Name: three and four-dimensional visualization and analysis approaches to study vertebrate axial elongation and segmentation
Uploaded: 2021-02-28T14:00:00
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LuVeLuレポーター株のオリビエ・プルキエとアレクサンダー・オーレフラ、RapiClearテストサンプルのSunJin研究所、BigStitcherを使用した支援のHugo Pereira、ライブイメージング装置のセットアップを支援してくれたNuno Granjeiro、IGC動物施設、およびこの作業の過程で有益なコメントとサポートを提供してくれたMalloラボの過去および現在のメンバーに感謝します。
我々は、ポルトガル2020年パートナーシップ協定に基づき、欧州地域開発基金(FEDER)及びFundação para a Ciência e a Tecnologia(FCT, Portugal)を通じて、リスボン地域運用プログラム(Lisboa 2020)が共同出資する、ポルトガルの資金提供 ref# PPBI-POCI-01-0145-FEDER-022122及びref# PTDC/BII-BTI/32375/2017の支援を受けているIGCの先進イメージングファシリティの技術支援に感謝する。この原稿に記載されている研究は、研究インフラCongento、プロジェクトLISBOA-01-0145-FEDER-030254(FCT、ポルトガル)およびSCML-MC-60-2014(サンタカーサダミゼリコルディア、ポルトガル)に助成金を支給し、M.M、研究インフラCongento、プロジェクトLISBOA-01-0145-FEDER-022170、およびPhDフェローシップPD/BD/128426/2017からADへの助成金によって支援されました。

動物を対象とした実験は、住宅、畜産、福祉に関するポルトガル(Portaria 1005/92)および欧州(指令2010/63/EU)の法律に従っていました。このプロジェクトは、「Instituto Gulbenkian de Ciência」の倫理委員会とポルトガルの国家機関「Direcção Geral de Alimentação e Veterinária」(ライセンス参照:014308)によってレビューされ、承認されました。
1. 3Dおよび4Dイメージング用のサンプル調製
<p...

軸方向の伸長とセグメンテーションは、脊椎動物の胚発生中に起こる最も複雑で動的なプロセスの2つです。単一細胞追跡を伴う3Dおよび4Dイメージングの使用は、しばらくの間、ゼブラフィッシュおよびニワトリ胚の両方においてこれらのプロセスを研究するために適用されており、そのためにアクセス可能性および培養条件が複雑なイメージングを容易にする19、44、45、46...

