. Filtrer med et filter på 0,22 μm.</li>
		<li>Forbered 100 ml 0,1 M nikkelsulfat og filtrer med et filter på 0,22 μm.</li>
		<li>Forbered 50 ml 2 M imidazol og filtrer med et filter på 0,22 μm.</li>
		<li>Klargjør og 0,22 μm filter 1,5 L ...

<ol>
	<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+Automated+Mid-Scale+Parallel+Protein+Purification+System+for+Antibody+Purification+and+Affinity+Chromatography.">Development of an Automated Mid-Scale Parallel Protein Purification System for Antibody Purification and Affinity Chromatography.</a> Protein Expression and Purification. , 128 (2016).</li><li>Renaud, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysics+in+Drug+Discovery:+Impact,+Challenges+and+Opportunities.+Nature+Reviews.">Biophysics in Drug Discovery: Impact, Challenges and Opportunities. Nature Reviews.</a> Drug Discovery. 15 (10), (2016).</li><li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+Protein+Purification+and+Quality+Assessment+for+Crystallization.">High-throughput Protein Purification and Quality Assessment for Crystallization.</a> Methods (San Diego, Calif). 55 (1), (2011).</li><li>Pan, W., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Metal+Affinity+NCTR+25+Tag+as+a+Better+Alternative+to+the+His-tag+for+the+Expression+of+Recombinant+Fused+Proteins.">A New Metal Affinity NCTR 25 Tag as a Better Alternative to the His-tag for the Expression of Recombinant Fused Proteins.</a> Protein Expression and Purification. , 164 (2019).</li><li>Locatelli-Hoops, S., Sheen, F. C., Zoubak, L., Gawrisch, K., Yeliseev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+HaloTag+Technology+to+Expression+and+Purification+of+Cannabinoid+Receptor+CB2.">Application of HaloTag Technology to Expression and Purification of Cannabinoid Receptor CB2.</a> Protein Expression and Purification. 89 (1), 62-72 (2013).</li><li>Pina, A. S., Lowe, C. R., Roque, A. C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+Opportunities+in+the+Purification+of+Recombinant+Tagged+Proteins.">Challenges and Opportunities in the Purification of Recombinant Tagged Proteins.</a> Biotechnology Advances. 32 (2), (2014).</li><li>Gaberc-Porekar, V., Menart, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+of+Immobilized-Metal+Affinity+Chromatography.">Perspectives of Immobilized-Metal Affinity Chromatography.</a> Journal of Biochemical and Biophysical Methods. 49 (1-3), (2001).</li><li>Anderson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Process+of+Structure-Based+Drug+Design.">The Process of Structure-Based Drug Design.</a> Chemistry &amp; Biology. 10 (9), (2003).</li><li>Cummin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+High-Throughput+Purification+Method+for+Hit+Identification+in+Protein+Screening.">A Simple High-Throughput Purification Method for Hit Identification in Protein Screening.</a> Journal of Immunological Methods. 339 (1), (2008).</li><li>Dominguez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Multi-Column+Plate+Adapter+Provides+an+Economical+and+Versatile+High-Throughput+Protein+Purification+System.">A Multi-Column Plate Adapter Provides an Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System.</a> Protein Expression and Purification. , 152 (2018).</li><li>Bolanos-Garcia, V. M., Davies, O. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+Analysis+and+Classification+of+Native+Proteins+From+E.+Coli+Commonly+Co-Purified+by+Immobilised+Metal+Affinity+Chromatography.">Structural Analysis and Classification of Native Proteins From E. Coli Commonly Co-Purified by Immobilised Metal Affinity Chromatography.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1760 (9), (2006).</li><li>Ayyar, B. V., Arora, S., Murphy, C., O'Kennedy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Affinity+Chromatography+for+Antibody+Purification.">Affinity Chromatography for Antibody Purification.</a> Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). , (1129).</li><li>Jubb, H., Higueruelo, A. P., Winter, A., Blundell, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+Biology+and+Drug+Discovery+for+Protein-Protein+Interactions.">Structural Biology and Drug Discovery for Protein-Protein Interactions.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 33 (5), (2012).</li><li>Grabowski, M., Niedzialkowska, E., Zimmerman, M. D., Minor, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Impact+of+Structural+Genomics:+the+First+Quindecennial.">The Impact of Structural Genomics: the First Quindecennial.</a> Journal of Structural and Functional Genomics. 17 (1), 1-16 (2016).</li></ol>

