Name: massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood
Uploaded: 2021-05-29T12:30:00
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Cette étude a été soutenue financièrement par la National Science Foundation of China (81471181 et 81870933) et le programme d’ouverture de l’Université médicale de Guangzhou (0506308) à Y Jiang, et par la National Science Foundation of China (81701471) et le programme scientifique de la Commission municipale de la santé de Guangzhou (20191A011083) à Z Qiu, et par la National Science Foundation of China (81501009) à L Wu.

Le protocole a été examiné et approuvé par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux du deuxième hôpital affilié de l’Université médicale de Guangzhou. Des rats ont été fournis par le centre animal de l’université médicale du Sud. Le plan expérimental est illustré à la figure 1.
1. Animal et instruments
<ol><li>Utilisez des rats Sprague-Dawley mâles âgés de 8 semaines pesant 250 ± 10 g.</li>
	<li>Loger les rats pen...

<ol>
	<li>Charidimou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+hemorrhage+recurrence,+small+vessel+disease+type,+and+cerebral+microbleeds:+A+meta-analysis.">Brain hemorrhage recurrence, small vessel disease type, and cerebral microbleeds: A meta-analysis.</a> Neurology. 89 (8), 820-829 (2017).</li><li>Tao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+brainstem+hemorrhage+model+by+autologous+blood+infusion+in+Rat:+White+Matter+Injury,+Magnetic+Resonance+Imaging,+and+Neurobehavioral+features.">A novel brainstem hemorrhage model by autologous blood infusion in Rat: White Matter Injury, Magnetic Resonance Imaging, and Neurobehavioral features.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 25 (5), 1102-1109 (2016).</li><li>Ichimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+treatment+for+primary+brainstem+hemorrhage+to+improve+postoperative+functional+outcomes.">Surgical treatment for primary brainstem hemorrhage to improve postoperative functional outcomes.</a> World Neurosurgery. 120, 1289-1294 (2018).</li><li>Behrouz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+pontine+haemorrhage:+A+systematic+review.">Prognostic factors in pontine haemorrhage: A systematic review.</a> European Stroke Journal. 3 (2), 101-109 (2018).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainstem+iron+overload+and+injury+in+a+rat+model+of+brainstem+hemorrhage.">Brainstem iron overload and injury in a rat model of brainstem hemorrhage.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 29 (8), 104956 (2020).</li><li>Chung, Y., Haines, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+brain+stem+surgery.">Experimental brain stem surgery.</a> Neurosurgery Clinics of North America. 4 (3), 405-414 (1993).</li><li>Lekic, T., Tang, J., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">A rat model of pontine hemorrhage.</a> Acta Neurochirurgica Supplement. 105, 135-137 (2008).</li><li>Lekic, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+hematoma+consequences,+neurobehavioral+profiles,+and+histopathology+in+a+rat+model+of+pontine+hemorrhage.">Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage.</a> Journal of Neurosurgery. 118 (2), 465-477 (2013).</li><li>Shrestha, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+brainstem+hemorrhage+model:+Key+points+to+success+in+modeling.">Rat brainstem hemorrhage model: Key points to success in modeling.</a> World Neurosurgery. 117, 106-116 (2018).</li><li>Luo, M., Tang, X., Zhu, J., Qiu, Z., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+acute+pontine+infarction+in+rats+by+electrical+stimulation.">Establishment of acute pontine infarction in rats by electrical stimulation.</a> Journal of Visualized Experiments. (162), (2020).</li><li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keep+warm+and+get+success:+The+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model.">Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).</li></ol>

Dans la présente étude, nous avons fourni un protocole pour générer un modèle massif de rat d’hémorragie de pontine. Ce modèle peut être utilisé pour la recherche sur le mécanisme physiopathologique et le pronostic de l’hémorragie pontine massive.
Tout au long de l’expérience, 25 rats ont été utilisés, dont un seul est mort. La vérification de MRI, d’anatomie brute, et de la souillure IL a indiqué que cette méthode a eu un taux de mortalité très bas et un taux de r?...