脊椎動物の体軸形成は、胚発生中に起こる非常に複雑で動的なプロセスです。胃形成の終わりに[マウスでは、胚発生日(E)8.0頃]に、神経中胚葉前駆細胞(NMP)として知られるエピブラスト前駆細胞のグループが、頭から尾への配列における軸延長の重要な駆動因子となり、頸部、体幹および尾部形成中に神経管および近軸中胚葉系組織を生成する1、2、3、4.興味深いことに、これらのNMPが尾側エピブラストで占める位置は、中胚葉または神経外胚葉に分化する決定において重要な役割を果たしているようです5。現在、NMPの正確な分子指紋は得られていませんが、これらの細胞は一般にT(Brachyury)とSox2 5,6を共発現すると考えられています。NMPの運命決定を調節する正確なメカニズム(すなわち、それらが神経経路をとるか中胚葉経路をとるか)は、正確に定義され始めたばかりである。原始的な筋状領域におけるTbx6発現は、NMP運命決定の初期マーカーであり、この遺伝子は中胚葉6、7の誘導および仕様に関与している。興味深いことに、初期の中胚葉細胞は高レベルのEpha18を発現しているようであり、Wnt/β-カテニンシグナル伝達、ならびにMsgn1もまた、近軸中胚葉分化およびソマイト形成において重要な役割を果たすことが示された9,10。単一細胞レベルでのNMPの完全な空間時間解析は、中胚葉の仕様を制御する分子メカニズムを完全に理解するために確かに役立つでしょう。
ソマイト(椎骨前駆体)の形成は脊椎動物の重要な特徴である。軸方向の伸長の間、近軸中胚葉はソマイトとして知られる一連の両側反復単位でセグメント化される。ソマイトの数と新しいセグメントの形成に必要な時間は、種11、12によって異なります。ソミトジェネシスは、前嚢内胚葉(例えば、Lfng)におけるNotch、WntおよびFgfシグナル伝達経路のいくつかの遺伝子の周期的発現によって観察され得る周期的シグナル伝達振動(「セグメンテーションクロック」として知られている)11、12を含む。ソミトジェネシスの現在のモデルはまた、各新しいソマイトの後縁の位置を定義するFgf、Wntおよびレチノイン酸シグナル伝達を含む一連の複雑なシグナル伝達勾配である「成熟波面」の存在を仮定する。したがって、「セグメンテーションクロック」と「成熟波面」との間の協調的な相互作用は、これらの重要な形態形成過程における摂動が胚致死性または先天性奇形(例えば、脊柱側弯症)の形成をもたらす可能性があるため、これらの椎骨前駆体モジュールの生成にとって基本的である13,14,15。
画像化技術、バイオイメージ解析方法およびソフトウェアにおける最近の大幅な進歩にもかかわらず、軸方向の伸長およびソミトジェネシスのほとんどの研究は、依然として単一/単離された2次元画像データ(例えば、切片)に依存しており、完全な多次元組織可視化を可能とせず、病理学的奇形(すなわち、突然変異による)と胚発生中に起こる正常な形態学的変化との間の明確な区別を複雑にする16。.3Dでのイメージングは、以前は標準的な2D法では同定されていなかった新しい形態形成運動をすでに明らかにしており17,18,19,20、脊椎動物のソミトジェネシスおよび軸方向拡張のメカニズムを理解するためのin totoイメージングの力を強調している。
マウス胚の3Dおよび4D顕微鏡、特にライブイメージングは技術的に困難であり、正確で意味のある時空間分析を可能にするために、サンプル調製、画像取得、およびデータ前処理中に重要なステップが必要です。ここでは、マウス胚のライブイメージングおよびホールマウント免疫蛍光染色のための詳細なプロトコールについて述べ、軸延長およびセグメンテーション中にNMPおよび中胚葉系細胞の両方を研究するために使用することができる。さらに、我々はまた、トトにおける3D可視化および染色体形成中の問題(例えば、骨癒合および脊柱側弯症)に起因する病理学的異常の定量化を可能にする、高齢胚および胎児の光投影断層撮影(OPT)のためのプロトコルについても記述する13,21,22。最後に、脊椎動物のセグメンテーションと軸方向の伸びの研究と教育における3Dイメージング再構成の力を示します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agarose low gelling temperature</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9414</td>
			<td>Used to mounting embryos (e.g. for OPT)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amira software</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>-</td>
			<td>Commerial software tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Brachyury (Goat polyclonal)</td>
			<td>R and D Systems</td>
			<td>AF2085 RRID:AB_2200235</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Sox2 (Rabbit monoclonal)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92494 RRID:AB_10585428</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Tbx6 (Goat polyclonal)</td>
			<td>R and D Systems</td>
			<td>AF4744 RRID:AB_2200834</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Laminin111 (Rabbit polyclonal)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L9393 RRID:AB_477163</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-goat 488 (Donkey polyclonal)</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A11055 RRID:AB_2534102</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit 568 (Donkey polyclonal)</td>
			<td>ThermoFisher &#160; Scientific</td>
			<td>A10042 RRID:AB_2534017</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl Alcohol (99+%)</td>
			<td>(any)</td>
			<td>-</td>
			<td>Used to clear embryos (component of BABB)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl Benzoate (99+%)</td>
			<td>(any)</td>
			<td>-</td>
			<td>Used to clear embryos (component of BABB)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>P6154</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass 20x20 mm #0</td>
			<td>(any)</td>
			<td>-</td>
			<td>100um thick</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass 20x20 mm #1</td>
			<td>(any)</td>
			<td>-</td>
			<td>170um thick</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass 20x60 mm #1.5</td>
			<td>(any)</td>
			<td>-</td>
			<td>To use as &#8220;slides&#8221;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#8217;,6-Diamidino-2- Phenylindole Dihydrochloride)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D3571</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drishti software</td>
			<td>(open source)</td>
			<td>-</td>
			<td>Free software tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>ED2SS</td>
			<td>For demineralization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji/ImageJ software</td>
			<td>(open source)</td>
			<td>-</td>
			<td>Free software tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>NZYtech</td>
			<td>MB01401</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Huygens software</td>
			<td>Scientific Volume Imaging</td>
			<td>-</td>
			<td>Commerial software tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone defined fetal bovine serum</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>#HYCLSH30070.03</td>
			<td>For live imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen peroxide solution 30 %</td>
			<td>Milipore</td>
			<td>1085971000</td>
			<td>For clearing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Bitplane / Oxford instruments</td>
			<td>-</td>
			<td>Commerial software tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iSpacers</td>
			<td>SunJin Lab</td>
			<td>(varies)</td>
			<td>Use as spacers for preparations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#25030&#8211;024</td>
			<td>For live imaging medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low glucose DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11054020</td>
			<td>For live imaging medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M2 medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7167</td>
			<td>To dissect embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRC20847.307</td>
			<td>For dehydration and rehydration steps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl salicylate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6752</td>
			<td>Used to clear embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td>Used in solution to fix embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#P0781</td>
			<td>For live imaging medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate-buffered saline solution)</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>L0615-500</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapiClear</td>
			<td>SunJin Laboratory</td>
			<td>RapiClear 1.52</td>
			<td>Used to clear embryos</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secure-Sea hybridization chambers</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5474</td>
			<td>Use as spacers for preparations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>simLab software</td>
			<td>SimLab soft</td>
			<td>-</td>
			<td>Commerial software tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide, depression concave glass - 75x25 mm</td>
			<td>(any)</td>
			<td>-</td>
			<td>To mount thick embryos.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td>For immunofluorescence</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three and four-dimensional visualization and analysis approaches to study vertebrate axial elongation and segmentation