Metoden er robust og enkel å bruke for relativt uerfarne proteinbiokjemikere, men det er noen få hensyn å huske på.
Advarsel om overfylling av oppsamlingsplater
Selve oppsamlingsplaten på 48 brønner holder bare 5 ml per brønn, mens hver 96-brønn bare rommer 2 ml. Dette må tas i betraktning når du legger til buffer og kjører prøve gjennom kolonnen, da det er risiko for å overfylle brønnene. Spesielt må det tas hensyn til når du overf?...

Proteinrensingsteknikker for å oppnå milligram mengder rensede proteiner er avgjørende for deres karakterisering og analyse, spesielt for biofysiske metoder som NMR. Proteinrensing er også sentralt på tvers av andre studieområder som legemiddeloppdagelsesprosesser og proteinproteininteraksjonsstudier; Å oppnå slike mengder rent protein kan imidlertid bli en flaskehals for disse teknikkene1,2,3. Den viktigste metoden for proteinrensing er kromatografi, som inkluderer en rekke metoder som er avhengige av de individuelle egenskapene til proteiner og deres koder. I affinitetskromatografi har proteiner et ekstra protein- eller peptidmotiv som fungerer som en tag som har en affinitet for et bestemt substrat på kromatografiharpiksen4. Den vanligste affinitetsmetoden er immobilisert metallaffinitetskromatografi (IMAC) ved hjelp av His-taggede proteiner, mens en annen populær metode er ionutvekslingskromatografi som skiller proteiner basert på deres ladning. For høyeste renhet brukes ofte en kombinasjon av affinitetskromatografi og ionbytte sammen, som vanligvis krever dyrt laboratorieutstyr for høy gjennomstrømning.
Den utviklende epoken med funksjonell proteomikk driver etterspørselen etter høygjennomstrømningsteknikker for rensing av ikke entall proteiner for spesifikk analyse, men et stort antall proteiner samtidig for omfattende analyse og genom brede studier5. Immobilisert metallaffinitetskromatografi (IMAC) er en av de mest brukte metodene for proteinrensing med høy gjennomstrømning6,7, men de automatiserte systemene er kostbare og uoverkommelige for mindre laboratorier8. De rimeligere platebaserte alternativene som for tiden er tilgjengelige, bruker tilgjengelig laboratoriebasert utstyr, for eksempel et vakuum. Selv om disse metodene lykkes i å forbedre rensehastigheten, kan den bare oppnå rensing med høy gjennomstrømning i mindre skala, og gir bare protein i mikrogramområdet. Disse begrensningene betyr at de ferdigpakkede 96 brønnfilterplatene (f.eks. fra GE Healthcare som nå eies av Cytiva) ikke kan brukes før biofysiske teknikker9. Tyngdekraft kromatografi er den mest kostnadseffektive metoden for rensing; Det er imidlertid upraktisk å sette opp flere kolonner og kan være utsatt for feil for flere proteiner.
En multikolonners plateadapter (MCPA) er utviklet og bevist å kunne og enkelt kjøre parallelle affinitetskromatografikolonner samtidig for å rense His-tagged gjær SH3 domener10. MCPA tilbyr en kostnadseffektiv rensingsmetode med høy gjennomstrømning som ikke er avhengig av kostbar instrumentering. Den fleksible designen kan effektivt rense milligram protein ved hjelp av flere affinitetskromatografikolonner under tyngdekraften eller vakuummanifolden. Videre kan harpikstype, volum og andre parametere justeres for hver enkelt kolonne for raskere optimalisering. Denne studien viser at ionutvekslingskromatografi fra MCPA kan brukes sammen med affinitetskromatografi av MCPA for å forbedre rensingen av Abp1 SH3-domenet. I tillegg kan opptil 24 forskjellige proteiner skilles parallelt ved hjelp av disse metodene.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 mL/ well collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201240-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL/ well collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201238-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 mL chromatography columns</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>7311550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well long drip plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>200919-100</td>
			<td>Come with 0.25 um filters which are to be removed.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate seal/mat</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201158-100</td>
			<td>Should be peirceable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>His60 Ni Superflow Resin</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td>635660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Q HP anion exchange column</td>
			<td>GE Healthcare (Cytiva)</td>
			<td>17115301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lvis plate reader</td>
			<td>BMG LABTECH</td>
			<td></td>
			<td>Compatible with FLUOstar Omega plate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male leur plugs</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-45503-70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PlatePrep 96 well Vacuum Manifold Starter kit</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>575650-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoir collection plate</td>
			<td>Agilent technologies</td>
			<td>201244-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Repeater Plus</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>2226020</td>
			<td>With 5 mL and 50 mL syringes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VACUSAFE vacuum</td>
			<td>INTEGRA</td>
			<td>158 320</td>
			<td>The vacusafe vacuum has a vacuum range from 300 mBar to 600 mBar and a 4 L waste collection bottle</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an economical and versatile high-throughput protein purification system using a multi-column plate adapter