L’hémorragie intracérébrale représente un cinquième des patients ayant subi un AVC. Le pronostic de l’hémorragie intracérébrale dépend de la vitesse, du volume et de l’emplacement du saignement1,2. Par rapport à l’hémorragie du cerveau avant, l’hémorragie du tronc cérébral a une mortalité et une morbidité plus élevées3. Environ 40% de l’hémorragie du tronc cérébral se produit dans le pont4. L’étiologie et la physiopathologie de l’hémorragie pontine sont assez différentes et moins étudiées que l’hémorragie du cerveau avant5.
Il existe deux types de modèles animaux d’hémorragie pontine. L’un est le modèle d’hémorragie spontanée induite par infusion de collagénase bactérienne dans le pont6,7,8. Le plus grand avantage de ce modèle est que le saignement est spontané. Cependant, la collagénase ne peut induire qu’un petit volume d’hémorragie pontine. En outre, la collagénase pourrait causer d’autres blessures au cerveau. L’autre modèle est induit par injection stéréotaxique de sang autologue dans le pont9. L’avantage de ce modèle est qu’il est facile à maîtriser avec un taux de réussite élevé. Théoriquement, les chercheurs pourraient injecter n’importe quel volume de sang dans n’importe quel endroit du pont. Cependant, en raison de la fuite arrière par la voie de l’aiguille, le volume injecté est limité. Récemment, la méthode de double injection a été promue pour réduire la fuite arrière9. Cette méthode injecte du sang autologue deux fois avec un intervalle de 20 minutes entre les injections. La méthode à double injection est appliquée pour provoquer une hémorragie légère (30 μL) et modérée (60 μL) des pontines, mais pas une hémorragie pontine massive. En clinique, la majorité des patients atteints d’hémorragie pontine au pronostic sombre ont une hémorragie massive (plus de 10 ml).
Dans l’étude précédente, nous avons fourni un protocole pour établir un modèle d’AVC ischémique pontin chez le rat10. Dans cette étude, nous modifions la méthode existante de double injection et fournissons un protocole détaillé pour induire une hémorragie pontine massive chez un rat par double injection de sang autologue de 100 μL à deux endroits différents dans le pont.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100ml Saline solution</td>
			<td>Guangdong yixiang</td>
			<td>191222201 C1</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100&#956;l Microinjector</td>
			<td>Shanghai Gaoge</td>
			<td></td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>Jiangsu Zhiyu</td>
			<td>20191014</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% Alcohol</td>
			<td>Shandong Lierkang</td>
			<td></td>
			<td>Disinfection of rat tail</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive tape</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal anesthesia system</td>
			<td>RWD</td>
			<td>R510-31S-6</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance beam</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blades</td>
			<td>Shanghai Feiying</td>
			<td>74-C</td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone cement</td>
			<td>Shanghai Xinshiji</td>
			<td>20180306</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain tank</td>
			<td>Shenzhen LEIYEA</td>
			<td></td>
			<td>For gross anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Jiangsu Hengrui</td>
			<td></td>
			<td>For pain management</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric cranial drill</td>
			<td>Nanjing&#160; Darwin biotechnology</td>
			<td>20180090018</td>
			<td>Making a burr hole on the skull</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EP tube</td>
			<td>Nantong Surui</td>
			<td></td>
			<td>Transfer autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Erythromycin eye cream</td>
			<td>Yunnan pharmacy</td>
			<td></td>
			<td>Eyes protection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HE dye liquor</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>G1120</td>
			<td>For HE staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating&#160;pad</td>
			<td>Dangerous Jungle</td>
			<td>JR01</td>
			<td>Keeping warm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium injection</td>
			<td>Chengdu Haitong Pharmacal Company</td>
			<td>190701</td>
			<td>Preparing heparin diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IndoPhors</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD</td>
			<td>20080701</td>
			<td>Inducing and maintaining anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light dark box</td>
			<td>Jiangsu Saiangsi</td>
			<td></td>
			<td>For neurological deficit scores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-injection pump</td>
			<td>Baoding Leifu</td>
			<td>TFD03-01-C</td>
			<td>Injection of autologous blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI system</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td>Confirmation of infarction in vivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J32020</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin</td>
			<td>Guoyao of China</td>
			<td></td>
			<td>Infection Prevention</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-tips</td>
			<td>Jiangxi Songhe</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalp heedle</td>
			<td>Jiangxi Hongda</td>
			<td>20200313</td>
			<td>Withdraw autologous blood from the tail vein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Shanghai Kaiyuan</td>
			<td>170902</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shearing scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>Y00040</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic apparatus</td>
			<td>RWD</td>
			<td>900-00001-00</td>
			<td>for surgical positioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel</td>
			<td>Xinxiang Huakangweicai</td>
			<td>20070601</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td></td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J25041</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue holding forcepts</td>
			<td>Shanghai Jinzhong</td>
			<td>J31080</td>
			<td>Surgicl instruments</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

