Name: massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood
Uploaded: 2021-05-29T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood at JoVE.com

Denne undersøgelse blev økonomisk støttet af National Science Foundation of China (81471181 og 81870933) og Opening Lab Program of Guangzhou Medical University (0506308) til Y Jiang og af National Science Foundation of China (81701471) og Scientific Program of Guangzhou Municipal Health Commission (20191A011083) til Z Qiu og af National Science Foundation of China (81501009) til L Wu.

Protokollen blev gennemgået og godkendt af institutional Animal Care and Use Committee på det andet tilknyttede hospital i Guangzhou Medical University. Rotter blev leveret af Animal Center i Southern Medical University. Det eksperimentelle design er vist i figur 1.
1. Dyr og instrumenter
<ol><li>Brug 8 uger gamle mandlige Sprague-Dawley rotter, der vejer 250 ± 10 g.</li>
	<li>Rotterne anbringes i mindst 7 dage før operationen under kontrollerede miljøforho...

<ol>
	<li>Charidimou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+hemorrhage+recurrence,+small+vessel+disease+type,+and+cerebral+microbleeds:+A+meta-analysis.">Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis.</a> Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).</li><li>Tao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+brainstem+hemorrhage+model+by+autologous+blood+infusion+in+Rat:+White+Matter+Injury,+Magnetic+Resonance+Imaging,+and+Neurobehavioral+features.">A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).</li><li>Ichimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+treatment+for+primary+brainstem+hemorrhage+to+improve+postoperative+functional+outcomes.">Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes.</a> World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).</li><li>Behrouz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+pontine+haemorrhage:+A+systematic+review.">Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review.</a> European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainstem+iron+overload+and+injury+in+a+rat+model+of+brainstem+hemorrhage.">Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).</li><li>Chung, Y., Haines, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+brain+stem+surgery.">Experimental brain stem surgery.</a> Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).</li><li>Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">A rat model of pontine hemorrhage.</a> Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).</li><li>Lekic, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+hematoma+consequences,+neurobehavioral+profiles,+and+histopathology+in+a+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).</li><li>Shrestha, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+brainstem+hemorrhage+model:+Key+points+to+success+in+modeling.">Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling.</a> World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).</li><li>Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+acute+pontine+infarction+in+rats+by+electrical+stimulation.">Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).</li><li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keep+warm+and+get+success:+The+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).</li></ol>

I denne undersøgelse, gav vi en protokol til at generere en massiv pontin blødning rotte model. Denne model kan bruges til forskning i patofysiologisk mekanisme og prognose for massiv pontinblødning.
Under hele eksperimentet blev der brugt 25 rotter, hvoraf kun en døde. Kontrollen af MRI, brutto anatomi, og HE farvning viste, at denne metode havde en meget lav dødelighed og en høj succesrate. For at etablere massiv pontinblødningsmodel skal to problemer løses, det injicerede autologe b...