Proteinrensing er avgjørende for studiet av proteinstruktur og funksjon og brukes vanligvis i kombinasjon med biofysiske teknikker. Det er også en nøkkelkomponent i utviklingen av nye terapeutiske behandlinger. Den utviklende epoken med funksjonell proteomikk driver etterspørselen etter proteinrensing med høy gjennomstrømning og forbedrede teknikker for å lette dette. Det ble hypoteset at en multikolonners plateadapter (MCPA) kan grensesnitt flere kromatografikolonner av forskjellige harpikser med multi-brønnplater for parallell rensing. Denne metoden tilbyr en økonomisk og allsidig metode for proteinrensing som kan brukes under tyngdekraft eller vakuum, og konkurrerer med hastigheten til et automatisert system. MCPA kan brukes til å gjenopprette milligram proteinutbytter ved en rimelig og tidseffektiv metode for etterfølgende karakterisering og analyse. MCPA har blitt brukt til rensing av SH3-domener med høy gjennomstrømningsaffinitet. Ionutveksling har også blitt demonstrert via MCPA for å rense proteinpost Ni-NTA affinitetskromatografi, noe som indikerer hvordan dette systemet kan tilpasses andre renselsestyper. På grunn av oppsettet med flere kolonner, kan individuell tilpasning av parametere gjøres i samme rensing, uoppnåelig av de nåværende platebaserte metodene.

MCPA har for eksempel renset 14 AbpSH3-mutanter under denatureringsforhold via Ni-NTA (figur 2A). En liten forurensning ~ 25 kDa kan ses, men proteinet er fortsatt stort sett rent. Denne forurensningen antas å være YodA, et vanlig co-renset protein som finnes i E. coli11. Figur 2B viser rensing av 11 forskjellige SH3-domener under opprinnelige forhold. Den lille forurensningen sett i denatureringsforhold fjernes under ...

Watch this Scientific Journal Video about An Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System Using a Multi-Column Plate Adapter at JoVE.com

An Economical and Versatile High-Throughput Protein Purification System Using a Multi-Column Plate Adapter

En flerkolonners plateadapter gjør det mulig å koble kromatografikolonner til flerbrønns oppsamlingsplater for parallell affinitet eller ionutvekslingsrensing, noe som gir en økonomisk proteinrensingsmetode med høy gjennomstrømning. Den kan brukes under tyngdekraften eller vakuum som gir milligram mengder protein via rimelig instrumentering.