massive pontine hemorrhage by dual injection of autologous blood

Nous fournissons un protocole pour établir un modèle massif d’hémorragie pontine chez un rat. Des rats pesant environ 250 grammes ont été utilisés dans cette étude. Cent microlitres de sang autologous ont été pris de la veine de queue et stereotaxically injectés dans le pont. Le processus d’injection a été divisé en 2 étapes: Premièrement, 10 μL de sang ont été injectés dans un endroit spécifique, en position antéropostérieure (AP) -9,0 mm; latéral (Lat) 0 mm; vertical (Vert) -9,2 mm, suivi d’une deuxième injection du sang résiduel situé à AP -9,0 mm; Lat 0 mm; Vert -9,0 mm avec un intervalle de 20 minutes. L’essai de faisceau d’équilibre, l’essai de placement de membre, et le neuroscore modifié de Voestch ont été utilisés pour évaluer la fonction neurologique. La formation image de résonance magnétique (MRI) a été employée pour évaluer le volume de l’hémorragie in vivo. Les symptômes de ce modèle étaient en ligne avec des patients présentant l’hémorragie massive de pontine.

Au total, 25 animaux ont été utilisés, 3 pour des injections de sang de contrôle, 6 pour 30 μL, 6 pour 60 μL et 10 pour des injections sanguines de 100 μL. Un rat qui a reçu une injection de sang autologue de 100 μL (1/10) est décédé dans les 24 heures suivant la chirurgie.
Des tests comportementaux ont été effectués le jour 1, le jour 3, le jour 7 et le jour 14 après chirurgie. Les scores pour le groupe témoin ...

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Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

Nous présentons un protocole pour établir un modèle massif d’hémorragie de pontine chez un rat par l’intermédiaire de la double injection du sang autologous.