Intracerebral blødning tegner sig for en femtedel af slagtilfælde patienter. Prognosen for intracerebral blødning afhænger af hastigheden, volumenet og placeringen af blødning1,2. Sammenlignet med forhjernen blødning, hjernestammen blødning har højere dødelighed og sygelighed3. Omkring 40% af hjernestammeblødning forekommer i pons4. Den etiologi og patofysiologi af pontin blødning er helt anderledes og mindre undersøgt end forebrain blødning5.
Der er to slags pontinblødning dyremodeller. Den ene er spontan blødning model induceret ved infusion af bakteriel kollagen i pons6,7,8. Den største fordel ved denne model er, at blødningen er spontan. Kollagen kan dog kun fremkalde en lille mængde pontinblødning. Desuden kan kollagen forårsage andre skader på hjernen. Den anden model er induceret af stereotaktisk injektion af autologt blod i pons9. Fordelen ved denne model er, at det er let at mestre med en høj succesrate. Teoretisk set kunne forskere injicere enhver mængde blod i ethvert sted af pons. På grund af ryglækagen gennem nålevejen er det injicerede volumen dog begrænset. For nylig er dobbeltinjektionsmetoden blevet fremmet for at reducere ryglækagen9. Denne metode injicerer autologt blod to gange med et interval på 20 minutter mellem injektionerne. Dobbeltinjektionsmetoden anvendes til at fremkalde mild (30 μL) og moderat (60 μL) pontinblødning, men ikke massiv pontinblødning. I klinikken har størstedelen af pontinblødningspatienter med dårlig prognose massiv blødning (mere end 10 mL).
I den foregående undersøgelse leverede vi en protokol til at etablere en pontinisk iskæmisk slagtilfældemodel hos rotte10. I denne undersøgelse ændrer vi den eksisterende dobbelte injektionsmetode og giver en detaljeret protokol til at fremkalde massiv pontinblødning hos en rotte ved dobbelt injektion af 100 μL autologt blod to forskellige steder i ponerne.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100ml Saline solution</td>
			<td>Guangdong yixiang</td>
			<td>191222201 C1</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100&#956;l Microinjector</td>
			<td>Shanghai Gaoge</td>
			<td></td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>Jiangsu Zhiyu</td>
			<td>20191014</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Alcohol</td>
			<td>Shandong Lierkang</td>
			<td></td>
			<td>Disinfection of rat tail</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive tape</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal anesthesia system</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R510-31S-6</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance beam</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blades</td>
			<td>Shanghai Feiying</td>
			<td>74-C</td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone cement</td>
			<td>Shanghai Xinshiji</td>
			<td>20180306</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain tank</td>
			<td>Shenzhen LEIYEA</td>
			<td></td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Jiangsu Hengrui</td>
			<td></td>
			<td>For pain management</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric cranial drill</td>
			<td>Nanjing&#160; Darwin biotechnology</td>
			<td>20180090018</td>
			<td>Making a burr hole on the skull</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP tube</td>
			<td>Nantong Surui</td>
			<td></td>
			<td>Transfer autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin eye cream</td>
			<td>Yunnan pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Eyes protection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye liquor</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>For HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating&#160;pad</td>
			<td>Dangerous Jungle</td>
			<td>JR01</td>
			<td>Keeping warm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium injection</td>
			<td>Chengdu Haitong Pharmacal Company</td>
			<td>190701</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IndoPhors</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD</td>
			<td>20080701</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light dark box</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Baoding Leifu</td>
			<td>TFD03-01-C</td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI system</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td>Confirmation of infarction in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J32020</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Infection Prevention</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-tips</td>
			<td>Jiangxi Songhe</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalp heedle</td>
			<td>Jiangxi Hongda</td>
			<td>20200313</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Shanghai Kaiyuan</td>
			<td>170902</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shearing scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>Y00040</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
			<td>RWD</td>
			<td>900-00001-00</td>
			<td>for surgical positioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel</td>
			<td>Xinxiang Huakangweicai</td>
			<td>20070601</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J25041</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue holding forcepts</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J31080</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood

Vi leverer en protokol til at etablere en massiv pontin blødning model i en rotte. Rotter, der vejer omkring 250 gram, blev brugt i denne undersøgelse. Et hundrede mikroliter autologt blod blev taget fra halen vene og stereotaxically injiceres i pons. Injektionsprocessen blev opdelt i 2 trin: For det første blev 10 μL blod sprøjtet ind på et bestemt sted, anteroposterior position (AP) -9,0 mm; sideværts (lat) 0 mm; lodret (Vert) -9,2 mm efterfulgt af en anden injektion af restblodet placeret ved AP -9,0 mm Lat 0 mm; Vert -9,0 mm med et interval på 20 minutter. Balancestråletesten, lemmernes placeringstest og den modificerede Voestch-neuroscore blev brugt til at evaluere neurologisk funktion. Magnetic Resonance Imaging (MRI) blev brugt til at vurdere mængden af blødning in vivo. Symptomerne på denne model var i overensstemmelse med patienter med massiv pontinblødning.

Der blev anvendt i alt 25 dyr, 3 til kontrol, 6 til 30 μL, 6 for 60 μL og 10 for 100 μL blodindsprøjtninger. En rotte, der fik en 100 μL injektion af autologt blod (1/10), døde inden for 24 timer efter operationen.
Adfærdstest blev udført på dag 1, dag 3, dag 7 og dag 14 efter operationen. Resultaterne for kontrolgruppen og blodinjektionsgrupper på forskellige tidspunkter efter operationen er vist i tabel 2</st...

Watch this Scientific Journal Video about Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood at JoVE.com

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

Vi præsenterer en protokol til at etablere en massiv pontin blødning model i en rotte via dobbelt injektion af autologt blod.