Et økonomisk og allsidig proteinrensesystem med høy gjennomstrømning ved hjelp av en adapter med flere kolonner

Protein purification is imperative to the study of protein structure and function and is usually used in combination with biophysical techniques. It is ...

Et økonomisk og allsidig proteinrensingssystem med høy gjennomstrømning ved hjelp av en adapter med flere kolonner. Hei, proteinrensing er avgjørende for studiet av proteinstruktur og funksjon. Og det brukes vanligvis i kombinasjon med biofysiske teknikker.Dette er spesielt viktig i en tid med funksjonell proteomikk som krever en proteinproduksjon med høy gjennomstrømning. Vi antok at en flerkolonners plateadapter, MCPA, kan grensesnitt flere kromatografikolonner av forskjellige harpikser med flerbrønnplater for parallell rensing. Med denne adapteren har vi utviklet en økonomisk og allsidig metode for proteinrensing som kan brukes under tyngdekraften eller vakuumkonkurrenten i hastigheten til et automatisert system.Her viser vi denne metoden for nikkel affinitet kromatografi og ionutveksling kromatografi. Monter MCPA ved å plassere en punktert tetningsmatte på en lang dryppplate, og sett deretter ønsket antall kolonner inn i hullene på tetningsmatten. Plasser en åpen oppsamlingsplater i bunnen av manifolden og lukk med toppen av manifolden.Fest slangen og plasser den monterte MCPA-en med søyler på toppen. Pipet 1,2 mil av nikkel-NTA-løsningen inn i kolonnene. Under pipettering, sørg for at perlene forblir fullt blandet.Slå på pumpen og kjør 20% etanol gjennom kolonnene og inn i oppsamlingsplaten nedenfor. Slå av pumpen når væsken er gjennomkjørt. Kast innholdet på oppsamlingsplaten i en avfallsboks.Legg til tre harpiksvolumer med EDTA-buffer i alle kolonnene. Slå på pumpen og kjør væsken gjennom. Vask nå kolonnene med tre harpiksvolumer på 0,5 molar natriumhydroksidbuffer.Vask kolonnene med fire harpiksvolumer på 100 millimolar nikkelsulfat, deretter 10 harpiksvolumer av Mili-Q vann. Hvis en kolonne går langsommere, skyver du væsken gjennom med sprøytestempelen. Hell ut innholdet på oppsamlingsplatene i en avfallsboks.Vask deretter kolonnene to ganger med fire harpiksvolumer på 10 millimolar imidazol vaskebuffer og tøm oppsamlingsplatene. Hvis flere prøver renses, må du bytte ut de åpne oppsamlingsplatene med en 48-brønnsplate. Når vakuumet er av, legger du lysene inn i kolonnene.Bruk en tynn plastrører for å forsiktig blande perlene og lystene i kolonnen for å maksimere bindingen. Slå på pumpen og kjør væsken gjennom. Hvis en kolonne blir blokkert, overfør lysateharpiksblandingen til en kolonne med et nytt filter.Frys oppsamlingsplatene slik at de inneholder gjennomstrømningen. Erstattet med en åpen oppsamlingsplate og vask deretter kolonnene med ni harpiksvolumer på 10 millimolar imidazolvaskbuffer. Gjenta dette trinnet fire eller fem ganger.Tøm avfallsplatene med jevne mellomrom for å unngå overløp. Sett på plass de åpne oppsamlingsplatene med en 96-brønnsplate, noe som sikrer at A1 er i øverste venstre hjørne. Rør ett harpiksvolum av denaturing elution buffer inn i kolonnene.Kjør væsken gjennom og kontroller oppsamlingsplaten for å sikre at det ikke er forurensning mellom brønnene. For neste fortynning, gjenta de forrige trinnene og samle i en ny oppsamlingsplate. Ta en 50 mikroliter aliquot av hver elution for renhets- og konsentrasjonsanalysen.Deretter vasker du kolonnene med to milliliter 20% etanol. Tilsett ytterligere to mil med 20% etanol i kolonnene og bruk den friske tynne plastrøreren til å blande perlene i etanol før du overfører til et 50 mil rør for lagring ved fire grader Celsius. Monter MCPA i vakuummanifold med en