ソミトジェネシスは脊椎動物の胚発生の特徴である。長年にわたり、研究者は、エクスビボおよびインビトロアプローチを包含する幅広い技術を使用して、さまざまな生物におけるこのプロセスを研究してきました。しかし、ほとんどの研究は依然として2次元(2D)イメージングデータの解析に依存しているため、複雑な3D空間での非常に動的な相互作用を伴う軸の延長やソミトジェネシスなどの発生プロセスの適切な評価が制限されています。ここでは、マウスのライブイメージング取得、データセット処理、視覚化、および3Dおよび4Dでの解析を可能にし、これらの発生プロセスに関与する細胞(例えば、神経中胚葉前駆細胞)を研究することを可能にする技術について説明する。また、マウス胚における光投影断層撮影法およびホールマウント免疫蛍光顕微鏡(サンプル調製から画像取得まで)のためのステップバイステップのプロトコルを提供し、3D画像データを処理および視覚化するために開発したパイプラインを示します。これらの技術のいくつかの使用を拡張し、軸方向の拡張とソマイト形成(3D再構成など)の現在の理解を向上させるために使用できる、利用可能なさまざまなソフトウェア(フィジー/ ImageJ、Drishti、Amira、Imarisなど)の特定の機能を強調します。全体として、ここで説明する技術は、発生生物学における3Dデータの視覚化と分析の重要性を強調しており、他の研究者が脊椎動物の軸延長とセグメンテーションの文脈で3Dおよび4D画像データにうまく対処するのに役立ちます。最後に、この研究は脊椎動物の胚発生を教えることを容易にするための新しいツールも採用しています。

ライブおよび免疫蛍光イメージングの両方についてこの論文に示された代表的な結果は、20×1.0NAの水対物レンズ、960nmに同調された励起レーザー、およびGaAsP光検出器(Dias et al. (2020)43に記載されているように)を備えた2光子システムを使用して得られた。光学投影断層撮影は、カスタムビルドのOPenTスキャナ(Gualda et al. (2013)28に記載されているように)を使用?...