Hémorragie pontine massive par double injection de sang autologue

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Nous fournissons un protocole pour établir l’hémorragie massive de pontine chez un rat. Ce modèle est facile à établir, reproductible et très réussi. L’injection distillée de la méthode autologue de rat pourrait être employée pour faire l’hémorragie dans n’importe laquelle des régions de cerveau.Les personnes qui veulent essayer ces techniques devraient apprendre à utiliser un cadre stéréotaxique et se familiariser avec l’anatomie des pontines. Commencez par placer un rideau chirurgical sur la souris. Faites une incision avec un scalpel le long de la ligne médiane marquée.Utilisez un coton-tige pour enlever tout sang potentiel. Placez ensuite un morceau de pince de chaque côté du lambeau du cuir chevelu pour exposer le crâne. Trempez un coton-tige dans une solution saline à 0,9 % et retirez délicatement les tissus conjonctifs de l’os du crâne.Utilisez un stylet pour marquer le point central du bregma comme point d’origine. Effectuez une craniotomie à l’aide d’une micro perceuse, en procédant prudemment. Lorsque vous avez terminé, retirez la micro perceuse du cadre stéréotaxique.Mettez une seringue Hamilton de 100 microlitres dans le support stéréotaxique. Allumez l’interrupteur de la pompe d’injection. Cliquez sur le bouton d’inhalation rapide.Puis aspirer la solution d’héparine à 100 microlitres et la drainer complètement. Appliquez de la chlorhexidine et un gommage chirurgical à 75% d’alcool sur l’ensemble du conte de la racine à la pointe au moins trois fois pour désinfecter la peau, adoucir l’excité et dilater la veine caudale pour augmenter le taux de réussite de l’injection. Attachez une acupuncture du cuir chevelu à une seringue d’un millilitre, puis insérez l’acupuncture du cuir chevelu dans une veine latérale de la queue à trois centimètres de l’extrémité de la queue et prenez 150 microlitres de sang.Retirez l’acupuncture du cuir chevelu de la seringue millilitre et transférez le sang dans un tube. Travailler rapidement pour prévenir la coagulation du sang. Changez les gants chirurgicaux.Sélectionnez le mode de retrait. Réglez le volume sur 100 microlitres et réglez la vitesse sur 200 microlitres par minute. Cliquez sur le bouton de course et aspirez 100 microlitres de sang dans la seringue Hamilton.Passez en mode infuse et réglez la vitesse sur une microlitre par minute. Avancez la seringue jusqu’à ce que la pointe atteigne 9,2 millimètres sous la surface du cerveau et injectez les 10 premiers microlitres de sang. Cliquez sur le bouton Exécuter.Arrêtez l’injection et laissez la seringue en position pendant 20 minutes pour empêcher le sang de s’écouler dans l’espace sous-arachnoïdien. Rétractez la seringue jusqu’à ce que la pointe arrive à neuf millimètres sous la surface du cerveau, puis redémarrez l’injection à la même vitesse d’un microlitre par minute jusqu’à ce que le sang résiduel ait été injecté complètement. Laissez la seringue en position pendant 10 minutes pour éviter le refoulement sanguin.Retirez la seringue du cerveau lentement. Ensuite, utilisez du ciment osseux pour couvrir le trou de craniotomie. Lorsque le ciment sèche, suturez la plaie avec un filament de suture polyamide à quatre zéro.Après avoir cousu trois ou quatre points de suture, attachez 2 nœuds chirurgicaux standard. Observez le rat toutes les 15 minutes jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement de l’anesthésie, puis retournez-le dans la cage d’origine avec un coussin chauffant en dessous. Fournir au rat un accès gratuit à la nourriture et à l’eau.Un total de 25 animaux ont été utilisés pour le contrôle 30 microliter, 60 microliter, et 100 injections de sang de microliter. Des tests comportementaux ont été conduits les jours un, trois, sept et 14 après chirurgie. L’hémorragie de pontine a causé des déficits neurologiques comme le réflexe cornéen diminué et le cercle.L’injection de 100 microlitres de sang a également induit le myotonia. Le balayage de MRI a été exécuté pendant 24 heures après chirurgie. Dans les groupes d’injection de sang, l’hémorragie a été détectée comme jante hypointense avec un noyau ISO à légèrement hyperintense dans la partie Basiler des étangs.Le volume de l’hémorragie a augmenté avec le volume d’injection. Les rats ont été sacrifiés à 24 heures et 14 jours après chirurgie. Et des sections de deux millimètres d’épaisseur ont été faites.Une hémorragie a été détectée autour du site d’injection et se distribuant à la base des étangs. Il y avait un léger oedème autour de l’hémorragie dans le groupe d’injection de sang 100 microliter. Certains des rats ont été sacrifiés pendant trois jours après chirurgie et des sections de paraffine ont été faites pour IL souillant.Les résultats ont montré que dans les groupes d’injection sanguine, les cellules inflammatoires enrichies dans la zone d’hémorragie para sont restées contenues avec des globules rouges intacts. Lorsque vous essayez ce protocole, assurez-vous de vous souvenir de la position d’injection. Cette méthode peut être utilisée pour induire une hémorragie dans n’importe quelle région cérébrale spécifique.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dual Somatic Recordings from Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) Neurons Identified by Green Fluorescent Protein (GFP) in Hypothalamic Slices

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Double Recordings somatiques de la gonadolibérine (GnRH) neurones identifiés par Green Fluorescent Protein (GFP) en tranches hypothalamiques

Gonadotropin-Releasing Hormone (GnRH) is a small neuropeptide that regulates pituitary release of luteinizing hormone (LH) and follicle-stimulating ...

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Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Livraison de gènes au cerveau de rat postnatal par des non-ventriculaire injection Plasmide et électroporation

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Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Injection de sang autologue au modèle spontané Hémorragie intracérébrale chez la souris

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

Imagerie en direct de<em&gt; Drosophila</em&gt; larves Neuroblastes

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Expérimental démyélinisation et la remyélinisation de la moelle épinière murin par injection focale de lysolécithine

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

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Minimally Invasive Endoscopic Intracerebral Hemorrhage Evacuation

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