åpen oppsamlingsplate og sprøytestempler i alle søylene.Fjern alle sprøytestempeene fra første rad. Fjern gummipakningen fra et fem mils sprøytestempelet og pierce deretter et hull i midten. Skyv deretter bunnen av en åpen kolonne gjennom den punkterte gummipakningen.Gjenta disse trinnene, og sett dem inn i den første raden med kolonner. Forsikre deg om at Q sepharose perler er fullt blandet. Og med den blå pipettespissen som er kuttet to centimeter fra bunnen, pipet 800 mikroliter av Q sepharose perler inn i de åpne kolonnene.Når perlene har lagt seg til bunnen av kolonnene, slå på vakuumpumpen nok til å kjøre 20% etanol gjennom. Vask kolonnene to ganger med to mil på 10 millimolar Tris. Slå av pumpen rett før Tris-bufferen har gått gjennom for å forhindre at harpiksen tørker ut.Avrenning kan kastes og erstattes med en 48-brønns oppsamlingsplate. Overfør alle prøver som skal renses til Q Sepharose-kolonnene i første rad, og bruk en tynn plastrører til å blande prøvene og perlene i rundt to minutter før du slår på vakuumpumpen. Lagre eller frys gjennomstrømningen for senere analyse.Med en åpen oppsamlingsplate, vask kolonnene to ganger med to mil på 10 millimolar Tris. Sett på plass de åpne oppsamlingsplatene med 96-brønnsplaten. Den første elutionfraksjonen kan samles i første rad eller i andre rad.For å unngå i andre rad, fjern sprøytestempevene fra disse posisjonene. Flytt Q Sepharose-kolonnene til disse posisjonene, og plasser deretter sprøytestempler i de åpne kolonnene i den første raden. Rør en milliliter av de første saltkonsentrasjonene i Q Sepharose-kolonnene.Slå på pumpen og samle elution. For å samle neste elution, fjern sprøytestemplene fra neste posisjoner, flytt Q Sepharose-kolonnene inn i disse posisjonene og erstatt deretter stempelet i tidligere posisjoner. Gjenta disse trinnene for hver påfølgende saltkonsentrasjon som brukes til å unnslippe.Sørg for at en ny oppsamlingsplate brukes til hver fjerde elution, og at hver plate er merket og lagret. Med en åpen oppsamlingsplater, vask kolonnene med to mil med fire molar natriumklorid, 10 millimolar Tris. Rør to mil med 20% etanol og kjør dette gjennom til det er like over perlene og forsegle deretter kolonnene for lagring.Som et eksempel har MCPA vellykket renset 14 AbpSH3 mutanter i denaturing forhold av en nikkel-NTA. En liten forurensning kan sees på 25 kilodaltonn, selv om proteinet fortsatt stort sett er rent. De små forurensningene sett i denatureringsforhold fjernes under opprinnelige forhold.Dette ble vist da 11 forskjellige SH3-domener ble renset. Dette viser at MCPA kan brukes til sammenligning av renseforhold. AbpSH3 kan skilles fra de fleste forurensninger via ionutvekslingsrensing fra lysater.Gode utbytter av betydelig rent AbpSH3 protein ble gjenvunnet med ulike høyere molekylvekter forurensninger. Rensing av prøver etter nikkel-NTA ved bruk av ionbytte med MCPA har fjernet disse høyvekts forurensningene. Selv om det fortsatt er en liten forurensning, er fraksjonene fortsatt stort sett rene og har gitt gode biofysiske data ved hjelp av NMR og termiske kjemiske denatureringsanalyser.Til slutt viser våre resultater at vår hypotese er riktig og at MCPA med hell kan rense milligram mengder proteiner ved hjelp av forskjellige kromatografiteknikker. MCPA-systemet kan konfigureres på flere måter i samme kjøringer for å optimalisere renseforholdene. Oppsettet er enkelt, billig og enkelt å trene uerfarne brukere, spesielt i laboratorier som ikke rutinemessig renser proteiner.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Method for Identifying Small Molecule Inhibitors of the Protein-protein Interaction Between HCN1 and TRIP8b