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Three and Four-Dimensional Visualization and Analysis Approaches to Study Vertebrate Axial Elongation and Segmentation

ここでは、in toto光投影断層撮影法、多光子顕微鏡を用いたライブイメージングおよびホールマウント免疫蛍光染色によって得られた、軸方向の伸長およびセグメンテーションの文脈におけるマウス胚の3次元および4次元画像データの視覚化および解析を可能にする計算ツールおよび方法について説明する。

脊椎動物の軸の伸びとセグメンテーションを研究するための3次元および4次元の可視化と解析アプローチ

Somitogenesis is a hallmark of vertebrate embryonic development. For years, researchers have been studying this process in a variety of organisms using a ...

マウス胚における器官形成段階は、胚複合体構造の可視化が困難なため、部分的には研究が不十分である。このプロトコルは、軸延長およびセグメンテーション中のマウス胚の3Dおよび4D視覚化および分析を可能にする技術を記述する。この技術の主な利点は、研究者がマウス胚の複雑な構造を3D動的物体として研究し、示すことを可能にすることである。このプロトコルには、脊柱側弯症などの哺乳動物の椎骨および脊髄に影響を及ぼす先天性奇形の研究に使用できる技術が含まれています。これらの技術は、インビトロモデルシステムでも使用することができ、したがって、ヒト胚発生の研究を可能にする。ライブイメージングのために胚発生日8.25日目から胚発生日10.5日目の間にマウス胚を調製するために、摂氏37度で予め加温されたM2培地で胚を解剖する。清潔な鉗子を使用して卵黄嚢を静かに取り除き、新鮮なM2培地で胚を1回洗い流して、解剖中に生じた血液や破片を取り除きます。ライブイメージング手順の間、10%HyCloneで定義されたFBS、2ミリモルのL-グルタミン、および1%ペニシリンストレプトマイシンを添加した低グルコースDMEM培地で、37°Cの加熱チャンバー内で胚をインキュベートし、5%の二酸化炭素環境で65%の酸素をインキュベートします。免疫蛍光顕微鏡用に同様の段階のマウス胚を調製するために、加熱されたM2を使用する代わりに、胚を低温PBSで解剖し、4%パラホルムアルデヒド中で固定する。テキスト原稿に記載されているように全マウント免疫蛍光染色プロトコールを実施した後、RapiClearを使用して組織クリアランスを達成することができる。まず、75×25ミリメートルの窪み凹面スライドガラスの中央に胚を置き、顕微鏡窪みスライド内のすべてのPBSTを除去し、200マイクロリットルの透明化溶液を加え、次いでスライド調製物を箱で覆う。光から10分間保護した後、胚が透明になり始めたら、透明化溶液を交換し、さらに20分間待つ。一方の側から始まり、他方に向かって静かに移動するカバースリップで胚を上回ってください。これで、サンプルをイメージングする準備ができました。サリチル酸メチルまたはBABBを使用して透明化する場合は、胚が100%メタノールで完全に脱水されていることを確認し、次に一連のBABBおよびメタノールを20%連続して濃度を増加させ、各ステップで20分間のインキュベーションを開始します。BABB ソリューションが 100% に達したら、新しいソリューション用に 2 つの追加変更を行います。サンプルの圧縮を避けるために、20 x 60ミリメートルの1.5枚のカバーガラススライドを準備して胚を取り付けます。薄い金属ワッシャーで作られたスペーサーを追加します。クリアした胚を、つまようじ、細かい綿の先端、またはパスツールピペットを使用して顕微鏡スライドに移します。その後、マウント媒体を1滴加え、別の同様のカバーガラスで覆い、溶融パラフィンでシールして、気泡を避けるために調製物をよりよく安定させる。カバースリップを片側に置き、徐々に静かに横にスライドさせ、必要に応じて培地を加えます。これで、サンプルを顕微鏡で画像化する準備が整いました。Fiji/ImageJを使用して、イメージング後に胚を標準化された前後軸および背腹軸位置に再配置します。フィジーの画像内のデータセット サイズを縮小し、データセットを 200 MB 未満に縮小するために必要な X、Y、Z スケール値をスケーリングして挿入します。[新しいウィンドウの作成]オプションがチェックされていることを確認します。次に、プラグインに移動し、3Dビューアを開きます。3D ビューアウィンドウ内で胚をクリックして選択すると、赤い 3D ボックスが表示されます。このモードを使用する場合は、データセットの回転をマウスで制御します。胚の完璧な位置を確認したら、[編集]を選択し、画像を変換し、3D Viewerウィンドウで変換した画像をエクスポートします。さまざまな直交平面を調べ、画像に移動し、直交ビューを積み重ねて選択します。胚が正しく配置されたら、3D ビューアウィンドウメニューを選択し、変換行列を編集、変換、およびマット拡張子を持つテキストファイルに保存します。