Massiv Pontine Blødning ved dobbelt injektion af autologt blod

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Vi leverer en protokol til at etablere massiv pontin blødning i en rotte. Denne model er nem at etablere, repeterbar og meget vellykket. Destilleret injektion af autolog rotte metode kunne bruges til at gøre blødning i nogen af hjernen regioner.Folk, der ønsker at prøve disse teknikker bør lære at bruge en stereotaxic ramme, og være bekendt med pontin anatomi. Begynd med at placere en kirurgisk drapering over musen. Lav et snit med en skalpel langs den markerede midterlinje.Brug en vatpind til at fjerne eventuelt blod. Placer derefter et stykke pincet på hver side af hovedbundsflappen for at afsløre kraniet. Dyp en vatpind i 0,9%saltvand og forsigtigt fjerne bindevæv fra kraniet knoglen.Brug en tuschpen til at markere bregmaens centrale punkt som udgangspunkt. Udfør en kraniotomi ved hjælp af en mikroboremaskine, og forevis forsigtigt. Når du er færdig, skal du fjerne mikroboret fra den stereotaxiske ramme.Sæt en 100 mikroliter Hamilton sprøjte i stereotaxic indehaveren. Tænd for indsprøjtningspumpekontakten. Klik på knappen hurtig indånding.Derefter aspirate heparin opløsning til 100 mikroliter og dræne det helt. Påfør chlorhexidin og 75% alkohol kirurgisk krat til hele fortællingen fra rod til spids mindst tre gange for at desinficere huden, blødgør horniness og udvide halen venen for at øge succesraten for injektion. Fastgør en hovedbund akupunktur til en en milliliter sprøjte, derefter indsætte hovedbunden akupunktur i en lateral hale vene tre centimeter fra halen spidsen og til at tage 150 mikroliter af blod.Fjern hovedbunden akupunktur fra den ene milliliter sprøjte og overføre blodet til et rør. Arbejder hurtigt for at forhindre blodpropper. Skift kirurgiske handsker.Vælg træktilstanden. Indstil lydstyrken til 100 mikroliter, og indstil hastigheden til 200 mikroliter i minuttet. Klik på knappen Kør, og indsug 100 mikroliter blod ind i Hamilton-sprøjten.Skift til indgydetilstanden, og indstil hastigheden til én mikroliter i minuttet. Fremryk sprøjten, indtil spidsen når 9,2 millimeter under hjernens overflade og injicere de første 10 mikroliter blod. Klik på knappen Kør.Stop injektionen, og lad sprøjten være på plads i 20 minutter for at forhindre blodet i at strømme ind i det subarachnoide rum. Træk sprøjten tilbage, indtil spidsen ankommer til ni millimeter under hjernens overflade, og genstart derefter injektionen med samme hastighed på en mikroliter i minuttet, indtil det resterende blod er blevet injiceret helt. Lad sprøjten være på plads i 10 minutter for at undgå blodtilstrømning.Fjern sprøjten langsomt fra hjernen. Brug derefter knoglecement til at dække kraniehullet. Når cementen tørrer sutur såret med en fire nul polyamid sutur filament.Efter syning tre eller fire sting binde 2 en-en standard kirurgiske knob. Overhold rotten hvert 15. minut, indtil den kommer sig helt fra anæstesi, og vend den derefter tilbage til det oprindelige bur med en varmepude nedenunder. Giv rotten fri adgang til mad og vand.I alt 25 dyr blev brugt til kontrol 30 mikroliter, 60 mikroliter, og 100 mikroliter blod injektioner. Adfærdstest blev udført på dag et, tre, syv og 14 efter operationen. Pontin blødning forårsaget neurologiske underskud som formindsket hornhinde refleks og kredser.Injektion af 100 mikroliter blod også induceret myotonien. MR-scanning blev udført 24 timer efter operationen. I blodindsprøjtning grupper, blødning blev opdaget som en hypointense rand med en ISO til lidt hyperintense kerne i Basiler del af damme.Blødningsmængden steg med injektionsvolumenet. Rotterne blev ofret på 24 timer og 14 dage efter operationen. Og to millimeter tykke sektioner blev lavet.Blødning blev opdaget omkring injektionsstedet og distribuere i bunden af dammene. Der var en lille ødem omkring blødningen i 100 mikroliter blodinjektion gruppe. Nogle af rotterne blev ofret tre dage efter operationen og paraffin sektioner blev foretaget for HE farvning.Resultaterne viste, at i blodinjektionsgrupperne forblev inflammatoriske celler beriget i parablødningszonen hæmoglobin indeholdt intakte røde blodlegemer. Når du forsøger denne protokol, skal du huske injektionspositionen. Denne metode kan bruges til at fremkalde en blødning i en bestemt cerebral region.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Identified by Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamic Slices

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone GnRH Neurons Identified by Green Fluorescent Protein GFP in Hypothalamic Slices

Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) is a small neuropeptide that regulates pituitary release of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating ...

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live-Imaging af<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvetilstand neuroblasts

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Eksperimentel Demyelinering og remyelinering af murine Spinal Cord ved Focal Injektion af Lysolecithin

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

En volumetriske metode til kvantificering af Cerebral vasospasme i en Murine Model af subaraknoid blødning

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Minimally Invasive Endoscopic Intracerebral Hemorrhage Evacuation

Minimalt invasiv endoskopisk intracerebral blødning Evakuering

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a subtype of stroke with high mortality and poor functional outcomes, largely because there are no evidence-based ...

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

Sub-akut Cerebral Microhemorrhages induceret af LPS injektion i rotter

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Etablering af akut Pontine Infarkt hos rotter ved elektrisk stimulation

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Dobbelt direkte injektion af blod i Cisterna Magna som en model af Subarachnoid Blødning

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...