Metode for å identifisere lavmolekylære inhibitorer av protein-protein samhandling mellom HCN1 og TRIP8b

Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated (HCN) channels are expressed ubiquitously throughout the brain, where they function to regulate the ...

A Protein Preparation Method for the High-throughput Identification of Proteins Interacting with a Nuclear Cofactor Using LC-MS/MS Analysis

En Protein Forberedelse metode for High-throughput identifisering av proteiner samspill med et kjernefysisk kofaktor Bruke LC-MS / MS-analyse

Transcriptional coregulators are vital to the efficient transcriptional regulation of nuclear chromatin structure. Coregulators play a variety of roles in ...

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis (QDB)

High Throughput, Absolute Determination of the Content of a Selected Protein at Tissue Levels Using Quantitative Dot Blot Analysis QDB

Høy gjennomstrømning, absolutt vilje av innholdet i et valgt Protein på vev nivåer ved hjelp av kvantitative Dot Blot analyse (QDB)

Lacking a convenient, quantitative, high throughput immunoblot method for absolute determination of the content of a specific protein at cellular and ...

Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

Ekstracellulære Protein Microarray teknologi for høy gjennomstrømning påvisning av lav affinitet reseptor-Ligand interaksjoner

Secreted factors, membrane-tethered receptors, and their interacting partners are main regulators of cellular communication and initiation of signaling ...

Identification of Novel CK2 Kinase Substrates Using a Versatile Biochemical Approach

Identifikasjon av romanen CK2 Kinase underlag med en allsidig biokjemiske tilnærming

The study of kinase-substrate relationships is essential to gain a complete understanding of the functions of these enzymes and their downstream targets ...

DNA Sequence Recognition by DNA Primase Using High-Throughput Primase Profiling

DNA Sequence anerkjennelse av DNA Primase ved hjelp av høy gjennomstrømming Primase profilering

DNA primase synthesizes short RNA primers that initiate DNA synthesis of Okazaki fragments on the lagging strand by DNA polymerase during DNA replication. ...

High-Throughput Total Internal Reflection Fluorescence and Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy Using a Photonic Chip

Høy-gjennomstrømning total intern refleksjon fluorescens og direkte Stokastisk optisk rekonstruksjon mikroskopi bruke en fotoniske chip

Total internal reflection fluorescence (TIRF) is commonly used in single molecule localization based super-resolution microscopy as it gives enhanced ...

A "Dual-Addition" Calcium Fluorescence Assay for the High-Throughput Screening of Recombinant G Protein-Coupled Receptors

En "dual-addisjon" kalsiumfluorescensanalyse for høy gjennomstrømningsscreening av rekombinante G-proteinkoblede reseptorer

G protein-coupled receptors (GPCRs) represent the largest superfamily of receptors and are the targets of numerous human drugs. High-throughput screening ...

Optimization of Flow Cytometric Sorting Parameters for High-Throughput Isolation and Purification of Small Extracellular Vesicles

Optimalisering av flowcytometriske sorteringsparametere for høykapasitetsisolering og rensing av små ekstracellulære vesikler

Small extracellular vesicles (sEV) can be released from all cell types and carry protein, DNA, and RNA. Signaling molecules serve as indicators of the ...

High-Throughput Protein Crystallization via Microdialysis

High-Throughput Protein Crystallization via Microdialysis

Proteinkrystallisering med høy gjennomstrømning via mikrodialyse

Understanding the structure-function relationships of macromolecules, such as proteins, at the molecular level is vital for biomedicine and modern drug ...