Fiji/ImageJを使用してテキストファイルを開き、最初の2行を削除して再保存します。これにより、TransformJ プラグインと互換性のある変換マトリックスファイルが作成されます。フル解像度データセットに切り替えて、操作プラグイン TransformJ および TransformJ アフィンを実行します。新しいウィンドウで、以前に保存した行列ファイルを参照して検索し、3 次 B スプライン補間を選択して等方的に再標本し、「OK」をクリックします。胚を適切に再配置した後、作成された空のスペースのほとんどをトリミングします。完全な Z 投影画像を実行するには、スタック、Z プロジェクトをクリックし、最大強度を選択します。次に、XとYに胚全体を含む最小ROIを描画します。編集、選択、選択の復元、および画像を選択してトリミングをクリックして、元のデータセット画像ウィンドウに切り替えます。画像を選択してスタックを開き、ツールをクリックし、スライスリムーバーを選択して、削除する最初と最後のスライスを指定して、胚組織と交差しない最初と最後のスライスをトリミングし、増分を1に変更してください。必要に応じて、テキスト原稿の指示を使用して、さらなる解析と3D再構成を実行します。より発達した胚の3D分析を行うには、胚発生日18.5の胎児を冷たいPBSで解剖し、余分な胚膜をすべて除去し、新鮮なPBSで胎児を数回洗浄して、解剖手順中に生成された血液および破片を除去する。PBSで作った4%PFAの胎児を摂氏4度で5~7日間固定する。胚をPBSで数回洗浄した後、10%メタノールに達するまで10%10連続して増加したメタノール溶液中でインキュベートすることによって胎児を脱水する。各インキュベーションを室温のシェーカー上で25分間行う。次に、胎児を最初にメタノール中の5%過酸化水素中で1日間、次いでメタノール中の10%過酸化水素中で、胚がすべての天然色素沈着を失うまで最大3日間、振とう機上で別々に孵化させる。室温のシェーカー上で20分間インキュベーションするたびに、脱塩水中で逆メタノール系列で胚を徐々に再水和させ、次いで脱塩水で1回の洗浄につき30分間胚を3回洗浄する。胎児を1%アガロースブロックに埋め込むには、50ミリリットルのプラスチックチューブまたはシリンジに溶融したアガロースを充填し、アガロースの垂直位置に胎児を置き、アガロースの凝固中に鉗子でこの位置を維持する。アガロースが完全にゼリゼライ化するために、ブロック付きの型を摂氏4度に30分間置き、胎児の入ったアガロースブロックを型から取り出し、士気をくじいた水を入れた容器に入れます。脱塩水またはPBSで希釈したメタノール濃度を10%上昇させて胎児を徐々に脱水を行い、メタノール濃度が100%に達するまでシェーカー上で室温で少なくとも45分間サンプルをメタノール濃度に保つ。胎児をシリーズBABB溶液とメタノールで2.5時間、各濃度で2.5時間移動させ、100%BABBに達するまでBABB濃度を25%増加させることによって胎児をきれいにする。胎児が完全に透明になるまで、BABB溶液を毎日新鮮なものと交換してください。このプロセスには 3 ~ 5 日かかる場合があります。接着剤を使用してクリアしたアガロースブロックをOPTスキャナのモーター軸に取り付け、光学系を調整して胎児全体の画像を取得し、完全な投影データセットの取得に進みます。4Dライブイメージング技術により、LuVeLuレポーター発現と胚発生日8.5 Snai1条件ノックアウト胚の動的解析が可能になります。前弯性中胚葉の正常なLuVeLuシグナルとともに、Snai1条件ノックアウト胚は、原始的な縞から生じる異所性膨らみにおいてLuVeLu発現を示す。ホールマウント免疫蛍光アッセイは、潜在的なNMPおよび中胚葉分化の主要な調節因子の検出を可能にする。白と黄色の矢印は、変異型と野生型の胚の違いを強調しています。マウント全体の免疫染色の3Dレンダリングにより、研究における組織または構造の理解を深めることができます。この場合、尾芽中の潜在的なNMPの位置を調査した。3D組織再構成は、マウス胚の形態学的欠陥を理解し、特徴付けるためにも重要である。3D再構成のインタラクティブな視覚化は、ユーザーフレンドリーな形式で構築することもできます。たとえば、PDF ファイル内などです。これらの3D胚尾構造は、より一般的な聴衆に3Dモデルの力を説明し、脊椎動物の軸方向の伸長とセグメンテーションを教える研究に役立つように使用できます。最後に、OTP顕微鏡技術を使用して、より発達したマウス胚のtoto可視化における3Dが可能である。アニメーション化されたレンダリングがここに示され、胎児の18.5日目の胎児の主要なスライスが強調表示されています。覚えておくべき最も重要なことは、結果は胚で観察されるものの忠実な表現のままでなければならないということです。研究者はこれらの方法を使用して、画像に静的な表示だけでなく、ビデオ、3次元再構成、さらにはデータのインタラクティブな3Dモデルを含めることもできます。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Differentiation of a Human Neural Stem Cell Line on Three Dimensional Cultures, Analysis of MicroRNA and Putative Target Genes

三次元培養、マイクロRNAの分析と推定標的遺伝子上のヒト神経幹細胞株の分化

Neural stem cells (NSCs) are capable of self-renewal and differentiation into neurons, astrocytes and oligodendrocytes under specific local ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

咽頭アーチのex vivo培養は、ハートと筋前駆細胞とそのニッチを研究します

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic Meckel&#8217;s Cartilage

Visualization of Chondrocyte Intercalation and Directional Proliferation via Zebrabow Clonal Cell Analysis in the Embryonic MeckelÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Cartilage

胚性メッケル軟骨でZebrabowクローン細胞分析によって軟骨細胞のインターカレーションと方向性増殖の可視化

Development of the vertebrate craniofacial structures requires precise coordination of cell migration, proliferation, adhesion and differentiation. ...

Kinetic Measurement and Real Time Visualization of Somatic Reprogramming

体細胞の再プログラミングの反応速度測定とリアルタイムの可視化

Somatic reprogramming has enabled the conversion of adult cells to induced pluripotent stem cells (iPSC) from diverse genetic backgrounds and disease ...

Analysis of Retinoic Acid-induced Neural Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells in Two and Three-dimensional Embryoid Bodies

2および3次元の胚様体中のマウス胚性幹細胞のレチノイン酸誘発神経分化の分析

Mouse embryonic stem cells (ESCs) isolated from the inner mass of the blastocyst (typically at day E3.5), can be used as in vitro model system for ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

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の胚性血管新生の可視化と定量分析<em&gt;ツメガエル</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Using In Vivo and Tissue and Cell Explant Approaches to Study the Morphogenesis and Pathogenesis of the Embryonic and Perinatal Aorta

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体内と組織や細胞植アプローチを使用して形態形成と胚および周産期の大動脈の病因を研究するには

The aorta is the largest artery in the body. The aortic wall is composed of an inner layer of endothelial cells, a middle layer of alternating elastic ...

Correlative Super-resolution and Electron Microscopy to Resolve Protein Localization in Zebrafish Retina

ゼブラフィッシュの網膜におけるタンパク質局在を解決する相関超解像および電子顕微鏡観察

We present a method to investigate the subcellular protein localization in the larval zebrafish retina by combining super-resolution light microscopy and ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

三次元レンダリングとカルビンディン抗体、解析人間の胎盤絨毛血管のネットワークを明らかにしました。

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

核の分布、蛋白質および細胞骨格を研究する線虫生殖細胞の解析

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...